MCP-1在肾小球肾炎中的表达及其意义
作者：丁涵露 朱妙珍
单位：丁涵露(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所肾内科，重庆 400042)；朱妙珍(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所肾内科，重庆 400042)
关键词：单核细胞趋化蛋白-1；单核细胞；肾小球肾炎
第三军医大学学报000118
提要 目的：探讨肾小球肾炎患者肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达及其与肾间质中浸润的单核细胞(MC)数、肾小管病理损伤、尿蛋白量之间的关系。方法：用免疫组化技术检测5例正常及31例原发性肾炎肾组织中MCP-1、CD68的表达。结果：正常肾组织有极少量MCP-1表达及MC浸润；膜性肾小球肾炎(MN)组肾小球内未见MCP-1、CD68表达；系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)、膜性增生性肾小球肾炎(MPGN)、局灶节段性肾炎(FSGS)组肾小球及肾炎各组肾小管-间质MCP-1+、CD68+细胞数量显著高于正常对照组(P<0.01),肾小球、肾小管MCP-1+表达量与肾间质MC浸润数量呈明显正相关(r1=0.84,r2=0.93,P<0.01)，但与24h尿蛋白定量无相关性(r1=0.52,r2=0.34,P>0.05)，肾小管MCP-1+表达量与病变肾小管数呈正相关(r=0.72,P<0.05)。结论：①MsPGN、MPGN、FSGS肾小球内MCP-1表达增强，提示可能和肾小球内MC浸润有关；②MsPGN、MPGN、FSGS、MN肾小管MCP-1表达增强，提示可能和肾小管-间质MC浸润及肾小管损伤有关。
, 百拇医药
中图法分类号 R341.43;R692.31 文献标识码 A
文章编号：1000-5404(2000)01-0060-04
Expression and significance of MCP-1 in patients with glomerulonephritis
DING Han-lu，ZHU Miao-zhen
(Department of Nephrology，Daping Hospital,Third Military Medical University，Chongqing 400042)
Abstract Objective:To study the expression of monocyte Chemoattractant Protein-1(MCP-1) in normal and nephrotic kidneys and its relationship with monocytic infiltration,damage of renal tubules and proteinuria.Methods:Immunohistochemistry was employed to determine the expression of MCP-1 and CD68 cells in 5 normal and 31 nephrotic kidneys.Results： In the normal renal tissues,there was a little MCP-1 expression and monocytic infiltration.No expression of MCP-1 or CD68 was found in the glomeruli of the patients with MN.In the glomeruli of the patients with MsPGN,MPGN and FSGS and in the interstitial tissue of the renal tubules of those with MsPGN,MPGN,FSGS and MN,the expression of MCP-1 and CD68 was significantly higher than that in the normal control (P<0.01).Positive expression of MCP-1 in the glomeruli and renal tubules was significantly correlated to the intensity of monocytic infiltration (r=0.84 and 0.93,P<0.01) but showed no correlation to the quantity of proteinuria (r=0.52 and 0.34,P>0.05).MCP-1 expression in the renal tubules was correlated to the number of damaged tubules (r=0.72,P<0.05).Conclusion： Our findings indicate that MCP-1 plays an important role to induce monocytic infiltration and to mediate tubular damages during glomerulonephritis.
