原发性高血压患者血小板内游离Ca2+浓度与血浆TxA2-PGI2平衡系统的关系
作者：叶和军 林求诚
单位：叶和军(武警浙江省总队医院心内科 浙江嘉兴，314000)；林求诚(福建中医药研究院)
关键词：高血压；血小板内游离Ca2+；血栓素A2；6-酮前列腺素F1α
临床心血管病杂志000109 摘 要：目的：探讨血小板内游离Ca2+浓度与血浆TxB2、6-keto-PGF1α水平变化在原发性高血压(EH)发病中的作用。方法：测定63例EH患者血小板内游离Ca2+浓度与血浆TxB2、6-keto-PGF1α水平，并与30例健康者对照。结果：①EH患者血小板内游离Ca2+浓度与血浆TxB2水平显著高于正常对照组，6-keto-PGF1α水平显著低于正常对照组；②平均动脉压与血小板内游离Ca2+浓度及血浆TxB2/6-keto-PGF1α比值显著正相关。结论：血小板内游离Ca2+浓度与血浆TxA2-PGI2平衡系统在EH发病中有一定作用。
, 百拇医药
Clinical study on intracellular free calcium of platelets and plasma
TxA2-PGI2 balance in patients with essential hypertension
YE He-Jun
(Zhejiang Provincial Corps Hospital,Chinese People′s Armed Police Forces,Jiaxing 314000;)
LIN Qiu-cheng
(Fujian Academy of TCM)
Abstract：Objective：To investigate the changes of intracellular free calcium concentration of platelets,the level of plasma TxB2,6-keto-PGF1α in patients with essential hypertension(EH).Method：63 patients with EH and 30 normal controls were observed. The intracellular free calcium concentration of platelets were measured by the technique of fluorescence with Fura-2 as indicator while the levels of plasma TxB2、6-keto-PGF1α were determined by radioimmunoassay simultaneously.Result：①Intracellular free calcium concentration of platelets and the level of plasma TxB2, the ratio of TxB2/6-keto-PGF1α in patients with EH were significantly increased than those in the controls (P<0.01),while the level of plasma 6-keto-PGF1α was significantly decreased than that in the controls (P<0.01). ②MAP was positively related to the intracellular free calcium concentration (r=0.832 3，P<0.01),the level of plasma TxB2(r=0.847 1，P<0.01),and the ratio of TxB2/6-keto-PGF1α(r=0.809 5，P<0.01).Conclusion：The intracellular free calcium and the TxA2-PGI2 balance may play an important role in the pathogenesis of EH.
, 百拇医药
Key words：Hypertension Intracellular free calcium of platelets Thromboxane A2 6-keloprostagbendin F1α▲
原发性高血压(EH)的发病机制尚未能得到完全阐明。本研究通过观察EH患者血小板内游离Ca2+(〔Ca2+〕i)浓度与血浆TxA2-PGF1α平衡系统变化，以探讨两者在EH患者中的变化规律与相互关系及其影响EH发生、发展的可能机制。
1 对象与方法
1.1 研究对象
EH组：EH患者63例，其中男27例，女36例；年龄45～70(50.8±4.8)岁；收缩压160～190(168.1±8.0)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，舒张压70～120(85.8±14.8)mmHg；经询问病史、体检及心、肝、肾功能检查，排除继发性高血压及吸烟患者。所有病例均符合1993年WHO/ISH的有关诊断标准，即3次不同时间、坐位测定血压>160/95 mmHg(处于治疗中的患者经停用抗高血压药1周后，血压达不到诊断标准者，不予纳入观察)。63例中Ⅰ期23例，Ⅱ期35例，Ⅲ期5例。
