食管鳞状细胞癌中p53蛋白和PCNA表达与淋巴结转移的关系
作者：林虹 黄应桂 曹军 黄冰
单位：林虹(广东医学院附属医院病理科，湛江 524001)；黄应桂(广东医学院附属医院病理科，湛江 524001)；曹军(广东医学院附属医院病理科，湛江 524001)；黄冰(广东医学院附属医院病理科，湛江 524001)
关键词：食管肿瘤；p53蛋白；增殖细胞核抗原；免疫组织化学
广东医学院学报000105 摘 要：目的：探讨食管鳞状细胞癌p53蛋白及增殖细胞核抗原(PCNA)共同表达的意义。方法：应用免疫组化S-P法研究103例食管鳞状细胞癌p53蛋白和PCNA表达情况。结果：p53蛋白阳性率为60.2%，PCNA高表达率为55.3%；p53蛋白阳性、PCNA高表达均与淋巴结转移有关(P＝0.0287，P＝0.0007)；当两者共同表达时，淋巴结转移率比其单表达者明显增高(P<0.01)。结论：p53和PCNA可能有协同作用。对食管鳞状细胞癌患者同时检测p53和PCNA更有利于估计预后。
, 百拇医药
分类号：R735.1
文章编号：1005-4057(2000)01-0011-03
Expression of p53 proteins and PCNA in esophageal squamous cell carcinoma and its relationship with lymph node metastasis
Lin Hong,Huang Yinggui,Cao Jun,et al
(Department of Pathology,Affiliated Hospital of Guangdong Medical College,Zhanjiang 524001)
Abstract：Objective：To study significance of p53 proteins and PCNA coexpression in esophageal squamous cell carcinoma.Methods：Using S-P immunohistochemical methods,p53 and PCNA expressions in 103 cases of human esophageal carcinoma were studied.Results：The positive rate of p53 proteins was 60.2%,The high expression rate of PCNA was 55.3%.p53 protein expressions andPCNA high expression were related with the metastasis of lymph node(P＝0.0287,P＝0.0007,respectively).When both p53 andPCNA were highly expressed,the lymph node metastasis rate significantly higher(P<0.01)in comparison with other cases.Conclusions：The results suggest that p53 may cooperate with PCNA,and examining the expression of p53 and PCNA together may be helpful to predicating the prognosis.
, 百拇医药
Key words：esophageal neoplasm；p53 proteins；PCNA；immunohistochemistry▲
肿瘤的预后受许多生物因素的影响。近年来p53和增殖细胞核抗原(PCNA)在食管鳞状细胞癌中表达与肿瘤生物学行为及预后之间关系的研究已有报道[1，4]，但论及p53和PCNA协同作用、共同表达方面的报道尚少[2]。本文应用免疫组化法对 103例食管鳞状细胞癌p53蛋白与PCNA表达进行研究，探讨食管鳞状细胞癌p53和PCNA两种蛋白共同表达时的意义。
1 材料与方法
1.1 材料
收集我院经手术切除的食管肿瘤组织，用 4%的甲醛固定，石蜡包埋切片，经 HE染色镜检证实为食管鳞状细胞癌者 103例(1级 25例，2级 44例，3级 34例)，其中有淋巴结转移者 49例，无淋巴结转移者 54例。
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1.2 试剂
抗p53抗体和抗PCNA单抗及S-P试剂盒均为 ZYMED公司产品，购自北京中山生物技术有限公司。
1.3 方法
石蜡切片4μm厚，免疫组化采用S-P(链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物)法，严格按说明书操作，DAB显色，抗p53抗体孵化前，切片需微波处理，暴露抗原。
1.4 结果判断
染色阳性信号呈棕黄色，PCNA以阳性细胞数<50%为低表达，≥50%为高表达，p53蛋白表达以无阳性细胞为阴性，阳性细胞>肿瘤细胞 25%为阳性。
1.5 统计学处理方法
采用χ2检验。
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2 结果
2.1 p53 蛋白的表达
