花椒油素对血小板粘附和丙二醛生成的影响
作者：金云海 林继红 程远远
单位：金云海(第一军医大学药理教研室，广东 广州 510515)；林继红(第一军医大学药理教研室，广东 广州 510515)；程远远(暨南大学医学院附属医院药剂科，广东 广州510630)
关键词：花椒油素(XT)；血小板粘附；丙二醛(MDA)；2-硫代巴比妥酸(TBA)；1，1，第一军医大学学报000113 摘要: 目的 观察花椒油素(Xanthoxylin, XT)对血小板粘附和丙二醛产生的影响。方法 用转动圆瓶法和2-硫代巴比妥酸(TBA)荧光微测定法研究花椒油素对大鼠血小板粘附和丙二醛(MDA)生成的影响。结果 体外实验：XT 0.037，0.185，0.924，9.240 μmol/L显著抑制血小板粘附和MDA的产生，血小板粘附的抑制率为49.9%～87.1%，MDA产生的抑制率为23.2～46.4%；体内实验：5 mg/kg XT也显著抑制血小板粘附和MDA的产生，血小板粘附的抑制率为56.8%，MDA产生的抑制率为41.5%。结论 体外实验血小板粘附的抑制率和MDA产生的抑制率间呈非常显著的线性正相关。
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3,3-四乙氧基丙烷(TEP)荧光微测定法
中图分类号：R331.1 文献标识码：A 文章编号：1000-2588(2000)01-0039-02
Effects of xanthoxylin on platelet adhesion and malondialdhehyde production in rats
JIN Yun-hai LIN Ji-hong
(Department of Pharmacology, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
CHENG Yuan-yuan
, 百拇医药
(Department of Pharmacy, Affiliated Hospital of Medical College, Ji'nan University, Guangzhou 510630, China)
Abstract: Objective To study the effects of xanthoxylin on platelet adhesion and malondialdhehyde(MDA) production in rats. Methods Revolving round bottle and 2-thiobarbituric acid (TBA) fluorescence micro-determination were used. Results In the in vitro experiment, xanthoxylin significantly inhibited platelet adhesion and MDA production, and the inhibitory rate of the former was 49.9% 87.1%, and the latter was 23.2% 46.4%. In the vivo experiment, it significantly inhibited platelet adhesion and MDA production as well when xanthoxylin 5mg/kg was administered orally, and the inhibitory rate of platelet adhesion was 56.8% and that of MDA production was 41.5%. Conclusion It was suggested that in the in vitro experiment, there is a positive correlation between inhibitory rate of platelet adhesion and that of MDA production. To study the effects of xanthoxylin on platelet adhesion and malondialdhehyde(MDA) production in rats. Methods Revolving round bottle and 2-thiobarbituric acid (TBA) fluorescence micro-determination were used. Results In the in vitro experiment, xanthoxylin significantly inhibited platelet adhesion and MDA production, and the inhibitory rate of the former was 49.9% 87.1%, and the latter was 23.2% 46.4%. In the vivo experiment, it significantly inhibited platelet adhesion and MDA production as well when xanthoxylin 5mg/kg was administered orally, and the inhibitory rate of platelet adhesion was 56.8% and that of MDA production was 41.5%. Conclusion It was suggested that in the in vitro experiment, there is a positive correlation between inhibitory rate of platelet adhesion and that of MDA production.
