反相高效液相色谱法同时测定金马通络胶囊中东茛菪碱及士的宁含量
作者：卞俊 蔡定国 顾明娟 饶光立 曾华武
单位：卞俊 蔡定国 顾明娟 饶光立 曾华武(海军药学专科中心 上海 200434)
关键词：反相高效液相色谱法；金马通络胶囊、东莨菪碱；士的宁
药物分析杂志000118 摘 要：目的：建立一种反相高效液相色谱法检测金马通络胶囊中东莨菪碱及士的宁含量。方法：用C18ODS柱为固定相。甲醇-水(58∶42)(水相含0.05 mol.L-1醋酸盐缓冲液及0.002 5 mol.L-1十二烷基硫酸钠)为流动相。检测波长226 nm。结果：该方法回收率氢溴酸东莨菪碱为100.5%，RSD=2.3%(n=5)；士的宁为97.5%，RSD=2.4%(n=5)。结论：该方法操作简便、快捷、专一、准确性好，可用于金马通络胶囊质量控制。
, 百拇医药
Determination Scopolamine and Strychnine
in Jin Ma Tong Luo Capsules by RP-HPLC
Bian Jun Cai Dingguo Gu Mingjuan Rao Guanli Zeng Huawu
(Research Center of Pharmacy,PLA Navy,Shanghai 200434)
Abstract：Objective：A RP-HPLC method in the separation and determination scopolamine and strychnine was developed.Method:The chromatographic conditions are listed below:Zorbax ODS C18 Column,UV detector at wavelength 226 nm,and a mobile phase MeOH-H2O(0.05 mol.L-1 acetate buffer solution with 0.002 5 mol.L-1 sodium lauryl sulfate,58∶42).Results:The recoveries for scopolamine and strychnine of the method are 100.5%(RSD 2.3%,n=5)and 97.5%(RSD 2.4%,n=5),respectively.Conclusion:The method is simple,rapid,accurate and precise.
, 百拇医药
Key words：RP-HPLC,Jin Ma Tong Luo capsules,scopolamine,strychnine▲
金马通络胶囊是由洋金花、马钱子、淫羊藿、西洋参等数味中药组成的复方制剂。具有祛风除湿、温经通络之功效，临床上用于强直性脊椎炎等症的治疗。因洋金花中东莨菪碱及马钱子中士的宁均为主要有效且有毒成分，必须严格控制其含量。HPLC法用于洋金花药材中东莨菪碱及马钱子药材及其制剂中士的宁的含量测定，已有文献报道[1～3]，但在同一制剂中采用HPLC法同时测定东莨菪碱及士的宁含量未见文献报道。本文建立了反相HPLC法测定金马通络胶囊中东莨菪碱及士的宁含量，获得了满意结果，为金马通络胶囊的质量控制及安全用药提供了有效手段。
1 仪器与试药
日本岛津LC-6A高效液相色谱仪；SPD-6AV紫外检测器；C-R3A数据处理机；CTO-6A柱温箱；7125型进样器。
, 百拇医药
氢溴酸东莨菪碱和士的宁对照品(定量用)由中国药品生物制品检定所提供；洋金花、马钱子、淫羊藿、西洋参等药材品种符合中国药典规定，购自上海市药材公司；样品金马通络胶囊(自制)，每1 g含东莨菪碱0.45 mg、士的宁2.0 mg。
十二烷基硫酸钠为化学纯，其余试剂均为分析纯。
2 色谱条件
分析柱：Zorbax ODS C18柱(150 mm×6.0 mm，粒径5 μm)，流动相：甲醇-水(58∶42)，水相含0.05 mol.L-1醋酸盐缓冲液(pH 4.60)及0.002 5 mol.L-1十二烷基硫酸钠；流速：1 mL.min-1；检测波长：226 nm；记录灵敏度：AUFS=0.08；柱温：40 ℃；进样体积：20 μL。在此色谱条件下，东莨菪碱及士的宁色谱图峰形对称，供试品色谱图中东莨菪碱及士的宁能相互达到基线分离，其它杂质成分对其测定结果不产生干扰。见色谱图1-A、B。
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图1 色谱图
A.东莨菪碱及士的宁对照品 B.样品
C.缺洋金花、马钱子 D.缺马钱子 E.缺洋金花
1.东莨菪碱 2.士的宁
3 供试品溶液制备
取样品内容物1.1 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入氯仿50 mL，浓氨试液3 mL，轻轻振摇数分钟，室温放置12 h以上，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液30 mL，置分液漏斗中，用0.25 mol.L-1硫酸提取3次，每次20 mL，合并提取液，加浓氨试液中和后，再多加2 mL，迅速用氯仿分次振摇提取(20，15，15，15，10 mL)，合并氯仿液，回收氯仿至干，残渣加甲醇溶解，转移置5.0 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.5 μm)过滤即得。