p53位于癌细胞核，间质细胞阴性，见图1。103例食管鳞状细胞癌中，阳性 62例，阳性率为 60.2%，p53表达与病理分级无关(χ2＝1.511，P＝0.4698)。有淋巴结转移组p53阳性率为77.5%，无淋巴结转移组p53阳性率为 44.4%，两者差异有显著性(χ2＝11.57，P<0.001)，见表1。
表1 103 例食管癌p53、PCNA的表达与病理分级和
淋巴结转移的关系
病理分级
淋巴结转移
1级
, 百拇医药
2级
3级
有
无
p53
阳性
13
26
23
38
24
阴性
12
18
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11
11
30
PCNA
高
4
24
29
33
24
低
21
20
5
, http://www.100md.com
16
30
2.2 PCNA的表达
PCNA仅分布于癌细胞核内，间质细胞核内无表达，见图2。103例食管鳞状细胞癌中，高表达率为55.3%，其中病理分级为1级高表达率为16.0%，2级高表达率为54.5%，3级高表达率为85.3%，三者间差异有极显著性意义(χ2＝28.01，P<0.001)。有淋巴结转移组PCNA高表达率为67.6%，无淋巴结转移组PCNA高表达率为44.4%，前者明显高于后者(χ2＝5.45，P＝0.0287)，见表1。
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图1 食管鳞状细胞癌癌细胞核p53蛋白阳性，S-P法，苏木素复染
图2 食管鳞状细胞癌癌细胞核PCNA阳性，S-P法，苏木素复染
2.3 p53蛋白和PCNA共同表达与淋巴结转移的关系
p53阳性及PCNA高表达者，其淋巴结转移率明显高于其它3种不同的表达(χ2＝23.57，P<0.01)，见表2。
表2 103例食管鳞癌p53和PCNA共同表达与
淋巴结转移的关系 表达情况
淋巴结转移
有
无
, 百拇医药
p53 (阳性)+PCNA(高)
30
10
p53 (阳性)+PCNA(低)
10
11
p53 (阴性)+PCNA(高)
4
13
p53 (阴性)+PCNA(低)
5
20
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3 讨论
p53基因是近年发现的抑癌基因，其产物p53蛋白对肿瘤的发生起抑制作用，而p53基因突变后的产物——突变型p53则失去抑癌功能，反而具有促进恶性转化的活性。研究表明p53基因改变与食管鳞状细胞癌的发生密切相关[3]。正常野生型p53蛋白由于其半衰期短、含量低，用免疫组化技术常不能检出，而突变型p53由于稳定性增加，半衰期延长，其堆积在细胞核里，用免疫组化技术能检测到，且p53基因突变与p53蛋白在组织中表达一致[4]。本组的结果显示p53蛋白总阳性率与病理分级无关，但与淋巴结转移明显相关。随着病理分级增高p53阳性率有所增大，淋巴结转移阳性组p53蛋白的阳性率显著高于阴性组，提示p53虽与肿瘤细胞的分化无关，但与增殖有关，p53对食管鳞状细胞癌转移起重要作用。
PCNA是与细胞增殖周期有关的周期蛋白，是目前一种较好判断细胞增殖状态标记，已广泛应用于肿瘤细胞动力学研究。本组结果表明PCNA高表达与食管鳞状细胞癌的病理分级和淋巴结转移有关，PCNA表达越高肿瘤分化程度越差，淋巴结转移发生可能性就越大，反映出肿瘤细胞增殖活性和分化程度的一般规律，也提示细胞增殖能力与转移之间的关系相一致，进一步说明了细胞增殖是肿瘤组织十分重要的特性。
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由于PCNA是DNA聚合酶的辅酶，表达和合成于细胞周期S期和G1期内，而有p53蛋白积聚的肿瘤也处于细胞周期特别是S期和G期[5]，说明PCNA和p53同属细胞周期蛋白，它们在食管鳞状细胞癌中的关系如何，是本文研究的目的。从上研究结果表明p53蛋白阳性者，PCNA高表达率明显高于p53蛋白阴性者，且p53蛋白阳性、PCNA高表达均有促进食管鳞状细胞癌淋巴结转移的作用，而当这两者共同表达时，这种作用更明显，表现在其淋巴结转移率明显高于其它表达者。这可能由于一方面p53蛋白积聚与肿瘤细胞的增殖密切相关[6]，突变型p53基因刺激PCNA启动子致其高表达[7]；另一方面p53对PCNA表达有协同作用[8]，PCNA和p53协同将加速肿瘤细胞增殖，促进肿瘤恶性进程[2]。本文结果提示，食管鳞状细胞癌中p53和PCNA之间可能有协同作用，故两者共同表达的患者，肿瘤细胞生长速度较快，且易发生淋巴结转移，是预后不良的标记。临床上对食管癌患者同时检测p53蛋白和PCNA更能反映食管鳞状细胞癌的性质和预后，可为判断预后提供较可靠的依据。■
, http://www.100md.com
作者简介：林虹，女，1963年1月出生，大学专科，技师
参考文献：
[1]朱大明，赵惠儒，张林.增殖细胞核抗原在食管鳞癌中的表达及意义.中国临床肿瘤，1997，24(1)：56～57
[2]谭立军，汤雪明，沈忠英.PCNA和p53在食管癌变过程中表达意义.上海：上海第一医科大学学报.1997，17(3)：178