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Key words monocyte chemoattractant protein-1；monocyte；glomerulonephritis
在肾小球肾炎的发生发展过程中，外周血单核细胞(Monocyte，MC)浸润于肾间质具有极为重要的意义,但其浸润机制不太明确。单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattract antprotein-1，MCP-1)是新近明确的对单核/巨噬细胞有趋化、激活双重作用的趋化因子[1]。动物实验证实[2，3]，肾组织细胞MCP-1表达增强与单核细胞浸润相关，但有关人类肾小球肾炎肾组织中MCP-1表达及其与单核细胞浸润、肾小管病理损伤、尿蛋白量之间的关系，国内未见报道，据此，本实验采用免疫组织化学方法探讨在正常及不同病理类型的肾小球肾炎肾组织中MCP-1表达变化及其与肾间质中浸润的单核细胞数、肾小管病理损伤、尿蛋白量之间的关系，以期明确MCP-1在肾小球肾炎发病机制中的作用，为临床治疗肾小球肾炎提供部分实验依据。
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1 材料与方法
1.1 病例选择
病人来源于我科1998年3月至1999年2月住院治疗并行肾穿刺活检的慢性肾小球肾炎患者31例，其中男性17例，女性14例，平均年龄34.5(15～57)岁，均为原发性肾小球肾炎，按1982年WHO拟订的肾小球疾病形态学分类标准[4]进行病理诊断分组。病人肾穿刺前无大剂量免疫抑制剂冲击治疗史。慢性肾炎组包括系膜增生性肾小球肾炎(Mesangial proliferative glomerulonephritis，MsPGN)17例；膜性增生性肾小球肾炎(Membranoproliferative glomerulonephritis，MPGN)5例；局灶性节段性肾小球硬化(Focal segmental glomerular sclerosis，FSGS)4例；膜性肾小球肾炎(Membranous glomerulonephritis，MN)5例。正常对照组5例，均为肾移植供肾，全部经证实肾功能及尿常规正常。
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1.2 观察指标
1.2.1 尿标本 患者入院后留取24h尿标本，备测24h尿蛋白定量。正常对照组尿标本于取移植肾标本时留取，备测尿常规。
1.2.2 普通病理学观察及病变肾小管百分数的测定 肾组织切片常规行HE、PAS、PASM染色，行病理诊断及分类。病变肾小管百分数的测定为计算肾皮质中100个肾小管中出现浊肿、变性、坏死、萎缩的肾小管的百分数。
1.2.3 MCP-1、CD68免疫细胞化学 4°C丙酮固定的10～15μm冰冻切片行S-P法染色，一抗分别为小鼠抗人MCP-1单克隆抗体(Pharmigen公司1∶500)、小鼠抗人CD68抗体(SantaCruze公司1∶50，识别单核细胞)，按照S-P试剂盒(福州迈新公司)说明书进行操作与测定。阴性对照以PBS代替一抗同法操作。
1.2.4 染色细胞的计数[5] 计算每张切片6个以上肾小球横切面内MCP-1+、CD68+细胞数的平均数，以MCP-1+细胞数/肾小球横切面、CD68+细胞数/肾小球横切面表示；计算每mm2皮质肾小管MCP-1+小管占总肾小管百分数，以MCP-1+小管%/mm2表示；计算每mm2皮质肾小管间质CD68+细胞数，以CD68+细胞数/mm2表示。
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1.3 统计学处理
计量资料结果以x±s表示。肾炎组与正常组之间的细胞数比较用t检验或秩和检验。MCP-1+细胞数与CD68+细胞数、病变肾小管百分数的相关分析采用直线相关，MCP-1+细胞数与尿蛋白的相关分析用非参数Spearman等级相关分析。
2 结果
2.1 MCP-1、CD68在肾组织中的表达
免疫组化显示，正常肾组织仅有极小部分的肾小球细胞和肾小管上皮细胞表达极弱的MCP-1，肾小球球内系膜区和肾小管间质区可见极少量CD68表达，呈弱阳性染色。MsPGN、MPGN、FSGS组肾小球和肾小管-间质的MCP-1+、CD68+表达量以及MN组肾小管-间质的MCP-1+、CD68+表达量明显高于正常对照组(P<0.01)。MN组未见肾小球表达MCP-1和CD68，MPGN组肾小球MCP-1+细胞数显著高于MsPGN组(P<0.01),同时MPGN、MsPGN和FSGS组肾小球MCP-1+、CD68+细胞数亦显著高于MN组(P<0.01)，MsPGN与FSGS组，MPGN与FSGS组肾小球阳性细胞数相比较差异不显著，肾炎各组之间MCP-1+肾小管数、小管间质CD68+细胞数相比较差异不显著，见表1。MCP-1阳性染色物质主要沉积于肾小球球内系膜区，此外在Bowman’s囊壁、肾血管内皮细胞、肾小管上皮细胞的基底侧以及部分间质小血管壁亦可见MCP-1表达,在球内系膜区及小管间质区可见CD68阳性染色，见图1～4。