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正常对照组：健康志愿者30例。其中男13例，女17例；年龄40～62(49±62)岁；收缩压105～138(120.7±9.5)mmHg，舒张压67～87(76.7±5.8)mmHg；平均动脉压(MAP)84～104(91.2±8.0)mmHg。经详细体检及ECG，胸透，血、尿常规，心、肝、肾功能等理化检查，无EH、发热及其他器质性心、脑、肝、肾、血液、肺部疾病。
所有受试对象1周内均未使用血管活性药物、潘生丁、阿司匹林、丹参等影响血小板聚集的药物及抗高血压药。
1.2 方法
血压测量方法：静息30 min以上，测定坐位右臂动脉压。正常对照组仅取当日连续3次的均值；EH组取非同日3次血压的均值。测量舒张压时以柯氏音消失时的读数为准。MAP计算方法遵循下列公式：MAP=舒张压+1/3(收缩压-舒张压)。血液标本：所有受试对象均于上午8时前空腹采肘静脉血。
, 百拇医药
血小板内游离Ca2+浓度的测定〔2〕：采肘静脉血10 ml，ACD抗凝，分离PRP。用Fura-2荧光法测定，其单位以nmol/L表示。
血浆TxB2及6-keto-PGF1α水平的测定：采肘静脉血标本2 ml，放入预冷的装有2%EDTA-2Na抗凝剂0.2 ml的塑料试管中，轻轻摇动使其充分混匀。然后迅速在4℃条件下离心(3 000 r/min)15 min，吸出上层血浆约1 ml，放入-40℃低温冰箱中保存以成批检测。于1周内以125I标记放射免疫分析法测定TxB2、6-keto-PGF1α水平。放免药盒由苏州医学院血栓与止血研究所提供，数据单位以ng/L表示。
1.3 统计方法
测定数据均以
±s表示。计量资料采用两样本均数t检验，方差不齐用秩和检验，率的比较用χ2检验，两变量直线相关用PERSON法，相关系数r值的显著性用P值表示。
, 百拇医药
2 结果
两组血小板内〔Ca2+〕i浓度与血浆TxB2、6-keto-PGF1α、TxB2/6-keto-PGF1α比值变化比较见表1。
EH患者MAP与血小板内〔Ca2+〕i浓度，血浆TxB2/6-keto-PGF1α比值的关系见表2。
表1 两组血小板内〔Ca2+〕i浓度与血 浆TxB2、6-keto-PGF1α、TxB2/6-keto-PGF1α比值变化比较±s 组别
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〔Ca2+〕i/(nmol*L-1)
TxB2/(ng.L-1)
6-keto-PGF1α/(ng.L-1)
TxB2/6-keto-P GF1α
正常对照
130.8±31.5
181. 7±45.8
25.7±6.3
, 百拇医药 8.5±7.8
EH
201.1±68.21)
289.6±148.51)
19.2±8.31)
18.7±14.71)
1)与正常对照组比较，P<0.01表2 MAP与血小板内〔Ca2+〕i浓度及血浆TxB2/6-keto-PGF1α比值关系
〔Ca2+〕i相关系数
, 百拇医药
MAP
相关系数
P值
相关系数
P值
〔Ca2+〕i
-
-
0 .832 3
<0.01
TxB2
0.891 5
, http://www.100md.com <0.01
0.847 1
<0.01
6-keto-PGF1α
-0.082 8
>0.05
-0.310 4
>0.05
TxB2/6-keto-PGF1α
0.565 1
<0.01
, 百拇医药
0.809 5
<0.01
3 讨论
血管平滑肌细胞内Ca2+代谢异常可使其结构和功能发生改变进而导致外周血管阻力升高引起血压升高〔2，3〕。国外以血小板作为平滑肌的替代模型，研究发现EH患者血小板内游离Ca2+浓度显著升高〔4，5〕。本文结果与之相符，表明EH患者有钙代谢异常。
血管内皮细胞生成并释放的前列环素(PGI2)与血小板生成的血栓素A2(TxA2)相互拮抗，共同调节血管舒缩过程。本研究表明，EH患者TxA2代谢产物即TxB2水平较正常对照组显著升高，而PGI2代谢产物即6-keto-PGF1α水平显著下降，相应地TxB2/6-keto -PGF1α比值显著上升，支持国内外其他研究的结果〔6，7〕。提示循环血中PGI 2和TxA2之间的相对平衡可能是血压维持常态的重要生理基础。
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相关分析表明血小板内〔Ca2+〕i浓度与血浆TxB2水平及TxB2/6-keto-PGF1 α比值显著正相关。推测高血压时〔Ca2+〕i浓度的升高，激活血小板使其血栓素合成酶活性增强，TxA2合成与释放增加。而血小板内〔Ca2+〕i浓度与6-keto-PGF 1α水平相关不显著，提示高血压时钙代谢的异常可能更重要的是影响TxA2/PGI2这一 对平衡系统，进一步说明该系统失衡在EH病程中的病理生理作用。
本研究观察到MAP与血小板内〔Ca2+〕i浓度及血浆TxB2水平、TxB2/6-keto-PG F1 α比值显著正相关。由于MAP更主要的反映了外周血管阻力，说明细胞内钙代谢异常和TxA 2-PGI2平衡系统失衡可能主要影响外周血管阻力而使血压变化。■
, 百拇医药
参考文献:
[1]谢良化，陈达光，邬大元，等.应用Fura-2测定血小板内游离钙浓 度.福建医学院学报，1991，25：167～168
[2]文允镒.钙调素与高血压关系的进展.中国高血压杂志，1994，7(Suppl):59～62