[3]Stemmermann G.Heffelfinger SC，Noffsinger A，et al.The molecular biology of esophageal and gastric cancer and their precursors：On cogenes tumor suppressor genes，and growth factors.Hum Pathol，1994，25：968
, 百拇医药
[4]周桥，杨光华.p53研究的一些新进展.中华病理学杂志，1995，24：267
[5]Wasseem NH，Lance DP.Monoclonal antibody analysis of the proliferating cell antigen(PCNA)，structural conversation and detection of a nuclear from.J cell sci.1990，96(1)：121
[6]陶仪声，宗永生.我国不同地方食管癌p53蛋白积聚的比较观察.中国肿瘤临床，1997，24(6)：405
[7]Gorgoulis V，Zoumpourlis V，Rassidakis G，et al.Molecular analysis ofp53 gene in Laryngeal premalignant and malignant lessions：p53 protein immunohistochemical expression is positively related to proliferating cell nuclear antigen labelling index.Vrchow Arch，1995，426：339
[8]李锦添，吴荫堂，黄宝珍，等.免疫组化检测鼻咽癌病变组化中PCNA和p53的意义.癌证，1995，14(2)：99
收稿日期：1999-05-25
修稿日期：1999-11-21, http://www.100md.com
单位：林虹(广东医学院附属医院病理科，湛江 524001)；黄应桂(广东医学院附属医院病理科，湛江 524001)；曹军(广东医学院附属医院病理科，湛江 524001)；黄冰(广东医学院附属医院病理科，湛江 524001)
关键词：食管肿瘤；p53蛋白；增殖细胞核抗原；免疫组织化学
广东医学院学报000105 摘 要：目的：探讨食管鳞状细胞癌p53蛋白及增殖细胞核抗原(PCNA)共同表达的意义。方法：应用免疫组化S-P法研究103例食管鳞状细胞癌p53蛋白和PCNA表达情况。结果：p53蛋白阳性率为60.2%，PCNA高表达率为55.3%；p53蛋白阳性、PCNA高表达均与淋巴结转移有关(P＝0.0287，P＝0.0007)；当两者共同表达时，淋巴结转移率比其单表达者明显增高(P<0.01)。结论：p53和PCNA可能有协同作用。对食管鳞状细胞癌患者同时检测p53和PCNA更有利于估计预后。
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分类号：R735.1
文章编号：1005-4057(2000)01-0011-03
Expression of p53 proteins and PCNA in esophageal squamous cell carcinoma and its relationship with lymph node metastasis
Lin Hong,Huang Yinggui,Cao Jun,et al
(Department of Pathology,Affiliated Hospital of Guangdong Medical College,Zhanjiang 524001)
Abstract：Objective：To study significance of p53 proteins and PCNA coexpression in esophageal squamous cell carcinoma.Methods：Using S-P immunohistochemical methods,p53 and PCNA expressions in 103 cases of human esophageal carcinoma were studied.Results：The positive rate of p53 proteins was 60.2%,The high expression rate of PCNA was 55.3%.p53 protein expressions andPCNA high expression were related with the metastasis of lymph node(P＝0.0287,P＝0.0007,respectively).When both p53 andPCNA were highly expressed,the lymph node metastasis rate significantly higher(P<0.01)in comparison with other cases.Conclusions：The results suggest that p53 may cooperate with PCNA,and examining the expression of p53 and PCNA together may be helpful to predicating the prognosis.