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表1 肾组织MCP-1、CD68表达情况
Tab1 Expression of MCP-1,CD68 in kidney Group
n
Glomerular
Renal tubule
MCP-1+(cell/gcs)
CD68+(cell/gcs)
MCP-1+(rt%/mm2)
CD68+(cell/mm2)
, 百拇医药
Control
5
2.3±1.2
0.72±0.4
5.1±2.1
7.2±0.3
MsPGN
17
38.4±5.8**
18.3±4.2**
40.3±5.3**
, 百拇医药 215.0±7.1**
MPGN
5
61.5±5.0**△
24.5±2.1**
44.0±5.7**
236.5±12.8**
FSGS
4
47.2±4.1**
20.1±3.7**
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51.3±5.1**
246.7±15.3**
MN
5
0
0
59.7±5.5**
301.0±9.0**
pcs:glomerular crosssection;rt:renal tubule;**:P<0.01 vs control;△:P<0.01 vs MsPGN
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图1 MsPGN中CD68在肾小管间质强阳性表达 (S-P×200)
Fig1 Strong postitive expression of CD68 in tubulointerstitial tissue in MsPGN (S-P×200)
图2 MPGN中肾小球细胞、肾小管上皮细胞强阳性表达MCP-1 (S-P×200)
Fig2 Strong positive expression of MCP-1 in glomerulus and tubular epithelial cell in MPGN (S-P×200)
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图3 FSGS中肾小球细胞强阳性表达CD68 (S-P×400)
Fig3 Strong positive expression of MCP-1 in glomerulus in FSGS (S-P×400)
图4 MN中肾小管上皮细胞强阳性表达MCP-1(S-P×200)
Fig4 Strong positive expression of MCP-1 in tubular epithelial cell in MN(S-P×200)
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2.2 MCP-1表达与肾小球、小管间质巨噬细胞浸润的关系
肾炎组(除外MN组)中肾小球内MCP-1+细胞数与肾小球CD68+细胞数呈明显正相关(r=0.84,P<0.01)，同时MCP-1+肾小管数与小管间质中CD68+细胞数亦呈明显正相关(r=0.93,P<0.01)，在MCP-1表达的部位，有明显的单核细胞浸润，而无MCP-1表达的部位，单核细胞浸润明显减少。
2.3 MCP-1表达与尿蛋白定量、病变肾小管数的关系
MsPGN、MPGN、FSGS、MN组24h尿蛋白定量(g/24h)分别为：4.38±2.37、3.99±0.75，3.53±1.01和5.25±1.70，相关分析表明，肾炎组(除外MN组)肾小球MCP-1+细胞数与尿蛋白量无相关性(r=0.52,P>0.05)，同时，肾炎组MCP-1+肾小管数与尿蛋白量亦无相关性(r=0.34,P>0.05),MsPGN、MPGN、FSGS、MN肾组织均有不同程度的皮质肾小管病理损伤，包括浊肿、变性、坏死、萎缩，MsPGN、MPGN、FSGS、MN病变肾小管的百分数分别为：50.0±5.7、53.7±4.5、58.3±8.9和63.7±5.3。肾小管MCP-1+表达量在小管病变轻的肾组织较低，在小管病变重的肾组织增高，肾炎组肾小管MCP-1+小管数与患者肾小管病变百分数呈正相关(r=0.72,P<0.05)。
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3 讨论
