比值光谱一阶导数法测定盐酸普鲁卡因注射液含量
作者：孙增先 张骞峰 王奎兴 李永溟 李恭润
单位：孙增先(江苏省连云港市第一人民医院，连云港 222002); 张骞峰(江苏省连云港市第一人民医院，连云港 222002); 王奎兴(江苏省连云港市第一人民医院，连云港 222002); 李永溟(江苏省连云港市第一人民医院，连云港 222002); 李恭润(江苏省连云港市第一人民医院，连云港 222002)
关键词：比值光谱一阶导数；盐酸普鲁卡因；对氨基苯甲酸
沈阳药科大学学报000115 摘 要：应用比值光谱一阶导数法测定盐酸普鲁卡因注射液含量，依据盐酸普鲁卡因比值导数光谱选择221 nm和231 nm作为测定波长，比值光谱一阶导数值与浓度(5～30 μg/mL)线性关系良好，能有效消除其降解产物对氨基苯甲酸的干扰，结果与药典方法比较没有显著差异(P>0.05).
, 百拇医药 分类号：R927.2
Determination of Procaine Hydrochloride Injection by the First Derivative Ratio Spectrometry
Sun Zengxian,Zhang Qianfeng,Wang Kuixing,Li Yongmin,Li Gongrun
(No.1 Hospital of Lianyungang,Lianyungang 222002)
Abstract：The first derivative ratio spectrometry was used for the determination of the procaine hydrochloride injection.According to the first derivative ratio spectrum of the procaine hydrochloride,the peak-valley method was applied for the determination at 221 and 231 nm.There was a good linear correlation between the first derivative ratio spectrum value and concentration(5～30 μg.mL-1) for the method that could eliminate the disturbance of its decomposition to para -aminobenzoic acid,and there are no differences while comparing the method with the Pharmacopeia method(P>0.05).
, 百拇医药
Key words：first derivative ratio spectrum; procaine hydrochloride;para-aminobenzoic acid▲
盐酸普鲁卡因注射液是临床常用的局麻药.《中华人民共和国药典》〔1〕采用亚硝酸钠滴定法测定盐酸普鲁卡因(PCHC)含量，但不能消除其降解产物对氨基苯甲酸(PABA)的干扰.有文献〔2～4〕采用系数倍率法、导数法、吸收度线性组合法等方法测定PCHC含量，消除PABA干扰.本文用比值光谱一阶导数法〔5～7〕测定其含量，能有效消除PABA的干扰.
1 仪器与试剂
岛津UV-260型紫外可见分光光度计；752-C型紫外可见分光光度计.PCHC符合《中华人民共和国药典》1995年版规定；PABA由中国药品生物制品检定所提供.盐酸普鲁卡因注射液为市售.其他试剂均为分析纯.
, http://www.100md.com
2 方法与结果
2.1 标准储备液的配制
精密称取在105℃干燥至恒重的PCHC和PABA各50 mg，分置100 mL量瓶中，各加适量pH 6.5磷酸盐缓冲液(BP)溶解并稀释至刻度，摇匀.
2.2 比值光谱一阶导数图的绘制及测定波长选择
分别精密吸取PCHC和PABA标准储备液适量，分置100 mL量瓶中，用BP稀释至刻度并摇匀；以BP作参比，在200～350nm波长范围内扫描，得到PCHC和PABA的吸收光谱，见图1.并每隔2 nm记录吸收度A，计算波长λ处PCHC吸收度对PABA吸收度的比值R，以及相邻波长处的吸收度比值之差ΔR与Δλ的比值D，以D对λ作图，得到PCHC的比值光谱一阶导数图；同样，也可以得到PABA的比值光谱一阶导数图(见图2).由图2可见，PCHC在221 nm处有峰值，231 nm处有谷值，故选择221 nm和231 nm作为PCHC的测定波长.
