寻常型银屑病Somatostatin+ DC的免疫表达
作者：夏青 张学军
单位：夏青(安徽医科大学学报编辑部， 安徽 合肥 230032)；张学军(安徽医科大学学报编辑部， 安徽 合肥 230032)
关键词：树突状细胞；抗原递呈细胞；Somatostatin+ DC
疾病控制杂志000122
【摘 要】 目的 探讨表达生长抑素的树突状细胞(Somatostatin+ DC)在寻常型银屑病中的免疫表达。方法 采用SABC免疫组化方法对2例正常人头皮、1例正常人上肢皮肤和银屑病皮损及自身非皮损部位各6例皮肤进行研究，了解Somatostatin+ DC的分布及其复合表达情况。结果 6例银屑病皮损真皮中可见明显增多的Somatostatin+ DC，数量为每毫米16～52细胞，比正常皮肤和自身非皮损皮肤明显增多。连续切片染色结果显示这种细胞不表达CD1a、S-100，部分表达HLA-DR。结论 Somatostatin+ DC与银屑病的发生和演变密切相关，由于Somatostatin+ DC不表达CD1a，因此可能是DC的一个亚型，提示神经-分泌-皮肤免疫可能存在双向调节机制。
, 百拇医药
【分类号】 R75； R392.3 【文献标识码】 A
【文章编号】 1008-6013(2000)01-0058-02
Study on expression of Somatostatin+ DC in psoriasis vulgaris
XIA Qing ZHANG Xue-jun
(Anhui Medical University, Hefei 230032, China)
【Abstract】 Objective To explore the immunol expression of Somatostatin+ DC in psoriasis vulgaris. Methods We studied on 2 cases of scalp, 1 case of upper arm and 6 cases of the injured area、 non-injured area respectively in psoriasis vulgar is to understand the distribution and coexpression of Somatostatin+ DC. Results The number of Somatostatin+ DCs in the injured area of 6 cases with psoriasis vulgaris more than that of normal skin, and the non-injured area was 16～52 cells per mm. The results showed that it didnt coexpress CD1a、S-100 except HLA-DR by the continue staining method. Conclusions Somatostatin+ DC in psoriasis vulgaris has proved the relationship between Somatostatin+ DC and psoriasis vulgaris. Because Somatostatin+ DC did not express CD1a, it might be a subgroug of DC. There was two-way regulating mechanism in neuron, secretion and cutaneous immunology.
, 百拇医药
【Key words】 dendritic cell; antigen presenting cell; Somatostatin+ DC
近年来文献表明皮肤中存在许多不同亚型的树突状细胞(Dendritic cell, DC)，它们具有不同程度的抗原递呈能力，是皮肤中重要的抗原递呈细胞(Antigen presenting cell, APC)。 Johanson等[1]报道在正常人真皮中可见生长抑素+树突状细胞(Somatostatin+ DC)，在银屑病真皮中Somatostatin+ DC明显增多，这种细胞具有独特的免疫特点，是皮肤中DC的亚型之一。我们对正常人和异常型银屑病人的皮肤进行了研究，证实了Somatostatin+ DC的存在，现报道如下。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 材料 2例正常头皮和1例正常人上肢皮肤取自安徽医科大学第一附属医院整形外科手术切除皮肤，均无炎症、肿瘤等皮肤症状；银屑病皮肤和自身非皮损部位各6例皮肤取自安徽医科大学第一附属医院皮肤科门诊病人，用无菌环形皮钻取皮；所有标本离体30 min内行OCT包埋，-20℃以下冷冻保存。年龄：正常人分别为17、26、31岁；银屑病人6例年龄25～52岁，平均38.5岁，均为上肢皮肤。银屑病诊断：参见人民卫生出版社出版《皮肤科学》第3版教材标准。SABC免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物公司，CD1a鼠单抗为Pharmingen公司产品，Somatostatin兔单抗为Zymed laboratories, INC产品，S-100鼠单抗为Sigma化学公司产品，HLA-DR鼠单抗为Maxim Biotech, INC产品。
1.2 方法 用LEICA CM 1100型冰冻切片机切片，切片厚4 μm，连续切片，平均每例切片12张，风干后在纯丙酮+H2O2液(浓度为0.5%)中室温下固定30 min后，进行检测或风干冷冻保存备用。一抗Somatostatin、CD1a、HLA-DR、S-100分别为：1∶50、1∶50、1∶100、1∶150。染色程序严格按照SABC试剂盒说明。部分AEC染色的标本经苏木精复染，经水溶性封片剂封片观察，阳性对照，以TBS代替一抗[2]。
