格列齐特片剂的生物利用度研究
作者：孙华东 张强 王桂玲 周田彦 魏树礼
单位：北京医科大学药学院药剂研究室, 北京 100083
关键词：格列齐特；生物利用度
中国临床药理学杂志000114
摘 要：为比较研制的格列齐特片剂相对进口格列齐特片剂的生物利用度, 建立了格列齐特的体内HPLC分析方法: 格列吡嗪为内标,甲醇:0.2%冰醋酸(3:2,v/v)为流动相,检测波长为229 nm,血浆处理采用乙醚一步萃取法,准确可靠。统计分析结果表明两种制剂的生物利用度无显著性差异(P>0.05),相对生物利用度为106.74%,药代动力学参数k、Cmax、Tmax、T1/2、MRT等均无显著性差异(P>0.05),证明两种制剂生物等效。
Pharmacokinetic and Relative Bioavailability of
, 百拇医药
Gliclazide Tablets By High Performance Liquid Chromatography
SUN Hua-Dong ZHANG Qiang WANG Gui-Ling ZHOU Tian-Yan WEI Shu-Li
(Departmet of Pharmaceutics, School of Pharmaceutical Sciences, Beijing Medical University,Beijing 100083)
Abstract：A high performance liquid chromatography was established for the determination of gliclazide in healthy human serum. Using gliclazide as internal standard, methyl alcohol containing 0.2% acetic acid (3:2,v/v) as the mobile phase ,229 nm as detective wavelength and applying Hypersil ODS-2 column at 30, this method is accurate, convenient and credible, especially for one-step extraction by diethyl ether. In comparison of two types of gliclazide tablets, one is domestic, the other is imported (Diamicron(r)). Statistical results showed that the two preparations are bioequivalent (P>0.05) through ANOVA and two one-sided test procedures.The relative bioavailability is 106.74% and the pharmacokinetic parameters, including k, T1/2, Cmax, Tmax and MRT, have no prominent difference (P>0.05).
, 百拇医药
Key words：gliclazide ; bioavailability
格列齐特(gliclazide)属于第二代磺酰脲类口服降糖药,兼具降糖及改善凝血功能的双重作用〔1〕。格列齐特片剂首先由法国施维雅药厂生产。国内亦有生产并已广泛应用于临床治疗。本文在文献方法〔2～6〕的基础上加以改进建立了HPLC方法并以进口格列齐特片剂为参比制剂,考察了研制的格列齐特片剂的药代动力学和生物利用度,旨在为临床合理用药提供参考依据。
材料与方法
1. 药品与试剂
格列齐特标准品(天津新新制药厂提供)；格列吡嗪(内标,北京德众万全药物技术开发公司提供);受试药物为试制的格列齐特片，每片80 mg,北京德众万全药物技术开发公司，批号980701;对照品格列齐特片，每片80 mg(商品:达美康),法国施维雅药厂与国营天津华津制药厂合作生产,批号为971225。甲醇为色谱纯，余为分析纯。
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2. 仪器及色谱条件
HP 1100 高效液相色谱系统，包括 HP 1100 单元泵、手动进样器、HP 1100 [YJYJS1]可编程紫外检测器、HP 1100 柱温箱、HP 3395 积分仪 ( Hewlett-Packard Inc.,U.S.A.)； Hypersil ODS-2 分析柱 (250×4.6 mm, 10 um, 大连依丽特科学仪器有限公司)；甲醇：0.2%冰醋酸 (3:2, v/v)为流动相, 流速1.0 ml.min-1, 柱温30℃，衰减为1，纸速0.3 cm.min-1, 检测波长229nm。
3. 受试对象
健康男性10名，年龄在19～23岁之间，体重54～75 kg。体检证明身体健康，精神状况良好。实验前停药一个月，实验过程中禁止服用其它药物, 并禁烟酒。在说明了本实验的目的，药物特性，临床应用和可能出现的药物不良反应之后，签定受试者知情同意书。
, 百拇医药
4. 给药方案
10名受试者随机分为两组,每组5人,交叉给药。给药前禁食12h,取空白血3 ml, 早8:00用200 ml温开水服药(80 mg格列齐特片或80 mg达美康)。继续禁食2h后统一进标准餐。服药后1, 2, 3, 5, 7，9, 12, 15, 24，36和48h取前臂静脉血3ml, 肝素抗凝，立即在3000 r.min-1的条件下离心5 min, 分离出血浆于 -20℃冰箱保存备用。一周后受试者服用另一片剂进行交叉实验。
5. 样品处理方法
