胃远端癌口侧癌旁粘膜p53、p21的表达与残胃断端复发癌的关系
作者：申强 孙振华 王静芬
单位：孙振华(哈尔滨医科大学附属第二医院 普外科，黑龙江 哈尔滨 150086)； 王静芬(哈尔滨医科大学附属第三医院 病理科，黑龙江 哈尔滨 150040)
关键词：胃癌；p53；p21；免疫组织化学
哈尔滨医科大学学报000117 摘 要：目的 探讨建立胃远端癌“分子切缘”概念的可行性。方法 应用免疫组化法对122例胃远端癌切除标本(其中30例术后随访有残胃断端复发癌)的癌周口侧粘膜的p53、p21的表达进行研究。结果 ①60例胃癌上切端组织中复发组的p53、p21的阳性率及联合阳性表达均明显高于对照组(P<0.005)。②62例胃远端癌的癌周口侧粘膜的p53、p21阳性率的变化趋势是自小弯和前(后)壁的近癌端向上切端逐步降低，并以小弯纵轴为主干向两侧逐步降低，其表达分布类似正态分布，顶峰位于小弯侧距癌肿边缘4～5cm处。结论 胃远端癌上切端的p53、p21阳性表达，尤其是联合阳性表达与残胃断端复发癌存在显著的相关性。建立“分子切缘”概念，即在通常的HE染色光镜下无癌组织为阴性判定的基础上，应用免疫组化法检测上切端，以p53、p21皆为阴性表达作为上切端阴性的可行性标准。
, 百拇医药
分类号：R735.2 文献标识码：A
文章编号：1000-1905(2000)01-0043-03
Relationship between the expression of p53,p21 genes in the upper gastric mucosa
adjacent to the gastric carcinoma and the carcinomas
on the edge of the remnant stomach
SHEN Qiang1,SUN Zhen-hua1,WANG Jing-fen2
, 百拇医药 (1.Department of Surgery,The Second Affiliated Hospital,Harbin Medical University,Harbin 150086;
2.Department of Pathology,The Third Affiliated Hospital,Harbin Medical University,Harbin 150040,China)
Abstract：Objective The variations and the factors related with the expression of p53,p21 genes in the upper gastric mucosa adjacent to the gastric carcinoma were examined and a new concept“molecular edge of gastrotomy" was established.Methods Adequate formalin-fixed paraffin-embedded upper gastric mucosa of gastric carcinoma and the edge of the remnant stomach for the immunohistochemical staining of p53,p21 were obstained in 122 patients from 1980 to now with complete clinicopathological and survival data means.Results The positive rates of p53,p21 were higher in test group than in control group(P<0.005),even between“-” and “+”.The concordance rate of p53,p21 in test group were higher than in control group(P<0.005).It was found that both p53 and p21 genes' overexpression was closely related to the degree of malignancy and the distance between the edge of the remnant stomach and the edge of the tumor.The variation of the expression of p53,p21 genes in the upper gastric mucosa adjacent to the gastric carcinoma dropped gradually from the part adjacent to the tumor to the edge of the remnant stomach;it dropped from the lesser curvature to the greater curvature.The distribution of p53,p21 genes was almost a normal distribution,with the zenith of the distribution about 4～5cm above the edge of the tumor in the lesser curvature. Conclusion The positive expression of p53,p21 genes on the edge of the remnant stomach is a negative factor in judging the patient after surgery,especially when both p53 and p21 express positive.The distance should be long enough(≥5cm) from the edge of the tumor to the gastrotomical edge in the lesser curvature.The negative criterion in judging the edge of the remnant stomach should be both p53 and p21 express negative in addition that no tumor cells were observed on the edge stained with HE.
