国产富马酸比索洛尔胶囊的人体相对生物利用度研究
作者：刘锡钧 陈鹭颖 杨正管 王庆彪 刘莹 裴仁九 翁东明
单位：南京军区福州总医院，福州 350001
关键词：富马酸比索洛尔；生物利用度；HPLC
中国临床药理学杂志000110
摘 要：为了考察富马酸比索洛尔胶囊新剂型的人体生物利用度，本文取10名男性健康志愿受试者单剂量交叉口服10 mg富马酸比索洛尔胶囊和富马酸比索洛尔片，用高效液相色谱荧光检测法测定血浆富马酸比索洛尔浓度，进行富马酸比索洛尔胶囊的药代动力学和相对生物利用度研究。结果表明：富马酸比索洛尔胶囊和片剂的血药浓度时间曲线图均符合口服吸收二室模型，主要药代动力学参数Tmax分别为2.05±1.89 h和2.20±1.75 h， Cmax分别为63.27±16.05 μg.L-1和57.49±10.49μg.L-1，T1/2β分别为12.79±2.86 h和13.11±3.93 h，AUC0～∞分别为1390.95±139.22 μg.h.L-1 和1381.04±151.56 μg.h.L-1。两种剂型的药代动力学参数经统计学分析无显著性差异(P>0.05)。富马酸比索洛尔胶囊的相对生物利用度为100.1%±18.7%，结果提示受试的胶囊剂和对照的片剂生物等效。
, http://www.100md.com
Relative Bioavailability of Domestic Bisoprolol Hemifumarate Capsule in Healthy Volunteers
LIU Xi-Jun CHEN Lu-Ying YANG Zheng-Guan WANG Qing-Biao LIU Ying PEI Ren-Jiu WENG Dong-Ming
(Department of Clinical Pharmacology , Fuzhou General Hospital ,Nanjing Millitary Area Fuzhou 350001)
Abstract：The pharmacokinetic profiles and the bioavailability of domestic Bisoprolol hemifumarate capsules were studied in 10 healthy male volunteers. A single oral dose of 10 mg bisoprolol capsules and tablets were given according to a cross over design. Plasma concentrations were measured by HPLC. The concentration-time curves of the two products of bisoprolol were fitted to a two-comparment model with oral absorption. There was no significant difference in each pharmacokinetic parameters between the capsules and the tablets (P>0.05).Tmax were 2.05±1.89 h and 2.20±1.75 h，Cmax were 63.76±16.05 μg.L-1and 57.49±10.49μg.L-1，T1/2βwere 12.79±2.86 h and 13.11±3.93 h，AUC0～∞were 1390.95±139.22 μg.h.L-1 and 1381.04±151.56 μg.h.L-1.The relative bioavailability of the bisoprolol capsule to the tablet was 100.1%±18.7%. These results suggested that the two products are bioequivalent.
