四神茶剂制备工艺及质量标准研究
作者：张典瑞 张兆旺 孙秀梅
单位：张典瑞 (山东医科大学 济南 250012)；张兆旺 孙秀梅(山东中医药大学)
关键词：四神茶；制备工艺；质量标准；剂型改革▲
中草药000112摘 要 四神茶剂为古方四神丸的改进剂型，由肉豆蔻、补骨脂、五味子、吴茱萸、大枣、生姜6味药组成。改制成茶剂可提高生物利用度，服用方便。本文对制备工艺和质量标准进行了研究。
四神茶剂为古方四神丸的改进剂型，主要有肉豆蔻、补骨脂、五味子、吴茱萸、大枣、生姜6味药组成，具有温肾暖脾、涩肠止泻的功能。临床上主要用于胃肠功能紊乱性疾病，尤其对各种原因不明的慢性腹泻疗效确切。药理研究[1]表明，四神丸具有抗痉挛、抑制副交感神经过度兴奋和松弛平滑肌的作用，并在治疗肠道易激综合征(IBS)方面具有良好的效果[2]，具有研究和开发价值。
, http://www.100md.com
将四神丸改制成四神茶剂，可以提高其生物利用度，增加溶出，而且服用方便。我们对四神茶剂的制备工艺和质量标准进行了研究。
1 仪器和试剂
DSC-41差示扫描量热分析仪(日本岛津公司制造)，SP-501N气相色谱仪(鲁南化工仪器厂制造)，D/max-rB型X射线衍射仪(日本理学电机会社制造)。
β-环糊精(广东郁南味精厂生产)，补骨脂素、五味子乙素和吴茱萸碱对照品(中国药品生物制品检定所提供)，硅胶G和硅胶GF254(青岛海洋化工厂生产)，其它试剂均为AR级。
2 四神茶剂制备工艺
2.1 方药提取：按处方比例称取一定量的药材，混合均匀，按“半仿生提取法”[3]提取。第一次加一定pH的水10倍量，浸30 min，双提法提取2 h，第二煎、第三煎再加一定pH的水6倍量，双提法各提取1 h。以上3次提取液分别过滤，滤液合并，减压浓缩至相对体积质量比为1.25左右，低温保存。
, 百拇医药
2.2 支持剂的制备及配比实验：上述3次提取后的药渣，置烘箱中80 ℃烘干，粉碎，过筛，留取10～20目粗粉作支持剂。将浸膏和支持剂按不同比例进行配比实验，可得二者最佳配比。
2.3 挥发油β-CD包合物的制备：采用饱和水溶液法[4，5]包合。精密称取β-CD 4 g，置100 mL具塞三角瓶中，加入蒸馏水100 mL，沸水浴加热使溶解，降至45 ℃，于磁力加热搅拌器恒温搅拌，用移液管量取挥发油0.75 mL，按3∶1比例用无水乙醇稀释，然后用5 mL注射器将挥发油稀释液缓缓注入保持45℃ β-CD溶液中，加塞，继续恒温搅拌2 h。置冰箱冷藏24 h，抽滤，少量水洗(约10 mL)，抽干，收集滤渣，置干燥器中12 h，即得白色粉末状包合物。将所得包合物进行气相分析，X射线衍射分析和差示扫描量热分析，可证明包合物确已形成。
2.4 茶剂的制备：按所选比例取支持剂吸收浸膏，混合均匀后，60 ℃以下干燥，以20目筛整粒，再加入挥发油β-CD包合物，混合均匀，包装，即得。
, http://www.100md.com
3 四神茶剂的质量标准
3.1 定性鉴别：采用薄层色谱法对四神茶剂中主要药物肉豆蔻、补骨脂、五味子、吴茱萸进行了定性鉴别。
称取四神茶10 g，研细，置圆底烧瓶中，加苯50 mL加热回流提取1 h，提取液滤过，回收至2 mL，作为样品供试液。另取缺肉豆蔻阴性样品和肉豆蔻阳性样品经同法制成肉豆蔻阴性和阳性对照液。取上述3种溶液各4 μL分别点于同一块硅胶G薄层板上，以石油醚(60 ℃～90 ℃)-苯(1∶1)为展开剂，上行展开15 cm，取出，晾干，喷以10 %硫酸乙醇液，105 ℃烘5 min至斑点清晰。可见样品供试液色谱中，在与阳性对照液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照液色谱中无相应的斑点。见图1。
1-样品 2-阴性对照
, 百拇医药
3-阳性对照 A-红色
B-棕色 C-红色
图1 肉豆蔻的薄层色谱
1-样品 2-阴性对照
