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编号:10237777
Ⅰ~Ⅱ期乳腺癌患者机体细胞免疫功能的探讨
http://www.100md.com 《哈尔滨医科大学学报》 2000年第1期
     作者:赵金鹏 姜洪池 吴祥松 韩丽 高光强 罗文涛

    单位:赵金鹏(哈尔滨医科大学附属第一医院 普外科); 姜洪池(哈尔滨医科大学附属第一医院 普外科); 吴祥松(哈尔滨医科大学附属第一医院 普外科); 韩丽(免疫科,黑龙江 哈尔滨 150001); 高光强(免疫科,黑龙江 哈尔滨 150001); 罗文涛(免疫科,黑龙江 哈尔滨 150001)

    关键词:T淋巴细胞亚群;自然杀伤细胞;乳腺癌;改良根治术;细胞免疫

    哈尔滨医科大学学报000108 摘 要:目的 探讨机体细胞免疫功能与乳腺癌发生、发展的关系及乳腺癌改良根治术对机体免疫功能的影响及免疫治疗在乳腺癌综合治疗中应用的意义。方法 采集20名乳腺良性肿瘤患者(术前),20名Ⅰ~Ⅱ期乳腺癌患者(术前、术后3天、术后10天)抗凝全血,应用流式细胞仪测定外周血中T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+细胞的百分比、CD4+/CD8+比率、NK细胞的百分比。结果 ①乳腺癌患者与乳腺良性肿瘤患者术前外周血中CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞的百分比、CD4+/CD8+比率均在正常范围,两组比较无显著差异(P>0.05);②乳腺癌伴有腋窝淋巴结转移组CD3+、CD4+及NK细胞百分比均略低于非转移组,CD8+细胞亚群百分比略高于非转移组,CD4+/CD8+比率亦略下降,但两组间无显著差异(P>0.05);③术后3天,CD3+、CD4+细胞百分比升高,CD8+降低,CD4+/CD8+升高,NK细胞略下降;术后10天各项指标与术后3天变化基本相同;术前与术后3天、10天各组相比差异无显著性(P>0.05)。结论 早期乳腺癌患者机体免疫系统紊乱不明显,免疫功能没有明显下降。肿瘤对机体免疫抑制作用不显著。施行乳腺癌改良根治术对患者机体免疫功能影响不显著。
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    分类号:R737.9 文献标识码:A

    文章编号:1000-1905(2000)01-0018-03

    Study on the organism immunologic function in patients with early breast cancer

    ZHAO Jin-peng JIANG Hong-chi WU Xiang-song et al

    (Department of General Surgery,The First Affiliated Hospital,Harbin Medical University,Harbin 150001,China)

    Abstract:Objective To investigate the relationship between organism immunologic function and generation and development of breast cancer,to study the effect of modified radical mastectomy for breast cancer on organism immunologic function.Methods Anticoagulative whole blood from 20 patients with benign breast tumour preoperatively and 20 patients with early breast cancer (Ⅰ or Ⅱ stage) preoperatively,3 days and 10 days after mastectomy was sampled.We detected CD3+,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+ and NK cells from peripheral blood by using multicolor flow cytometry.Results ①There were no difference on the percentages of CD3+,CD4+,CD8+,NK cells and the rates of CD4+/CD8+ between early breast cancer patients and benign breast tumour patients (P>0.05).②The percentages of CD3+,CD4+,NK cells and the rates of CD4+/CD8+ in the patients with metastasis of axillary lymph nodes were mildly lower than those without metastasis of axillary lymph nodes,while the changes of CD8+ were just on the contrary,but there were no significant difference between the two groups (P>0.05).③The percentages of CD3+,CD4+ and the rates of CD4+/CD8+ were slightly higher,and the percentages of CD8+,NK cells were mildly lower in 3 days and 10 days postoperative groaps than in preoperative group.There was no obvious difference among three groups (P>0.05).Conclusion Immunologic function of early breast cancer patients does not decrease significantly,and cancer does not suppress organism immunologic function obviously.Modified radical mastectomy for breast cancer has not marked effect on organism immunologic function.
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    Key words:T lymphocyte subset;natural killing cell;breast cancer;modified radical mastectomy;cellular immunity▲

    机体免疫状态特别是细胞免疫与肿瘤的发生、发展及预后有密切关系。本实验拟应用流式细胞仪技术对Ⅰ~Ⅱ期乳腺癌患者机体细胞免疫状态进行定量分析,探讨早期乳腺癌患者机体细胞免疫功能的变化,寻求免疫因素与乳腺癌发生、发展的关系,为乳腺癌患者临床免疫治疗提供参考。