, 百拇医药
Fig.1 Absorption spectra of PCHC and PABA
Fig.2 First derivative of the ratio spectra
2.3 标准曲线的绘制
精密吸取PABA标准储备液适量，置100 mL量瓶中，用BP稀释至刻度并摇匀，作标准参比溶液(3.0 μg/mL).分别在220、222、230、232 nm处测定吸收度.
分别精密吸取PCHC标准储备液适量，分别用BP稀释至一定浓度，得到PCHC的系列标准溶液，分别在220、222、230和232 nm处测定吸收度，计算ΔD，以浓度C对ΔD作线性回归分析，得回归方程，见表1.
, 百拇医药
2.4 回收试验
精密吸取PCHC和PABA标准储备液适量，按处方比例加入氯化钠，用BP稀释成含不同浓度的PCHC、PABA和含氯化钠均为6.25 μg/mL的溶液，按上法测定，计算PCHC含量，结果见表2.
Tab.1 Linear relationship Standard reference
solution(PABA)/3 μg.mL-1
A220
0.147 0
A220
0.120 0
, http://www.100md.com
A232
0.064 0
A232
0.064 0
Standard solution
(PCHC)/μg.mL-1
5.01
10.10
14.95
20.00
25.05
, 百拇医药
29.90
A220
0.165 0
0.311 0
0.465 0
0.621 5
0.763 0
0.903 0
A222
0.162 0
0.311 0
0.465 0
, 百拇医药
0.621 5
0.763 0
0.903 0
A230
0.102 0
0.196 0
0.290 0
0.385 5
0.470 0
0.563 0
A232
0.081 0
, http://www.100md.com
0.155 0
0.231 0
0.306 0
0.375 0
0.448 0
R220
1.122 5
2.115 7
3.163 3
4.227 9
5.190 5
6.142 9
, 百拇医药
R222
1.350 0
2.591 7
3.875 0
5.179 2
6.358 3
7.525 0
R230
1.593 8
3.062 5
4.531 3
6.023 4
, http://www.100md.com
7.343 8
8.796 9
R232
1.265 6
2.421 9
3.609 4
4.781 3
5.859 4
7.000 0
ΔR21
0.227 5
0.476 0
, 百拇医药
0.711 7
0.951 3
1.167 8
1.382 1
ΔR231
-0.328 2
0.640 6
-0.921 9
-1.242 1
-1.484 4
-1.796 9
ΔD
, http://www.100md.com
0.555 7
1.116 7
1.633 6
2.193 4
2.652 2
3.179 0
Regression equation
ΔD=0.104 9.C+0.053 2
r=0.999 6
Tab.2 The recovery test No
PABA added/
, 百拇医药
μg.mL-1
PCHC added/
μg.mL-1
PCHC found/
μg.mL-1
PCHC recovery /
%
Mean/
%
RSD/
%
, http://www.100md.com
1
0.80
20.00
20.28
101.40
2
0.50
22.62
22.77
100.66
3
0.30
25.05
, http://www.100md.com
24.98
99.72
100.20
0.84
4
0.25
27.47
27.27
99.27
5
0.00
29.90
29.89
, http://www.100md.com
99.97
2.5 样品测定
精密吸取样品2.5 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度并摇匀；精密吸取上清液2.5 mL，置50 mL量瓶中，用BP稀释至刻度并摇匀(约含PCHC 25 μg/mL).在220、222、230和232 nm处测吸收度，计算PCHC含量.并与药典法(1995版)比较，结果见表3.
3 讨论
从图2可以发现，PABA有较大的比值光谱一阶导数峰谷差，可用于PABA定量分析，经我们实验表明，PABA在高浓度时(1～16 μg/mL)线性关系很好；在低浓度时(小于1 μg.mL)线性较差，变异也大，不适合用于盐酸普鲁卡因注射液中PABA的含量测定.