取血浆样品500 ml置10 ml具塞离心管内，依次精密加入内标溶液(0.1 mg.ml-1)30 ml,磷酸盐缓冲液 (pH = 6.8) 0.3 ml,饱和硫酸锌溶液0.2 ml, 旋涡快速混合1 min后精密加入无水乙醚5 ml,经振荡15 min, 离心(3000 r.min-1)5 min，精密吸取醚层4 ml于35℃轻柔氮气流吹干。残渣用100 ml 甲醇溶解,取20 ml进样。
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6. 数据处理和统计分析
实验数据采用中国药学会编制的3p87程序进行药代动力学参数计算,AUC用梯形法计算, Cmax、Tmax为实测值。以参比制剂的曲线下面积AUC0-∞为标准，计算试制制剂的相对生物利用度，并对主要药代动力学参数进行方差分析及双单侧t检验。
结果
1. 方法学
1.1 色谱行为
在本实验条件下, 格列齐特、格列吡嗪及血浆杂质得到良好分离, 保留时间格列齐特为10.50 min, 格列吡嗪为8.0 min,符合分析要求。色谱图请见图1。
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Fig.1Chromatograms of gliclazide from plasma
1-Glipizide(internal standard,TR=8.0min) 2-Gliclazide(TR=10.50min)
A.Blank serum B.Standard C.Plasma sample
1.2 标准曲线
取空白血浆500 ml，分别精密加入0.2，0.6，1.2，2.4，4.8，6.0，12.0，24.0 mg.L-1的格列齐特标准溶液100ml，按样品处理项下的方法处理。 以格列齐特峰面积与内标峰面积之比Ay/An对C作线性回归,回归方程为: Ay/An=0.1372C+ 0.0021 r=0.9990(n=8)，线性范围为0.033～4mg.L-1,药物浓度C与药物峰面积与内标物峰面积之比(Ay/An)有较好的相关性。最低检测浓度为0.03 mg.L-1，最小检测量为0.6 ng。
, 百拇医药
1.3 回收率及精度
方法回收率测定结果见表1。变异系数测定结果见表2。结果表明，该生物样品测定方法线性关系良好，血浆不干扰样品的测定，日内日间精密度较好,回收率较高，符合测定生物样品的要求。
Table1.Recovery of gliclazide in human plasma(n=5) Added(mg.L-1)
Found(mg.L-1)
Recovery(%)
0.05
0.05±0.01
92.00
, 百拇医药
0.80
0.87±0.08
108.63
4.00
3.60±0.20
90.05
Table2.Precision of gliclazide in human plama(n=5) Added
(mg.L-1)
Within-day
mean±SD
, http://www.100md.com (mg.L-1)
Variance
RSD(%)
Between-day
mean±SD
(mg.L-1)
Variance
RSD(%)
0.05
0.05±0.01
10.43
, 百拇医药
0.04±0.01
7.80
0.80
0.87±0.08
9.32
0.88±0.07
8.23
4.00
3.60±0.20
5.41
3.58±0.20
5.59
, http://www.100md.com
2. 数据处理及结果
研制的格列齐特片或达美康片的药-时数据见图2。两制剂的药代动力学参数见表5。可见10名受试者口服单剂量格列齐特片(80 mg)或达美康(80 mg)后, 试制的格列齐特片和达美康的Cmax分别为2.40±0.76和2.50±0.72 mg.L-1,没有显著性差异(P>0.05)；而格列齐特片和达美康的Tmax分别为9.82±0.5和10.03±0.1 h, 也没有显著性差异(P>0.05)。相对生物利用度为106.74%，90%可信限为80.98%～102.37%,经双单侧t检验证明两种制剂生物等效。
Fig2.Irean concentration-time curve after single oral
, 百拇医药
dose of 80 mg gliclazide(n=10)
Table3.The pharmacokinetics parameters of gliclaxide
after a single oral dose(80mg)gliclazide tablets Parameters
Diamicron(r)
Domestic gliclazide
table
Cmax(mg.L-1)
2.50±0.72
, http://www.100md.com
2.40±0.76
Tmax(h)
10.00±3.09
9.80±2.49
AUC0-48(mgh.L-1)
36.43±11.44
35.58±12.77
AUC0-inf(mgh.L-1)
41.25±12.99
, 百拇医药 38.24±14.13
ka(h-1)
0.22±0.17
0.23±0.13
ke(h-1)
0.09±0.04
0.10±0.03
T1/2a(h-1)
3.98±1.61
3.90±1.95
T1/2e(h-1)
, http://www.100md.com
9.20±4.66
7.24±2.20
MRT(h-1)
24.18±9.16
19.73±4.84
Fr(%)
-
106.74±61.2
讨论