, 百拇医药
Key words：gastric carcinoma;p53;p21;immunohistochemistry▲
有文献报道p53、p21主要作用于胃癌发生初期，不仅轻、中、重度异型增生中有p53、p21阳性表达，而且癌旁肠化已有p53突变、p21激活及表达。上述研究结果表明，p53、p21对胃癌的发生即胃粘膜的癌变可能起关键作用，因此p53、p21表达的检测有助于对胃粘膜癌变倾向的判断。但是目前关于胃远端癌口侧癌旁粘膜p53、p21的表达与残胃断端复发癌的关系国内外尚无相关报道。本实验在前人理论的基础上针对这一问题进行了深入研究。
1 材料与方法
1.1 材料
本研究分两个阶段，第一阶段选取1980～1995年间我院收治的胃远端癌切除标本60例(其中术后随访有残胃断端复发癌的30例为实验组)，每例取上切端蜡块。第二阶段随机选取新鲜胃远端(胃窦及小弯侧)癌切除标本62例，条形切取癌肿口侧的小弯、前(后)壁及大弯粘膜(长度与癌肿边缘距上切端的距离相同，方向平行)，每隔1cm用墨汁标记并以近肿物侧为圆心，卷成同心圆形，10%中性福尔马林固定、石蜡包埋，5μm厚连续切片，免疫组化(SP)法染色。免疫组化染色SP试剂盒及第1抗体(p53、ras p21)阳性对照片均由福州迈新生物技术公司提供。
, 百拇医药
1.2 结果判断
非癌粘膜组织的p53、p21阳性判定是以腺管为单位着色时才作为阳性表达，阳性腺管散在分布为“+”；阳性腺管成堆成簇分布为“
”；阳性腺管弥漫成片为“
”。
1.3 统计方法
应用χ2检验和四格表确切概率法分析。
2 结果
2.1 实验组与对照组上切端组织之间p53和p21表达的关系见表1。
表1 实验组与对照组之间p53和p21表达的关系 表达
, http://www.100md.com
强度
p53
p21
实验组
(%)
对照组
(%)
实验组
(%)
对照组
(%)
-
12
, http://www.100md.com (40.0)
26
(86.7)*
10
(33.3)
27
(90.0)*
+
10
(33.3)
3
(10.0)*
, http://www.100md.com
13
(43.3)
3
(10.0)*
++
7
(23.3)
1
(3.3)*
5
(160)
0
(-)*
, 百拇医药
+++
1
(3.3)
0
(-)*
2
(6.7)
0
(-)*
注：*P<0.01
2.2 实验组与对照组上切端组织的p53、p21联合表达的关系见表2。
表2 实验组与对照组的p53、p21联合表达的关系 组别
, 百拇医药
p53、p21联合阳性 其它联合表达
p53、p21联合阴性 其它联合表达
例数
(%)
例数
(%)
例数
(%)
例数
(%)
实验组
15
(50.0)
, http://www.100md.com
15
(50.0)*
7
(23.3)
23
(76.7)*
对照组
2
(6.7)
28
(93.3)*
25
, http://www.100md.com
(83.3)
5
(16.7)*
注：*P<0.01
2.3 胃远端癌癌周口侧粘膜的p53、p21表达与距癌肿边缘距离的关系见表3。
表3 胃远端癌口侧癌旁粘膜p53、p21表达与距离的关系 距癌肿边
缘距离(cm)
例数
p53阳性表达
p21阳性表达
小弯
, 百拇医药
前(后)壁
大弯
小弯
前(后)壁
大弯
0～1
62
32**
16**
6*
22**
13**
, 百拇医药
4
1～2
62
22**
8**
3*
15**
6**
2
2～3
62
14**
, 百拇医药
5**
1*
7**
4**
0
3～4
62
9**
1**
0*
4**
, 百拇医药
0**
0
4～5
62
1**
0**
0*
0**
0**
0
注：*P<0.05 **P<0.01
, http://www.100md.com 3 讨论
胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一[1]。大量研究表明其发生主要是由于基因的某些损伤—癌基因的激活和抑癌基因的失活所致[2]。Rugge等[3]研究发现胃癌轻、中、重度异型增生中皆有p53、p21的阳性表达。Joypaul等[4]还进一步以PCR-SSCP及DNA测序方法显示55.3%的癌旁肠化已有p53基因突变。上述研究表明p53突变、p21激活对胃粘膜的癌变可能起着关键性的作用，以手术切除为中心环节的综合治疗仍是唯一所能治愈进展期胃癌的手段，但在上切端组织病理HE染色阴性的病例中，仍可能有残胃断端复发癌的发生，而目前在此方面研究甚少，本文旨在用免疫组化方法从分子生物学角度来探索上切端p53、p21表达与残胃断端复发癌的关系，建立“分子切缘”概念，从而将发生断端复发癌的可能性减小到最低程度。
实验组p53、p21的阳性率及联合阳性表达明显高于对照组(P<0.005)，存在极显著差异，并且在“+”水平即存在显著的临床意义；而实验组p53、p21的阴性表达则明显低于对照组(P<0.005)，存在极显著差异。上述结果证明上切端p53、p21阳性表达尤其是联合阳性表达的病例较上切端联合阴性表达的病例术后发生残胃断端复发癌的可能性较高；而后者的可能性极低。因而本文尝试建立一种全新的“分子切缘”概念，即在通常的上切端HE染色光镜下无癌组织为阴性判定的基础上，用免疫组化法检测上切端，以p53、p21均为阴性作为“分子切缘”阴性判定的常规指标，从而对今后胃远端癌手术治疗的癌肿口侧的切除范围和术后随访病例的选择提供更为科学的指导及理论基础。