3-阳性对照 4-补骨脂素
A-亮蓝色
图2 补骨脂的薄层色谱
称取四神茶2 g，研细，加甲醇10 mL,浸泡6 h，时常振摇，滤过，滤液浓缩至2 mL，作为样品供试液。另取缺补骨脂阴性样品和补骨脂阳性样品经同法制得补骨脂阴性和阳性对照液。补骨脂素标准品对照液为0.8 mg/mL的甲醇溶液。取上述4种溶液各4 μL，分别点于同一块0.5% CMC-Na-硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯(9.5∶0.5)为展开剂，上行展开15 cm，取出，晾干，于UV365 nm下观察。可见样品供试液色谱中，在与阳性对照液和标准品对照液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照液色谱中无相应的斑点。见图2。
, http://www.100md.com
称取四神茶2 g，研细，置圆底烧瓶中，加氯仿10 mL加热回流提取1 h，提取液滤过，回收溶剂至2 mL，作为样品供试液。另取缺吴茱萸阴性样品和吴茱萸阳性样品经同法制得吴茱萸阴性和阳性对照液。吴茱萸碱标准品对照液为0.56 mg/mL的氯仿溶液。取上述4种溶液各6 μL，点于同一块0.5% CMC-Na-硅胶CF254薄层上，以石油醚-氯仿-甲醇(4∶24∶0.5)为展开剂，上行展开15 cm，取出，晾干，于UV254 nm下观察。可见样品供试液色谱中，在与阳性对照液和标准品对照液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照液色谱中无相应的斑点。见图3。
1-样品 2-阴性对照 3-阳性
对照 4-吴茱萸碱 A-褐色
图3 吴茱萸薄层色谱
, http://www.100md.com
1-样品 2-阴性对照 3-阳性
对照 4-五味子乙素 A-褐色
图4 五味子薄层色谱
称取四神茶2 g，研细，加甲醇10 mL，放置12 h，时常振摇，滤过，滤液浓缩至2 mL，作为样品供试液。另取缺五味子阴性样品和五味子阳性样品经同法制得五味子阴性和阳性对照液。五味子乙素对照液为0.83 mg/mL甲醇溶液。取上述4种溶液各4 μL，点于同一块0.5% CMC-Na-硅胶GF254薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯(15∶5)为展开剂，上行展开，取出，晾干，于UV254 nm下观察。可见样品供试液色谱中，在与五味子阳性对照液和五味子乙素标准品对照液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱无相应的斑点。据此可证明本品中含有五味子。见图4。
3.2 补骨脂素的含量测定：薄层层析条件：以苯-乙酸乙酯(9.5∶0.5)为展开剂，用0.5% CMC-Na-硅胶G板展开，补骨脂素与其它组分能较好地分离。
, 百拇医药
薄层扫描条件：扫描方式为单波长反射式锯齿扫描，扫描波长为310 nm，狭缝1.2 mm×1.2 mm，Sx=3，灵敏度中。
标准曲线的制备：精密称取补取脂素1.60 mg，置2 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度。精密吸取上述溶液2，4，6，8，10 μL点于0.5% CMC-Na-硅胶G薄层板上，按上述条件测定峰面积，并计算得回归方程Y=18 369.24+74 521.41X，r=0.999 5。结果表明，补骨脂素在1.6～8 μg范围内具有良好的线性关系。
稳定性实验：精密吸取上述对照品溶液，按上述条件测定峰面积。结果表明，补骨脂素在4.5 h内稳定。
精密度实验：对同一斑点连续扫描5次，峰面积积分值的RSD为0.72%，同板峰面积的RSD为0.89%，异板峰面积的RSD为2.24%。
加样回收率实验：5次平均回收率为98.96 %，RSD为1.57 %。