, 百拇医药
Key words：bisoprolol hemifumarate ; bioavaiability; HPLC
富马酸比索洛尔(bisoprolol hemifrumarate ,BSP)是继美托洛尔、阿替洛尔和普萘洛尔之后的又一新型β-受体阻滞剂，它具有药理作用强、药物不良反应小及药效持续时间长等优点。本文采用高效液相色谱-荧光检测法测定血样中富马酸比索洛尔浓度，比较国产富马酸比索洛尔胶囊和片剂在健康男性成人体内的药代动力学过程，评价富马酸比索洛尔胶囊的相对生物利用度，为富马酸比索洛尔胶囊的临床评价提供依据。
材料与方法
1. 药品与试剂
富马酸比索洛尔标准品(含量99.5%)、富马酸比索洛尔胶囊(每粒含富马酸比索洛尔2.5 mg)，批号：980205，均由西安有生医药研究所提供。富马酸比索洛尔片，每片含富马酸比索洛尔5 mg，批号961106，北京四环制药厂产品。内标催醒胺，军事医学科学院提供；乙腈为色谱纯；甲醇，乙醚，氢氧化钠，磷酸均为分析纯。
, 百拇医药
2. 仪器
Waters高效液相色谱系统(包括510型高压梯度泵，470型可变波长荧光检测器；U6K型手动进样阀，Millennium TM2010色谱专家系统及数据处理软件)；XW-80旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；80-2离心沉淀器(上海手术器械厂)；HH.S112电热恒温水浴(江苏省医疗器械厂)。
3. 受试者与试验方法
3.1 受试者
10名男性健康志愿受试者，体重60.6±5.25 kg，年龄21～25岁，经生化检验未见肝、肾功能异常，心电图检查无异常。实验前将有关实验计划和实验细节报请福州总医院医学伦理委员会批准，获准后和志愿受试者签定试验知情同意书。实验前一周及整个实验过程中未服用其它任何药物，实验期间统一饮食并禁烟、酒、茶和咖啡，实验过程中定时测定受试者的血压和心率，全部实验在临床医生和护士的密切观察下进行。
, 百拇医药
3.2 给药与血样采集
10名受试者随机分为两组，采用随机自身交叉服用胶囊和片剂。中间药物清洗期为一周。受试者空腹12 h后，于次日早晨6:00服用胶囊(每粒2.5 mg，共服4粒)或片(每粒5 mg，共服2片)，200 ml温开水送服，服药2 h后统一进食。分别于服药前及服药后0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，5.0，7.0，10.0，13.0，18.0，24.0和35.0 h，由肘静脉取血5 ml于肝素化试管中，离心，取2 ml血浆置-40℃冰箱中待测。
3.3.色谱条件[1,2]
流动相为乙腈:甲醇:0.09 mol·L-1磷酸:水(34:10:6:50 v/v)，流速0.9 ml.min-1，色谱柱为Nova-pak C18 4.0 mm×15 cm 4μm分析柱和C18 10μm预柱，柱温25℃，荧光检测波长232/300 nm(Ex/Em)。
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3.4.生物样品的提取与分离
取肝素化血浆2 ml，加内标0.025 ml (19.69 mg.L-1)，加1 mol.L-1氢氧化钠0.1 ml，涡旋混匀，加乙醚4 ml涡旋10 min，振荡3 min，离心，取上层有机层3 ml，依法再提一次，合并两次提取液，在40℃水浴上氮气流吹干，用100μl流动相溶解残渣，取25μl进样。
3.5.测定方法考察
血浆中富马酸比索洛尔线性范围考察：取健康人空白血浆2.0 ml分别加入刻度离心试管中，再分别加入标准贮备液，使其浓度分别为4，8，16，32，64，128μg.L-1，涡旋混匀后，同“生物样品提取与分离”项下操作，进样后的色谱图经数据处理系统处理，以浓度C(μg.L-1)对样品内标的峰面积比H进行线性回归。回归方程为H = -0.3108+0.6999C (n=6，r=0.9998)。
, 百拇医药
富马酸比索洛尔的回收率、日内、日间变异系数(RSD%)的测定，采用4, 16, 64 μg.L-1三个浓度，计算日内和日间变异系数均值分别为2.70%±1.74%(n=5)， 7.93%±1.92%(n=5)，三种浓度的方法回收率分别为105.43%±3.64%, 95.81%±4.07%, 98.34%±5.05%。最小检测限为2μg.L-1(N/S=3)。
4. 数据处理[3,4]
将血药浓度-时间数据在半对数图上作图，显示二房室特征，经PKBP-N1程序(南京军区南京总医院药理科提供)对经时血药浓度数据进行处理，显示富马酸比索洛尔在体内的经时过程符合一级吸收二房室模型。参数求算按实测值由梯形法求得，取mean±SD。