用有机溶剂萃取血浆中的药物时,血浆pH对提取率有一定影响。一般对于弱酸或弱碱性药物,当血浆pH比pKa小两个单位(对弱酸)或大两个单位(对弱碱)时,药物分子以游离态存在,故提取率较高。在实验中,格列齐特属弱酸性药物(pKa),结果证明血浆pH为4.0时比pH为6.8时的提取率略高,但前者引入的血浆杂质远比后者多,所以我们选用了pH为6.8的提取环境。这一点Masako等〔3〕亦有论述。
, http://www.100md.com
萃取血浆中格列齐特所用的有机溶剂文献报导〔2～5〕的有苯,氯仿,乙酸乙酯等。上述溶剂毒性大,沸点高,需在较高温度下(>50℃)吹干,而格列齐特在高温下不稳定(最好<40℃)。所以我们选用毒性相对较小而沸点较低的乙醚(bp35℃)作为萃取剂。
硫酸锌饱和溶液可以更加有效地去除血浆中的杂质,且用量小,不会因稀释而引起检测限降低。
文献[4-6]报道的格列奇特片剂以进口片剂作参比,均表现为生物不等效。而本试验中受试制剂与文献相比，达峰缓、峰值低且与进口片剂生物等效。
参考文献
1.Holmes B, Heel RC, Brosden RN, et al. Gliclazide, a preliminary review of its pharmacodynamic properties and therapeutic effects in diabetes mellitus. Drugs, 1984;27:301～306.
, http://www.100md.com
2.Masako K, Kunio K, Mitsuo H, et al. Determination of gliclazide in human serum by high-performance liquid chromatography using an anionexchange resin. J Chromatogr, 1980;183:467～473.
3.Masako K, Knio K,Mitso H,et al.Reversed-phase high performance liquid chromatographic determination of gliclazide in human plasma.Chem Pharm Bull.1980;28:344～346.
4.刘皋林、高申.国产及进口格列齐特片的药物动力学特性及其生物利用度比较. 中国药学, 1993;28:144～146.
5.张丹、曾经泽. 血浆中格列齐特的HPLC测定及药代动力学研究.药物分析, 1996;183:157～159.
6.孙建国、高凌.格列齐特片的人体药代动力学及其相对生物利用度研究。中国药科大学学报，1998;29:217～219.
收稿：1999-3-7
修回：1999-10-9, 百拇医药
单位：北京医科大学药学院药剂研究室, 北京 100083
关键词：格列齐特；生物利用度
中国临床药理学杂志000114
摘 要：为比较研制的格列齐特片剂相对进口格列齐特片剂的生物利用度, 建立了格列齐特的体内HPLC分析方法: 格列吡嗪为内标,甲醇:0.2%冰醋酸(3:2,v/v)为流动相,检测波长为229 nm,血浆处理采用乙醚一步萃取法,准确可靠。统计分析结果表明两种制剂的生物利用度无显著性差异(P>0.05),相对生物利用度为106.74%,药代动力学参数k、Cmax、Tmax、T1/2、MRT等均无显著性差异(P>0.05),证明两种制剂生物等效。
Pharmacokinetic and Relative Bioavailability of
, 百拇医药
Gliclazide Tablets By High Performance Liquid Chromatography
SUN Hua-Dong ZHANG Qiang WANG Gui-Ling ZHOU Tian-Yan WEI Shu-Li
(Departmet of Pharmaceutics, School of Pharmaceutical Sciences, Beijing Medical University,Beijing 100083)
Abstract：A high performance liquid chromatography was established for the determination of gliclazide in healthy human serum. Using gliclazide as internal standard, methyl alcohol containing 0.2% acetic acid (3:2,v/v) as the mobile phase ,229 nm as detective wavelength and applying Hypersil ODS-2 column at 30, this method is accurate, convenient and credible, especially for one-step extraction by diethyl ether. In comparison of two types of gliclazide tablets, one is domestic, the other is imported (Diamicron(r)). Statistical results showed that the two preparations are bioequivalent (P>0.05) through ANOVA and two one-sided test procedures.The relative bioavailability is 106.74% and the pharmacokinetic parameters, including k, T1/2, Cmax, Tmax and MRT, have no prominent difference (P>0.05).
