Graves 眼病患者血清抗眼肌膜抗体与TSH受体抗体的关系
作者：吴艺捷
单位：吴艺捷(200080 上海市第一人民医院内分泌科)
关键词：Graves眼病；眼肌膜抗体；TSH受体抗体
临床内科杂志000119
摘 要：目的：评价抗眼肌膜抗体和TSH受体抗体(TRAb)在Graves眼病(GO)免疫发病中的作用。方法：检测Graves病伴GO或无GO患者及正常对照组血清抗眼肌膜抗体和TRAb,进行血清抑制试验。结果：GO组血清抗眼肌膜抗体检出率明显增高,TRAb阳性的特异性不及抗眼肌膜抗体。血清抑制试验中抗眼肌膜抗体阳性血清不能阻断单克隆TSH受体抗体(3B12)与重组人TSH受体(3A1)或眼肌膜抗原的结合。结论：血清抗眼肌膜抗体和TRAb在GO自身免疫发病中的作用可能是相互独立的。
分类号：R581.1 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1001-9057(2000)01-0046-03
Relationship between anti-eye-muscle membrane antibody and TSH receptor antibody in serum from patient with Graves ophthalmopathy
WU Yijie.
(Department of Endocrinology,Shanghai First Peoples Hospital,Shanghai 200080，Chian.)
Abstract：Objective：To evaluate the effects of anti-eye-muscle membrane antibody and TSH receptor antibody(TRAb) in the immune pathogenesis of Graves ophthalmopathy (GO).Methods：Anti-eye-muscle membrane antibodies and TRAb were detected in sera from Graves hyperthyroid patients with GO(GO group)and without GO (non-GO group),bing compared with normal control.Serum inhibition assay was carried out in these sera.Results：Detectable anti-64 and 95 KDa antibodies in GO group was significantly higher than those in non-GO group as well as normal controls (P<0.05 or 0.01) .Positive rates of serum TRAb were similar between GO group and non-GO group(P>0.05),whereas no positive TRAb could be found in normal controls.By serum inhibition assay,we found that no serum could block 3B12,a monoclonal TSH receptor antibody,binding to 3A1,a recombinant TSH receptor,or eye muscle membrane antigens.Conclusion：There are specific antibodies that recognise eye muscle membrane antigens in the sera from patients with GO.Anti-eye-muscle membrane antibodies might be more sensitive than TRAb in evaluating autoimmune state of GO.These antibodies might be independent of TRAb in relevant to the pathogenesis of GO.
, 百拇医药
Key words：Graves ophthalmopathy；Eye-muscle membrane antibody；TSH receptor antibody
Graves眼病(GO)的发病机理尚不完全清楚[1],文献报道GO患者血清中存在抗眼肌膜抗体,与GO的临床表现密切相关[1-3]。另一方面,伴有GO的Graves病患者血清TRAb的阳性率明显高于无GO的Graves病患者,TRAb的阳性率明显高于无GO的Graves病患者,TRAb在GO的发病中亦起着重要作用[1,4]。但抗眼肌膜抗体的TRAb在有、无GO二者之间的关系则不清楚,我们对此进行了观察。现报道如下。
对象和方法
一、研究对象:(1)Graves病伴GO组(GO组)22例,男性2例,女性20例,年龄20岁～69岁，平均年龄43岁。参照美国甲状腺协会的诊断标准[1],眼病的严重程度为1～4级。(2)Graves病无GO组(无GO组)33例,男性5例,女性28例，年龄18岁～71岁,平均年龄41岁，均无GO的病状和眼征。(3)正常对照组25例,男性4例,女性21例,年龄22岁～67岁,平均年龄40岁，均无甲亢的症状和体征。
, http://www.100md.com