非房室模型性参数(non-compartmental parameters) 采用统计矩方法分析。
, 百拇医药
生物利用度估算 本实验估算的是富马酸比索洛尔胶囊的相对生物利用度，以北京四环制药厂生产的富马酸比索洛尔片为参比对照品。生物利用度计算公式为：
F=AUC胶囊/AUC片×100%
统计学处理 采用交叉实验设计的方差分析法对实验结果进行统计分析。对Cmax和AUC先进行对数转换，再进行统计学处理。
结果与讨论
1. 血药浓度
用HPLC法测定单剂量口服富马酸比索洛尔胶囊和片的药时曲线图(图1)。
Fig1.Mean plasma concentration-time curve of bisoprolol hemifumarate
, 百拇医药
after a single oral dose of 10mg in 10 healthy volunteers
由图1可见，单剂量口服10 mg富马酸比索洛尔胶囊和片剂比较，血药浓度达峰较快，吸收速率常数较大，这可能由于片剂存在一个崩解时间而使其吸收比胶囊剂稍慢的缘故，胶囊剂和片剂的峰浓度(Cmax)之间没有显著差异。
2. 富马酸比索洛尔胶囊药代动力学及其相对生 物利用度
按实测值由梯形法求得单剂量口服10 mg富马酸比索洛尔胶囊和10 mg富马酸比索洛尔片药代动力学参数见表1。
Table 1. The pharmacokinetic parameters of bisoprolol hemifumarate
, http://www.100md.com after a single oral dose of 10 mg in normal subjects Pharameters
Cspdulr
Tablet
Cmax(μg.L-1)
63.76±16.05
57.49±10.49
Tmax(h)
2.05±1.89
2.20±1.75
T1/2a(h)
, 百拇医药
2.49±3.34
2.97±1.78
T1/2b(h)
12.79±2.860
13.11±3.930
T1/2ka(h)
0.71±1.12
0.44±0.29
V.C/F(L)
138.46±47.090
153.32±31.600
, 百拇医药
AUC0～t(μg.h.L-1)
1332.18±146.750
1327.39±168.730
AUC0～∞(μg.h.L-1)
1390.95±139.220
1381.04±151.560
(mean±SD,n=10)
由表1可见，富马酸比索洛尔片为参比对照，用面积法估算的富马酸比索洛尔胶囊的相对生物利用度为100.1%±18.7%。
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3. 生物等效性评价
体内主要药代动力学参数和AUC0～∞二者之间没有明显差异，经对(实际测定值)、AUC0～35和AUC35～∞作方差分析，除受试者间有显著差异外(服用片剂和胶囊的受试者间均有统计学差异，这可能与比索洛尔的亲脂性较强，呈现开放二室处置模型有关)，周期间和处方间无统计学差异；对和AUC0～∞方差分析后再行双单侧检验，结果的可信区间上限为120.2%下限为98.4%，落在片剂的70%～145%之间，AUC0～∞的可信区间上限为113.4%下限为90.8%，落在片剂AUC0～∞的80%～125%之间，二者为生物等效。受试者在试验期间未见明显的不良反应，但是，实验研究的结果提示，受试者服用片剂和胶囊剂后，经方差分析的统计学处理均存在个体差异，说明比索洛尔口服后对不同的个体其最大峰浓度值有明显的差异，临床应用该药治疗高血压等疾病时，需要根据临床疗效，调整合适的剂量，尽量做到治疗的个体化。故全部实验的结果可以为临床应用富马酸比索洛尔胶囊提供药动学指导依据。
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参考文献
1.张振清.高效液相色谱法测定人血浆中比索洛尔浓度.药物分析杂志，1996；16：78～80.
2.Poirier JM, Perez M, Cheymol G, et al. Rapid and sensitive high-performance liquid chromatographic determination of bisoprolol in plasma and urine. J Chromatogr, 1988 ; 426: 431～437.
3.黄圣凯.生物等效性评价的统计方法.中国药学杂志，1994；29：312～314.