, 百拇医药
1.3 阳性判断标准 SABC-AP经BCIP/NBT显色呈蓝色即为阳性细胞，SABC-POD经AEC显色呈红色即为阳性细胞，以上染色方法中阴性对照组无显色及背景无显色为特异性阳性必需条件。
1.4 组织定量方法 采用测试网格(10×10)，在高倍(×400)视野下对免疫组化阳性细胞进行计数，随机选取5个以上不重复无重叠的视野，测定每毫米真、表皮细胞数。
2 结果
在2例正常人头皮和1例前臂皮肤中可见染色阳性的Somatostatin+ DC，这种细胞主要集中在真皮乳头和网状层中，每毫米真皮为4～16个细胞，细胞形态不规则，具有多个突起，表皮中较少见[2]。而在6例银屑病皮损真皮中可见明显增多的Somatostatin+ DC(见图1)，数量为每毫米16～52个(见表1)，比正常皮肤和自身非皮损皮肤明显增多。连续切片染色结果表明这种细胞不表达CD1a、S-100，部分复合表达HLA-DR。
, 百拇医药
图1 银屑病皮损区Somatostatin+ DC的分布(AEC×100)
Figure 1 Distribution of somatostatin+ DC in the
injured area in psoriasis vulgaris
表1 正常人和银屑病皮损真皮Somatostatin+ DC的分布(
±s)
Table 1 Distribution of dermal somatostatin+ DC
in psoriasis vulgaris (±s) Item
, http://www.100md.com
n
Position
Field of
vision
Somatostatin+ DC
Normal skin
2
Scalp
10
12±4
1
Upper arm
, 百拇医药
5
7±3
Psoriasis vulgaris
Non-injured area
6
Upper arm
30
13±5
Injured area
6
Upper arm
30
, 百拇医药
34±18**
**P<0.01 Compared with normal skin and self non-injured skin3 讨论
Somatostatin属于神经肽类中激素类物质，多位于表皮下、真皮层、游离神经末梢等处，它可以促进神经肽P物质(SP)释放，后者直接作用于靶器官或刺激肥大细胞释放组胺而引起生物学效应。Eedy等[3]用放免法发现银屑病病人皮损中Somatostatin和SP明显高于非皮损区及正常人。这些神经肽可能通过与能表达这种激素的受体的细胞相结合，从而调节免疫反应，而DC中可能表达神经肽受体。神经肽类物质不仅仅由神经轴突释放，还可能由一些DC合成分泌，Talme等[4]报道正常人真皮中可见Somatostatin+ DC，这类细胞可能分泌神经肽而可以作用于神经免疫系统。因此，神经-分泌-皮肤免疫可能是一种双向调节机制。我们通过免疫组化法研究发现在表皮中可少量存在而主要分布于真皮的Somatostatin+ DC，银屑病皮损真皮中具有明显增多的Somatostatin+ DC。与正常皮肤、自身非皮损处相比差异有显著性(P<0.01)。从而提示存在双向调节机制。连续切片染色表明Somatostatin+ DC不表达CD1a和S-100，部分复合表达HLA-DR；由于Somatostatin+ DC不表达CD1a、FXⅢa和S-100，不同于真皮树突状细胞[5]，因此Somatostatin+ DC可能是DC的一个亚型。我们将继续对这种细胞的免疫特点进行深入研究。
, http://www.100md.com
【基金项目】 安徽省教委科研基金资助项目(99j10122)
【作者简介】 夏青(1968-)，男，医学编辑，硕士
张学军(1955-)，男，教授，博士，《安徽医科大学学报》常务副主编，中华皮肤科学会委员，国际皮肤科学会会员委员会委员；主要研究方向：皮肤免疫学。
【参考文献】
[1]Johanson O, Hilliges M, Talme T， et al. Somatostatin immunoreactive cells in psoriatic human skin during peptide T treatment [J]. Acta Derm Venereol, 1994，74(5):106～109.
[2]夏 青，张学军.正常皮肤CD1a+ DC、Somatostatin+ DC的免疫表达研究 [J].安徽医科大学学报，1999，34(6)：419～421.
, 百拇医药
[3]Eedy DJ. Neuropeptides in skin [J]. Br J Dermatol, 1993，128:597～605.
[4]Talme T, Schultzberg M, Sundqvist KG， et al. Colocalization of somatostatin and HLA-DR-like immunoreactivity in dendritic cells of psoriatic skin (see comments) [J]. Acta Derm Venereol, 1997，77(55):42～338.
[5]Grassi F, Dezutter DC, Mcllroy D， et al. Monocyte-derived dendritic cells have a phenotype comparable to that of dermal dendritic cells and display ultrastructural granules distinct from birbeck granules [J]. J Leukoc Biol, 1998，64(4):93～484.