, 百拇医药
样品的含量测定：精密称取四神茶剂5 g，研匀，用甲醇为溶剂索氏提取6 h，提取液回收溶剂后，定容于50 mL容量瓶中，得样品供试液。用定量毛细管精密吸取样品供试液6 μL，点于0.5% CMC-Na-硅胶G板上，按上述条件展开，扫描测定其含量，结果见表1，其95%置信区间为0.251～0.261 mg/g。
表1 四神茶剂补骨脂素含量 批号
测得值
(mg/g)
±s
(mg/g)
RSD
(%)
1
, 百拇医药
0.254
0.268
0.246
0.248
0.264
0.256±0.01
3.91
2
0.261
0.254
0.267
0.249
0.271
, 百拇医药
0.260±0.009
3.46
3
0.244
0.253
0.259
0.248
0.247
0.251±0.006
2.39
4 讨论
4.1 本茶剂制备工艺中，以药渣粗粉作支持剂，既不同于目前市售的全生药型的袋泡茶，又不同于半生药型袋泡茶，其释药速度快，生物利用度高，生产成本低，能够即泡即饮。
, 百拇医药
4.2 本制剂的另一特点是采用半仿生提取法提取，能较好地体现中医治病的特点，充分发挥混合成分的综合作用。
4.3 本制剂对其主要组成药物进行了薄层鉴别，并对其主要成分补骨脂素进行了含量测定，方法简单，方便可行，结果准确可靠，能有效控制制剂质量。■
张典瑞：Address:Zhang Dianrui, Shandong University of Medical Sciences, Jinan
参考文献
1，胡稳恒，等.中成药研究，1981，(9)：31
2，张 迪.黑龙江中医药，1986，(6)：23
3，张兆旺，等.中国中药杂志，1995，20(11)：670
4，奚念朱，等.药剂学.北京：人民卫生出版社，1990：157
5，谢秀琼，等.中药新制剂开发与应用.北京：人民卫生出版社，1994：74
(1999-04-15 收稿), 百拇医药
单位：张典瑞 (山东医科大学 济南 250012)；张兆旺 孙秀梅(山东中医药大学)
关键词：四神茶；制备工艺；质量标准；剂型改革▲
中草药000112摘 要 四神茶剂为古方四神丸的改进剂型，由肉豆蔻、补骨脂、五味子、吴茱萸、大枣、生姜6味药组成。改制成茶剂可提高生物利用度，服用方便。本文对制备工艺和质量标准进行了研究。
四神茶剂为古方四神丸的改进剂型，主要有肉豆蔻、补骨脂、五味子、吴茱萸、大枣、生姜6味药组成，具有温肾暖脾、涩肠止泻的功能。临床上主要用于胃肠功能紊乱性疾病，尤其对各种原因不明的慢性腹泻疗效确切。药理研究[1]表明，四神丸具有抗痉挛、抑制副交感神经过度兴奋和松弛平滑肌的作用，并在治疗肠道易激综合征(IBS)方面具有良好的效果[2]，具有研究和开发价值。
, http://www.100md.com
将四神丸改制成四神茶剂，可以提高其生物利用度，增加溶出，而且服用方便。我们对四神茶剂的制备工艺和质量标准进行了研究。
1 仪器和试剂
DSC-41差示扫描量热分析仪(日本岛津公司制造)，SP-501N气相色谱仪(鲁南化工仪器厂制造)，D/max-rB型X射线衍射仪(日本理学电机会社制造)。
β-环糊精(广东郁南味精厂生产)，补骨脂素、五味子乙素和吴茱萸碱对照品(中国药品生物制品检定所提供)，硅胶G和硅胶GF254(青岛海洋化工厂生产)，其它试剂均为AR级。
2 四神茶剂制备工艺
2.1 方药提取：按处方比例称取一定量的药材，混合均匀，按“半仿生提取法”[3]提取。第一次加一定pH的水10倍量，浸30 min，双提法提取2 h，第二煎、第三煎再加一定pH的水6倍量，双提法各提取1 h。以上3次提取液分别过滤，滤液合并，减压浓缩至相对体积质量比为1.25左右，低温保存。
, 百拇医药
2.2 支持剂的制备及配比实验：上述3次提取后的药渣，置烘箱中80 ℃烘干，粉碎，过筛，留取10～20目粗粉作支持剂。将浸膏和支持剂按不同比例进行配比实验，可得二者最佳配比。