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4 加样回收率实验
取已知含量的制剂样品，分别定量加入氢溴酸东莨菪碱及士的宁对照品，按上述拟定方法测定，5次测定的平均回收率分别为100.5%，97.5%；RSD分别为2.3%，2.4%。
5 样品测定
取样品3批，按上述拟定方法及色谱条件，分别吸取20 μL进样测定，按外标法计算，结果见表1。
表1 3批样品含量测定结果(n=5) 样品
氢溴酸东莨菪碱
士的宁
相当标示量/%
RSD/%
, 百拇医药
相当标示量/%
RSD/%
951214
102.9
5.0
99.78
4.5
951216
99.73
3.1
98.66
2.3
951218
, 百拇医药
104.8
4.7
99.94
4.8
6 讨论6.1 检测波长的选择 经紫外扫描测得，氢溴酸东莨菪碱甲醇液最大吸收波长为226 nm。士的宁甲醇液最大吸收波长为255 nm，东莨菪碱在此波长没有吸收，而士的宁在226 nm测定不受影响，故选择226 nm作为检测波长同步检测金马通络胶囊中东莨菪碱及士的宁的含量。
6.2 流动相选择 本文在流动相中加入十二烷基硫酸钠作为配对离子，在酸性条件下与生物碱类成分结合成中性离子对，增加其保留值，使性质相似的生物碱类物质东莨菪碱和士的宁及其它杂质成分在反相系统中相互达到基线分离。
6.3 提取方法及条件的选择 样品经加热回流(1，2，3 h)提取，超声处理20，30 min提取及冷浸提取比较，结果表明采用冷浸法提取，氯仿为溶媒，加浓氨试液使生物碱在碱性条件下充分游离并转入氯仿，并对不同冷浸时间(12，24，36 h)的萃取效果进行研究，冷浸12 h即可将制剂样品中待测成分提取出来。
, 百拇医药
6.4 线性关系的考察 精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品10 mg，士的宁对照品15 mg，置100 mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，稀释至刻度，制成含氢溴酸东莨菪碱0.1 mg.mL-1及士的宁0.15 mg.mL-1的对照品溶液，分别吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL至5.0 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取上述各溶液，在上述色谱条件下进样20 μL，各浓度溶液分别进样3次，以峰面积对进样量(μg)进行线性回归，得氢溴酸东莨菪碱和士的宁的回归方程分别为：
Y=6.174X+0.048 2 r=0.999 7
Y=16.36X-0.045 r=0.999 4
可见进样量氢溴酸东莨菪碱在0.8～10 μg、士的宁在1.66～8.30 μg范围内线性关系良好。
, 百拇医药
6.5 方法精密度测定 在同一天内5个不同时间及5个不同日期对同一供试品溶液进行测定，分别计算，东莨菪碱日内精密度为RSD=1.4%,日间精密度为RSD=2.3%；士的宁日内精密度为RSD=1.4%，日间精密度为RSD=2.4%。
6.6 重现性实验 取制剂样品，按上述所拟定方法平行测定6次，结果表明，本方法重现性好，氢溴酸东莨菪碱RSD为3.6%，士的宁RSD为2.8%。
6.7 空白试验 取制剂样品，缺洋金花的空白样品，缺马钱子的空白样品和缺洋金花、马钱子粉的空白样品，制成相同浓度的溶液，在相同色谱条件下分别进样，比较以上样品HPLC色谱图，空白试验结果表明，本法测定对待测成分无干扰，专属性好。见图1-C、D、E。
6.8 制备供试品 其样品氨性氯仿萃取液经硫酸提取后，经氨水碱化用氯仿回流萃取时，氯仿萃取的次数不应少于5次，这样才能充分保证萃取液中士的宁成分充分转移至氯仿中，以减少测定结果的误差。
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6.9 本文建立的方法，经同一型号不同色谱柱及不同型号液相色谱仪对同一批号制剂样品检测，其结果基本相符。实验表明，该方法准确、快速、专一且重现性好。■
参考文献：
[1]于霖汇，杨德柱，胡淑贤.反相高效液相色谱法测定洋金花中东莨菪碱含量.中成药，1992，14(8)：35
[2]金斌，金蓉鸾，何宏贤.反相离子对HPLC法测定洋金花类生药中的东莨菪碱和阿托品.中国药科大学学报，1991，22(3)：181
[3]李海生，周静远.马钱子及其制剂中士的宁的HPLC测定法.药物分析杂志，1982，2(6)：326
收稿日期：1999-04-27, http://www.100md.com
单位：卞俊 蔡定国 顾明娟 饶光立 曾华武(海军药学专科中心 上海 200434)
