卡托普利对肾性高血压心肌肥厚大鼠左心室肌原癌基因c-fos mRNA表达的影响
作者：尹时华 肖立新 化长林 魏劲波
单位：尹时华(咸宁医学院生理学教研室，咸宁 437100)；肖立新(深圳市卫生学校，深圳 518020)；化长林(咸宁医学院生理学教研室，咸宁 437100)；魏劲波(湖北医科大学生理学教研室，武汉 430071)
关键词：卡托普利；肾性高血压；c-fos
咸宁医学院学报000101 摘 要 目的：探讨卡托普利对肾性高血压心肌肥厚大鼠左室肌原癌基因c-fos mRNA表达的影响。方法：采用原位杂交方法检测原癌基因c-fos mRNA的表达。结果：经过8周治疗后，卡托普利使高血压心肌肥厚大鼠左室肌原癌基因c-fos mRNA表达量显著减少(P<0.001)。结论：卡托普利能减少高血压心肌肥厚大鼠左室肌原癌基因c-fos mRNA的表达。
中图分类号 R961 文献标识码 A 文章编号 1008-0635(2000)01-0001-03
, 百拇医药
The Effects of Captopril on the Expression of Proto-oncogene c-fos in the Left Ventricle in Rats with Renovascular Hypertensive Myocardiohypertrophy
YIN Shihua，HUA Changlin et al
(Department of Physiology,Xianning Medical College,Xianning 437100)
XIAO lixin
(Shen Zhen Health School,Shen Zhen 518020)
ABSTRACT Objective To study the effects of captopril(Cap) on the expression of proto-oncogene c-fos in left ventricular muscle of rats with renovascular hypertensive myocardiohypertrophy.Methods The level of c-fos were measured by hybridization in situ.Results After eight weeks of treatment,the expression of c-fos decreased markedly (P<0.001).Conclusion The expression of c-fos in left ventricular muscle of the rats with renovascular hypertensive myocardiohypertrophy could be decreased when Cap is used to treat the model rats.
, 百拇医药
KEY WORDS Captopril；Renovascular hypertension；c-fos
高血压引起左心室肥厚(LVH)可导致多种病理性后果。LVH是影响心血管疾病发病率和死亡率的独立危险因素，转基因动物和反义核酸技术均证明c-fos基因在心肌肥厚的信号传递过程中作用十分重要[1，2]，实验证明在高血压LVH时大鼠核内原癌基因c-fos表达增强，本实验使用卡托普利(Captopril,Cap)治疗肾性高血压所致左心室肥厚大鼠，观察其对大鼠左心室肌原癌基因c-fos mRNA表达的影响，并进一步探讨左室肥厚的发病机制。
1 材料与方法
1.1动物与模型
选用雄性Wistar大鼠(由本院动物中心提供)，体重180～220g。二肾一夹(2K1C)型肾血管型高血压大鼠采用经典造模方法[3]：经3%戊巴比妥钠(30mg/kg腹腔注射)麻醉，游离左肾动脉并用内径为0.2～0.3mm银夹缩窄，右侧肾不触及。假手术组(A组)手术方法同上，但不安置银夹。术后前4周每周测血压一次，凡术后4周末收缩压较术前升高20mmHg以上，且高于125mmHg者确定为已形成高血压[4]，可以用于实验。
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1.2 实验动物分组
随机将成功造模后的16只大鼠分成2组，每组8只。B组：2K1C组；C组：2K1C+Cap(100mg/kg.d-1)组，术后四周开始灌饲Cap水溶液,治疗8周后处死检测。
1.3 观测指标
1.3.1 尾动脉收缩压(SBP)的测定
微型动物测压仪(湖南医科大学生理学教研室研制)测量尾动脉收缩压。
1.3.2 左心室/体重比(LVW/BW)测定
处死动物之前称体重，处死后分离左室用滤纸吸去处表面水份称重以求得比值。
1.3.3 原位杂交
, 百拇医药
取新鲜标本(左室肌)固定，切片、烤片、探针标记按照地高辛标记试剂盒(购自Sigma公司)方法以地高辛标记的c-fos(Sigma公司)行原位cDNA-mRNA杂交。