(收稿日期 1999-12-31), http://www.100md.com
单位：夏青(安徽医科大学学报编辑部， 安徽 合肥 230032)；张学军(安徽医科大学学报编辑部， 安徽 合肥 230032)
关键词：树突状细胞；抗原递呈细胞；Somatostatin+ DC
疾病控制杂志000122
【摘 要】 目的 探讨表达生长抑素的树突状细胞(Somatostatin+ DC)在寻常型银屑病中的免疫表达。方法 采用SABC免疫组化方法对2例正常人头皮、1例正常人上肢皮肤和银屑病皮损及自身非皮损部位各6例皮肤进行研究，了解Somatostatin+ DC的分布及其复合表达情况。结果 6例银屑病皮损真皮中可见明显增多的Somatostatin+ DC，数量为每毫米16～52细胞，比正常皮肤和自身非皮损皮肤明显增多。连续切片染色结果显示这种细胞不表达CD1a、S-100，部分表达HLA-DR。结论 Somatostatin+ DC与银屑病的发生和演变密切相关，由于Somatostatin+ DC不表达CD1a，因此可能是DC的一个亚型，提示神经-分泌-皮肤免疫可能存在双向调节机制。
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【分类号】 R75； R392.3 【文献标识码】 A
【文章编号】 1008-6013(2000)01-0058-02
Study on expression of Somatostatin+ DC in psoriasis vulgaris
XIA Qing ZHANG Xue-jun
(Anhui Medical University, Hefei 230032, China)
【Abstract】 Objective To explore the immunol expression of Somatostatin+ DC in psoriasis vulgaris. Methods We studied on 2 cases of scalp, 1 case of upper arm and 6 cases of the injured area、 non-injured area respectively in psoriasis vulgar is to understand the distribution and coexpression of Somatostatin+ DC. Results The number of Somatostatin+ DCs in the injured area of 6 cases with psoriasis vulgaris more than that of normal skin, and the non-injured area was 16～52 cells per mm. The results showed that it didnt coexpress CD1a、S-100 except HLA-DR by the continue staining method. Conclusions Somatostatin+ DC in psoriasis vulgaris has proved the relationship between Somatostatin+ DC and psoriasis vulgaris. Because Somatostatin+ DC did not express CD1a, it might be a subgroug of DC. There was two-way regulating mechanism in neuron, secretion and cutaneous immunology.
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【Key words】 dendritic cell; antigen presenting cell; Somatostatin+ DC
近年来文献表明皮肤中存在许多不同亚型的树突状细胞(Dendritic cell, DC)，它们具有不同程度的抗原递呈能力，是皮肤中重要的抗原递呈细胞(Antigen presenting cell, APC)。 Johanson等[1]报道在正常人真皮中可见生长抑素+树突状细胞(Somatostatin+ DC)，在银屑病真皮中Somatostatin+ DC明显增多，这种细胞具有独特的免疫特点，是皮肤中DC的亚型之一。我们对正常人和异常型银屑病人的皮肤进行了研究，证实了Somatostatin+ DC的存在，现报道如下。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 材料 2例正常头皮和1例正常人上肢皮肤取自安徽医科大学第一附属医院整形外科手术切除皮肤，均无炎症、肿瘤等皮肤症状；银屑病皮肤和自身非皮损部位各6例皮肤取自安徽医科大学第一附属医院皮肤科门诊病人，用无菌环形皮钻取皮；所有标本离体30 min内行OCT包埋，-20℃以下冷冻保存。年龄：正常人分别为17、26、31岁；银屑病人6例年龄25～52岁，平均38.5岁，均为上肢皮肤。银屑病诊断：参见人民卫生出版社出版《皮肤科学》第3版教材标准。SABC免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物公司，CD1a鼠单抗为Pharmingen公司产品，Somatostatin兔单抗为Zymed laboratories, INC产品，S-100鼠单抗为Sigma化学公司产品，HLA-DR鼠单抗为Maxim Biotech, INC产品。
1.2 方法 用LEICA CM 1100型冰冻切片机切片，切片厚4 μm，连续切片，平均每例切片12张，风干后在纯丙酮+H2O2液(浓度为0.5%)中室温下固定30 min后，进行检测或风干冷冻保存备用。一抗Somatostatin、CD1a、HLA-DR、S-100分别为：1∶50、1∶50、1∶100、1∶150。染色程序严格按照SABC试剂盒说明。部分AEC染色的标本经苏木精复染，经水溶性封片剂封片观察，阳性对照，以TBS代替一抗[2]。