, http://www.100md.com
考察胃远端癌癌周口侧粘膜的p53、p21阳性表达的整体变化趋势结果显示，p53、p21的阳性率是以小弯侧癌旁为中心，自小弯、前(后)壁、大弯的近癌端向上切端逐步降低的，同时又以小弯纵轴为主干向两侧逐步降低，这种连续、逐步降低的变化趋势使“分子切缘”概念的建立成为可能，是必不可少的理论基础。如果以p53和p21阳性率零作为分布边界，其整体分布类似一正态分布，顶峰通常位于小弯侧距癌肿边缘4～5cm处，这一结果提示手术治疗时小弯要切除足够长，距癌肿边缘5cm以上为宜。■
作者简介：申强(1973-)，男，教授，硕士研究生
参考文献：
[1]徐光炜.胃癌.黄家驷外科学[M].第5版.北京：人民卫生出版社，1996.1105.
[2]Bishop DT,Thomas HJ,et al.The genetics of colcrectal cancer[J].Cancer Surv,1990,9(4):585-604.
, 百拇医药
[3]Rugge M,Shiao YH,Correa P,et al.Immunonistochemical evidence of p53 overexpression in gastric epithelial dysplasia[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,992,1(7):551-4.
[4]Joypaul BV,Newman EL,Hopwood D,et al.Expression of p53 protein in normal,dysplastic,and malignant gastric mucosa:an immunohistochemical study[J].J Pathol,1993,170(3):279-83.
收稿日期：1999-11-23, 百拇医药
单位：孙振华(哈尔滨医科大学附属第二医院 普外科，黑龙江 哈尔滨 150086)； 王静芬(哈尔滨医科大学附属第三医院 病理科，黑龙江 哈尔滨 150040)
关键词：胃癌；p53；p21；免疫组织化学
哈尔滨医科大学学报000117 摘 要：目的 探讨建立胃远端癌“分子切缘”概念的可行性。方法 应用免疫组化法对122例胃远端癌切除标本(其中30例术后随访有残胃断端复发癌)的癌周口侧粘膜的p53、p21的表达进行研究。结果 ①60例胃癌上切端组织中复发组的p53、p21的阳性率及联合阳性表达均明显高于对照组(P<0.005)。②62例胃远端癌的癌周口侧粘膜的p53、p21阳性率的变化趋势是自小弯和前(后)壁的近癌端向上切端逐步降低，并以小弯纵轴为主干向两侧逐步降低，其表达分布类似正态分布，顶峰位于小弯侧距癌肿边缘4～5cm处。结论 胃远端癌上切端的p53、p21阳性表达，尤其是联合阳性表达与残胃断端复发癌存在显著的相关性。建立“分子切缘”概念，即在通常的HE染色光镜下无癌组织为阴性判定的基础上，应用免疫组化法检测上切端，以p53、p21皆为阴性表达作为上切端阴性的可行性标准。
, 百拇医药
分类号：R735.2 文献标识码：A
文章编号：1000-1905(2000)01-0043-03
Relationship between the expression of p53,p21 genes in the upper gastric mucosa
adjacent to the gastric carcinoma and the carcinomas
on the edge of the remnant stomach
SHEN Qiang1,SUN Zhen-hua1,WANG Jing-fen2
, 百拇医药 (1.Department of Surgery,The Second Affiliated Hospital,Harbin Medical University,Harbin 150086;
2.Department of Pathology,The Third Affiliated Hospital,Harbin Medical University,Harbin 150040,China)
Abstract：Objective The variations and the factors related with the expression of p53,p21 genes in the upper gastric mucosa adjacent to the gastric carcinoma were examined and a new concept“molecular edge of gastrotomy" was established.Methods Adequate formalin-fixed paraffin-embedded upper gastric mucosa of gastric carcinoma and the edge of the remnant stomach for the immunohistochemical staining of p53,p21 were obstained in 122 patients from 1980 to now with complete clinicopathological and survival data means.Results The positive rates of p53,p21 were higher in test group than in control