, 百拇医药
Key words：gliclazide ; bioavailability
格列齐特(gliclazide)属于第二代磺酰脲类口服降糖药,兼具降糖及改善凝血功能的双重作用〔1〕。格列齐特片剂首先由法国施维雅药厂生产。国内亦有生产并已广泛应用于临床治疗。本文在文献方法〔2～6〕的基础上加以改进建立了HPLC方法并以进口格列齐特片剂为参比制剂,考察了研制的格列齐特片剂的药代动力学和生物利用度,旨在为临床合理用药提供参考依据。
材料与方法
1. 药品与试剂
格列齐特标准品(天津新新制药厂提供)；格列吡嗪(内标,北京德众万全药物技术开发公司提供);受试药物为试制的格列齐特片，每片80 mg,北京德众万全药物技术开发公司，批号980701;对照品格列齐特片，每片80 mg(商品:达美康),法国施维雅药厂与国营天津华津制药厂合作生产,批号为971225。甲醇为色谱纯，余为分析纯。
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2. 仪器及色谱条件
HP 1100 高效液相色谱系统，包括 HP 1100 单元泵、手动进样器、HP 1100 [YJYJS1]可编程紫外检测器、HP 1100 柱温箱、HP 3395 积分仪 ( Hewlett-Packard Inc.,U.S.A.)； Hypersil ODS-2 分析柱 (250×4.6 mm, 10 um, 大连依丽特科学仪器有限公司)；甲醇：0.2%冰醋酸 (3:2, v/v)为流动相, 流速1.0 ml.min-1, 柱温30℃，衰减为1，纸速0.3 cm.min-1, 检测波长229nm。
3. 受试对象
健康男性10名，年龄在19～23岁之间，体重54～75 kg。体检证明身体健康，精神状况良好。实验前停药一个月，实验过程中禁止服用其它药物, 并禁烟酒。在说明了本实验的目的，药物特性，临床应用和可能出现的药物不良反应之后，签定受试者知情同意书。
, 百拇医药
4. 给药方案
10名受试者随机分为两组,每组5人,交叉给药。给药前禁食12h,取空白血3 ml, 早8:00用200 ml温开水服药(80 mg格列齐特片或80 mg达美康)。继续禁食2h后统一进标准餐。服药后1, 2, 3, 5, 7，9, 12, 15, 24，36和48h取前臂静脉血3ml, 肝素抗凝，立即在3000 r.min-1的条件下离心5 min, 分离出血浆于 -20℃冰箱保存备用。一周后受试者服用另一片剂进行交叉实验。
5. 样品处理方法
取血浆样品500 ml置10 ml具塞离心管内，依次精密加入内标溶液(0.1 mg.ml-1)30 ml,磷酸盐缓冲液 (pH = 6.8) 0.3 ml,饱和硫酸锌溶液0.2 ml, 旋涡快速混合1 min后精密加入无水乙醚5 ml,经振荡15 min, 离心(3000 r.min-1)5 min，精密吸取醚层4 ml于35℃轻柔氮气流吹干。残渣用100 ml 甲醇溶解,取20 ml进样。
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6. 数据处理和统计分析
实验数据采用中国药学会编制的3p87程序进行药代动力学参数计算,AUC用梯形法计算, Cmax、Tmax为实测值。以参比制剂的曲线下面积AUC0-∞为标准，计算试制制剂的相对生物利用度，并对主要药代动力学参数进行方差分析及双单侧t检验。
结果
1. 方法学
1.1 色谱行为
在本实验条件下, 格列齐特、格列吡嗪及血浆杂质得到良好分离, 保留时间格列齐特为10.50 min, 格列吡嗪为8.0 min,符合分析要求。色谱图请见图1。
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Fig.1Chromatograms of gliclazide from plasma
1-Glipizide(internal standard,TR=8.0min) 2-Gliclazide(TR=10.50min)
A.Blank serum B.Standard C.Plasma sample
1.2 标准曲线
取空白血浆500 ml，分别精密加入0.2，0.6，1.2，2.4，4.8，6.0，12.0，24.0 mg.L-1的格列齐特标准溶液100ml，按样品处理项下的方法处理。 以格列齐特峰面积与内标峰面积之比Ay/An对C作线性回归,回归方程为: Ay/An=0.1372C+ 0.0021 r=0.9990(n=8)，线性范围为0.033～4mg.L-1,药物浓度C与药物峰面积与内标物峰面积之比(Ay/An)有较好的相关性。最低检测浓度为0.03 mg.L-1，最小检测量为0.6 ng。
, 百拇医药
1.3 回收率及精度
方法回收率测定结果见表1。变异系数测定结果见表2。结果表明，该生物样品测定方法线性关系良好，血浆不干扰样品的测定，日内日间精密度较好,回收率较高，符合测定生物样品的要求。
Table1.Recovery of gliclazide in human plasma(n=5) Added(mg.L-1)
Found(mg.L-1)
Recovery(%)
0.05
0.05±0.01
92.00
, 百拇医药
0.80
0.87±0.08
108.63
4.00
3.60±0.20
90.05
Table2.Precision of gliclazide in human plama(n=5) Added
(mg.L-1)
Within-day
mean±SD