本实验结果显示，正常肾组织可见极少量MCP-1表达及单核细胞浸润，可能与维持其正常的生理功能有关。与正常肾组织比较,MsPGN、MPGN和FSGS组肾小球内MCP-1+、CD68+细胞数增加非常显著(P<0.01)，相关分析发现肾小球内MCP-1+细胞数与CD68+细胞数呈明显正相关(r=0.84,P<0.01)。以上结果说明，肾小球内MCP-1过度表达及其可能引起的单核细胞的炎性浸润参与了肾小球肾炎的病理损害过程。MN组未见肾小球内MCP-1阳性表达及单核细胞的浸润，这与Brad等[3]的报道一致，提示MCP-1、CD68未参与MN肾小球病理损害或MN肾小球的病理损害存在其他因素的损害机制。MsPGN、MPGN、FSGS、MN肾炎患者常伴有比较严重的肾小管-间质病变，其往往是肾脏病变进展及肾功能进一步恶化的重要因素，目前认为单核细胞在其发生发展上起了重要作用。而单核细胞的浸润，常需要有MCP-1的存在[6]。本实验结果显示，肾炎组织中，MCP-1+肾小管数和浸润于小管间质的单核细胞数呈明显正相关(r=0.93，P<0.01)。MCP-1表达增强的肾小管周围有较多的单核细胞浸润，而无MCP-1表达的肾小管周围，则仅有少量单核细胞的浸润。Robert等[7]亦报道人类MN、MPGN、FSGS在MCP-1表达阳性的近端肾小管周围有大量的单核细胞浸润，与本结果一致，本实验另外发现MsPGN在MCP-1表达增强的肾小管周围也有较多的单核细胞浸润，说明肾小管MCP-1高表达可能是单核细胞在局部浸润的重要原因，同时相关分析发现，肾小管MCP-1+细胞数与病变肾小管数呈正相关(r=0.72，P<0.05)，MCP-1表达量在小管病变轻的肾组织较低，在小管病变重的肾组织较高，说明肾小管MCP-1表达增加，可能是导致肾小管病理损害的一个重要原因。动物实验发现，肾小球内异常浸润的单核细胞和尿蛋白之间有相关性；体外实验发现，高浓度白蛋白，转铁蛋白等可使培养的肾小管上皮细胞分泌MCP-1[8]，本实验肾炎患者的尿蛋白量与肾小球、肾小管MCP-1表达量均无相关性(r1=0.52，r2=0.34，P>0.05)，提示免疫因素[9]等原因介导肾组织损伤的作用可能更为重要，在体内MCP-1与尿蛋白的关系需要进一步研究。
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据本实验免疫组化结果，可知MCP-1在肾组织的表达，主要集中在肾小球球系膜区和肾小管上皮细胞基底侧，而肾小球系膜区和肾小管间质区正是单核细胞浸润的主要部位，体外细胞培养已证实，人肾小球系膜细胞、肾小管上皮细胞在细胞因子作用下，可表达分泌MCP-1，并对单核细胞有趋化作用[7,10]，以上结果提示肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞在体内可能表达MCP-1，当然本实验也不排除浸润于系膜区的单核细胞表达MCP-1的可能。此外在Bowman’s囊壁，肾小球血管内皮细胞中也可见MCP-1阳性表达，细胞培养证实，在细胞因子作用下，肾小球上皮细胞可表达MCP-1[11]，另外在抗胸腺细胞抗体诱导的肾炎动物模型[2]，用免疫组化方法发现肾小球内皮细胞表达MCP-1，提示肾小球上皮细胞、内皮细胞在体内可能表达MCP-1。
据本实验，我们认为MCP-1可能在肾小球肾炎患者的单核细胞浸润过程中起重要作用，这就为临床治疗肾小球肾炎提出了一条新思路，即在进一步探索如何降低MCP-1在肾组织中的表达从而降低单核细胞在肾间质的浸润现象方面具有重要价值。
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作者简介：丁涵露(1970.2)，女，山东省日照市人，硕士研究生，住院医师，主要从事肾小球肾炎发病机制方面的研究。电话：(023)68757446
参考文献
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, 百拇医药
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收稿日期：1999-06-11
修回日期：1999-10-13, http://www.100md.com
单位：丁涵露(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所肾内科，重庆 400042)；朱妙珍(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所肾内科，重庆 400042)
关键词：单核细胞趋化蛋白-1；单核细胞；肾小球肾炎
第三军医大学学报000118