二、抗眼肌膜抗体测定:用猪眼肌制备眼肌膜抗原[2],SDS-PAGE和Western印迹用5%浓缩胶、8%分离胶,抗原蛋白质浓度为1.5 mg/ml,标准品分子量为29 kDa～205 kDa(Sigma公司),依次进行电泳,4℃过夜转移,阻滞后,分别与待测血清或PBS(空白对照)温育,再与抗人IgG温育,显色判读结果。
三、血清抑制试验：基本方法与上Western印迹相似,但抗原分别用眼肌膜和重组人TSH受体(3A1),电泳,转移后,两种抗原均先与受测血清温育,再依次与单克隆TSH受体抗体(3B12)和抗鼠IgG温育,显色并判读结果。
四、血清TRAb和TSH测定：血清TRAb测定用放射受体分析法,试剂盒由英国RSR Limited公司提供,正常值范围为<8U/L。血清TSH测定用IRMA法,试剂盒由英国Ciba Corning Diagnostics Limited 公司提供,正常值范围0.3 mIU/L～5.5 mIU/L。
, http://www.100md.com
五、统计学处理：用microsta软件完成,各组间率的差异用χ2或Fisher检验。
结 果
一、GO组患者血清抗55 kDa、64 kDa、95 kDa眼肌膜抗体检出率分别为22.7%、63.6%、50.0%；无GO组为9.1%、18.2%、9.1%；正常对照组为12.0%、8.0%、12.0%。抗55 kDa眼肌膜抗体检出率在三组间比较无显著性差异,抗64 kDa和95 kDa眼肮膜抗体检出率为GO组高于无GO组和正常对照组(P<0.05～0.01),而后两组间比较无显著性差异(P>0.05)。
二、GO组TRAb阳性率为63.6%(14/22),无GO组为48.5%(16/33)。二者比较无显著性差异(P>0.05),正常对照组无一例TRAb阳性。
三、根据GO组与无GO组患者血清TRAb阳性或阴性进一步分组,比较各组抗眼肮膜抗体的检出率(见表1)。GO组中TRAb阳性与阴性患者之间抗眼肌膜抗体检出率相似。但在无GO组中,TRAb阳性者抗55 kDa和64 kDa抗体检出率高于阴性者(P<0.05)。在GO组与无GO组两组间相比较,除抗55 kDa抗体外,无论TRAb阳性或阴性,均以GO组抗体的检出率较高(P<0.05～0.01)。
, http://www.100md.com
表1 Graves眼病患者血清TRAb与抗眼肌膜抗体检出率的关系 项 目
55 kDa
64 kDa
95 kDa
GD伴GO
GD无GO
GD伴GO
GD无GO
GD伴GO
GD无GO
TRAb阳性
28.6(4/14)
, 百拇医药
18.8(3/16)
64.3(9/14)
31.3(5/16)*
50.0(7/14)
12.5(3/16)**
TRAb阴性
12.5(1/8)
0(0/17)
2.5(5/8)
5.9(1/17)**#
50.0(4/8)
, 百拇医药
5.9(1/17)**
注:与GD伴GO相比*P<0.05,**P<0.01;TRAb阳性与阴性相比#P<0.05。GD为Graves病,GO为Graves眼病。 四、根据GO组与无GO组患者血清TSH水平,再分为TSH正常和异常两亚组,比较各组TRAb的阳性率(见表2)。结果GO组中TSH正常和异常亚组间TRAb阳性率相似且趋较高,无GO组仅TSH异常，亚组TRAb阳性率较高(P<0.01)。
表2 Graves眼病患者血清TSH水平与TRAb阳性率 组 别
TSH异常
TSH正常
Graves病伴GO组
72.7(8/11)
, http://www.100md.com
54.5(6/11)
Graves病无GO组
59.3(16/27)*
0(0/6)△
注:TSH正常与异常之间相比*P<0.01;与Graves伴GO组相比*P<0.01。
五、血清抑制试验中3B12能识别眼肌膜和3A1(抗原抗体反应条带分别为55 kDa和76 kDa)。当眼肌膜和3A1两抗原先与呈现抗55 kDa、64 kDa和95 kDa抗体阳性的血清温育后,再与3B12及抗鼠IgG温育,呈现的反应带与预先未与血清温育的反应带相同。说明血清抗眼肌膜抗体,即使是55 kDa抗体均不能抑制(阻断)随后3B12与眼肌膜抗原和3A1的结合。
, http://www.100md.com
讨 论
一般认为GO是一种器官特异性自身免疫性疾病[1，2]。本资料中GO组患者血清中存在特异性抗眼肌膜抗体,提示自身免疫反应参与了GO的发病,在此反应中眼肌是主要的靶组织[1,3]。
文献报道血清TRAb水平与GO时眼肌的改变密切相关[4],本组也见到GO患者血清TRAb阳性率较高,但无GO患者同样亦有较高的阳性率,当这些患者仍处于TSH异常时,两组TRAb阳性率相似，当TSH正常后，才呈现GO组TRAb阳性率高于无GO组，而抗眼肌膜抗体检出率无论是整组间比较或是在TRAb阳性与阴性的亚组间比较,均显示GO组的检出率高于无GO组,提示抗眼肌膜抗体在评价GO患者的自身免疫状态时较TRAb有更好的特异性。
有作者发现球后组织亦有TSH受体的表达,认为其在GO的发病中是一潜在自身抗原[5]。本组单克隆TSH受体抗体(3B12)不仅能与重组人TSH受体(3A1)结合,而且可识别眼肌膜抗原,而GO患者血清同样亦可与二者起反应。但在血清抑制试验中,患者血清,包括55 kDa抗体阳性的血清与3A1或眼肌膜抗原预温育后,却不能阻断随后3B12与这两种抗原相结合。虽然3B12识别眼肌膜抗原的确切机理尚待研究,但血清抗体识别的眼肌膜抗原显然不是TSH受体。在GO免疫发病机理中,抗眼肌膜抗体与TRAb这两种自身抗体的作用可能是相互独立的。
, 百拇医药
参考文献：
[1] Burch HB & Wartofsky L.Graves ophthalmopathy:current concepts regarding pathogenesis and management.Endocri Rev,1993,14∶747-793.