[3]Morgan K G. Role of calcium in maintenance of vascular smooth muscle tone.Am J Cardiol,1987,59:24A～24A
[4]Erne P, Bolli P,Burgisser E, et al. Relation of platelets calcium with blood pressure. N Engl Med,1984,310:1084～1085
, http://www.100md.com
[5]Linder A, Kenny M, Mcacham A J. Effects of a circulating factor in patients w ith essential hypertension on intracellular free calcium in normal platelets. N Engl Med,1987,316:509～510
[6]杨国雄，张国忠，李保罗.血栓素A2和前列环素与自发性高血压大鼠血压发展的关系. 中国病理生理杂志，1991，3：237～239
[7]李碧林，刘正宏.TxB2，6-酮-PGF1α、血液流变与高血压的关系.中华神经精神病 科杂志，1990，13：174，167
收稿日期：1999-03-27, 百拇医药
单位：叶和军(武警浙江省总队医院心内科 浙江嘉兴，314000)；林求诚(福建中医药研究院)
关键词：高血压；血小板内游离Ca2+；血栓素A2；6-酮前列腺素F1α
临床心血管病杂志000109 摘 要：目的：探讨血小板内游离Ca2+浓度与血浆TxB2、6-keto-PGF1α水平变化在原发性高血压(EH)发病中的作用。方法：测定63例EH患者血小板内游离Ca2+浓度与血浆TxB2、6-keto-PGF1α水平，并与30例健康者对照。结果：①EH患者血小板内游离Ca2+浓度与血浆TxB2水平显著高于正常对照组，6-keto-PGF1α水平显著低于正常对照组；②平均动脉压与血小板内游离Ca2+浓度及血浆TxB2/6-keto-PGF1α比值显著正相关。结论：血小板内游离Ca2+浓度与血浆TxA2-PGI2平衡系统在EH发病中有一定作用。
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Clinical study on intracellular free calcium of platelets and plasma
TxA2-PGI2 balance in patients with essential hypertension
YE He-Jun
(Zhejiang Provincial Corps Hospital,Chinese People′s Armed Police Forces,Jiaxing 314000;)
LIN Qiu-cheng
(Fujian Academy of TCM)
Abstract：Objective：To investigate the changes of intracellular free calcium concentration of platelets,the level of plasma TxB2,6-keto-PGF1α in patients with essential hypertension(EH).Method：63 patients with EH and 30 normal controls were observed. The intracellular free calcium concentration of platelets were measured by the technique of fluorescence with Fura-2 as indicator while the levels of plasma TxB2、6-keto-PGF1α were determined by radioimmunoassay simultaneously.Result：①Intracellular free calcium concentration of platelets and the level of plasma TxB2, the ratio of TxB2/6-keto-PGF1α in patients with EH were significantly increased than those in the controls (P<0.01),while the level of plasma 6-keto-PGF1α was significantly decreased than that in the controls (P<0.01). ②MAP was positively related to the intracellular free calcium concentration (r=0.832 3，P<0.01),the level of plasma TxB2(r=0.847 1，P<0.01),and the ratio of TxB2/6-keto-PGF1α(r=0.809 5，P<0.01).Conclusion：The intracellular free calcium and the TxA2-PGI2 balance may play an important role in the pathogenesis of EH.