, 百拇医药
Key words: xanthoxylin; platelet adhesion; malondialdhehyde(MDA); 2-thiobarbituric acid(TBA); 1,1,3,3-tetraethoxypropane (TEP)fluorescence micro-determination
花椒油素(Xanthoxylin，XT)是大戟科植物乌臼[Sapiuμsebiferum(L) Roxb]根皮中的有效成分，相对分子质量为196.21。乌臼是一种具有消积、解毒功效的传统中药[1,2]。我们对XT已进行了一定的研究，发现其具有抗血小板聚集和抗血栓的作用。本研究的目的是观察XT对血小板粘附及粘附后产生丙二醛(MDA)的影响，以进一步证实和分析其抗血栓的作用机理。
1 材料
XT由中山大学化学系提供。WTP-AⅢ型粘附仪由江苏无锡石塘湾医学仪器厂生产。RF-5000型分光荧光计购于日本Shimadzu。TBA和TEP购于Sigma。SD大鼠由第一军医大学实验动物中心提供。注射器、针头和试管等均用甲基硅油硅化。
, 百拇医药
2 方法
2.1 血小板粘附实验[3] 2.1.1 体外实验 取SD大鼠30只，体质量(295± 18) g，雌雄不拘，随机分成5组，每组6只。第1组为对照组，第2～5组为不同浓度XT组。用乙醚把大鼠麻醉后，从下腔静脉取血，以3.8%枸橼酸钠抗凝，每只试管放入1 ml血液，对照组加入4 μl无水乙醇，药物组加入XT无水乙醇溶液4 μl，XT的终浓度为0.037、 0.185、0.924、9.240 μmol/L。从每只管中取出0.8 ml放入长颈圆玻瓶内，立即将瓶放在粘附仪的旋转盘上，以3.7 r/min速度旋转15 min。粘附前后计血小板数。并以以下公式计算血小板粘附率：粘附率(%)＝(粘附前血小板数-粘附后血小板数)/粘附前血小板数5 100%。
2.1.2 体内实验 取SD大鼠12只，体质量(291± 20) g，雌雄各半，随机分成2组，每组6只。第1组以等容积5%阿拉伯胶浆灌胃，第2组以5 mg/kg XT阿拉伯胶混悬液灌胃，1 h后乙醚麻醉，下腔静脉取血，其它操作同体外实验。
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2.2 血小板MDA测定[4] 2.2.1 体外实验 取上述体外实验粘附前后的血液，制备血小板悬浮液，用反复冻溶的方法溶解血小板。以TBA荧光微测定法检测MDA含量。以TEP制作标准曲线。荧光测定时，l ex为532 nm，l em为553 nm。
2.2.2 体内实验 取血小板粘附体内实验的血液，其它操作同MDA测定的体外实验。
3 结果
体内外实验均证明XT对血小板粘附及MDA的产生有显著地抑制作用。在血小板粘附的实验中，XT 0.037、0.185、0.924、9.240 μmol/L对血小板粘附的抑制率分别为49.9%、68.4%、75.3%、87.1%；5 mg/kg XT给大鼠灌胃1 h后，血小板粘附的抑制率为56.8%(表1)。在血小板MDA含量测定实验中，XT 0.037、0.185、 0.924、9.240 μmol/L对MDA产生的抑制率分别为23.2%、34.7%、39.1%、46.4%；5 mg/kg XT给大鼠灌胃1 h后，MDA产生的抑制率为41.5%(表2)。0.037和0.185两个剂量组粘附后的血小板数和MDA的产量与粘附前比较仍有显著差别，而0.924和9.240两个剂量组与粘附前比较无显著差别。实验结果具有明显的量效关系。血小板粘附抑制率和MDA产生的抑制率间存在着非常显著的线性相关，线性方程为Y＝-7.9508X+0.6242, g =0.9999 (P<0.01)。
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表1 XT体内外给药对大鼠血小板粘附的影响
Tab.1 Effects of XT on rat platelet adhesion in vivo/vitro Group
Number of platelet
(×1011/L)
Adhesive rate
Inhibitory rate
Before
After
(%)
(%)
, 百拇医药
In vitro control
8.1±1.6
4.8±0.95 5▲▲
37.3±17.4
XT(μmol/L)
0.037
8.2±1.2
6.0±0.9▲
18.7±11.2*
49.9
0.185
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8.3±1.2
7.2±0.8▲
11.8±9.4**
68.4
0.924
8.1±1.6
7.4±2.0
9.2±11.1**
75.3
9.240
8.1±1.3
7.7±1.3
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4.8±4.9**
87.1
In vivo control
8.2±1.3
5.0±1.2▲▲
38.0±16.4
XT(5 mg/kg)
8.3±0.9
6.7±0.95 ▲
16.4±11.3*
56.8
, 百拇医药
n=6. *P<0.05, **P<0.01 vs control.▲P<0.05, ▲▲P<0.01 vs normal (before adhesion)
表2 XT体内外给药对大鼠血小板产生MDA的影响
Tab.2 Effects of XT on rat platelet MAD production in vivo/vitro Group
MDA(nmol/L)
Inhibitory rate
Before
After
(%)
, 百拇医药
In vitro control
21.3±5.0
47.0±7.4▲▲
XT(μmol/L)
0.037
21.5±3.5
36.1±6.6▲▲*
23.2
0.185
21.8±4.4
30.7±6.4▲**
, 百拇医药
34.7
0.924
22.1±4.7
28.6±4.9**
39.1
9.240
21.7±3.4
25.2±6.9**
46.4
In vivo control
21.6±5.8
47.9±8.8▲▲
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XT(5 mg/kg)
20.0±6.6
28.0±7.8**
41.5
n=6. *P<0.05, **P<0.01 vs control. ▲P<0.05，▲▲P<0.01 vs normal (before adhesion)
4 讨论
血小板聚集和粘附是血栓形成的主要因素，无论体外还是体内实验均证明XT有显著抑制血小板粘附的作用，说明其具有显著的抗血栓作用，而且具有明显的剂量依赖性。本研究证明，在血小板粘附过程中血小板产生MDA的量增加。MDA是血小板花生四烯酸的代谢产物，此过程可能与TXA2合成酶对PGH2的转化有关[5]。所以，MDA增高说明合成途径增强，血小板粘附、聚集、血管收缩性增加。XT能够降低血小板粘附后MDA的产生，从另一侧面说明其对花生四烯酸代谢成MDA的代谢途径具有明显地抑制作用，其作用环节可能是抑制TXA2合成酶。