[2] Zhang Z G,Salvi M,Miller A,et al.Restricted tissue reactivity of autoantibodies to a 64-kDa eye muscle membrane antigen in thyroid associated ophthalmopathy.Clin Immun Immunopath,1992,62∶183-189.
[3] Barsouk A,Wengrowicz S,Scalise D,et al.New assays for the measurement of serum antibodies reactive with eye muscle membrane antigens confirm their significance in thyroid-associated ophthalmopathy.Thyroid,1995,5∶195-200.
, http://www.100md.com
[4] Nishikawa M,Yoshimura M,Toyoda N,et al.Correlation of orbital muscle changes evaluated by magnetic resonance imaging and thyroid-stimulating antibody in patients with Graves ophthalmopathy.Acta Endocrinol,1993,129∶213-219.
[5] Bahn RS,Dutton CM,Natt N,et al.Thyrotropin receptor expression in Graves orbital adipose/ connective tissues:potential autoantigen in Graves ophthalmopathy.J Clin Endocrinol Metab,1998,83∶998-1002.
收稿日期：1999-01-28
修回日期：1999-04-20, 百拇医药
单位：吴艺捷(200080 上海市第一人民医院内分泌科)
关键词：Graves眼病；眼肌膜抗体；TSH受体抗体
临床内科杂志000119
摘 要：目的：评价抗眼肌膜抗体和TSH受体抗体(TRAb)在Graves眼病(GO)免疫发病中的作用。方法：检测Graves病伴GO或无GO患者及正常对照组血清抗眼肌膜抗体和TRAb,进行血清抑制试验。结果：GO组血清抗眼肌膜抗体检出率明显增高,TRAb阳性的特异性不及抗眼肌膜抗体。血清抑制试验中抗眼肌膜抗体阳性血清不能阻断单克隆TSH受体抗体(3B12)与重组人TSH受体(3A1)或眼肌膜抗原的结合。结论：血清抗眼肌膜抗体和TRAb在GO自身免疫发病中的作用可能是相互独立的。
分类号：R581.1 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1001-9057(2000)01-0046-03
Relationship between anti-eye-muscle membrane antibody and TSH receptor antibody in serum from patient with Graves ophthalmopathy
WU Yijie.
(Department of Endocrinology,Shanghai First Peoples Hospital,Shanghai 200080，Chian.)
Abstract：Objective：To evaluate the effects of anti-eye-muscle membrane antibody and TSH receptor antibody(TRAb) in the immune pathogenesis of Graves ophthalmopathy (GO).Methods：Anti-eye-muscle membrane antibodies and TRAb were detected in sera from Graves hyperthyroid patients with GO(GO group)and without GO (non-GO group),bing compared with normal control.Serum inhibition assay was carried out in these sera.Results：Detectable anti-64 and 95 KDa antibodies in GO group was significantly higher than those in non-GO group as well as normal controls (P<0.05 or 0.01) .Positive rates of serum TRAb were similar between GO group and non-GO group(P>0.05),whereas no positive TRAb could be found in normal controls.By serum inhibition assay,we found that no serum could block 3B12,a monoclonal TSH receptor antibody,binding to 3A1,a recombinant TSH receptor,or eye muscle membrane antigens.Conclusion：There are specific antibodies that recognise eye muscle membrane antigens in the sera from patients with GO.Anti-eye-muscle membrane antibodies might be more sensitive than TRAb in evaluating autoimmune state of GO.These antibodies might be independent of TRAb in relevant to the pathogenesis of GO.