4.韩可勤.生物等效性评价中数据对数变换后的一些统计问题.中国临床药理学杂志，1994；10：124～128.
收稿：1999-3-1
修回：1999-10-4, 百拇医药
单位：南京军区福州总医院，福州 350001
关键词：富马酸比索洛尔；生物利用度；HPLC
中国临床药理学杂志000110
摘 要：为了考察富马酸比索洛尔胶囊新剂型的人体生物利用度，本文取10名男性健康志愿受试者单剂量交叉口服10 mg富马酸比索洛尔胶囊和富马酸比索洛尔片，用高效液相色谱荧光检测法测定血浆富马酸比索洛尔浓度，进行富马酸比索洛尔胶囊的药代动力学和相对生物利用度研究。结果表明：富马酸比索洛尔胶囊和片剂的血药浓度时间曲线图均符合口服吸收二室模型，主要药代动力学参数Tmax分别为2.05±1.89 h和2.20±1.75 h， Cmax分别为63.27±16.05 μg.L-1和57.49±10.49μg.L-1，T1/2β分别为12.79±2.86 h和13.11±3.93 h，AUC0～∞分别为1390.95±139.22 μg.h.L-1 和1381.04±151.56 μg.h.L-1。两种剂型的药代动力学参数经统计学分析无显著性差异(P>0.05)。富马酸比索洛尔胶囊的相对生物利用度为100.1%±18.7%，结果提示受试的胶囊剂和对照的片剂生物等效。
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Relative Bioavailability of Domestic Bisoprolol Hemifumarate Capsule in Healthy Volunteers
LIU Xi-Jun CHEN Lu-Ying YANG Zheng-Guan WANG Qing-Biao LIU Ying PEI Ren-Jiu WENG Dong-Ming
(Department of Clinical Pharmacology , Fuzhou General Hospital ,Nanjing Millitary Area Fuzhou 350001)
Abstract：The pharmacokinetic profiles and the bioavailability of domestic Bisoprolol hemifumarate capsules were studied in 10 healthy male volunteers. A single oral dose of 10 mg bisoprolol capsules and tablets were given according to a cross over design. Plasma concentrations were measured by HPLC. The concentration-time curves of the two products of bisoprolol were fitted to a two-comparment model with oral absorption. There was no significant difference in each pharmacokinetic parameters between the capsules and the tablets (P>0.05).Tmax were 2.05±1.89 h and 2.20±1.75 h，Cmax were 63.76±16.05 μg.L-1and 57.49±10.49μg.L-1，T1/2βwere 12.79±2.86 h and 13.11±3.93 h，AUC0～∞were 1390.95±139.22 μg.h.L-1 and 1381.04±151.56 μg.h.L-1.The relative bioavailability of the bisoprolol capsule to the tablet was 100.1%±18.7%. These results suggested that the two products are bioequivalent.
