P533、c-erb-B2、Bcl-2蛋白在肺癌中的表达及相互关系
作者：刘启才 韦拔雄 彭杰 李烈
单位：刘启才 彭杰 李烈(广州医学院实验医学研究中心)；韦拔雄(广州市职业病防治院)
关键词：肺癌；P53；c-erb-B2；Bcl-2
广州医学院学报000107提要 目的：检测P53、c-erb-B2、Bcl-2在原发性肺癌中的表达，探讨其表达的临床意义和相互之间的关系。方法：采用LSAB法检测99例原发性肺癌中三种癌蛋白的表达情况，并分析三者表达的相关性及与肺癌的临床因素的相关性。结果：99例原发性肺癌中有54例P53蛋白呈细胞核阳性表达(54.5%)；非小细胞肺癌中P53的表达在≥50岁组明显高于<50岁组(P<0.01)，且与Be1-2的表达相关(P<0.05)；c-erb-B2在肺腺癌中的表达显著高于鳞癌(P<0.005)和小细胞癌(P<0.005)；肺小细胞肺癌中Bcl-2的表达高于肺鳞癌(P<0.05)和肺腺癌(P<0.01)。结论：c-erb-B2、Bcl-2的表达与肺癌的组织学类型有关；P53的表达与年龄有关，而与性别、淋巴结的转移无关。
, 百拇医药
中图分类号 R734.2 文献标识码：A 文章编号：1008-1836(2000)01-0028-04
The Expressions of P53,c-erb-B2 and Bcl-2 Proteins in Primary Lung Cancer and the
Correlations among Them
Liu Qichai,Peng Jie
(Research Center of Experimental Medicine,Guangzhou Medical College,Guangzhou 510182)
Wei Baxiong
, 百拇医药
(Guangzhou Institute for Prevention and Treatment of Occupational Diseases)
Objective:To investigate the clinical significance of the expressions of P53，c-erb-B2 and Bcl-2 proteins and their mutual relationship in primary lung cancer. Methods:LSAB method was used to detect the expressions of the three oncoproteins in cancer specimens of 99 cases with primary lung cancer,and the correlations among them as well as that between the expressions and the clinical factors. Results:Nuclear location of P53 protein was found in 54 out of the 99 cases (54.5%). In non-small cell lung cancer the positive rate of P53 expression in the group with ages older than 50 years was higher than that in the group with ages younger than 50 years (P<0.01),and the expression of P53 was correlated with that of Bcl-2 (P<0.05). The expression of c-erb-B2 was significantly higher in adenocarcinoma than that in squamous lung cancer (P<0.005) and small cell lung cancer (P<0.005),and that of Bcl-2 in small cell lung cancer was obviously higher than in squamous lung cancer (P<0.05) and in adenous lung cancer (P<0.01). Conclusion:There seem to be some associations between the expressions of the three oncoproteins and the histopathological types of primary lung cancer;the expression of P53 protein is probably associated with patient′s age but not with sex or the situation of lymphonodi in lung cancer.
, 百拇医药
Key words Lung cancer;P53;c-erb-B2;Bcl-2
细胞原癌基因的激活和抑癌基因的缺失或失活等多基因的改变导致肺癌的发生[1]。抑瘤基因P53，由于突变而丧失了抑止细胞转变的能力及转录活性，而且P53还可通过介导细胞凋亡和使细胞停止在G1期等途径对肿瘤的发生产生影响[2]。c-erb-B2作为生长因子受体，参与细胞的生长代谢，调控细胞的增殖分化。同时Bcl-2、P53、c-erb-B2均涉及细胞的凋亡，由于三者致瘤机理上的相关性，我们分析三者在肺癌中的表达，探讨其表达的临床意义和相互之间的关系。1 材料与方法
1.1 标本来源 实验中99例原发性肺癌标本均选自广州医学院第一附属医院1994～1996年的外检蜡块，HE染色后观察，按WHO分类标准确定鳞癌有33例，腺癌有37例，小细胞癌有29例。
, http://www.100md.com
1.2 方法 石蜡块4μm切片，常规脱蜡水化，0.01M枸橼酸溶液中，微波450瓦5min×2，然后按DAKO公司提供的LSAB试剂盒说明书操作。P53、c-erb-B2、Bcl-2单抗的稀释度分别为1∶75，1∶125，1；40。
1.3 统计处理 所有数据经两两相关性检验。
2 结果