, 百拇医药
参考文献
[1]江苏新医学院编. 中药大辞典[M]. 上海：上海人民出版社，1977. 475～6.
[2]柯明清. 中药有效成分与药理特性[M]. 第二版. 长沙：湖南科学技术出版社，1982. 457～8.
[3]翁维良，崔 晶，张立平等. 血淤证与虚症病人血小板粘附性测定[J]. 山西医药学杂志，1986, 15:69～170.
[4]Seiko Ishii. Determination of lipid peroxide[J]. Saishin-Igaku, 1978, 33:660～3.
[5]阮长耿. 血小板-基础与临床[M]. 上海：上海科学技术出版社，1987. 65～6.
1999-02-28, 百拇医药
单位：金云海(第一军医大学药理教研室，广东 广州 510515)；林继红(第一军医大学药理教研室，广东 广州 510515)；程远远(暨南大学医学院附属医院药剂科，广东 广州510630)
关键词：花椒油素(XT)；血小板粘附；丙二醛(MDA)；2-硫代巴比妥酸(TBA)；1，1，第一军医大学学报000113 摘要: 目的 观察花椒油素(Xanthoxylin, XT)对血小板粘附和丙二醛产生的影响。方法 用转动圆瓶法和2-硫代巴比妥酸(TBA)荧光微测定法研究花椒油素对大鼠血小板粘附和丙二醛(MDA)生成的影响。结果 体外实验：XT 0.037，0.185，0.924，9.240 μmol/L显著抑制血小板粘附和MDA的产生，血小板粘附的抑制率为49.9%～87.1%，MDA产生的抑制率为23.2～46.4%；体内实验：5 mg/kg XT也显著抑制血小板粘附和MDA的产生，血小板粘附的抑制率为56.8%，MDA产生的抑制率为41.5%。结论 体外实验血小板粘附的抑制率和MDA产生的抑制率间呈非常显著的线性正相关。
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3,3-四乙氧基丙烷(TEP)荧光微测定法
中图分类号：R331.1 文献标识码：A 文章编号：1000-2588(2000)01-0039-02
Effects of xanthoxylin on platelet adhesion and malondialdhehyde production in rats
JIN Yun-hai LIN Ji-hong
(Department of Pharmacology, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
CHENG Yuan-yuan
, 百拇医药
(Department of Pharmacy, Affiliated Hospital of Medical College, Ji'nan University, Guangzhou 510630, China)
Abstract: Objective To study the effects of xanthoxylin on platelet adhesion and malondialdhehyde(MDA) production in rats. Methods Revolving round bottle and 2-thiobarbituric acid (TBA) fluorescence micro-determination were used. Results In the in vitro experiment, xanthoxylin significantly inhibited platelet adhesion and MDA production, and the inhibitory rate of the former was 49.9% 87.1%, and the latter was 23.2% 46.4%. In the vivo experiment, it significantly inhibited platelet adhesion and MDA production as well when xanthoxylin 5mg/kg was administered orally, and the inhibitory rate of platelet adhesion was 56.8% and that of MDA production was 41.5%. Conclusion It was suggested that in the in vitro experiment, there is a positive correlation between inhibitory rate of platelet adhesion and that of MDA production. To study the effects of xanthoxylin on platelet adhesion and malondialdhehyde(MDA) production in rats. Methods Revolving round bottle and 2-thiobarbituric acid (TBA) fluorescence micro-determination were used. Results In the in vitro experiment, xanthoxylin significantly inhibited platelet adhesion and MDA production, and the inhibitory rate of the former was 49.9% 87.1%, and the latter was 23.2% 46.4%. In the vivo experiment, it significantly inhibited platelet adhesion and MDA production as well when xanthoxylin 5mg/kg was administered orally, and the inhibitory rate of platelet adhesion was 56.8% and that of MDA production was 41.5%. Conclusion It was suggested that in the in vitro experiment, there is a positive correlation between inhibitory rate of platelet adhesion and that of MDA production.