Tab.3 Determination of the samples No
, 百拇医药
PCHC found/mg
First derivative
ratio spectrum method
Chinese Pharmacopoeia
method
1
38.37
38.00
2
38.08
38.06
3
, 百拇医药
37.97
37.98
4
38.70
38.79
Average
stated
amount/%
95.70±0.82
95.52±0.98
40mg PCHC in each ampoule(2mL);P>0.05(t test)
, 百拇医药 介质的选择对PCHC测定有较大影响，因PCHC易受pH影响而水解，本文选择pH 6.5磷酸盐缓冲液作为测定介质，一方面是为了增加PCHC的稳定性；一方面可消除PABA吸收峰移值.关润华〔4〕报道PABA在水溶液中吸收峰随浓度增大而长移，而在pH 6.5的磷酸盐缓冲液中吸收峰的位置不受浓度影响，并能提高测定的重现性和准确性.■
参考文献：
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典：二部.北京：化学工业出版社，1995.713
[2]孙金平，季瑛.倍增差示双波长分光光度法测定盐酸普鲁卡因注射液的含量.现代应用药学杂志，1992，9(5)：231～232
[3]李毅然，李敬涵.一阶导数光谱法测定盐酸普鲁卡因注射液的含量.中国医院药学杂志，1987，7(11)：502～503
, 百拇医药
[4]关润华.吸收度线性组合分光光度法测定盐酸普鲁卡因注射液含量.中国医院药学杂志，1991，11(4)：170～172
[5]Salinas F,Berzas Nevado JJ, Espinosa Mansilla A.A new spectrophotometric method for quantitative multicomponent analysis resolution of mixtures of salicylic and salicyluric acids.Talanta,1990，37(3)：347～351
[6]Berzas Nevado JJ,Guiberteau Cabanillas C,Salinas F.Spectrophotometric resolution of ternary mixtures of salicylaldehyde,3-hydroxybenzaldehyde and 4-hydroxybenzaldehyde by the derivative ratio spectrum-zero crossing method.Talanta,1992，39(5)：547～553
[7]Morelli B.Simultaneous determination of ceftriaxone and streptomycin in mixture by “ratio-spectra” 2nd derivative and “zero-crossing” 3rd derivative spectrophotometry.Talanta，1994，41(5)：673～683
收稿日期：1999-05-17, http://www.100md.com
单位：孙增先(江苏省连云港市第一人民医院，连云港 222002); 张骞峰(江苏省连云港市第一人民医院，连云港 222002); 王奎兴(江苏省连云港市第一人民医院，连云港 222002); 李永溟(江苏省连云港市第一人民医院，连云港 222002); 李恭润(江苏省连云港市第一人民医院，连云港 222002)
关键词：比值光谱一阶导数；盐酸普鲁卡因；对氨基苯甲酸
沈阳药科大学学报000115 摘 要：应用比值光谱一阶导数法测定盐酸普鲁卡因注射液含量，依据盐酸普鲁卡因比值导数光谱选择221 nm和231 nm作为测定波长，比值光谱一阶导数值与浓度(5～30 μg/mL)线性关系良好，能有效消除其降解产物对氨基苯甲酸的干扰，结果与药典方法比较没有显著差异(P>0.05).
, 百拇医药 分类号：R927.2
Determination of Procaine Hydrochloride Injection by the First Derivative Ratio Spectrometry
Sun Zengxian,Zhang Qianfeng,Wang Kuixing,Li Yongmin,Li Gongrun
(No.1 Hospital of Lianyungang,Lianyungang 222002)
Abstract：The first derivative ratio spectrometry was used for the determination of the procaine hydrochloride injection.According to the first derivative ratio spectrum of the procaine hydrochloride,the peak-valley method was applied for the determination at 221 and 231 nm.There was a good linear correlation between the first derivative ratio spectrum value and concentration(5～30 μg.mL-1) for the method that could eliminate the disturbance of its decomposition to para -aminobenzoic acid,and there are no differences while comparing the method with the Pharmacopeia method(P>0.05).