提要 目的：探讨肾小球肾炎患者肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达及其与肾间质中浸润的单核细胞(MC)数、肾小管病理损伤、尿蛋白量之间的关系。方法：用免疫组化技术检测5例正常及31例原发性肾炎肾组织中MCP-1、CD68的表达。结果：正常肾组织有极少量MCP-1表达及MC浸润；膜性肾小球肾炎(MN)组肾小球内未见MCP-1、CD68表达；系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)、膜性增生性肾小球肾炎(MPGN)、局灶节段性肾炎(FSGS)组肾小球及肾炎各组肾小管-间质MCP-1+、CD68+细胞数量显著高于正常对照组(P<0.01),肾小球、肾小管MCP-1+表达量与肾间质MC浸润数量呈明显正相关(r1=0.84,r2=0.93,P<0.01)，但与24h尿蛋白定量无相关性(r1=0.52,r2=0.34,P>0.05)，肾小管MCP-1+表达量与病变肾小管数呈正相关(r=0.72,P<0.05)。结论：①MsPGN、MPGN、FSGS肾小球内MCP-1表达增强，提示可能和肾小球内MC浸润有关；②MsPGN、MPGN、FSGS、MN肾小管MCP-1表达增强，提示可能和肾小管-间质MC浸润及肾小管损伤有关。
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中图法分类号 R341.43;R692.31 文献标识码 A
文章编号：1000-5404(2000)01-0060-04
Expression and significance of MCP-1 in patients with glomerulonephritis
DING Han-lu，ZHU Miao-zhen
(Department of Nephrology，Daping Hospital,Third Military Medical University，Chongqing 400042)
Abstract Objective:To study the expression of monocyte Chemoattractant Protein-1(MCP-1) in normal and nephrotic kidneys and its relationship with monocytic infiltration,damage of renal tubules and proteinuria.Methods:Immunohistochemistry was employed to determine the expression of MCP-1 and CD68 cells in 5 normal and 31 nephrotic kidneys.Results： In the normal renal tissues,there was a little MCP-1 expression and monocytic infiltration.No expression of MCP-1 or CD68 was found in the glomeruli of the patients with MN.In the glomeruli of the patients with MsPGN,MPGN and FSGS and in the interstitial tissue of the renal tubules of those with MsPGN,MPGN,FSGS and MN,the expression of MCP-1 and CD68 was significantly higher than that in the normal control (P<0.01).Positive expression of MCP-1 in the glomeruli and renal tubules was significantly correlated to the intensity of monocytic infiltration (r=0.84 and 0.93,P<0.01) but showed no correlation to the quantity of proteinuria (r=0.52 and 0.34,P>0.05).MCP-1 expression in the renal tubules was correlated to the number of damaged tubules (r=0.72,P<0.05).Conclusion： Our findings indicate that MCP-1 plays an important role to induce monocytic infiltration and to mediate tubular damages during glomerulonephritis.