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Key words：Hypertension Intracellular free calcium of platelets Thromboxane A2 6-keloprostagbendin F1α▲
原发性高血压(EH)的发病机制尚未能得到完全阐明。本研究通过观察EH患者血小板内游离Ca2+(〔Ca2+〕i)浓度与血浆TxA2-PGF1α平衡系统变化，以探讨两者在EH患者中的变化规律与相互关系及其影响EH发生、发展的可能机制。
1 对象与方法
1.1 研究对象
EH组：EH患者63例，其中男27例，女36例；年龄45～70(50.8±4.8)岁；收缩压160～190(168.1±8.0)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，舒张压70～120(85.8±14.8)mmHg；经询问病史、体检及心、肝、肾功能检查，排除继发性高血压及吸烟患者。所有病例均符合1993年WHO/ISH的有关诊断标准，即3次不同时间、坐位测定血压>160/95 mmHg(处于治疗中的患者经停用抗高血压药1周后，血压达不到诊断标准者，不予纳入观察)。63例中Ⅰ期23例，Ⅱ期35例，Ⅲ期5例。
, http://www.100md.com
正常对照组：健康志愿者30例。其中男13例，女17例；年龄40～62(49±62)岁；收缩压105～138(120.7±9.5)mmHg，舒张压67～87(76.7±5.8)mmHg；平均动脉压(MAP)84～104(91.2±8.0)mmHg。经详细体检及ECG，胸透，血、尿常规，心、肝、肾功能等理化检查，无EH、发热及其他器质性心、脑、肝、肾、血液、肺部疾病。
所有受试对象1周内均未使用血管活性药物、潘生丁、阿司匹林、丹参等影响血小板聚集的药物及抗高血压药。
1.2 方法
血压测量方法：静息30 min以上，测定坐位右臂动脉压。正常对照组仅取当日连续3次的均值；EH组取非同日3次血压的均值。测量舒张压时以柯氏音消失时的读数为准。MAP计算方法遵循下列公式：MAP=舒张压+1/3(收缩压-舒张压)。血液标本：所有受试对象均于上午8时前空腹采肘静脉血。
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血小板内游离Ca2+浓度的测定〔2〕：采肘静脉血10 ml，ACD抗凝，分离PRP。用Fura-2荧光法测定，其单位以nmol/L表示。
血浆TxB2及6-keto-PGF1α水平的测定：采肘静脉血标本2 ml，放入预冷的装有2%EDTA-2Na抗凝剂0.2 ml的塑料试管中，轻轻摇动使其充分混匀。然后迅速在4℃条件下离心(3 000 r/min)15 min，吸出上层血浆约1 ml，放入-40℃低温冰箱中保存以成批检测。于1周内以125I标记放射免疫分析法测定TxB2、6-keto-PGF1α水平。放免药盒由苏州医学院血栓与止血研究所提供，数据单位以ng/L表示。
1.3 统计方法
测定数据均以
±s表示。计量资料采用两样本均数t检验，方差不齐用秩和检验，率的比较用χ2检验，两变量直线相关用PERSON法，相关系数r值的显著性用P值表示。, 百拇医药
2 结果
两组血小板内〔Ca2+〕i浓度与血浆TxB2、6-keto-PGF1α、TxB2/6-keto-PGF1α比值变化比较见表1。
EH患者MAP与血小板内〔Ca2+〕i浓度，血浆TxB2/6-keto-PGF1α比值的关系见表2。
表1 两组血小板内〔Ca2+〕i浓度与血 浆TxB2、6-keto-PGF1α、TxB2/6-keto-PGF1α比值变化比较
±s 组别, http://www.100md.com
〔Ca2+〕i/(nmol*L-1)
TxB2/(ng.L-1)
6-keto-PGF1α/(ng.L-1)
TxB2/6-keto-P GF1α
正常对照
130.8±31.5
181. 7±45.8
25.7±6.3
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EH
201.1±68.21)
289.6±148.51)
19.2±8.31)
18.7±14.71)
1)与正常对照组比较，P<0.01表2 MAP与血小板内〔Ca2+〕i浓度及血浆TxB2/6-keto-PGF1α比值关系
〔Ca2+〕i相关系数
