影响强化戊二醛杀菌效果因素的实验研究
作者：曹月升 任玉玺 张立志 刘朱梅
单位：河北省人民医院检验科(石家庄 050071)
关键词：戊二醛；药理学；消毒药；分析；葡萄球菌，金黄色；大肠杆菌；杀菌
河北医科大学学报000111摘 要：目的 探讨强化戊二醛杀菌效果的影响因素，提高该消毒液的杀菌效果。方法 分别对消毒液的酸碱度、温度、作用时间、有机物(血清)等条件，设置不同的变量值，选用几种试验菌做杀菌试验。 结果 2 %强化戊二醛在常规条件下，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的杀灭率在99.90 %以上，对枯草杆菌黑色变种杀灭率为90.26 %。同时检出了在不同变量条件下的细菌杀灭率。结论 强化戊二醛的杀菌效果随着pH值的增加、温度的升高、作用时间的延长而提高，随着有机物浓度的增加而减弱。
分类号：R446.5
, http://www.100md.com
STUDY ON FACTORS INFLUENCING GERMICIDAL EFFICACY OF GLUTARALDEHYDE
Cao Yuesheng Ren Yuxi Zhang Lizhi Liu Zhumei
(Department of Laboratory,Hebei Provincial People's Hospital(Shijiazhuang 050071))
ABSTRACT：Objective To explore the factors influencing germicidal efficacy of glutaraldehyde,so as to improve its germicidal efficacy.Methods The germicidal experiments were done separately on some test bacteria under the states of the different pH value, temperature, contact time and organic substance. Results Under normal condifion,killing rate of 2 % intensive glutaraldehyde on S.aureaus,E.coli and C.albicans was above 99.99 %,and that on B.subtilis Var.niger was 90.26 %.Meanwhile,the killing rate was examined under different conditions.Conclusion Glutaraldehyde increases its killing effect with pH increase,higher temperature and loger acting time,but decreased its action with more organic substance.
, 百拇医药
KEYWORDS：glutaraldehyde/pharmacol; disinfectants/anal; staphylococcus, aureus; escherichia coli; sterilization▲
继常用消毒剂杀灭绿脓杆菌最低有效浓度的测定[1]之后，本文对临床上最常用的戊二醛消毒剂杀灭金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌黑色变种和白色念珠菌等多种细菌，在不同变量值的溶液酸碱度、温度、作用时间、有机物浓度等情况下的杀灭率做了观察，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料：2 %强化戊二醛，由天津市消毒药械有限公司生产。试验菌为金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、大肠杆菌(ATCC 25922)、枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)、白色念珠菌(ATCC 10231)。
, 百拇医药
1.2 菌悬液制备：将试验菌37 ℃24 h斜面培养物，用0.03 mol/l的磷酸盐缓冲液(PBS)洗脱，稀释成含菌量为10 cfu的菌悬液。
1.3 定量杀菌试验[2]：当消毒剂2 %强化戊二醛，对4种试验菌进行溶液酸碱度、温度、作用时间等影响杀菌效果试验时，将装有试验浓度消毒液的试管与装有菌悬液的试管，置试验规定的水浴箱内恒温后，将0.5 ml菌悬液加入盛有4.5 ml消毒液(对照管为无菌蒸馏水)的试管中，混匀，作用至规定时间，取0.5 ml菌药混合液，加入4.5 ml中和剂(含0.5 %甘氨酸磷酸盐溶液)，混匀，中和作用10 min。取该液或稀释液1 ml接种平皿，倾注普通营养琼脂(白色念珠菌为沙氏葡萄糖琼脂)，混匀，于37 ℃培养24 h(白色念珠菌于28 ℃培养5 d)，作活菌计数，计算杀灭率。
在进行有机物影响试验时，以人血清代表有机物，在菌悬液加入不同量的人血清观察。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 杀菌效果：试验表明，2 %强化戊二醛消毒剂在30 ℃ 、pH 7、作用时间5 min的条件下，可杀灭金黄色葡萄球菌 99.95 %、大肠杆菌 99.97 %、枯草杆菌黑色变种 90.26 %、白色念珠菌 99.94 %，见表1。