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Key words monocyte chemoattractant protein-1；monocyte；glomerulonephritis
在肾小球肾炎的发生发展过程中，外周血单核细胞(Monocyte，MC)浸润于肾间质具有极为重要的意义,但其浸润机制不太明确。单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattract antprotein-1，MCP-1)是新近明确的对单核/巨噬细胞有趋化、激活双重作用的趋化因子[1]。动物实验证实[2，3]，肾组织细胞MCP-1表达增强与单核细胞浸润相关，但有关人类肾小球肾炎肾组织中MCP-1表达及其与单核细胞浸润、肾小管病理损伤、尿蛋白量之间的关系，国内未见报道，据此，本实验采用免疫组织化学方法探讨在正常及不同病理类型的肾小球肾炎肾组织中MCP-1表达变化及其与肾间质中浸润的单核细胞数、肾小管病理损伤、尿蛋白量之间的关系，以期明确MCP-1在肾小球肾炎发病机制中的作用，为临床治疗肾小球肾炎提供部分实验依据。
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1 材料与方法
1.1 病例选择
病人来源于我科1998年3月至1999年2月住院治疗并行肾穿刺活检的慢性肾小球肾炎患者31例，其中男性17例，女性14例，平均年龄34.5(15～57)岁，均为原发性肾小球肾炎，按1982年WHO拟订的肾小球疾病形态学分类标准[4]进行病理诊断分组。病人肾穿刺前无大剂量免疫抑制剂冲击治疗史。慢性肾炎组包括系膜增生性肾小球肾炎(Mesangial proliferative glomerulonephritis，MsPGN)17例；膜性增生性肾小球肾炎(Membranoproliferative glomerulonephritis，MPGN)5例；局灶性节段性肾小球硬化(Focal segmental glomerular sclerosis，FSGS)4例；膜性肾小球肾炎(Membranous glomerulonephritis，MN)5例。正常对照组5例，均为肾移植供肾，全部经证实肾功能及尿常规正常。
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1.2 观察指标
1.2.1 尿标本 患者入院后留取24h尿标本，备测24h尿蛋白定量。正常对照组尿标本于取移植肾标本时留取，备测尿常规。
1.2.2 普通病理学观察及病变肾小管百分数的测定 肾组织切片常规行HE、PAS、PASM染色，行病理诊断及分类。病变肾小管百分数的测定为计算肾皮质中100个肾小管中出现浊肿、变性、坏死、萎缩的肾小管的百分数。
1.2.3 MCP-1、CD68免疫细胞化学 4°C丙酮固定的10～15μm冰冻切片行S-P法染色，一抗分别为小鼠抗人MCP-1单克隆抗体(Pharmigen公司1∶500)、小鼠抗人CD68抗体(SantaCruze公司1∶50，识别单核细胞)，按照S-P试剂盒(福州迈新公司)说明书进行操作与测定。阴性对照以PBS代替一抗同法操作。
1.2.4 染色细胞的计数[5] 计算每张切片6个以上肾小球横切面内MCP-1+、CD68+细胞数的平均数，以MCP-1+细胞数/肾小球横切面、CD68+细胞数/肾小球横切面表示；计算每mm2皮质肾小管MCP-1+小管占总肾小管百分数，以MCP-1+小管%/mm2表示；计算每mm2皮质肾小管间质CD68+细胞数，以CD68+细胞数/mm2表示。
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1.3 统计学处理
计量资料结果以x±s表示。肾炎组与正常组之间的细胞数比较用t检验或秩和检验。MCP-1+细胞数与CD68+细胞数、病变肾小管百分数的相关分析采用直线相关，MCP-1+细胞数与尿蛋白的相关分析用非参数Spearman等级相关分析。
2 结果
2.1 MCP-1、CD68在肾组织中的表达