2.1 P53为胞核阳性(见图1)，其在鳞癌，腺癌，及小细胞癌中的表达无显著差异。c-erb-B2阳性物质主要定位于细胞膜(也有一部分位于细胞浆)(见图2)，其在腺癌中的表达显著高于鳞癌和小细胞癌(P<0.005),小细胞癌和非小细胞癌比较，两者之间也有显著性差异(P<0.005)。Bcl-2的阳性染色见于细胞浆(见图3)，其在小细胞癌中的表达率明显高于鳞癌及腺癌，三者之间的差异显著(P<0.05)，两两比较，小细胞癌与鳞癌(P<0.05)，小细胞癌与腺癌(P<0.01)，小细胞癌与非小细胞癌(P<0.05)都有显著性差异，具体表达情况见表1。
, 百拇医药
2.2 在非小细胞肺癌中，P53的表达与Bcl-2相关(P<0.05)，即P53阳性的标本Bcl-2呈阴性；而且P53在非小细胞中的表达与患者的年龄有关，即大于50岁的患者，P53呈阳性的可能性高于年龄小于50岁者。见表2。
表1 肺癌类型与P53、c-erb-B2及Bcl-2表达的关系 组织学类型
病例数
P53
c-erb-B2
Bcl-2
+
-
, 百拇医药
%
+
-
%
+
-
%
鳞癌
33
18
15
54.5
17
16
, 百拇医药
51.5
12
21
36.4
腺癌
37
21
16
56.8
29
8
78.4
10
, 百拇医药 27
27.0
小细胞癌
29
15
14
51.7
6
23
20.6
20
9
69
合计
, 百拇医药
99
54
54.5
52
52.5
42
42.4
表2 非小细胞肺癌中P53的表达与c-erb-B2、Bcl-2及临床因素的关系
P53(+)
P53(-)
c-erbB-2(+)
, 百拇医药
27
19
c-erbB-2(-)
12
12
NS
Bcl-2(+)
8
14
Bcl-2(-)
31
17
P<0.005
, http://www.100md.com
Age≥50
36
21
Age<50
3
10
P<0.001
Male
28
23
Female
11
8
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NS
Nodes(+)
18
14
注：“NS”无意义，“Nodes(+)”临床上发现有淋巴结转移病灶(无详细病理资料的病人未作统计)
2.3 非小细胞肺癌中P53的表达与生物及临床指标的关系
2.4 小细胞肺癌中，P53的表达与C-erb-B2及Bcl-2无关。3 讨论
3.1 P53在肺癌中的表达
P53蛋白的免疫组化是识别突变型P53的有效方法。实验结果证实P53在肺鳞癌，腺癌及小细胞未分化癌中的表达没有显著性差异。使用不同的技术方法，如免疫组化和SSCP-PCR，检测P53基因的改变，发现他们之间有很大的差异。对此有两种解释： 1.有些特殊的突变可导致P53免疫染色的缺失； 2.除了误义突变外，还存在其他一些P53蛋白聚集的机理[3，4]。关于P53的表达与预后的关系，目前没有定论。本实验只发现在非小细胞肺癌中P53的表达与临床因素的年龄有关，而与性别、淋巴结转移无关。分析P53的改变与预后的关系，结合免疫组化和检测P53基因改变的技术，结论才会更准确，可靠。
, 百拇医药
3.2 肺腺癌中C-erb-B2癌蛋白的高频率表达在肺癌中是一个非常常见表的现象。在其它肿瘤的腺癌中均有相似的表达，表明腺癌肿瘤细胞中有一个维持这种蛋白表达的选择性过程存在。大多数研究证实小细胞肺癌中没有C-erb-B2的表达[5]，而本实验29例小细胞肺癌中发现有6例呈C-erb-B2阳性，而且均为强阳性(阳性细胞数>50%)，说明C-erb-B2在小细胞肺癌中也起一定的作用，至于其在小细胞肺癌中表达的原因及意义目前还不清楚。
3.3 肺癌中Bcl-2的表达模式不同于正常支气管粘膜(基底细胞显示Bcl-2染色，但分化好的表浅细胞不显示)，表明在Bcl-2阳性的肿瘤中其均一性染色反映BCL-2表达的持续存在，并不因肿瘤细胞分化而被抑制。肺癌中Bcl-2异常表达的原因不清，Bcl-2过度表达最典型的原因-14；18易位，在肺癌中没有检出，也没有发现18号染色体的其它异常。有结果表明，转录后调节可能是Bcl-2表达的生理机制，如果是这样的话，控制mRNA翻译的改变可能会导致Bcl-2蛋白的聚集[6]。这些都有特于作进一步的探索。
, 百拇医药
3.4 实验中发现在非小细胞肺癌中Bcl-2的表达与有关。该结果与Bcl-2及P53的作用机理是一致的。Bcl-2和P53基因均涉及凋亡的基因控制，Bcl-2基因产物对促进细胞存活和抑制凋亡起作用，其活性受一个21KD的Bcl-2相关蛋白BAX来调节，BAX/Bcl-2的比值决定凋亡刺激因子作用后细胞存活与否[7]，而且Bcl-2能阻断依赖P53的凋亡。野生型P53也可指导细胞凋亡，由于突变导致P53功能的丢失将会削弱细胞对DNA损伤产生的反应，如细胞周期的停止和修复过程，进一步被放射线或化学治疗所诱导的凋亡途径也被放弃[8]。野生型P53促进细胞凋亡同样与BAX有关，P53基因能在转录上调控BAX和Bcl-2基因。在肺癌中，有关肺癌Bcl-2及P53与凋亡的具体关系正在我们的进一步研究之中。
作者简介：刘启才，男(1970.6-)，硕士，实习研究员。研究方向：肺癌与细胞凋亡。
, 百拇医药
参考文献
[1]Minna JD.The molecular biology of lung cancer pathogenesis[J]. Chest,1993;103:449～456
[2]Tormanen U,Eerola AK,Rainio P,et al.Enhanced apoptosis shortened in non- small cell lung carcinoma[J]. Cancer Res,1995;55(23):5596～5602
[3]Bennett WP,Colby TV,Travis Wd,et al.P53 protein accumulate frequently in early bronchial neoplasia[J]. Cancer Res,1993;53:4817～22
, 百拇医药
[4]Top B,Mooi WJ,Klaver SG,et al. Comparative analysis of pP53 gene mutations and protein accumulation in human lung cancer[J].Int J Cancer,1995;64:83～91