关键词：反相高效液相色谱法；金马通络胶囊、东莨菪碱；士的宁
药物分析杂志000118 摘 要：目的：建立一种反相高效液相色谱法检测金马通络胶囊中东莨菪碱及士的宁含量。方法：用C18ODS柱为固定相。甲醇-水(58∶42)(水相含0.05 mol.L-1醋酸盐缓冲液及0.002 5 mol.L-1十二烷基硫酸钠)为流动相。检测波长226 nm。结果：该方法回收率氢溴酸东莨菪碱为100.5%，RSD=2.3%(n=5)；士的宁为97.5%，RSD=2.4%(n=5)。结论：该方法操作简便、快捷、专一、准确性好，可用于金马通络胶囊质量控制。
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Determination Scopolamine and Strychnine
in Jin Ma Tong Luo Capsules by RP-HPLC
Bian Jun Cai Dingguo Gu Mingjuan Rao Guanli Zeng Huawu
(Research Center of Pharmacy,PLA Navy,Shanghai 200434)
Abstract：Objective：A RP-HPLC method in the separation and determination scopolamine and strychnine was developed.Method:The chromatographic conditions are listed below:Zorbax ODS C18 Column,UV detector at wavelength 226 nm,and a mobile phase MeOH-H2O(0.05 mol.L-1 acetate buffer solution with 0.002 5 mol.L-1 sodium lauryl sulfate,58∶42).Results:The recoveries for scopolamine and strychnine of the method are 100.5%(RSD 2.3%,n=5)and 97.5%(RSD 2.4%,n=5),respectively.Conclusion:The method is simple,rapid,accurate and precise.
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Key words：RP-HPLC,Jin Ma Tong Luo capsules,scopolamine,strychnine▲
金马通络胶囊是由洋金花、马钱子、淫羊藿、西洋参等数味中药组成的复方制剂。具有祛风除湿、温经通络之功效，临床上用于强直性脊椎炎等症的治疗。因洋金花中东莨菪碱及马钱子中士的宁均为主要有效且有毒成分，必须严格控制其含量。HPLC法用于洋金花药材中东莨菪碱及马钱子药材及其制剂中士的宁的含量测定，已有文献报道[1～3]，但在同一制剂中采用HPLC法同时测定东莨菪碱及士的宁含量未见文献报道。本文建立了反相HPLC法测定金马通络胶囊中东莨菪碱及士的宁含量，获得了满意结果，为金马通络胶囊的质量控制及安全用药提供了有效手段。
1 仪器与试药
日本岛津LC-6A高效液相色谱仪；SPD-6AV紫外检测器；C-R3A数据处理机；CTO-6A柱温箱；7125型进样器。
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氢溴酸东莨菪碱和士的宁对照品(定量用)由中国药品生物制品检定所提供；洋金花、马钱子、淫羊藿、西洋参等药材品种符合中国药典规定，购自上海市药材公司；样品金马通络胶囊(自制)，每1 g含东莨菪碱0.45 mg、士的宁2.0 mg。
十二烷基硫酸钠为化学纯，其余试剂均为分析纯。
2 色谱条件
分析柱：Zorbax ODS C18柱(150 mm×6.0 mm，粒径5 μm)，流动相：甲醇-水(58∶42)，水相含0.05 mol.L-1醋酸盐缓冲液(pH 4.60)及0.002 5 mol.L-1十二烷基硫酸钠；流速：1 mL.min-1；检测波长：226 nm；记录灵敏度：AUFS=0.08；柱温：40 ℃；进样体积：20 μL。在此色谱条件下，东莨菪碱及士的宁色谱图峰形对称，供试品色谱图中东莨菪碱及士的宁能相互达到基线分离，其它杂质成分对其测定结果不产生干扰。见色谱图1-A、B。
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图1 色谱图
A.东莨菪碱及士的宁对照品 B.样品
C.缺洋金花、马钱子 D.缺马钱子 E.缺洋金花
1.东莨菪碱 2.士的宁
3 供试品溶液制备