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Key words: xanthoxylin; platelet adhesion; malondialdhehyde(MDA); 2-thiobarbituric acid(TBA); 1,1,3,3-tetraethoxypropane (TEP)fluorescence micro-determination
花椒油素(Xanthoxylin，XT)是大戟科植物乌臼[Sapiuμsebiferum(L) Roxb]根皮中的有效成分，相对分子质量为196.21。乌臼是一种具有消积、解毒功效的传统中药[1,2]。我们对XT已进行了一定的研究，发现其具有抗血小板聚集和抗血栓的作用。本研究的目的是观察XT对血小板粘附及粘附后产生丙二醛(MDA)的影响，以进一步证实和分析其抗血栓的作用机理。
1 材料
XT由中山大学化学系提供。WTP-AⅢ型粘附仪由江苏无锡石塘湾医学仪器厂生产。RF-5000型分光荧光计购于日本Shimadzu。TBA和TEP购于Sigma。SD大鼠由第一军医大学实验动物中心提供。注射器、针头和试管等均用甲基硅油硅化。
, 百拇医药
2 方法
2.1 血小板粘附实验[3] 2.1.1 体外实验 取SD大鼠30只，体质量(295± 18) g，雌雄不拘，随机分成5组，每组6只。第1组为对照组，第2～5组为不同浓度XT组。用乙醚把大鼠麻醉后，从下腔静脉取血，以3.8%枸橼酸钠抗凝，每只试管放入1 ml血液，对照组加入4 μl无水乙醇，药物组加入XT无水乙醇溶液4 μl，XT的终浓度为0.037、 0.185、0.924、9.240 μmol/L。从每只管中取出0.8 ml放入长颈圆玻瓶内，立即将瓶放在粘附仪的旋转盘上，以3.7 r/min速度旋转15 min。粘附前后计血小板数。并以以下公式计算血小板粘附率：粘附率(%)＝(粘附前血小板数-粘附后血小板数)/粘附前血小板数5 100%。
2.1.2 体内实验 取SD大鼠12只，体质量(291± 20) g，雌雄各半，随机分成2组，每组6只。第1组以等容积5%阿拉伯胶浆灌胃，第2组以5 mg/kg XT阿拉伯胶混悬液灌胃，1 h后乙醚麻醉，下腔静脉取血，其它操作同体外实验。
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2.2 血小板MDA测定[4] 2.2.1 体外实验 取上述体外实验粘附前后的血液，制备血小板悬浮液，用反复冻溶的方法溶解血小板。以TBA荧光微测定法检测MDA含量。以TEP制作标准曲线。荧光测定时，l ex为532 nm，l em为553 nm。
2.2.2 体内实验 取血小板粘附体内实验的血液，其它操作同MDA测定的体外实验。
3 结果
体内外实验均证明XT对血小板粘附及MDA的产生有显著地抑制作用。在血小板粘附的实验中，XT 0.037、0.185、0.924、9.240 μmol/L对血小板粘附的抑制率分别为49.9%、68.4%、75.3%、87.1%；5 mg/kg XT给大鼠灌胃1 h后，血小板粘附的抑制率为56.8%(表1)。在血小板MDA含量测定实验中，XT 0.037、0.185、 0.924、9.240 μmol/L对MDA产生的抑制率分别为23.2%、34.7%、39.1%、46.4%；5 mg/kg XT给大鼠灌胃1 h后，MDA产生的抑制率为41.5%(表2)。0.037和0.185两个剂量组粘附后的血小板数和MDA的产量与粘附前比较仍有显著差别，而0.924和9.240两个剂量组与粘附前比较无显著差别。实验结果具有明显的量效关系。血小板粘附抑制率和MDA产生的抑制率间存在着非常显著的线性相关，线性方程为Y＝-7.9508X+0.6242, g =0.9999 (P<0.01)。
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表1 XT体内外给药对大鼠血小板粘附的影响
Tab.1 Effects of XT on rat platelet adhesion in vivo/vitro Group
Number of platelet
(×1011/L)
Adhesive rate
Inhibitory rate
Before