主要流程：固定、切片、蛋白酶K 40ug/ml 37℃20min，0.2%甘氨酸2×10min，4%多聚甲醛20min，预杂交42℃ 20h杂交95℃ 5min，-20℃ 5min，湿盒内42℃ 36h,(含变性地高辛cDNA探针)洗涤、封闭、滴加小鼠抗地高辛，滴加生物素化羊抗小鼠IgG，加SABC，DAB显色，水洗，封片，镜检。阴性对照不加探针，不加抗体，阳性对照用已知阳性片。阳性判断标准：以细胞浆着棕黄色为阳性，用计算机图像系统分析，每次随机选30个细胞，以细胞阳性染色的平均光密度(OD值)表示各mRNA表达量。
1.4 统计分析
所有数据用均数±标准差(
±s)表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析和q检验。P<0.05为显著性标准。
, 百拇医药
2 结 果
2.1收缩压
左室/体重比值(表1)：SBP C组与B组比较有显著性差异(P<0.001), LVW/BW比值C组与B组比较差异显著(P<0.005)。
2.2 原癌基因c-fos mRNA表达
c-fos mRNA表达见图1～3。从图1～3可见，A组c-fos mRNA有少量表达，胞浆着色淡，着色细胞数少；B组c-fos mRNA有大量表达，胞浆着色深，着色细胞数多；C组c-fos mRNA表达与A组相似，胞浆着色淡，着色细胞数亦少。OD值比较见表1，C组与B组比较c-fos mRNA表达有显著性差异(P<0.001)。
图1 A组大鼠左室肌c-fos mRNA的表达×400
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图2 B组大鼠左室肌c-fos mRNA的表达×400
表1 Cap对肾性高血压心肌肥厚大鼠SBP、LVW/BW及左室肌原癌基因c-fos mRNA表达的影响(±s) 组 别
n
SBP(mmHg)
n
LVW/BW(mg/g)
n
c-fos(OD值)
A
8
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116±15
8
2.59±0.12
30
0.09±0.01
B
8
171±16
8
3.38±0.32
30
0.16±0.02
C
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8
132±13△
8
2.82±0.26*
30
0.09±0.01△
与B组比较△P<0.001，*P<0.005
图3 C组大鼠左室肌c-fos mRNA的表达×400
3 讨 论
高血压是一种多基因遗传疾病，其发病机理涉及一系列高血压相关基因的表达异常[5]，c-fos编码核内转录因子调控着细胞的增殖与分化，属立即早期反应基因。实验证明c-fos可编码核内多种信息分子，对细胞分化，增殖起重要作用[6]。c-fos的表达与不同组织、细胞类型及发育阶段密切相关。左室肥厚是高血压最常见的器官损害，也是心血管疾病的独立危险因子，实验证明高血压左室肥厚的形成和发展过程与心肌组织内原癌基因c-fos的高表达有密切的联系[7]。卡托普利作为血管紧张素转换酶抑制剂类药物是目前最常用的降压及逆转左室肥厚的药物，本实验观察到，一方面，Cap能显著降低高血压大鼠的血压及降低左室/体重比值，另一方面，Cap对高血压大鼠左室肌原癌基因c-fos mRNA的表达有明显抑制作用，这可能与Cap降低血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在血浆中含量有关，AngⅡ可通过与相应受体结合，经信号传导激活立即早期反应基因，如c-fos、c-myc、c-jun等原癌基因的表达，后者进一步刺激次级应答基因的表达，引起心肌胚胎型蛋白合成增加，导致心肌肥大。另外，Cap是否通过其他途径减轻c-fos mRNA在左室肌的表达尚待研究。
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参考文献
1，Shi Y,Hutchinson HG,Hall DJ,et al.A down-regulation of c-myc expression by antisense oligo nucleotides inhibits proliferation of human smooth muscle cells.Circulation,1993;88:1109
2，Jackson T,Allard MF,Sreenan,et al.The c-myc protooncogene regulates cardiac development of trans-genic mice.Molecul cellul Biolog,1990；10：3709
3，Taska K,Kamei C,Tagnli H,et al.Anti hypertensive effects of nisoldi-pine and reference drugs in certain types of hypertensive rats.Arzneim-Forsch/drug res,1987；37(1)：316
, 百拇医药
4，顾德官，顾天华，宋代军，等.实验性高血压大鼠的血压观察.上海第二医学院学报，1985；2：102
5，杨亚东，李倩虹，张新波.原发性高血压相关基因的研究进展.中华高血压杂志，1993；1：1
6，Simpson PC.Proto-oncogene and cardiac hypertrophy.Annu Rev Physiol,1989；51：189