, 百拇医药
Key words：first derivative ratio spectrum; procaine hydrochloride;para-aminobenzoic acid▲
盐酸普鲁卡因注射液是临床常用的局麻药.《中华人民共和国药典》〔1〕采用亚硝酸钠滴定法测定盐酸普鲁卡因(PCHC)含量，但不能消除其降解产物对氨基苯甲酸(PABA)的干扰.有文献〔2～4〕采用系数倍率法、导数法、吸收度线性组合法等方法测定PCHC含量，消除PABA干扰.本文用比值光谱一阶导数法〔5～7〕测定其含量，能有效消除PABA的干扰.
1 仪器与试剂
岛津UV-260型紫外可见分光光度计；752-C型紫外可见分光光度计.PCHC符合《中华人民共和国药典》1995年版规定；PABA由中国药品生物制品检定所提供.盐酸普鲁卡因注射液为市售.其他试剂均为分析纯.
, http://www.100md.com
2 方法与结果
2.1 标准储备液的配制
精密称取在105℃干燥至恒重的PCHC和PABA各50 mg，分置100 mL量瓶中，各加适量pH 6.5磷酸盐缓冲液(BP)溶解并稀释至刻度，摇匀.
2.2 比值光谱一阶导数图的绘制及测定波长选择
分别精密吸取PCHC和PABA标准储备液适量，分置100 mL量瓶中，用BP稀释至刻度并摇匀；以BP作参比，在200～350nm波长范围内扫描，得到PCHC和PABA的吸收光谱，见图1.并每隔2 nm记录吸收度A，计算波长λ处PCHC吸收度对PABA吸收度的比值R，以及相邻波长处的吸收度比值之差ΔR与Δλ的比值D，以D对λ作图，得到PCHC的比值光谱一阶导数图；同样，也可以得到PABA的比值光谱一阶导数图(见图2).由图2可见，PCHC在221 nm处有峰值，231 nm处有谷值，故选择221 nm和231 nm作为PCHC的测定波长.
, 百拇医药
Fig.1 Absorption spectra of PCHC and PABA
Fig.2 First derivative of the ratio spectra
2.3 标准曲线的绘制
精密吸取PABA标准储备液适量，置100 mL量瓶中，用BP稀释至刻度并摇匀，作标准参比溶液(3.0 μg/mL).分别在220、222、230、232 nm处测定吸收度.
分别精密吸取PCHC标准储备液适量，分别用BP稀释至一定浓度，得到PCHC的系列标准溶液，分别在220、222、230和232 nm处测定吸收度，计算ΔD，以浓度C对ΔD作线性回归分析，得回归方程，见表1.
, 百拇医药
2.4 回收试验
精密吸取PCHC和PABA标准储备液适量，按处方比例加入氯化钠，用BP稀释成含不同浓度的PCHC、PABA和含氯化钠均为6.25 μg/mL的溶液，按上法测定，计算PCHC含量，结果见表2.
Tab.1 Linear relationship Standard reference
solution(PABA)/3 μg.mL-1
A220
0.147 0
A220
0.120 0
, http://www.100md.com
A232
0.064 0
A232
0.064 0
Standard solution
(PCHC)/μg.mL-1
5.01
10.10
14.95
20.00
25.05
, 百拇医药
29.90
A220
0.165 0
0.311 0
0.465 0
0.621 5
0.763 0
0.903 0
A222
0.162 0
0.311 0
0.465 0
, 百拇医药
0.621 5
0.763 0
0.903 0
A230
0.102 0
0.196 0
0.290 0
0.385 5
0.470 0
0.563 0
A232
0.081 0
, http://www.100md.com
0.155 0
0.231 0
0.306 0
0.375 0
0.448 0
R220
1.122 5
2.115 7
3.163 3
4.227 9
5.190 5
6.142 9
, 百拇医药
R222
1.350 0
2.591 7
3.875 0
5.179 2
6.358 3
7.525 0
R230
1.593 8
3.062 5
4.531 3
6.023 4
, http://www.100md.com
7.343 8
8.796 9
R232
1.265 6
2.421 9
3.609 4
4.781 3
5.859 4
7.000 0
ΔR21
0.227 5
0.476 0
, 百拇医药
0.711 7
0.951 3
1.167 8
1.382 1
ΔR231
-0.328 2
0.640 6
-0.921 9
-1.242 1
-1.484 4
-1.796 9
ΔD
, http://www.100md.com
0.555 7
1.116 7
1.633 6
2.193 4
2.652 2
3.179 0
Regression equation