[5]Ben Ezra JM,Kornstein MJ,Grimes MM,et al. Small cell carcinoma of the lung express the bcl 2 protein[J]. Am J Pathol,1994;5:1036～40
[6]Reed JC.Regulation of bcl-2 pro-oncogene expression during normal human lymphocyte proliferation[J]. Science,1987;236:1295～9
, 百拇医药
[7]Willms GT,et al.Molecular regulation of apoptosis genetic control on cell death[J]. Cell,1993;74:777～79
[8]Schuler M,Rochlitz C.Horowitz JA,et al.A phase I study of adenovirus-mediated wild type P53 gene transfer in patients with advanced non-small cell lung cancer[J].Human Gene Ther,1998;9(14):2075～82
(收稿：1999-10-12), http://www.100md.com
单位：刘启才 彭杰 李烈(广州医学院实验医学研究中心)；韦拔雄(广州市职业病防治院)
关键词：肺癌；P53；c-erb-B2；Bcl-2
广州医学院学报000107提要 目的：检测P53、c-erb-B2、Bcl-2在原发性肺癌中的表达，探讨其表达的临床意义和相互之间的关系。方法：采用LSAB法检测99例原发性肺癌中三种癌蛋白的表达情况，并分析三者表达的相关性及与肺癌的临床因素的相关性。结果：99例原发性肺癌中有54例P53蛋白呈细胞核阳性表达(54.5%)；非小细胞肺癌中P53的表达在≥50岁组明显高于<50岁组(P<0.01)，且与Be1-2的表达相关(P<0.05)；c-erb-B2在肺腺癌中的表达显著高于鳞癌(P<0.005)和小细胞癌(P<0.005)；肺小细胞肺癌中Bcl-2的表达高于肺鳞癌(P<0.05)和肺腺癌(P<0.01)。结论：c-erb-B2、Bcl-2的表达与肺癌的组织学类型有关；P53的表达与年龄有关，而与性别、淋巴结的转移无关。
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中图分类号 R734.2 文献标识码：A 文章编号：1008-1836(2000)01-0028-04
The Expressions of P53,c-erb-B2 and Bcl-2 Proteins in Primary Lung Cancer and the
Correlations among Them
Liu Qichai,Peng Jie
(Research Center of Experimental Medicine,Guangzhou Medical College,Guangzhou 510182)
Wei Baxiong
, 百拇医药
(Guangzhou Institute for Prevention and Treatment of Occupational Diseases)
Objective:To investigate the clinical significance of the expressions of P53，c-erb-B2 and Bcl-2 proteins and their mutual relationship in primary lung cancer. Methods:LSAB method was used to detect the expressions of the three oncoproteins in cancer specimens of 99 cases with primary lung cancer,and the correlations among them as well as that between the expressions and the clinical factors. Results:Nuclear location of P53 protein was found in 54 out of the 99 cases (54.5%). In non-small cell lung cancer the positive rate of P53 expression in the group with ages older than 50 years was higher than that in the group with ages younger than 50 years (P<0.01),and the expression of P53 was correlated with that of Bcl-2 (P<0.05). The expression of c-erb-B2 was significantly higher in adenocarcinoma than that in squamous lung cancer (P<0.005) and small cell lung cancer (P<0.005),and that of Bcl-2 in small cell lung cancer was obviously higher than in squamous lung cancer (P<0.05) and in adenous lung cancer (P<0.01). Conclusion:There seem to be some associations between the expressions of the three oncoproteins and the histopathological types of primary lung cancer;the expression of P53 protein is probably associated with patient′s age but not with sex or the situation of lymphonodi in lung cancer.