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MAP
相关系数
P值
相关系数
P值
〔Ca2+〕i
-
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0 .832 3
<0.01
TxB2
0.891 5
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0.847 1
<0.01
6-keto-PGF1α
-0.082 8
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TxB2/6-keto-PGF1α
0.565 1
<0.01
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0.809 5
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3 讨论
血管平滑肌细胞内Ca2+代谢异常可使其结构和功能发生改变进而导致外周血管阻力升高引起血压升高〔2，3〕。国外以血小板作为平滑肌的替代模型，研究发现EH患者血小板内游离Ca2+浓度显著升高〔4，5〕。本文结果与之相符，表明EH患者有钙代谢异常。
血管内皮细胞生成并释放的前列环素(PGI2)与血小板生成的血栓素A2(TxA2)相互拮抗，共同调节血管舒缩过程。本研究表明，EH患者TxA2代谢产物即TxB2水平较正常对照组显著升高，而PGI2代谢产物即6-keto-PGF1α水平显著下降，相应地TxB2/6-keto -PGF1α比值显著上升，支持国内外其他研究的结果〔6，7〕。提示循环血中PGI 2和TxA2之间的相对平衡可能是血压维持常态的重要生理基础。
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相关分析表明血小板内〔Ca2+〕i浓度与血浆TxB2水平及TxB2/6-keto-PGF1 α比值显著正相关。推测高血压时〔Ca2+〕i浓度的升高，激活血小板使其血栓素合成酶活性增强，TxA2合成与释放增加。而血小板内〔Ca2+〕i浓度与6-keto-PGF 1α水平相关不显著，提示高血压时钙代谢的异常可能更重要的是影响TxA2/PGI2这一 对平衡系统，进一步说明该系统失衡在EH病程中的病理生理作用。
本研究观察到MAP与血小板内〔Ca2+〕i浓度及血浆TxB2水平、TxB2/6-keto-PG F1 α比值显著正相关。由于MAP更主要的反映了外周血管阻力，说明细胞内钙代谢异常和TxA 2-PGI2平衡系统失衡可能主要影响外周血管阻力而使血压变化。■
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参考文献:
[1]谢良化，陈达光，邬大元，等.应用Fura-2测定血小板内游离钙浓 度.福建医学院学报，1991，25：167～168
[2]文允镒.钙调素与高血压关系的进展.中国高血压杂志，1994，7(Suppl):59～62
[3]Morgan K G. Role of calcium in maintenance of vascular smooth muscle tone.Am J Cardiol,1987,59:24A～24A
[4]Erne P, Bolli P,Burgisser E, et al. Relation of platelets calcium with blood pressure. N Engl Med,1984,310:1084～1085
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[5]Linder A, Kenny M, Mcacham A J. Effects of a circulating factor in patients w ith essential hypertension on intracellular free calcium in normal platelets. N Engl Med,1987,316:509～510
[6]杨国雄，张国忠，李保罗.血栓素A2和前列环素与自发性高血压大鼠血压发展的关系. 中国病理生理杂志，1991，3：237～239
[7]李碧林，刘正宏.TxB2，6-酮-PGF1α、血液流变与高血压的关系.中华神经精神病 科杂志，1990，13：174，167
收稿日期：1999-03-27, 百拇医药