免疫组化显示，正常肾组织仅有极小部分的肾小球细胞和肾小管上皮细胞表达极弱的MCP-1，肾小球球内系膜区和肾小管间质区可见极少量CD68表达，呈弱阳性染色。MsPGN、MPGN、FSGS组肾小球和肾小管-间质的MCP-1+、CD68+表达量以及MN组肾小管-间质的MCP-1+、CD68+表达量明显高于正常对照组(P<0.01)。MN组未见肾小球表达MCP-1和CD68，MPGN组肾小球MCP-1+细胞数显著高于MsPGN组(P<0.01),同时MPGN、MsPGN和FSGS组肾小球MCP-1+、CD68+细胞数亦显著高于MN组(P<0.01)，MsPGN与FSGS组，MPGN与FSGS组肾小球阳性细胞数相比较差异不显著，肾炎各组之间MCP-1+肾小管数、小管间质CD68+细胞数相比较差异不显著，见表1。MCP-1阳性染色物质主要沉积于肾小球球内系膜区，此外在Bowman’s囊壁、肾血管内皮细胞、肾小管上皮细胞的基底侧以及部分间质小血管壁亦可见MCP-1表达,在球内系膜区及小管间质区可见CD68阳性染色，见图1～4。
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表1 肾组织MCP-1、CD68表达情况
Tab1 Expression of MCP-1,CD68 in kidney Group
n
Glomerular
Renal tubule
MCP-1+(cell/gcs)
CD68+(cell/gcs)
MCP-1+(rt%/mm2)
CD68+(cell/mm2)
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Control
5
2.3±1.2
0.72±0.4
5.1±2.1
7.2±0.3
MsPGN
17
38.4±5.8**
18.3±4.2**
40.3±5.3**
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MPGN
5
61.5±5.0**△
24.5±2.1**
44.0±5.7**
236.5±12.8**
FSGS
4
47.2±4.1**
20.1±3.7**
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51.3±5.1**
246.7±15.3**
MN
5
0
0
59.7±5.5**
301.0±9.0**
pcs:glomerular crosssection;rt:renal tubule;**:P<0.01 vs control;△:P<0.01 vs MsPGN
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图1 MsPGN中CD68在肾小管间质强阳性表达 (S-P×200)
Fig1 Strong postitive expression of CD68 in tubulointerstitial tissue in MsPGN (S-P×200)
图2 MPGN中肾小球细胞、肾小管上皮细胞强阳性表达MCP-1 (S-P×200)
Fig2 Strong positive expression of MCP-1 in glomerulus and tubular epithelial cell in MPGN (S-P×200)
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图3 FSGS中肾小球细胞强阳性表达CD68 (S-P×400)
Fig3 Strong positive expression of MCP-1 in glomerulus in FSGS (S-P×400)
图4 MN中肾小管上皮细胞强阳性表达MCP-1(S-P×200)
Fig4 Strong positive expression of MCP-1 in tubular epithelial cell in MN(S-P×200)
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2.2 MCP-1表达与肾小球、小管间质巨噬细胞浸润的关系
肾炎组(除外MN组)中肾小球内MCP-1+细胞数与肾小球CD68+细胞数呈明显正相关(r=0.84,P<0.01)，同时MCP-1+肾小管数与小管间质中CD68+细胞数亦呈明显正相关(r=0.93,P<0.01)，在MCP-1表达的部位，有明显的单核细胞浸润，而无MCP-1表达的部位，单核细胞浸润明显减少。
2.3 MCP-1表达与尿蛋白定量、病变肾小管数的关系
MsPGN、MPGN、FSGS、MN组24h尿蛋白定量(g/24h)分别为：4.38±2.37、3.99±0.75，3.53±1.01和5.25±1.70，相关分析表明，肾炎组(除外MN组)肾小球MCP-1+细胞数与尿蛋白量无相关性(r=0.52,P>0.05)，同时，肾炎组MCP-1+肾小管数与尿蛋白量亦无相关性(r=0.34,P>0.05),MsPGN、MPGN、FSGS、MN肾组织均有不同程度的皮质肾小管病理损伤，包括浊肿、变性、坏死、萎缩，MsPGN、MPGN、FSGS、MN病变肾小管的百分数分别为：50.0±5.7、53.7±4.5、58.3±8.9和63.7±5.3。肾小管MCP-1+表达量在小管病变轻的肾组织较低，在小管病变重的肾组织增高，肾炎组肾小管MCP-1+小管数与患者肾小管病变百分数呈正相关(r=0.72,P<0.05)。