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1.3 阳性判断标准 SABC-AP经BCIP/NBT显色呈蓝色即为阳性细胞，SABC-POD经AEC显色呈红色即为阳性细胞，以上染色方法中阴性对照组无显色及背景无显色为特异性阳性必需条件。
1.4 组织定量方法 采用测试网格(10×10)，在高倍(×400)视野下对免疫组化阳性细胞进行计数，随机选取5个以上不重复无重叠的视野，测定每毫米真、表皮细胞数。
2 结果
在2例正常人头皮和1例前臂皮肤中可见染色阳性的Somatostatin+ DC，这种细胞主要集中在真皮乳头和网状层中，每毫米真皮为4～16个细胞，细胞形态不规则，具有多个突起，表皮中较少见[2]。而在6例银屑病皮损真皮中可见明显增多的Somatostatin+ DC(见图1)，数量为每毫米16～52个(见表1)，比正常皮肤和自身非皮损皮肤明显增多。连续切片染色结果表明这种细胞不表达CD1a、S-100，部分复合表达HLA-DR。
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图1 银屑病皮损区Somatostatin+ DC的分布(AEC×100)
Figure 1 Distribution of somatostatin+ DC in the
injured area in psoriasis vulgaris
表1 正常人和银屑病皮损真皮Somatostatin+ DC的分布(
±s)Table 1 Distribution of dermal somatostatin+ DC
in psoriasis vulgaris (
±s) Item, http://www.100md.com
n
Position
Field of
vision
Somatostatin+ DC
Normal skin
2
Scalp
10
12±4
1
Upper arm
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5
7±3
Psoriasis vulgaris
Non-injured area
6
Upper arm
30
13±5
Injured area
6
Upper arm
30
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34±18**
**P<0.01 Compared with normal skin and self non-injured skin3 讨论
Somatostatin属于神经肽类中激素类物质，多位于表皮下、真皮层、游离神经末梢等处，它可以促进神经肽P物质(SP)释放，后者直接作用于靶器官或刺激肥大细胞释放组胺而引起生物学效应。Eedy等[3]用放免法发现银屑病病人皮损中Somatostatin和SP明显高于非皮损区及正常人。这些神经肽可能通过与能表达这种激素的受体的细胞相结合，从而调节免疫反应，而DC中可能表达神经肽受体。神经肽类物质不仅仅由神经轴突释放，还可能由一些DC合成分泌，Talme等[4]报道正常人真皮中可见Somatostatin+ DC，这类细胞可能分泌神经肽而可以作用于神经免疫系统。因此，神经-分泌-皮肤免疫可能是一种双向调节机制。我们通过免疫组化法研究发现在表皮中可少量存在而主要分布于真皮的Somatostatin+ DC，银屑病皮损真皮中具有明显增多的Somatostatin+ DC。与正常皮肤、自身非皮损处相比差异有显著性(P<0.01)。从而提示存在双向调节机制。连续切片染色表明Somatostatin+ DC不表达CD1a和S-100，部分复合表达HLA-DR；由于Somatostatin+ DC不表达CD1a、FXⅢa和S-100，不同于真皮树突状细胞[5]，因此Somatostatin+ DC可能是DC的一个亚型。我们将继续对这种细胞的免疫特点进行深入研究。
, http://www.100md.com
【基金项目】 安徽省教委科研基金资助项目(99j10122)
【作者简介】 夏青(1968-)，男，医学编辑，硕士
张学军(1955-)，男，教授，博士，《安徽医科大学学报》常务副主编，中华皮肤科学会委员，国际皮肤科学会会员委员会委员；主要研究方向：皮肤免疫学。
【参考文献】
[1]Johanson O, Hilliges M, Talme T， et al. Somatostatin immunoreactive cells in psoriatic human skin during peptide T treatment [J]. Acta Derm Venereol, 1994，74(5):106～109.
[2]夏 青，张学军.正常皮肤CD1a+ DC、Somatostatin+ DC的免疫表达研究 [J].安徽医科大学学报，1999，34(6)：419～421.
, 百拇医药
[3]Eedy DJ. Neuropeptides in skin [J]. Br J Dermatol, 1993，128:597～605.
[4]Talme T, Schultzberg M, Sundqvist KG， et al. Colocalization of somatostatin and HLA-DR-like immunoreactivity in dendritic cells of psoriatic skin (see comments) [J]. Acta Derm Venereol, 1997，77(55):42～338.
[5]Grassi F, Dezutter DC, Mcllroy D， et al. Monocyte-derived dendritic cells have a phenotype comparable to that of dermal dendritic cells and display ultrastructural granules distinct from birbeck granules [J]. J Leukoc Biol, 1998，64(4):93～484.
(收稿日期 1999-12-31), http://www.100md.com