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Key words：esophageal neoplasm；p53 proteins；PCNA；immunohistochemistry▲
肿瘤的预后受许多生物因素的影响。近年来p53和增殖细胞核抗原(PCNA)在食管鳞状细胞癌中表达与肿瘤生物学行为及预后之间关系的研究已有报道[1，4]，但论及p53和PCNA协同作用、共同表达方面的报道尚少[2]。本文应用免疫组化法对 103例食管鳞状细胞癌p53蛋白与PCNA表达进行研究，探讨食管鳞状细胞癌p53和PCNA两种蛋白共同表达时的意义。
1 材料与方法
1.1 材料
收集我院经手术切除的食管肿瘤组织，用 4%的甲醛固定，石蜡包埋切片，经 HE染色镜检证实为食管鳞状细胞癌者 103例(1级 25例，2级 44例，3级 34例)，其中有淋巴结转移者 49例，无淋巴结转移者 54例。
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1.2 试剂
抗p53抗体和抗PCNA单抗及S-P试剂盒均为 ZYMED公司产品，购自北京中山生物技术有限公司。
1.3 方法
石蜡切片4μm厚，免疫组化采用S-P(链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物)法，严格按说明书操作，DAB显色，抗p53抗体孵化前，切片需微波处理，暴露抗原。
1.4 结果判断
染色阳性信号呈棕黄色，PCNA以阳性细胞数<50%为低表达，≥50%为高表达，p53蛋白表达以无阳性细胞为阴性，阳性细胞>肿瘤细胞 25%为阳性。
1.5 统计学处理方法
采用χ2检验。
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2 结果
2.1 p53 蛋白的表达
p53位于癌细胞核，间质细胞阴性，见图1。103例食管鳞状细胞癌中，阳性 62例，阳性率为 60.2%，p53表达与病理分级无关(χ2＝1.511，P＝0.4698)。有淋巴结转移组p53阳性率为77.5%，无淋巴结转移组p53阳性率为 44.4%，两者差异有显著性(χ2＝11.57，P<0.001)，见表1。
表1 103 例食管癌p53、PCNA的表达与病理分级和
淋巴结转移的关系
病理分级
淋巴结转移
1级
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2级
3级
有
无
p53
阳性
13
26
23
38
24
阴性
12
18
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11
11
30
PCNA
高
4
24
29
33
24
低
21
20
5
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16
30
2.2 PCNA的表达
PCNA仅分布于癌细胞核内，间质细胞核内无表达，见图2。103例食管鳞状细胞癌中，高表达率为55.3%，其中病理分级为1级高表达率为16.0%，2级高表达率为54.5%，3级高表达率为85.3%，三者间差异有极显著性意义(χ2＝28.01，P<0.001)。有淋巴结转移组PCNA高表达率为67.6%，无淋巴结转移组PCNA高表达率为44.4%，前者明显高于后者(χ2＝5.45，P＝0.0287)，见表1。
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图1 食管鳞状细胞癌癌细胞核p53蛋白阳性，S-P法，苏木素复染
图2 食管鳞状细胞癌癌细胞核PCNA阳性，S-P法，苏木素复染
2.3 p53蛋白和PCNA共同表达与淋巴结转移的关系
p53阳性及PCNA高表达者，其淋巴结转移率明显高于其它3种不同的表达(χ2＝23.57，P<0.01)，见表2。
表2 103例食管鳞癌p53和PCNA共同表达与
淋巴结转移的关系 表达情况
淋巴结转移
有
无
, 百拇医药
p53 (阳性)+PCNA(高)
30
10
p53 (阳性)+PCNA(低)
10
11
p53 (阴性)+PCNA(高)
4
13
p53 (阴性)+PCNA(低)
5
20
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3 讨论