2.3 挥发油β-CD包合物的制备：采用饱和水溶液法[4，5]包合。精密称取β-CD 4 g，置100 mL具塞三角瓶中，加入蒸馏水100 mL，沸水浴加热使溶解，降至45 ℃，于磁力加热搅拌器恒温搅拌，用移液管量取挥发油0.75 mL，按3∶1比例用无水乙醇稀释，然后用5 mL注射器将挥发油稀释液缓缓注入保持45℃ β-CD溶液中，加塞，继续恒温搅拌2 h。置冰箱冷藏24 h，抽滤，少量水洗(约10 mL)，抽干，收集滤渣，置干燥器中12 h，即得白色粉末状包合物。将所得包合物进行气相分析，X射线衍射分析和差示扫描量热分析，可证明包合物确已形成。
2.4 茶剂的制备：按所选比例取支持剂吸收浸膏，混合均匀后，60 ℃以下干燥，以20目筛整粒，再加入挥发油β-CD包合物，混合均匀，包装，即得。
, http://www.100md.com
3 四神茶剂的质量标准
3.1 定性鉴别：采用薄层色谱法对四神茶剂中主要药物肉豆蔻、补骨脂、五味子、吴茱萸进行了定性鉴别。
称取四神茶10 g，研细，置圆底烧瓶中，加苯50 mL加热回流提取1 h，提取液滤过，回收至2 mL，作为样品供试液。另取缺肉豆蔻阴性样品和肉豆蔻阳性样品经同法制成肉豆蔻阴性和阳性对照液。取上述3种溶液各4 μL分别点于同一块硅胶G薄层板上，以石油醚(60 ℃～90 ℃)-苯(1∶1)为展开剂，上行展开15 cm，取出，晾干，喷以10 %硫酸乙醇液，105 ℃烘5 min至斑点清晰。可见样品供试液色谱中，在与阳性对照液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照液色谱中无相应的斑点。见图1。
1-样品 2-阴性对照
, 百拇医药
3-阳性对照 A-红色
B-棕色 C-红色
图1 肉豆蔻的薄层色谱
1-样品 2-阴性对照
3-阳性对照 4-补骨脂素
A-亮蓝色
图2 补骨脂的薄层色谱
称取四神茶2 g，研细，加甲醇10 mL,浸泡6 h，时常振摇，滤过，滤液浓缩至2 mL，作为样品供试液。另取缺补骨脂阴性样品和补骨脂阳性样品经同法制得补骨脂阴性和阳性对照液。补骨脂素标准品对照液为0.8 mg/mL的甲醇溶液。取上述4种溶液各4 μL，分别点于同一块0.5% CMC-Na-硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯(9.5∶0.5)为展开剂，上行展开15 cm，取出，晾干，于UV365 nm下观察。可见样品供试液色谱中，在与阳性对照液和标准品对照液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照液色谱中无相应的斑点。见图2。
, http://www.100md.com
称取四神茶2 g，研细，置圆底烧瓶中，加氯仿10 mL加热回流提取1 h，提取液滤过，回收溶剂至2 mL，作为样品供试液。另取缺吴茱萸阴性样品和吴茱萸阳性样品经同法制得吴茱萸阴性和阳性对照液。吴茱萸碱标准品对照液为0.56 mg/mL的氯仿溶液。取上述4种溶液各6 μL，点于同一块0.5% CMC-Na-硅胶CF254薄层上，以石油醚-氯仿-甲醇(4∶24∶0.5)为展开剂，上行展开15 cm，取出，晾干，于UV254 nm下观察。可见样品供试液色谱中，在与阳性对照液和标准品对照液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照液色谱中无相应的斑点。见图3。
1-样品 2-阴性对照 3-阳性
对照 4-吴茱萸碱 A-褐色
图3 吴茱萸薄层色谱
, http://www.100md.com
1-样品 2-阴性对照 3-阳性
对照 4-五味子乙素 A-褐色
图4 五味子薄层色谱