    1 临床资料与方法

    1.1 病例选择

    选择1998年7月~1999年2月我院收治的Ⅰ~Ⅱ期乳腺癌及乳腺良性肿瘤患者各20例(诊断均被病理组织学检查证实),其中Ⅰ期乳腺癌11例,Ⅱ期乳腺癌9例,均为女性,年龄在30~65岁之间,平均年龄为45.3岁。每位患者于术前2天采外周血检测T淋巴细胞亚群及NK细胞,术中经冰冻病理组织学检查,恶性肿瘤患者行乳腺癌改良根治术。术后3天、术后10天测定乳腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞。应用直接免疫荧光法标记抗原测定T细胞亚群及NK细胞,应用流式细胞仪计细胞数。
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    1.2 操作步骤

    采外周静脉血3ml,EDTA抗凝。分别取100μl抗凝血加入标记A、B、C、D、E等5个实验管,再分别加入单克隆抗体相交联的异硫氰酸荧光素(FITC)或藻红蛋白(PE)20μl进行免疫标记;避光,室温放置20min,加入裂解液2ml,避光放置5~12min,裂解红细胞。离心200g 5min,倒掉上清液,管内剩余约50μl,加入鞘液2ml,再次离心,加入鞘液0.5ml,应用流式细胞仪进行检测及应用SimulSET自动分析软件进行分析。

    1.3 结果判定

    以LeucoGATE管 (CD45-FITC/CD14-PE)自动设门,确定预分析的淋巴细胞亚群以Mouse IgG1/IgG2为阴性对照;根据资料,CD3和CD4均为阳性的细胞为辅助性T淋巴细胞,CD3和CD8同时阳性的细胞为抑制性T淋巴细胞,CD3阴性而CD16及/或CD56阳性为NK细胞。
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    1.4 统计学处理

    乳腺癌组与良性肿瘤组、乳腺癌腋窝淋巴结转移组与非转移组的定量结果进行t检验,术前及术后3天、10天3组间的定量结果进行方差分析。

    2 结果

    2.1 乳腺良性肿瘤与早期乳腺癌

    各细胞亚群百分比、NK细胞百分比及CD4+/CD8+比率均在检测药盒的正常值范围内。乳腺癌组CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比率均略高于良性乳腺肿瘤组,NK细胞百分比乳腺癌组略低于良性肿瘤组,有下降趋势,无显著性差异(P>0.05),见表1。

    表1 乳腺良性肿瘤组与乳腺癌组检测结果(±s)
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    CD3+

    CD4+

    CD8+

    CD4+/CD8+

    NK

    良性肿瘤组(20例)

    73.1±5.37

    39.1±8.44

    32.7±7.77

    1.31±0.54

    15.4±6.62
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    乳腺癌组(20例)

    73.9±8.36

    42.2±8.25

    33.5±12.1

    1.41±0.62

    13.5±7.55

    2.2 乳腺癌腋窝淋巴结转移组与非转移组 非转移组CD3+、CD4+、NK、CD4+/CD8+比率均高于转移组,CD8+低于转移组;腋窝淋巴结转移组与良性肿瘤组比较,CD8+有上升趋势,NK下降更明显;非转移组NK细胞百分比略高于良性肿瘤组;三组无显著性差异(P>0.05),见表2。
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    表2 腋窝淋巴结转移组、非转移组和良性肿瘤组检测结果(±s)

    CD3+

    CD4+

    CD8+

    CD4+/CD8+

    NK

    转移组(9例)

    72.9±8.63

    40.6±8.78
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    35.9±4.09

    1.35±0.45

    10.3±0.4

    非转移组(11例)

    75.7±8.09

    43.7±7.91

    30.8±7.54

    1.54±0.70

    16±9.25

    良性肿瘤组(20例)

    73.1±5.37

    39.1±8.44
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    32.7±7.77

    1.31±0.54

    15.4±6.62

    2.3 乳腺癌组术前、术后比较 CD3+术后3天、术后10天均高于术前,有上升趋势,三组比较差异无显著性。CD4+术后10天略有下降,CD8+呈下降趋势,CD4+/CD8+术后10天略低于术后3天,NK变化不明显。三组之间比较均无显著性差异(P>0.05),见表3。

    表3 乳腺癌组术前、术后检测结果(±s)

    CD3+
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    CD4+

    CD8+

    CD4+/CD8+

    NK

    术 前(20例)

    73.9±8.36

    42.2±8.25

    33.5±12.1

    1.41±0.62

    13.5±7.55

    术后3天(20例)
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    75.1±9.23

    44.6±10.9

    31.1±8.14

    1.55±0.58

    12.2±6.34

    术后10天(20例)