ΔD=0.104 9.C+0.053 2
r=0.999 6
Tab.2 The recovery test No
PABA added/
, 百拇医药
μg.mL-1
PCHC added/
μg.mL-1
PCHC found/
μg.mL-1
PCHC recovery /
%
Mean/
%
RSD/
%
, http://www.100md.com
1
0.80
20.00
20.28
101.40
2
0.50
22.62
22.77
100.66
3
0.30
25.05
, http://www.100md.com
24.98
99.72
100.20
0.84
4
0.25
27.47
27.27
99.27
5
0.00
29.90
29.89
, http://www.100md.com
99.97
2.5 样品测定
精密吸取样品2.5 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度并摇匀；精密吸取上清液2.5 mL，置50 mL量瓶中，用BP稀释至刻度并摇匀(约含PCHC 25 μg/mL).在220、222、230和232 nm处测吸收度，计算PCHC含量.并与药典法(1995版)比较，结果见表3.
3 讨论
从图2可以发现，PABA有较大的比值光谱一阶导数峰谷差，可用于PABA定量分析，经我们实验表明，PABA在高浓度时(1～16 μg/mL)线性关系很好；在低浓度时(小于1 μg.mL)线性较差，变异也大，不适合用于盐酸普鲁卡因注射液中PABA的含量测定.
Tab.3 Determination of the samples No
, 百拇医药
PCHC found/mg
First derivative
ratio spectrum method
Chinese Pharmacopoeia
method
1
38.37
38.00
2
38.08
38.06
3
, 百拇医药
37.97
37.98
4
38.70
38.79
Average
stated
amount/%
95.70±0.82
95.52±0.98
40mg PCHC in each ampoule(2mL);P>0.05(t test)
, 百拇医药 介质的选择对PCHC测定有较大影响，因PCHC易受pH影响而水解，本文选择pH 6.5磷酸盐缓冲液作为测定介质，一方面是为了增加PCHC的稳定性；一方面可消除PABA吸收峰移值.关润华〔4〕报道PABA在水溶液中吸收峰随浓度增大而长移，而在pH 6.5的磷酸盐缓冲液中吸收峰的位置不受浓度影响，并能提高测定的重现性和准确性.■
参考文献：
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典：二部.北京：化学工业出版社，1995.713
[2]孙金平，季瑛.倍增差示双波长分光光度法测定盐酸普鲁卡因注射液的含量.现代应用药学杂志，1992，9(5)：231～232
[3]李毅然，李敬涵.一阶导数光谱法测定盐酸普鲁卡因注射液的含量.中国医院药学杂志，1987，7(11)：502～503
, 百拇医药
[4]关润华.吸收度线性组合分光光度法测定盐酸普鲁卡因注射液含量.中国医院药学杂志，1991，11(4)：170～172
[5]Salinas F,Berzas Nevado JJ, Espinosa Mansilla A.A new spectrophotometric method for quantitative multicomponent analysis resolution of mixtures of salicylic and salicyluric acids.Talanta,1990，37(3)：347～351
[6]Berzas Nevado JJ,Guiberteau Cabanillas C,Salinas F.Spectrophotometric resolution of ternary mixtures of salicylaldehyde,3-hydroxybenzaldehyde and 4-hydroxybenzaldehyde by the derivative ratio spectrum-zero crossing method.Talanta,1992，39(5)：547～553
[7]Morelli B.Simultaneous determination of ceftriaxone and streptomycin in mixture by “ratio-spectra” 2nd derivative and “zero-crossing” 3rd derivative spectrophotometry.Talanta，1994，41(5)：673～683
收稿日期：1999-05-17, http://www.100md.com