, http://www.100md.com (mg.L-1)
Variance
RSD(%)
Between-day
mean±SD
(mg.L-1)
Variance
RSD(%)
0.05
0.05±0.01
10.43
, 百拇医药
0.04±0.01
7.80
0.80
0.87±0.08
9.32
0.88±0.07
8.23
4.00
3.60±0.20
5.41
3.58±0.20
5.59
, http://www.100md.com
2. 数据处理及结果
研制的格列齐特片或达美康片的药-时数据见图2。两制剂的药代动力学参数见表5。可见10名受试者口服单剂量格列齐特片(80 mg)或达美康(80 mg)后, 试制的格列齐特片和达美康的Cmax分别为2.40±0.76和2.50±0.72 mg.L-1,没有显著性差异(P>0.05)；而格列齐特片和达美康的Tmax分别为9.82±0.5和10.03±0.1 h, 也没有显著性差异(P>0.05)。相对生物利用度为106.74%，90%可信限为80.98%～102.37%,经双单侧t检验证明两种制剂生物等效。
Fig2.Irean concentration-time curve after single oral
, 百拇医药
dose of 80 mg gliclazide(n=10)
Table3.The pharmacokinetics parameters of gliclaxide
after a single oral dose(80mg)gliclazide tablets Parameters
Diamicron(r)
Domestic gliclazide
table
Cmax(mg.L-1)
2.50±0.72
, http://www.100md.com
2.40±0.76
Tmax(h)
10.00±3.09
9.80±2.49
AUC0-48(mgh.L-1)
36.43±11.44
35.58±12.77
AUC0-inf(mgh.L-1)
41.25±12.99
, 百拇医药 38.24±14.13
ka(h-1)
0.22±0.17
0.23±0.13
ke(h-1)
0.09±0.04
0.10±0.03
T1/2a(h-1)
3.98±1.61
3.90±1.95
T1/2e(h-1)
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9.20±4.66
7.24±2.20
MRT(h-1)
24.18±9.16
19.73±4.84
Fr(%)
-
106.74±61.2
讨论
用有机溶剂萃取血浆中的药物时,血浆pH对提取率有一定影响。一般对于弱酸或弱碱性药物,当血浆pH比pKa小两个单位(对弱酸)或大两个单位(对弱碱)时,药物分子以游离态存在,故提取率较高。在实验中,格列齐特属弱酸性药物(pKa),结果证明血浆pH为4.0时比pH为6.8时的提取率略高,但前者引入的血浆杂质远比后者多,所以我们选用了pH为6.8的提取环境。这一点Masako等〔3〕亦有论述。
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萃取血浆中格列齐特所用的有机溶剂文献报导〔2～5〕的有苯,氯仿,乙酸乙酯等。上述溶剂毒性大,沸点高,需在较高温度下(>50℃)吹干,而格列齐特在高温下不稳定(最好<40℃)。所以我们选用毒性相对较小而沸点较低的乙醚(bp35℃)作为萃取剂。
硫酸锌饱和溶液可以更加有效地去除血浆中的杂质,且用量小,不会因稀释而引起检测限降低。
文献[4-6]报道的格列奇特片剂以进口片剂作参比,均表现为生物不等效。而本试验中受试制剂与文献相比，达峰缓、峰值低且与进口片剂生物等效。
参考文献
1.Holmes B, Heel RC, Brosden RN, et al. Gliclazide, a preliminary review of its pharmacodynamic properties and therapeutic effects in diabetes mellitus. Drugs, 1984;27:301～306.
, http://www.100md.com
2.Masako K, Kunio K, Mitsuo H, et al. Determination of gliclazide in human serum by high-performance liquid chromatography using an anionexchange resin. J Chromatogr, 1980;183:467～473.
3.Masako K, Knio K,Mitso H,et al.Reversed-phase high performance liquid chromatographic determination of gliclazide in human plasma.Chem Pharm Bull.1980;28:344～346.
4.刘皋林、高申.国产及进口格列齐特片的药物动力学特性及其生物利用度比较. 中国药学, 1993;28:144～146.
5.张丹、曾经泽. 血浆中格列齐特的HPLC测定及药代动力学研究.药物分析, 1996;183:157～159.
6.孙建国、高凌.格列齐特片的人体药代动力学及其相对生物利用度研究。中国药科大学学报，1998;29:217～219.
收稿：1999-3-7
修回：1999-10-9, 百拇医药