After
(%)
(%)
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In vitro control
8.1±1.6
4.8±0.95 5▲▲
37.3±17.4
XT(μmol/L)
0.037
8.2±1.2
6.0±0.9▲
18.7±11.2*
49.9
0.185
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8.3±1.2
7.2±0.8▲
11.8±9.4**
68.4
0.924
8.1±1.6
7.4±2.0
9.2±11.1**
75.3
9.240
8.1±1.3
7.7±1.3
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4.8±4.9**
87.1
In vivo control
8.2±1.3
5.0±1.2▲▲
38.0±16.4
XT(5 mg/kg)
8.3±0.9
6.7±0.95 ▲
16.4±11.3*
56.8
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n=6. *P<0.05, **P<0.01 vs control.▲P<0.05, ▲▲P<0.01 vs normal (before adhesion)
表2 XT体内外给药对大鼠血小板产生MDA的影响
Tab.2 Effects of XT on rat platelet MAD production in vivo/vitro Group
MDA(nmol/L)
Inhibitory rate
Before
After
(%)
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In vitro control
21.3±5.0
47.0±7.4▲▲
XT(μmol/L)
0.037
21.5±3.5
36.1±6.6▲▲*
23.2
0.185
21.8±4.4
30.7±6.4▲**
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34.7
0.924
22.1±4.7
28.6±4.9**
39.1
9.240
21.7±3.4
25.2±6.9**
46.4
In vivo control
21.6±5.8
47.9±8.8▲▲
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XT(5 mg/kg)
20.0±6.6
28.0±7.8**
41.5
n=6. *P<0.05, **P<0.01 vs control. ▲P<0.05，▲▲P<0.01 vs normal (before adhesion)
4 讨论
血小板聚集和粘附是血栓形成的主要因素，无论体外还是体内实验均证明XT有显著抑制血小板粘附的作用，说明其具有显著的抗血栓作用，而且具有明显的剂量依赖性。本研究证明，在血小板粘附过程中血小板产生MDA的量增加。MDA是血小板花生四烯酸的代谢产物，此过程可能与TXA2合成酶对PGH2的转化有关[5]。所以，MDA增高说明合成途径增强，血小板粘附、聚集、血管收缩性增加。XT能够降低血小板粘附后MDA的产生，从另一侧面说明其对花生四烯酸代谢成MDA的代谢途径具有明显地抑制作用，其作用环节可能是抑制TXA2合成酶。
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参考文献
[1]江苏新医学院编. 中药大辞典[M]. 上海：上海人民出版社，1977. 475～6.
[2]柯明清. 中药有效成分与药理特性[M]. 第二版. 长沙：湖南科学技术出版社，1982. 457～8.
[3]翁维良，崔 晶，张立平等. 血淤证与虚症病人血小板粘附性测定[J]. 山西医药学杂志，1986, 15:69～170.
[4]Seiko Ishii. Determination of lipid peroxide[J]. Saishin-Igaku, 1978, 33:660～3.
[5]阮长耿. 血小板-基础与临床[M]. 上海：上海科学技术出版社，1987. 65～6.
1999-02-28, 百拇医药