, 百拇医药
Key words：Graves ophthalmopathy；Eye-muscle membrane antibody；TSH receptor antibody
Graves眼病(GO)的发病机理尚不完全清楚[1],文献报道GO患者血清中存在抗眼肌膜抗体,与GO的临床表现密切相关[1-3]。另一方面,伴有GO的Graves病患者血清TRAb的阳性率明显高于无GO的Graves病患者,TRAb的阳性率明显高于无GO的Graves病患者,TRAb在GO的发病中亦起着重要作用[1,4]。但抗眼肌膜抗体的TRAb在有、无GO二者之间的关系则不清楚,我们对此进行了观察。现报道如下。
对象和方法
一、研究对象:(1)Graves病伴GO组(GO组)22例,男性2例,女性20例,年龄20岁～69岁，平均年龄43岁。参照美国甲状腺协会的诊断标准[1],眼病的严重程度为1～4级。(2)Graves病无GO组(无GO组)33例,男性5例,女性28例，年龄18岁～71岁,平均年龄41岁，均无GO的病状和眼征。(3)正常对照组25例,男性4例,女性21例,年龄22岁～67岁,平均年龄40岁，均无甲亢的症状和体征。
, http://www.100md.com
二、抗眼肌膜抗体测定:用猪眼肌制备眼肌膜抗原[2],SDS-PAGE和Western印迹用5%浓缩胶、8%分离胶,抗原蛋白质浓度为1.5 mg/ml,标准品分子量为29 kDa～205 kDa(Sigma公司),依次进行电泳,4℃过夜转移,阻滞后,分别与待测血清或PBS(空白对照)温育,再与抗人IgG温育,显色判读结果。
三、血清抑制试验：基本方法与上Western印迹相似,但抗原分别用眼肌膜和重组人TSH受体(3A1),电泳,转移后,两种抗原均先与受测血清温育,再依次与单克隆TSH受体抗体(3B12)和抗鼠IgG温育,显色并判读结果。
四、血清TRAb和TSH测定：血清TRAb测定用放射受体分析法,试剂盒由英国RSR Limited公司提供,正常值范围为<8U/L。血清TSH测定用IRMA法,试剂盒由英国Ciba Corning Diagnostics Limited 公司提供,正常值范围0.3 mIU/L～5.5 mIU/L。
, http://www.100md.com
五、统计学处理：用microsta软件完成,各组间率的差异用χ2或Fisher检验。
结 果
一、GO组患者血清抗55 kDa、64 kDa、95 kDa眼肌膜抗体检出率分别为22.7%、63.6%、50.0%；无GO组为9.1%、18.2%、9.1%；正常对照组为12.0%、8.0%、12.0%。抗55 kDa眼肌膜抗体检出率在三组间比较无显著性差异,抗64 kDa和95 kDa眼肮膜抗体检出率为GO组高于无GO组和正常对照组(P<0.05～0.01),而后两组间比较无显著性差异(P>0.05)。
二、GO组TRAb阳性率为63.6%(14/22),无GO组为48.5%(16/33)。二者比较无显著性差异(P>0.05),正常对照组无一例TRAb阳性。
三、根据GO组与无GO组患者血清TRAb阳性或阴性进一步分组,比较各组抗眼肮膜抗体的检出率(见表1)。GO组中TRAb阳性与阴性患者之间抗眼肌膜抗体检出率相似。但在无GO组中,TRAb阳性者抗55 kDa和64 kDa抗体检出率高于阴性者(P<0.05)。在GO组与无GO组两组间相比较,除抗55 kDa抗体外,无论TRAb阳性或阴性,均以GO组抗体的检出率较高(P<0.05～0.01)。
, http://www.100md.com
表1 Graves眼病患者血清TRAb与抗眼肌膜抗体检出率的关系 项 目
55 kDa
64 kDa
95 kDa
GD伴GO
GD无GO
GD伴GO
GD无GO
GD伴GO
GD无GO
TRAb阳性
28.6(4/14)
, 百拇医药
18.8(3/16)
64.3(9/14)
31.3(5/16)*
50.0(7/14)
12.5(3/16)**
TRAb阴性
12.5(1/8)
0(0/17)
2.5(5/8)
5.9(1/17)**#
50.0(4/8)
, 百拇医药
5.9(1/17)**
注:与GD伴GO相比*P<0.05,**P<0.01;TRAb阳性与阴性相比#P<0.05。GD为Graves病,GO为Graves眼病。 四、根据GO组与无GO组患者血清TSH水平,再分为TSH正常和异常两亚组,比较各组TRAb的阳性率(见表2)。结果GO组中TSH正常和异常亚组间TRAb阳性率相似且趋较高,无GO组仅TSH异常，亚组TRAb阳性率较高(P<0.01)。
表2 Graves眼病患者血清TSH水平与TRAb阳性率 组 别