p53基因是近年发现的抑癌基因，其产物p53蛋白对肿瘤的发生起抑制作用，而p53基因突变后的产物——突变型p53则失去抑癌功能，反而具有促进恶性转化的活性。研究表明p53基因改变与食管鳞状细胞癌的发生密切相关[3]。正常野生型p53蛋白由于其半衰期短、含量低，用免疫组化技术常不能检出，而突变型p53由于稳定性增加，半衰期延长，其堆积在细胞核里，用免疫组化技术能检测到，且p53基因突变与p53蛋白在组织中表达一致[4]。本组的结果显示p53蛋白总阳性率与病理分级无关，但与淋巴结转移明显相关。随着病理分级增高p53阳性率有所增大，淋巴结转移阳性组p53蛋白的阳性率显著高于阴性组，提示p53虽与肿瘤细胞的分化无关，但与增殖有关，p53对食管鳞状细胞癌转移起重要作用。
PCNA是与细胞增殖周期有关的周期蛋白，是目前一种较好判断细胞增殖状态标记，已广泛应用于肿瘤细胞动力学研究。本组结果表明PCNA高表达与食管鳞状细胞癌的病理分级和淋巴结转移有关，PCNA表达越高肿瘤分化程度越差，淋巴结转移发生可能性就越大，反映出肿瘤细胞增殖活性和分化程度的一般规律，也提示细胞增殖能力与转移之间的关系相一致，进一步说明了细胞增殖是肿瘤组织十分重要的特性。
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由于PCNA是DNA聚合酶的辅酶，表达和合成于细胞周期S期和G1期内，而有p53蛋白积聚的肿瘤也处于细胞周期特别是S期和G期[5]，说明PCNA和p53同属细胞周期蛋白，它们在食管鳞状细胞癌中的关系如何，是本文研究的目的。从上研究结果表明p53蛋白阳性者，PCNA高表达率明显高于p53蛋白阴性者，且p53蛋白阳性、PCNA高表达均有促进食管鳞状细胞癌淋巴结转移的作用，而当这两者共同表达时，这种作用更明显，表现在其淋巴结转移率明显高于其它表达者。这可能由于一方面p53蛋白积聚与肿瘤细胞的增殖密切相关[6]，突变型p53基因刺激PCNA启动子致其高表达[7]；另一方面p53对PCNA表达有协同作用[8]，PCNA和p53协同将加速肿瘤细胞增殖，促进肿瘤恶性进程[2]。本文结果提示，食管鳞状细胞癌中p53和PCNA之间可能有协同作用，故两者共同表达的患者，肿瘤细胞生长速度较快，且易发生淋巴结转移，是预后不良的标记。临床上对食管癌患者同时检测p53蛋白和PCNA更能反映食管鳞状细胞癌的性质和预后，可为判断预后提供较可靠的依据。■
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作者简介：林虹，女，1963年1月出生，大学专科，技师
参考文献：
[1]朱大明，赵惠儒，张林.增殖细胞核抗原在食管鳞癌中的表达及意义.中国临床肿瘤，1997，24(1)：56～57
[2]谭立军，汤雪明，沈忠英.PCNA和p53在食管癌变过程中表达意义.上海：上海第一医科大学学报.1997，17(3)：178
[3]Stemmermann G.Heffelfinger SC，Noffsinger A，et al.The molecular biology of esophageal and gastric cancer and their precursors：On cogenes tumor suppressor genes，and growth factors.Hum Pathol，1994，25：968
, 百拇医药
[4]周桥，杨光华.p53研究的一些新进展.中华病理学杂志，1995，24：267
[5]Wasseem NH，Lance DP.Monoclonal antibody analysis of the proliferating cell antigen(PCNA)，structural conversation and detection of a nuclear from.J cell sci.1990，96(1)：121
[6]陶仪声，宗永生.我国不同地方食管癌p53蛋白积聚的比较观察.中国肿瘤临床，1997，24(6)：405
[7]Gorgoulis V，Zoumpourlis V，Rassidakis G，et al.Molecular analysis ofp53 gene in Laryngeal premalignant and malignant lessions：p53 protein immunohistochemical expression is positively related to proliferating cell nuclear antigen labelling index.Vrchow Arch，1995，426：339
[8]李锦添，吴荫堂，黄宝珍，等.免疫组化检测鼻咽癌病变组化中PCNA和p53的意义.癌证，1995，14(2)：99
收稿日期：1999-05-25
修稿日期：1999-11-21, http://www.100md.com