, 百拇医药
Key words：bisoprolol hemifumarate ; bioavaiability; HPLC
富马酸比索洛尔(bisoprolol hemifrumarate ,BSP)是继美托洛尔、阿替洛尔和普萘洛尔之后的又一新型β-受体阻滞剂，它具有药理作用强、药物不良反应小及药效持续时间长等优点。本文采用高效液相色谱-荧光检测法测定血样中富马酸比索洛尔浓度，比较国产富马酸比索洛尔胶囊和片剂在健康男性成人体内的药代动力学过程，评价富马酸比索洛尔胶囊的相对生物利用度，为富马酸比索洛尔胶囊的临床评价提供依据。
材料与方法
1. 药品与试剂
富马酸比索洛尔标准品(含量99.5%)、富马酸比索洛尔胶囊(每粒含富马酸比索洛尔2.5 mg)，批号：980205，均由西安有生医药研究所提供。富马酸比索洛尔片，每片含富马酸比索洛尔5 mg，批号961106，北京四环制药厂产品。内标催醒胺，军事医学科学院提供；乙腈为色谱纯；甲醇，乙醚，氢氧化钠，磷酸均为分析纯。
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2. 仪器
Waters高效液相色谱系统(包括510型高压梯度泵，470型可变波长荧光检测器；U6K型手动进样阀，Millennium TM2010色谱专家系统及数据处理软件)；XW-80旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；80-2离心沉淀器(上海手术器械厂)；HH.S112电热恒温水浴(江苏省医疗器械厂)。
3. 受试者与试验方法
3.1 受试者
10名男性健康志愿受试者，体重60.6±5.25 kg，年龄21～25岁，经生化检验未见肝、肾功能异常，心电图检查无异常。实验前将有关实验计划和实验细节报请福州总医院医学伦理委员会批准，获准后和志愿受试者签定试验知情同意书。实验前一周及整个实验过程中未服用其它任何药物，实验期间统一饮食并禁烟、酒、茶和咖啡，实验过程中定时测定受试者的血压和心率，全部实验在临床医生和护士的密切观察下进行。
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3.2 给药与血样采集
10名受试者随机分为两组，采用随机自身交叉服用胶囊和片剂。中间药物清洗期为一周。受试者空腹12 h后，于次日早晨6:00服用胶囊(每粒2.5 mg，共服4粒)或片(每粒5 mg，共服2片)，200 ml温开水送服，服药2 h后统一进食。分别于服药前及服药后0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，5.0，7.0，10.0，13.0，18.0，24.0和35.0 h，由肘静脉取血5 ml于肝素化试管中，离心，取2 ml血浆置-40℃冰箱中待测。
3.3.色谱条件[1,2]
流动相为乙腈:甲醇:0.09 mol·L-1磷酸:水(34:10:6:50 v/v)，流速0.9 ml.min-1，色谱柱为Nova-pak C18 4.0 mm×15 cm 4μm分析柱和C18 10μm预柱，柱温25℃，荧光检测波长232/300 nm(Ex/Em)。
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3.4.生物样品的提取与分离
取肝素化血浆2 ml，加内标0.025 ml (19.69 mg.L-1)，加1 mol.L-1氢氧化钠0.1 ml，涡旋混匀，加乙醚4 ml涡旋10 min，振荡3 min，离心，取上层有机层3 ml，依法再提一次，合并两次提取液，在40℃水浴上氮气流吹干，用100μl流动相溶解残渣，取25μl进样。
3.5.测定方法考察
血浆中富马酸比索洛尔线性范围考察：取健康人空白血浆2.0 ml分别加入刻度离心试管中，再分别加入标准贮备液，使其浓度分别为4，8，16，32，64，128μg.L-1，涡旋混匀后，同“生物样品提取与分离”项下操作，进样后的色谱图经数据处理系统处理，以浓度C(μg.L-1)对样品内标的峰面积比H进行线性回归。回归方程为H = -0.3108+0.6999C (n=6，r=0.9998)。
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富马酸比索洛尔的回收率、日内、日间变异系数(RSD%)的测定，采用4, 16, 64 μg.L-1三个浓度，计算日内和日间变异系数均值分别为2.70%±1.74%(n=5)， 7.93%±1.92%(n=5)，三种浓度的方法回收率分别为105.43%±3.64%, 95.81%±4.07%, 98.34%±5.05%。最小检测限为2μg.L-1(N/S=3)。
4. 数据处理[3,4]