TSH异常
TSH正常
Graves病伴GO组
72.7(8/11)
, http://www.100md.com
54.5(6/11)
Graves病无GO组
59.3(16/27)*
0(0/6)△
注:TSH正常与异常之间相比*P<0.01;与Graves伴GO组相比*P<0.01。
五、血清抑制试验中3B12能识别眼肌膜和3A1(抗原抗体反应条带分别为55 kDa和76 kDa)。当眼肌膜和3A1两抗原先与呈现抗55 kDa、64 kDa和95 kDa抗体阳性的血清温育后,再与3B12及抗鼠IgG温育,呈现的反应带与预先未与血清温育的反应带相同。说明血清抗眼肌膜抗体,即使是55 kDa抗体均不能抑制(阻断)随后3B12与眼肌膜抗原和3A1的结合。
, http://www.100md.com
讨 论
一般认为GO是一种器官特异性自身免疫性疾病[1，2]。本资料中GO组患者血清中存在特异性抗眼肌膜抗体,提示自身免疫反应参与了GO的发病,在此反应中眼肌是主要的靶组织[1,3]。
文献报道血清TRAb水平与GO时眼肌的改变密切相关[4],本组也见到GO患者血清TRAb阳性率较高,但无GO患者同样亦有较高的阳性率,当这些患者仍处于TSH异常时,两组TRAb阳性率相似，当TSH正常后，才呈现GO组TRAb阳性率高于无GO组，而抗眼肌膜抗体检出率无论是整组间比较或是在TRAb阳性与阴性的亚组间比较,均显示GO组的检出率高于无GO组,提示抗眼肌膜抗体在评价GO患者的自身免疫状态时较TRAb有更好的特异性。
有作者发现球后组织亦有TSH受体的表达,认为其在GO的发病中是一潜在自身抗原[5]。本组单克隆TSH受体抗体(3B12)不仅能与重组人TSH受体(3A1)结合,而且可识别眼肌膜抗原,而GO患者血清同样亦可与二者起反应。但在血清抑制试验中,患者血清,包括55 kDa抗体阳性的血清与3A1或眼肌膜抗原预温育后,却不能阻断随后3B12与这两种抗原相结合。虽然3B12识别眼肌膜抗原的确切机理尚待研究,但血清抗体识别的眼肌膜抗原显然不是TSH受体。在GO免疫发病机理中,抗眼肌膜抗体与TRAb这两种自身抗体的作用可能是相互独立的。
, 百拇医药
参考文献：
[1] Burch HB & Wartofsky L.Graves ophthalmopathy:current concepts regarding pathogenesis and management.Endocri Rev,1993,14∶747-793.
[2] Zhang Z G,Salvi M,Miller A,et al.Restricted tissue reactivity of autoantibodies to a 64-kDa eye muscle membrane antigen in thyroid associated ophthalmopathy.Clin Immun Immunopath,1992,62∶183-189.
[3] Barsouk A,Wengrowicz S,Scalise D,et al.New assays for the measurement of serum antibodies reactive with eye muscle membrane antigens confirm their significance in thyroid-associated ophthalmopathy.Thyroid,1995,5∶195-200.
, http://www.100md.com
[4] Nishikawa M,Yoshimura M,Toyoda N,et al.Correlation of orbital muscle changes evaluated by magnetic resonance imaging and thyroid-stimulating antibody in patients with Graves ophthalmopathy.Acta Endocrinol,1993,129∶213-219.
[5] Bahn RS,Dutton CM,Natt N,et al.Thyrotropin receptor expression in Graves orbital adipose/ connective tissues:potential autoantigen in Graves ophthalmopathy.J Clin Endocrinol Metab,1998,83∶998-1002.
收稿日期：1999-01-28
修回日期：1999-04-20, 百拇医药