7，单铮铮，戴生明，陈红，等.高血压左心室肥厚与心肌原癌基因c-fos的表达.高血压杂志，1997；5(3)：168
(收稿：1999-09-30), 百拇医药
单位：尹时华(咸宁医学院生理学教研室，咸宁 437100)；肖立新(深圳市卫生学校，深圳 518020)；化长林(咸宁医学院生理学教研室，咸宁 437100)；魏劲波(湖北医科大学生理学教研室，武汉 430071)
关键词：卡托普利；肾性高血压；c-fos
咸宁医学院学报000101 摘 要 目的：探讨卡托普利对肾性高血压心肌肥厚大鼠左室肌原癌基因c-fos mRNA表达的影响。方法：采用原位杂交方法检测原癌基因c-fos mRNA的表达。结果：经过8周治疗后，卡托普利使高血压心肌肥厚大鼠左室肌原癌基因c-fos mRNA表达量显著减少(P<0.001)。结论：卡托普利能减少高血压心肌肥厚大鼠左室肌原癌基因c-fos mRNA的表达。
中图分类号 R961 文献标识码 A 文章编号 1008-0635(2000)01-0001-03
, 百拇医药
The Effects of Captopril on the Expression of Proto-oncogene c-fos in the Left Ventricle in Rats with Renovascular Hypertensive Myocardiohypertrophy
YIN Shihua，HUA Changlin et al
(Department of Physiology,Xianning Medical College,Xianning 437100)
XIAO lixin
(Shen Zhen Health School,Shen Zhen 518020)
ABSTRACT Objective To study the effects of captopril(Cap) on the expression of proto-oncogene c-fos in left ventricular muscle of rats with renovascular hypertensive myocardiohypertrophy.Methods The level of c-fos were measured by hybridization in situ.Results After eight weeks of treatment,the expression of c-fos decreased markedly (P<0.001).Conclusion The expression of c-fos in left ventricular muscle of the rats with renovascular hypertensive myocardiohypertrophy could be decreased when Cap is used to treat the model rats.
, 百拇医药
KEY WORDS Captopril；Renovascular hypertension；c-fos
高血压引起左心室肥厚(LVH)可导致多种病理性后果。LVH是影响心血管疾病发病率和死亡率的独立危险因素，转基因动物和反义核酸技术均证明c-fos基因在心肌肥厚的信号传递过程中作用十分重要[1，2]，实验证明在高血压LVH时大鼠核内原癌基因c-fos表达增强，本实验使用卡托普利(Captopril,Cap)治疗肾性高血压所致左心室肥厚大鼠，观察其对大鼠左心室肌原癌基因c-fos mRNA表达的影响，并进一步探讨左室肥厚的发病机制。
1 材料与方法
1.1动物与模型
选用雄性Wistar大鼠(由本院动物中心提供)，体重180～220g。二肾一夹(2K1C)型肾血管型高血压大鼠采用经典造模方法[3]：经3%戊巴比妥钠(30mg/kg腹腔注射)麻醉，游离左肾动脉并用内径为0.2～0.3mm银夹缩窄，右侧肾不触及。假手术组(A组)手术方法同上，但不安置银夹。术后前4周每周测血压一次，凡术后4周末收缩压较术前升高20mmHg以上，且高于125mmHg者确定为已形成高血压[4]，可以用于实验。
, http://www.100md.com
1.2 实验动物分组
随机将成功造模后的16只大鼠分成2组，每组8只。B组：2K1C组；C组：2K1C+Cap(100mg/kg.d-1)组，术后四周开始灌饲Cap水溶液,治疗8周后处死检测。
1.3 观测指标
1.3.1 尾动脉收缩压(SBP)的测定
微型动物测压仪(湖南医科大学生理学教研室研制)测量尾动脉收缩压。
1.3.2 左心室/体重比(LVW/BW)测定
处死动物之前称体重，处死后分离左室用滤纸吸去处表面水份称重以求得比值。
1.3.3 原位杂交
, 百拇医药
取新鲜标本(左室肌)固定，切片、烤片、探针标记按照地高辛标记试剂盒(购自Sigma公司)方法以地高辛标记的c-fos(Sigma公司)行原位cDNA-mRNA杂交。