group(P<0.005),even between“-” and “+”.The concordance rate of p53,p21 in test group were higher than in control group(P<0.005).It was found that both p53 and p21 genes' overexpression was closely related to the degree of malignancy and the distance between the edge of the remnant stomach and the edge of the tumor.The variation of the expression of p53,p21 genes in the upper gastric mucosa adjacent to the gastric carcinoma dropped gradually from the part adjacent to the tumor to the edge of the remnant stomach;it dropped from the lesser curvature to the greater curvature.The distribution of p53,p21 genes was almost a normal distribution,with the zenith of the distribution about 4～5cm above the edge of the tumor in the lesser curvature. Conclusion The positive expression of p53,p21 genes on the edge of the remnant stomach is a negative factor in judging the patient after surgery,especially when both p53 and p21 express positive.The distance should be long enough(≥5cm) from the edge of the tumor to the gastrotomical edge in the lesser curvature.The negative criterion in judging the edge of the remnant stomach should be both p53 and p21 express negative in addition that no tumor cells were observed on the edge stained with HE.
, 百拇医药
Key words：gastric carcinoma;p53;p21;immunohistochemistry▲
有文献报道p53、p21主要作用于胃癌发生初期，不仅轻、中、重度异型增生中有p53、p21阳性表达，而且癌旁肠化已有p53突变、p21激活及表达。上述研究结果表明，p53、p21对胃癌的发生即胃粘膜的癌变可能起关键作用，因此p53、p21表达的检测有助于对胃粘膜癌变倾向的判断。但是目前关于胃远端癌口侧癌旁粘膜p53、p21的表达与残胃断端复发癌的关系国内外尚无相关报道。本实验在前人理论的基础上针对这一问题进行了深入研究。
1 材料与方法
1.1 材料
本研究分两个阶段，第一阶段选取1980～1995年间我院收治的胃远端癌切除标本60例(其中术后随访有残胃断端复发癌的30例为实验组)，每例取上切端蜡块。第二阶段随机选取新鲜胃远端(胃窦及小弯侧)癌切除标本62例，条形切取癌肿口侧的小弯、前(后)壁及大弯粘膜(长度与癌肿边缘距上切端的距离相同，方向平行)，每隔1cm用墨汁标记并以近肿物侧为圆心，卷成同心圆形，10%中性福尔马林固定、石蜡包埋，5μm厚连续切片，免疫组化(SP)法染色。免疫组化染色SP试剂盒及第1抗体(p53、ras p21)阳性对照片均由福州迈新生物技术公司提供。
, 百拇医药
1.2 结果判断
非癌粘膜组织的p53、p21阳性判定是以腺管为单位着色时才作为阳性表达，阳性腺管散在分布为“+”；阳性腺管成堆成簇分布为“
”；阳性腺管弥漫成片为“”。1.3 统计方法
应用χ2检验和四格表确切概率法分析。
2 结果
2.1 实验组与对照组上切端组织之间p53和p21表达的关系见表1。
表1 实验组与对照组之间p53和p21表达的关系 表达
, http://www.100md.com
强度
p53
p21
实验组
(%)
对照组
(%)
实验组
(%)
对照组
(%)
-
12
, http://www.100md.com (40.0)
26
(86.7)*
10
(33.3)
27
(90.0)*
+
10
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3
(10.0)*
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13
(43.3)
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(10.0)*
++
7
(23.3)
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(3.3)*