将血药浓度-时间数据在半对数图上作图，显示二房室特征，经PKBP-N1程序(南京军区南京总医院药理科提供)对经时血药浓度数据进行处理，显示富马酸比索洛尔在体内的经时过程符合一级吸收二房室模型。参数求算按实测值由梯形法求得，取mean±SD。
非房室模型性参数(non-compartmental parameters) 采用统计矩方法分析。
, 百拇医药
生物利用度估算 本实验估算的是富马酸比索洛尔胶囊的相对生物利用度，以北京四环制药厂生产的富马酸比索洛尔片为参比对照品。生物利用度计算公式为：
F=AUC胶囊/AUC片×100%
统计学处理 采用交叉实验设计的方差分析法对实验结果进行统计分析。对Cmax和AUC先进行对数转换，再进行统计学处理。
结果与讨论
1. 血药浓度
用HPLC法测定单剂量口服富马酸比索洛尔胶囊和片的药时曲线图(图1)。
Fig1.Mean plasma concentration-time curve of bisoprolol hemifumarate
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after a single oral dose of 10mg in 10 healthy volunteers
由图1可见，单剂量口服10 mg富马酸比索洛尔胶囊和片剂比较，血药浓度达峰较快，吸收速率常数较大，这可能由于片剂存在一个崩解时间而使其吸收比胶囊剂稍慢的缘故，胶囊剂和片剂的峰浓度(Cmax)之间没有显著差异。
2. 富马酸比索洛尔胶囊药代动力学及其相对生 物利用度
按实测值由梯形法求得单剂量口服10 mg富马酸比索洛尔胶囊和10 mg富马酸比索洛尔片药代动力学参数见表1。
Table 1. The pharmacokinetic parameters of bisoprolol hemifumarate
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Cspdulr
Tablet
Cmax(μg.L-1)
63.76±16.05
57.49±10.49
Tmax(h)
2.05±1.89
2.20±1.75
T1/2a(h)
, 百拇医药
2.49±3.34
2.97±1.78
T1/2b(h)
12.79±2.860
13.11±3.930
T1/2ka(h)
0.71±1.12
0.44±0.29
V.C/F(L)
138.46±47.090
153.32±31.600
, 百拇医药
AUC0～t(μg.h.L-1)
1332.18±146.750
1327.39±168.730
AUC0～∞(μg.h.L-1)
1390.95±139.220
1381.04±151.560
(mean±SD,n=10)
由表1可见，富马酸比索洛尔片为参比对照，用面积法估算的富马酸比索洛尔胶囊的相对生物利用度为100.1%±18.7%。
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3. 生物等效性评价
体内主要药代动力学参数和AUC0～∞二者之间没有明显差异，经对(实际测定值)、AUC0～35和AUC35～∞作方差分析，除受试者间有显著差异外(服用片剂和胶囊的受试者间均有统计学差异，这可能与比索洛尔的亲脂性较强，呈现开放二室处置模型有关)，周期间和处方间无统计学差异；对和AUC0～∞方差分析后再行双单侧检验，结果的可信区间上限为120.2%下限为98.4%，落在片剂的70%～145%之间，AUC0～∞的可信区间上限为113.4%下限为90.8%，落在片剂AUC0～∞的80%～125%之间，二者为生物等效。受试者在试验期间未见明显的不良反应，但是，实验研究的结果提示，受试者服用片剂和胶囊剂后，经方差分析的统计学处理均存在个体差异，说明比索洛尔口服后对不同的个体其最大峰浓度值有明显的差异，临床应用该药治疗高血压等疾病时，需要根据临床疗效，调整合适的剂量，尽量做到治疗的个体化。故全部实验的结果可以为临床应用富马酸比索洛尔胶囊提供药动学指导依据。
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参考文献
1.张振清.高效液相色谱法测定人血浆中比索洛尔浓度.药物分析杂志，1996；16：78～80.
2.Poirier JM, Perez M, Cheymol G, et al. Rapid and sensitive high-performance liquid chromatographic determination of bisoprolol in plasma and urine. J Chromatogr, 1988 ; 426: 431～437.
3.黄圣凯.生物等效性评价的统计方法.中国药学杂志，1994；29：312～314.
4.韩可勤.生物等效性评价中数据对数变换后的一些统计问题.中国临床药理学杂志，1994；10：124～128.
收稿：1999-3-1
修回：1999-10-4, 百拇医药