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3 讨论
本实验结果显示，正常肾组织可见极少量MCP-1表达及单核细胞浸润，可能与维持其正常的生理功能有关。与正常肾组织比较,MsPGN、MPGN和FSGS组肾小球内MCP-1+、CD68+细胞数增加非常显著(P<0.01)，相关分析发现肾小球内MCP-1+细胞数与CD68+细胞数呈明显正相关(r=0.84,P<0.01)。以上结果说明，肾小球内MCP-1过度表达及其可能引起的单核细胞的炎性浸润参与了肾小球肾炎的病理损害过程。MN组未见肾小球内MCP-1阳性表达及单核细胞的浸润，这与Brad等[3]的报道一致，提示MCP-1、CD68未参与MN肾小球病理损害或MN肾小球的病理损害存在其他因素的损害机制。MsPGN、MPGN、FSGS、MN肾炎患者常伴有比较严重的肾小管-间质病变，其往往是肾脏病变进展及肾功能进一步恶化的重要因素，目前认为单核细胞在其发生发展上起了重要作用。而单核细胞的浸润，常需要有MCP-1的存在[6]。本实验结果显示，肾炎组织中，MCP-1+肾小管数和浸润于小管间质的单核细胞数呈明显正相关(r=0.93，P<0.01)。MCP-1表达增强的肾小管周围有较多的单核细胞浸润，而无MCP-1表达的肾小管周围，则仅有少量单核细胞的浸润。Robert等[7]亦报道人类MN、MPGN、FSGS在MCP-1表达阳性的近端肾小管周围有大量的单核细胞浸润，与本结果一致，本实验另外发现MsPGN在MCP-1表达增强的肾小管周围也有较多的单核细胞浸润，说明肾小管MCP-1高表达可能是单核细胞在局部浸润的重要原因，同时相关分析发现，肾小管MCP-1+细胞数与病变肾小管数呈正相关(r=0.72，P<0.05)，MCP-1表达量在小管病变轻的肾组织较低，在小管病变重的肾组织较高，说明肾小管MCP-1表达增加，可能是导致肾小管病理损害的一个重要原因。动物实验发现，肾小球内异常浸润的单核细胞和尿蛋白之间有相关性；体外实验发现，高浓度白蛋白，转铁蛋白等可使培养的肾小管上皮细胞分泌MCP-1[8]，本实验肾炎患者的尿蛋白量与肾小球、肾小管MCP-1表达量均无相关性(r1=0.52，r2=0.34，P>0.05)，提示免疫因素[9]等原因介导肾组织损伤的作用可能更为重要，在体内MCP-1与尿蛋白的关系需要进一步研究。
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据本实验免疫组化结果，可知MCP-1在肾组织的表达，主要集中在肾小球球系膜区和肾小管上皮细胞基底侧，而肾小球系膜区和肾小管间质区正是单核细胞浸润的主要部位，体外细胞培养已证实，人肾小球系膜细胞、肾小管上皮细胞在细胞因子作用下，可表达分泌MCP-1，并对单核细胞有趋化作用[7,10]，以上结果提示肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞在体内可能表达MCP-1，当然本实验也不排除浸润于系膜区的单核细胞表达MCP-1的可能。此外在Bowman’s囊壁，肾小球血管内皮细胞中也可见MCP-1阳性表达，细胞培养证实，在细胞因子作用下，肾小球上皮细胞可表达MCP-1[11]，另外在抗胸腺细胞抗体诱导的肾炎动物模型[2]，用免疫组化方法发现肾小球内皮细胞表达MCP-1，提示肾小球上皮细胞、内皮细胞在体内可能表达MCP-1。
据本实验，我们认为MCP-1可能在肾小球肾炎患者的单核细胞浸润过程中起重要作用，这就为临床治疗肾小球肾炎提出了一条新思路，即在进一步探索如何降低MCP-1在肾组织中的表达从而降低单核细胞在肾间质的浸润现象方面具有重要价值。
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作者简介：丁涵露(1970.2)，女，山东省日照市人，硕士研究生，住院医师，主要从事肾小球肾炎发病机制方面的研究。电话：(023)68757446
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收稿日期：1999-06-11
修回日期：1999-10-13, http://www.100md.com