5
(160)
0
(-)*
, 百拇医药
+++
1
(3.3)
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2
(6.7)
0
(-)*
注：*P<0.01
2.2 实验组与对照组上切端组织的p53、p21联合表达的关系见表2。
表2 实验组与对照组的p53、p21联合表达的关系 组别
, 百拇医药
p53、p21联合阳性 其它联合表达
p53、p21联合阴性 其它联合表达
例数
(%)
例数
(%)
例数
(%)
例数
(%)
实验组
15
(50.0)
, http://www.100md.com
15
(50.0)*
7
(23.3)
23
(76.7)*
对照组
2
(6.7)
28
(93.3)*
25
, http://www.100md.com
(83.3)
5
(16.7)*
注：*P<0.01
2.3 胃远端癌癌周口侧粘膜的p53、p21表达与距癌肿边缘距离的关系见表3。
表3 胃远端癌口侧癌旁粘膜p53、p21表达与距离的关系 距癌肿边
缘距离(cm)
例数
p53阳性表达
p21阳性表达
小弯
, 百拇医药
前(后)壁
大弯
小弯
前(后)壁
大弯
0～1
62
32**
16**
6*
22**
13**
, 百拇医药
4
1～2
62
22**
8**
3*
15**
6**
2
2～3
62
14**
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5**
1*
7**
4**
0
3～4
62
9**
1**
0*
4**
, 百拇医药
0**
0
4～5
62
1**
0**
0*
0**
0**
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注：*P<0.05 **P<0.01
, http://www.100md.com 3 讨论
胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一[1]。大量研究表明其发生主要是由于基因的某些损伤—癌基因的激活和抑癌基因的失活所致[2]。Rugge等[3]研究发现胃癌轻、中、重度异型增生中皆有p53、p21的阳性表达。Joypaul等[4]还进一步以PCR-SSCP及DNA测序方法显示55.3%的癌旁肠化已有p53基因突变。上述研究表明p53突变、p21激活对胃粘膜的癌变可能起着关键性的作用，以手术切除为中心环节的综合治疗仍是唯一所能治愈进展期胃癌的手段，但在上切端组织病理HE染色阴性的病例中，仍可能有残胃断端复发癌的发生，而目前在此方面研究甚少，本文旨在用免疫组化方法从分子生物学角度来探索上切端p53、p21表达与残胃断端复发癌的关系，建立“分子切缘”概念，从而将发生断端复发癌的可能性减小到最低程度。
实验组p53、p21的阳性率及联合阳性表达明显高于对照组(P<0.005)，存在极显著差异，并且在“+”水平即存在显著的临床意义；而实验组p53、p21的阴性表达则明显低于对照组(P<0.005)，存在极显著差异。上述结果证明上切端p53、p21阳性表达尤其是联合阳性表达的病例较上切端联合阴性表达的病例术后发生残胃断端复发癌的可能性较高；而后者的可能性极低。因而本文尝试建立一种全新的“分子切缘”概念，即在通常的上切端HE染色光镜下无癌组织为阴性判定的基础上，用免疫组化法检测上切端，以p53、p21均为阴性作为“分子切缘”阴性判定的常规指标，从而对今后胃远端癌手术治疗的癌肿口侧的切除范围和术后随访病例的选择提供更为科学的指导及理论基础。
, http://www.100md.com
考察胃远端癌癌周口侧粘膜的p53、p21阳性表达的整体变化趋势结果显示，p53、p21的阳性率是以小弯侧癌旁为中心，自小弯、前(后)壁、大弯的近癌端向上切端逐步降低的，同时又以小弯纵轴为主干向两侧逐步降低，这种连续、逐步降低的变化趋势使“分子切缘”概念的建立成为可能，是必不可少的理论基础。如果以p53和p21阳性率零作为分布边界，其整体分布类似一正态分布，顶峰通常位于小弯侧距癌肿边缘4～5cm处，这一结果提示手术治疗时小弯要切除足够长，距癌肿边缘5cm以上为宜。■
作者简介：申强(1973-)，男，教授，硕士研究生
参考文献：
[1]徐光炜.胃癌.黄家驷外科学[M].第5版.北京：人民卫生出版社，1996.1105.
[2]Bishop DT,Thomas HJ,et al.The genetics of colcrectal cancer[J].Cancer Surv,1990,9(4):585-604.
, 百拇医药
[3]Rugge M,Shiao YH,Correa P,et al.Immunonistochemical evidence of p53 overexpression in gastric epithelial dysplasia[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,992,1(7):551-4.
[4]Joypaul BV,Newman EL,Hopwood D,et al.Expression of p53 protein in normal,dysplastic,and malignant gastric mucosa:an immunohistochemical study[J].J Pathol,1993,170(3):279-83.
收稿日期：1999-11-23, 百拇医药