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Key words Lung cancer;P53;c-erb-B2;Bcl-2
细胞原癌基因的激活和抑癌基因的缺失或失活等多基因的改变导致肺癌的发生[1]。抑瘤基因P53，由于突变而丧失了抑止细胞转变的能力及转录活性，而且P53还可通过介导细胞凋亡和使细胞停止在G1期等途径对肿瘤的发生产生影响[2]。c-erb-B2作为生长因子受体，参与细胞的生长代谢，调控细胞的增殖分化。同时Bcl-2、P53、c-erb-B2均涉及细胞的凋亡，由于三者致瘤机理上的相关性，我们分析三者在肺癌中的表达，探讨其表达的临床意义和相互之间的关系。1 材料与方法
1.1 标本来源 实验中99例原发性肺癌标本均选自广州医学院第一附属医院1994～1996年的外检蜡块，HE染色后观察，按WHO分类标准确定鳞癌有33例，腺癌有37例，小细胞癌有29例。
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1.2 方法 石蜡块4μm切片，常规脱蜡水化，0.01M枸橼酸溶液中，微波450瓦5min×2，然后按DAKO公司提供的LSAB试剂盒说明书操作。P53、c-erb-B2、Bcl-2单抗的稀释度分别为1∶75，1∶125，1；40。
1.3 统计处理 所有数据经两两相关性检验。
2 结果
2.1 P53为胞核阳性(见图1)，其在鳞癌，腺癌，及小细胞癌中的表达无显著差异。c-erb-B2阳性物质主要定位于细胞膜(也有一部分位于细胞浆)(见图2)，其在腺癌中的表达显著高于鳞癌和小细胞癌(P<0.005),小细胞癌和非小细胞癌比较，两者之间也有显著性差异(P<0.005)。Bcl-2的阳性染色见于细胞浆(见图3)，其在小细胞癌中的表达率明显高于鳞癌及腺癌，三者之间的差异显著(P<0.05)，两两比较，小细胞癌与鳞癌(P<0.05)，小细胞癌与腺癌(P<0.01)，小细胞癌与非小细胞癌(P<0.05)都有显著性差异，具体表达情况见表1。
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2.2 在非小细胞肺癌中，P53的表达与Bcl-2相关(P<0.05)，即P53阳性的标本Bcl-2呈阴性；而且P53在非小细胞中的表达与患者的年龄有关，即大于50岁的患者，P53呈阳性的可能性高于年龄小于50岁者。见表2。
表1 肺癌类型与P53、c-erb-B2及Bcl-2表达的关系 组织学类型
病例数
P53
c-erb-B2
Bcl-2
+
-
, 百拇医药
%
+
-
%
+
-
%
鳞癌
33
18
15
54.5
17
16
, 百拇医药
51.5
12
21
36.4
腺癌
37
21
16
56.8
29
8
78.4
10
, 百拇医药 27
27.0
小细胞癌
29
15
14
51.7
6
23
20.6
20
9
69
合计
, 百拇医药
99
54
54.5
52
52.5
42
42.4
表2 非小细胞肺癌中P53的表达与c-erb-B2、Bcl-2及临床因素的关系
P53(+)
P53(-)
c-erbB-2(+)
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27
19
c-erbB-2(-)
12
12
NS
Bcl-2(+)
8
14
Bcl-2(-)
31
17
P<0.005
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Age≥50
36
21
Age<50
3
10
P<0.001
Male
28
23
Female
11
8
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NS
Nodes(+)
18
14
注：“NS”无意义，“Nodes(+)”临床上发现有淋巴结转移病灶(无详细病理资料的病人未作统计)
2.3 非小细胞肺癌中P53的表达与生物及临床指标的关系
2.4 小细胞肺癌中，P53的表达与C-erb-B2及Bcl-2无关。3 讨论
3.1 P53在肺癌中的表达
P53蛋白的免疫组化是识别突变型P53的有效方法。实验结果证实P53在肺鳞癌，腺癌及小细胞未分化癌中的表达没有显著性差异。使用不同的技术方法，如免疫组化和SSCP-PCR，检测P53基因的改变，发现他们之间有很大的差异。对此有两种解释： 1.有些特殊的突变可导致P53免疫染色的缺失； 2.除了误义突变外，还存在其他一些P53蛋白聚集的机理[3，4]。关于P53的表达与预后的关系，目前没有定论。本实验只发现在非小细胞肺癌中P53的表达与临床因素的年龄有关，而与性别、淋巴结转移无关。分析P53的改变与预后的关系，结合免疫组化和检测P53基因改变的技术，结论才会更准确，可靠。