主要流程：固定、切片、蛋白酶K 40ug/ml 37℃20min，0.2%甘氨酸2×10min，4%多聚甲醛20min，预杂交42℃ 20h杂交95℃ 5min，-20℃ 5min，湿盒内42℃ 36h,(含变性地高辛cDNA探针)洗涤、封闭、滴加小鼠抗地高辛，滴加生物素化羊抗小鼠IgG，加SABC，DAB显色，水洗，封片，镜检。阴性对照不加探针，不加抗体，阳性对照用已知阳性片。阳性判断标准：以细胞浆着棕黄色为阳性，用计算机图像系统分析，每次随机选30个细胞，以细胞阳性染色的平均光密度(OD值)表示各mRNA表达量。
1.4 统计分析
所有数据用均数±标准差(
±s)表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析和q检验。P<0.05为显著性标准。, 百拇医药
2 结 果
2.1收缩压
左室/体重比值(表1)：SBP C组与B组比较有显著性差异(P<0.001), LVW/BW比值C组与B组比较差异显著(P<0.005)。
2.2 原癌基因c-fos mRNA表达
c-fos mRNA表达见图1～3。从图1～3可见，A组c-fos mRNA有少量表达，胞浆着色淡，着色细胞数少；B组c-fos mRNA有大量表达，胞浆着色深，着色细胞数多；C组c-fos mRNA表达与A组相似，胞浆着色淡，着色细胞数亦少。OD值比较见表1，C组与B组比较c-fos mRNA表达有显著性差异(P<0.001)。
图1 A组大鼠左室肌c-fos mRNA的表达×400
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图2 B组大鼠左室肌c-fos mRNA的表达×400
表1 Cap对肾性高血压心肌肥厚大鼠SBP、LVW/BW及左室肌原癌基因c-fos mRNA表达的影响(
±s) 组 别n
SBP(mmHg)
n
LVW/BW(mg/g)
n
c-fos(OD值)
A
8
, http://www.100md.com
116±15
8
2.59±0.12
30
0.09±0.01
B
8
171±16
8
3.38±0.32
30
0.16±0.02
C
, http://www.100md.com
8
132±13△
8
2.82±0.26*
30
0.09±0.01△
与B组比较△P<0.001，*P<0.005
图3 C组大鼠左室肌c-fos mRNA的表达×400
3 讨 论
高血压是一种多基因遗传疾病，其发病机理涉及一系列高血压相关基因的表达异常[5]，c-fos编码核内转录因子调控着细胞的增殖与分化，属立即早期反应基因。实验证明c-fos可编码核内多种信息分子，对细胞分化，增殖起重要作用[6]。c-fos的表达与不同组织、细胞类型及发育阶段密切相关。左室肥厚是高血压最常见的器官损害，也是心血管疾病的独立危险因子，实验证明高血压左室肥厚的形成和发展过程与心肌组织内原癌基因c-fos的高表达有密切的联系[7]。卡托普利作为血管紧张素转换酶抑制剂类药物是目前最常用的降压及逆转左室肥厚的药物，本实验观察到，一方面，Cap能显著降低高血压大鼠的血压及降低左室/体重比值，另一方面，Cap对高血压大鼠左室肌原癌基因c-fos mRNA的表达有明显抑制作用，这可能与Cap降低血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在血浆中含量有关，AngⅡ可通过与相应受体结合，经信号传导激活立即早期反应基因，如c-fos、c-myc、c-jun等原癌基因的表达，后者进一步刺激次级应答基因的表达，引起心肌胚胎型蛋白合成增加，导致心肌肥大。另外，Cap是否通过其他途径减轻c-fos mRNA在左室肌的表达尚待研究。
, http://www.100md.com
参考文献
1，Shi Y,Hutchinson HG,Hall DJ,et al.A down-regulation of c-myc expression by antisense oligo nucleotides inhibits proliferation of human smooth muscle cells.Circulation,1993;88:1109
2，Jackson T,Allard MF,Sreenan,et al.The c-myc protooncogene regulates cardiac development of trans-genic mice.Molecul cellul Biolog,1990；10：3709
3，Taska K,Kamei C,Tagnli H,et al.Anti hypertensive effects of nisoldi-pine and reference drugs in certain types of hypertensive rats.Arzneim-Forsch/drug res,1987；37(1)：316
, 百拇医药
4，顾德官，顾天华，宋代军，等.实验性高血压大鼠的血压观察.上海第二医学院学报，1985；2：102
5，杨亚东，李倩虹，张新波.原发性高血压相关基因的研究进展.中华高血压杂志，1993；1：1
6，Simpson PC.Proto-oncogene and cardiac hypertrophy.Annu Rev Physiol,1989；51：189
7，单铮铮，戴生明，陈红，等.高血压左心室肥厚与心肌原癌基因c-fos的表达.高血压杂志，1997；5(3)：168
(收稿：1999-09-30), 百拇医药