取样品内容物1.1 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入氯仿50 mL，浓氨试液3 mL，轻轻振摇数分钟，室温放置12 h以上，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液30 mL，置分液漏斗中，用0.25 mol.L-1硫酸提取3次，每次20 mL，合并提取液，加浓氨试液中和后，再多加2 mL，迅速用氯仿分次振摇提取(20，15，15，15，10 mL)，合并氯仿液，回收氯仿至干，残渣加甲醇溶解，转移置5.0 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.5 μm)过滤即得。
, 百拇医药
4 加样回收率实验
取已知含量的制剂样品，分别定量加入氢溴酸东莨菪碱及士的宁对照品，按上述拟定方法测定，5次测定的平均回收率分别为100.5%，97.5%；RSD分别为2.3%，2.4%。
5 样品测定
取样品3批，按上述拟定方法及色谱条件，分别吸取20 μL进样测定，按外标法计算，结果见表1。
表1 3批样品含量测定结果(n=5) 样品
氢溴酸东莨菪碱
士的宁
相当标示量/%
RSD/%
, 百拇医药
相当标示量/%
RSD/%
951214
102.9
5.0
99.78
4.5
951216
99.73
3.1
98.66
2.3
951218
, 百拇医药
104.8
4.7
99.94
4.8
6 讨论6.1 检测波长的选择 经紫外扫描测得，氢溴酸东莨菪碱甲醇液最大吸收波长为226 nm。士的宁甲醇液最大吸收波长为255 nm，东莨菪碱在此波长没有吸收，而士的宁在226 nm测定不受影响，故选择226 nm作为检测波长同步检测金马通络胶囊中东莨菪碱及士的宁的含量。
6.2 流动相选择 本文在流动相中加入十二烷基硫酸钠作为配对离子，在酸性条件下与生物碱类成分结合成中性离子对，增加其保留值，使性质相似的生物碱类物质东莨菪碱和士的宁及其它杂质成分在反相系统中相互达到基线分离。
6.3 提取方法及条件的选择 样品经加热回流(1，2，3 h)提取，超声处理20，30 min提取及冷浸提取比较，结果表明采用冷浸法提取，氯仿为溶媒，加浓氨试液使生物碱在碱性条件下充分游离并转入氯仿，并对不同冷浸时间(12，24，36 h)的萃取效果进行研究，冷浸12 h即可将制剂样品中待测成分提取出来。
, 百拇医药
6.4 线性关系的考察 精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品10 mg，士的宁对照品15 mg，置100 mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，稀释至刻度，制成含氢溴酸东莨菪碱0.1 mg.mL-1及士的宁0.15 mg.mL-1的对照品溶液，分别吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL至5.0 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取上述各溶液，在上述色谱条件下进样20 μL，各浓度溶液分别进样3次，以峰面积对进样量(μg)进行线性回归，得氢溴酸东莨菪碱和士的宁的回归方程分别为：
Y=6.174X+0.048 2 r=0.999 7
Y=16.36X-0.045 r=0.999 4
可见进样量氢溴酸东莨菪碱在0.8～10 μg、士的宁在1.66～8.30 μg范围内线性关系良好。
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6.5 方法精密度测定 在同一天内5个不同时间及5个不同日期对同一供试品溶液进行测定，分别计算，东莨菪碱日内精密度为RSD=1.4%,日间精密度为RSD=2.3%；士的宁日内精密度为RSD=1.4%，日间精密度为RSD=2.4%。
6.6 重现性实验 取制剂样品，按上述所拟定方法平行测定6次，结果表明，本方法重现性好，氢溴酸东莨菪碱RSD为3.6%，士的宁RSD为2.8%。
6.7 空白试验 取制剂样品，缺洋金花的空白样品，缺马钱子的空白样品和缺洋金花、马钱子粉的空白样品，制成相同浓度的溶液，在相同色谱条件下分别进样，比较以上样品HPLC色谱图，空白试验结果表明，本法测定对待测成分无干扰，专属性好。见图1-C、D、E。
6.8 制备供试品 其样品氨性氯仿萃取液经硫酸提取后，经氨水碱化用氯仿回流萃取时，氯仿萃取的次数不应少于5次，这样才能充分保证萃取液中士的宁成分充分转移至氯仿中，以减少测定结果的误差。
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6.9 本文建立的方法，经同一型号不同色谱柱及不同型号液相色谱仪对同一批号制剂样品检测，其结果基本相符。实验表明，该方法准确、快速、专一且重现性好。■
参考文献：
[1]于霖汇，杨德柱，胡淑贤.反相高效液相色谱法测定洋金花中东莨菪碱含量.中成药，1992，14(8)：35
[2]金斌，金蓉鸾，何宏贤.反相离子对HPLC法测定洋金花类生药中的东莨菪碱和阿托品.中国药科大学学报，1991，22(3)：181
[3]李海生，周静远.马钱子及其制剂中士的宁的HPLC测定法.药物分析杂志，1982，2(6)：326
收稿日期：1999-04-27, http://www.100md.com