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3.2 肺腺癌中C-erb-B2癌蛋白的高频率表达在肺癌中是一个非常常见表的现象。在其它肿瘤的腺癌中均有相似的表达，表明腺癌肿瘤细胞中有一个维持这种蛋白表达的选择性过程存在。大多数研究证实小细胞肺癌中没有C-erb-B2的表达[5]，而本实验29例小细胞肺癌中发现有6例呈C-erb-B2阳性，而且均为强阳性(阳性细胞数>50%)，说明C-erb-B2在小细胞肺癌中也起一定的作用，至于其在小细胞肺癌中表达的原因及意义目前还不清楚。
3.3 肺癌中Bcl-2的表达模式不同于正常支气管粘膜(基底细胞显示Bcl-2染色，但分化好的表浅细胞不显示)，表明在Bcl-2阳性的肿瘤中其均一性染色反映BCL-2表达的持续存在，并不因肿瘤细胞分化而被抑制。肺癌中Bcl-2异常表达的原因不清，Bcl-2过度表达最典型的原因-14；18易位，在肺癌中没有检出，也没有发现18号染色体的其它异常。有结果表明，转录后调节可能是Bcl-2表达的生理机制，如果是这样的话，控制mRNA翻译的改变可能会导致Bcl-2蛋白的聚集[6]。这些都有特于作进一步的探索。
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3.4 实验中发现在非小细胞肺癌中Bcl-2的表达与有关。该结果与Bcl-2及P53的作用机理是一致的。Bcl-2和P53基因均涉及凋亡的基因控制，Bcl-2基因产物对促进细胞存活和抑制凋亡起作用，其活性受一个21KD的Bcl-2相关蛋白BAX来调节，BAX/Bcl-2的比值决定凋亡刺激因子作用后细胞存活与否[7]，而且Bcl-2能阻断依赖P53的凋亡。野生型P53也可指导细胞凋亡，由于突变导致P53功能的丢失将会削弱细胞对DNA损伤产生的反应，如细胞周期的停止和修复过程，进一步被放射线或化学治疗所诱导的凋亡途径也被放弃[8]。野生型P53促进细胞凋亡同样与BAX有关，P53基因能在转录上调控BAX和Bcl-2基因。在肺癌中，有关肺癌Bcl-2及P53与凋亡的具体关系正在我们的进一步研究之中。
作者简介：刘启才，男(1970.6-)，硕士，实习研究员。研究方向：肺癌与细胞凋亡。
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参考文献
[1]Minna JD.The molecular biology of lung cancer pathogenesis[J]. Chest,1993;103:449～456
[2]Tormanen U,Eerola AK,Rainio P,et al.Enhanced apoptosis shortened in non- small cell lung carcinoma[J]. Cancer Res,1995;55(23):5596～5602
[3]Bennett WP,Colby TV,Travis Wd,et al.P53 protein accumulate frequently in early bronchial neoplasia[J]. Cancer Res,1993;53:4817～22
, 百拇医药
[4]Top B,Mooi WJ,Klaver SG,et al. Comparative analysis of pP53 gene mutations and protein accumulation in human lung cancer[J].Int J Cancer,1995;64:83～91
[5]Ben Ezra JM,Kornstein MJ,Grimes MM,et al. Small cell carcinoma of the lung express the bcl 2 protein[J]. Am J Pathol,1994;5:1036～40
[6]Reed JC.Regulation of bcl-2 pro-oncogene expression during normal human lymphocyte proliferation[J]. Science,1987;236:1295～9
, 百拇医药
[7]Willms GT,et al.Molecular regulation of apoptosis genetic control on cell death[J]. Cell,1993;74:777～79
[8]Schuler M,Rochlitz C.Horowitz JA,et al.A phase I study of adenovirus-mediated wild type P53 gene transfer in patients with advanced non-small cell lung cancer[J].Human Gene Ther,1998;9(14):2075～82
(收稿：1999-10-12), http://www.100md.com