称取四神茶2 g，研细，加甲醇10 mL，放置12 h，时常振摇，滤过，滤液浓缩至2 mL，作为样品供试液。另取缺五味子阴性样品和五味子阳性样品经同法制得五味子阴性和阳性对照液。五味子乙素对照液为0.83 mg/mL甲醇溶液。取上述4种溶液各4 μL，点于同一块0.5% CMC-Na-硅胶GF254薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯(15∶5)为展开剂，上行展开，取出，晾干，于UV254 nm下观察。可见样品供试液色谱中，在与五味子阳性对照液和五味子乙素标准品对照液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱无相应的斑点。据此可证明本品中含有五味子。见图4。
3.2 补骨脂素的含量测定：薄层层析条件：以苯-乙酸乙酯(9.5∶0.5)为展开剂，用0.5% CMC-Na-硅胶G板展开，补骨脂素与其它组分能较好地分离。
, 百拇医药
薄层扫描条件：扫描方式为单波长反射式锯齿扫描，扫描波长为310 nm，狭缝1.2 mm×1.2 mm，Sx=3，灵敏度中。
标准曲线的制备：精密称取补取脂素1.60 mg，置2 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度。精密吸取上述溶液2，4，6，8，10 μL点于0.5% CMC-Na-硅胶G薄层板上，按上述条件测定峰面积，并计算得回归方程Y=18 369.24+74 521.41X，r=0.999 5。结果表明，补骨脂素在1.6～8 μg范围内具有良好的线性关系。
稳定性实验：精密吸取上述对照品溶液，按上述条件测定峰面积。结果表明，补骨脂素在4.5 h内稳定。
精密度实验：对同一斑点连续扫描5次，峰面积积分值的RSD为0.72%，同板峰面积的RSD为0.89%，异板峰面积的RSD为2.24%。
加样回收率实验：5次平均回收率为98.96 %，RSD为1.57 %。
, 百拇医药
样品的含量测定：精密称取四神茶剂5 g，研匀，用甲醇为溶剂索氏提取6 h，提取液回收溶剂后，定容于50 mL容量瓶中，得样品供试液。用定量毛细管精密吸取样品供试液6 μL，点于0.5% CMC-Na-硅胶G板上，按上述条件展开，扫描测定其含量，结果见表1，其95%置信区间为0.251～0.261 mg/g。
表1 四神茶剂补骨脂素含量 批号
测得值
(mg/g)
±s(mg/g)
RSD
(%)
1
, 百拇医药
0.254
0.268
0.246
0.248
0.264
0.256±0.01
3.91
2
0.261
0.254
0.267
0.249
0.271
, 百拇医药
0.260±0.009
3.46
3
0.244
0.253
0.259
0.248
0.247
0.251±0.006
2.39
4 讨论
4.1 本茶剂制备工艺中，以药渣粗粉作支持剂，既不同于目前市售的全生药型的袋泡茶，又不同于半生药型袋泡茶，其释药速度快，生物利用度高，生产成本低，能够即泡即饮。
, 百拇医药
4.2 本制剂的另一特点是采用半仿生提取法提取，能较好地体现中医治病的特点，充分发挥混合成分的综合作用。
4.3 本制剂对其主要组成药物进行了薄层鉴别，并对其主要成分补骨脂素进行了含量测定，方法简单，方便可行，结果准确可靠，能有效控制制剂质量。■
张典瑞：Address:Zhang Dianrui, Shandong University of Medical Sciences, Jinan
参考文献
1，胡稳恒，等.中成药研究，1981，(9)：31
2，张 迪.黑龙江中医药，1986，(6)：23
3，张兆旺，等.中国中药杂志，1995，20(11)：670
4，奚念朱，等.药剂学.北京：人民卫生出版社，1990：157
5，谢秀琼，等.中药新制剂开发与应用.北京：人民卫生出版社，1994：74
(1999-04-15 收稿), 百拇医药