    75.9±7.39

    44.3±8.58

    32.2±7.78

    1.54±0.63

    13.8±5.48

    3 讨论 T细胞亚群不同的变化可反映机体细胞免疫功能的改变。CD4+细胞数量的变化可反映机体抗肿瘤免疫功能。CD8+抑制性T细胞活化后分泌可溶性抑制因子,使肿瘤逃避免疫攻击,与肿瘤的存在、发展及荷瘤宿主的免疫抑制状态密切相关。CD4+/CD8+比率反映了机体免疫状态,保持一定的比率对维持机体的免疫应答有重要意义,可预测患者的预后。NK细胞是外周血中淋巴细胞水颗粒组分,不需致敏直接杀伤肿瘤细胞,是机体抗肿瘤第一道防线,在控制肿瘤转移早期起主要作用。
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    本实验选择乳腺良性肿瘤作为对照组,文献报道良性肿瘤患者T细胞亚群及NK细胞的百分比均在正常范围,对机体免疫功能无影响。Andersen[1]通过对116例手术患者研究发现,病人患肿瘤被诊断后及等待手术会出现恐惧心理,生理调节功能下降,这种神经精神 因素降低细胞免疫功能,抑制细胞免疫应答。故两组更有可比性。

    Ⅰ~Ⅱ期乳腺癌患者T细胞亚群及NK细胞百分比与良性肿瘤患者相比较发现,CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比率均在正常值范围内。这与Ludwig[2]的研究结果相符,早期乳腺癌免疫参数无明显改变。McCluskey[3]报道Ⅰ~Ⅲ期患者的CD4+/CD8+比率正常,CD3+百分比各期与对照组无明显差异。朱理玮等[4]发现乳腺癌分期与NK细胞(CD16+)的活性无关。Schroder[5]通过对乳腺癌及卵巢癌患者外周血淋巴细胞亚群的研究发现,CD4+/CD8+比率乳腺癌组没有明显下降。Ⅰ~Ⅱ期乳腺癌患者细胞免疫功能没有受到明显抑制,这一结果为目前对乳腺癌免疫治疗效果不佳提供参考。
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    腋窝淋巴结转移组的CD4+、CD4+/CD8+及NK细胞均低于非转移者,CD8+略高,NK细胞百分比降低。表明随着肿瘤的发展,肿瘤侵袭淋巴系统影响了免疫应答,机体免疫功能下降;NK减少减弱了机体直接抗肿瘤的能力。以上结果表明,Ⅰ~Ⅱ期乳腺癌患者机体免疫系统并没有发生严重紊乱,随着肿瘤的进展,机体免疫功能可能呈现下降趋势。

    关于乳腺癌改良根治术对患者机体免疫功能的影响及肿瘤切除术后机体免疫系统的变化,胡永华[6]等研究表明,乳腺癌根治术后48h内CD3+、CD4+明显减少,术后72h开始恢复。本实验乳腺癌患者手术治疗方法为乳癌改良根治术,CD3+、CD4+术后3天略高于术前,术后10天高于术后3天,表明术后早期机体免疫功能并没有受到明显抑制,推测此术式对机体的创伤轻,对免疫系统影响不显著。结论是,早期乳腺癌患者机体免疫系统紊乱不明显,免疫功能没有明显下降,肿瘤对机体免疫抑制作用不显著。施行乳腺癌改良根治术对患者机体免疫功能影响不显著。■
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    基金项目:黑龙江省自然科学基金资助项目

    作者简介:赵金鹏(1964-),男,主治医师,硕士

    参考文献:

    [1]Andersen BL,Farrar WB,Golden Kreutz D,et al.Stress and immune responses after surgical treatment for regional breast cancer[J].J Natl Cancer Inst,1998,90(1):30.

    [2]Ludwig CU,Hartmann D,Landmann R,et al.Unaltered immunocompetence in patients with non-disseminated breast cancer at the time of diagnosis[J].Cancer,1985,55:1673.
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    [3]McCluskey DR,Roy AD,Abram WP,et al.T lymphocyte subsets in the peripheral blood of patients with benign and malignant breast disease[J].Br J Cancer,1983,47:307.

    [4]朱理玮,李克敏,薛承锐,等.乳腺癌患者T细胞亚群变化的定量检测及其临床意义[J].中国肿瘤杂志,1994,21(3):209.

    [5]Schroder W,Vering A,Stegmuller M,et al.Lymphocyte subsets in patients with ovarian and breast cancer[J].Eur J Gynaecol Oncol,1997,18(6):474.

    [6]胡永华,童月琪,姚丽华.麻醉手术对乳腺癌患者外周血T细胞亚群的影响[J].北京医科大学学报,1995,27(3):20.

    收稿日期:1999-11-25, http://www.100md.com