表1 戊二醛溶液杀菌效果
Table 1 Germicidal efficacy of glutaraldehyde solution Bateria
Control group
(cfu/ml)
Disinfected group
(cfu/ml)
, 百拇医药
S.aureus
2 060 000
1 030
E.coli
3 936 000
1 180
B.subtilis Var.niger
4 074 000
30 147
C.albicans
1 875 000
1 125
, 百拇医药
2.2 影响因素
2.2.1 溶液酸碱度：将消毒剂的酸碱度设置pH 5,6,7,8的变量值,在30 ℃下作用5min。试验表明溶液呈碱性时杀菌效果较好,见表2。表2 pH值对戊二醛溶液杀菌效果的影响
Table 2 Influence of pH Value on efficacy of
glutaraldehyde solution
(%) Bateria
Average killing rate in different pH of disinfectant
5
6
, 百拇医药
7
8
S.aureus
99.90
99.92
99.95
100
E.coli
99.91
99.94
99.97
100
B.subtilis Var.niger
, 百拇医药
90.00
90.10
90.26
91.40
C.albicans
99.90
99.91
99.94
99.96
2.2.2 温度:将溶液的温度设置20 ℃、30 ℃、42 ℃的变量值，在pH 7.0条件下，作用5 min,试验表明溶液温度越高杀菌效果越好,见表3。表3 温度对戊二醛溶液杀菌效果的影响
, http://www.100md.com Table 3 Influence of temerature on efficacy of
glutaraldehyde solution
(%) Bacteria
Average killing rate in different temperature of disinfectant
20 ℃
30 ℃
42 ℃
S.aureus
99.91
99.95
, http://www.100md.com
100
E.coli
99.94
99.97
100
B.subtilis Var.niger
90.20
90.26
91.30
C.albicans
99.90
99.94
, 百拇医药
100
2.2.3 作用时间:将消毒剂作用时间设置1、5、10、15 min的变量值，在pH 7.0、30 ℃条件下试验，结果表明作用时间越长杀菌效果越好,见表4。表4 作用时间对戊二醛溶液杀菌效果的影响
Table 4 Influence of contact time on efficacy of
glutaraldehyde solution
(%) Bacteria
Average killing rate after exposure for different periods of time
1min
, 百拇医药
5min
10min
15min
S.aureus
91.80
99.95
99.99
100.0
E.coli
94.85
99.97
100.0
100.0
, 百拇医药
B.subtilis Var.niger
84.90
90.26
92.50
99.90
C.albicans
89.85
99.94
99.97
100
2.2.4 血清浓度：将人血清浓度设置0%、5 %、10 %变量值，消毒剂在pH7.0、30 ℃、作用5 min,结果表明杀菌效果随着血清浓度的升高而降低，见表5。
, http://www.100md.com
表5 有机物对戊二醛溶液杀菌效果的影响
Table 5 Influence of organic substance on germicidal in
efficacy of glutaraldehyde solution
(%) Bacteria
Average killing rate in different serum concentration
0 %
5 %
10 %
S.aureus
, 百拇医药
99.95
99.80
99.30
E.coli
99.97
99.85
99.30
B.subtilis Var.niger
90.26
90.00
88.20
C.albicans
, 百拇医药
99.94
99.75
99.00
3 讨 论
戊二醛是国内外公认的广谱高效、快速、低毒的化学消毒剂，是继甲醛、环氧乙烷之后化学消毒剂发展史上的第3个里程碑[3]。强化戊二醛是通过对戊二醛的2个醛基活化处理，使其醛基更加活泼，更发挥其活性，杀菌作用剧增,主要成份含2 %戊二醛及0.3 %碳酸氢钠[4,5]。通过对2 %强化戊二醛杀菌效果各种影响因素检测，结果表明：在pH 7.0、30 ℃、作用时间5 min条件下，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌，均能杀灭 99.90 %以上,对枯草杆菌杀灭 90.26 %。其杀菌效果随着pH值的增加、温度的升高、作用时间的延长而提高；随着有机物浓度的增加而减弱。这些规律的取得有助于对该消毒剂的正确使用，对枯草杆菌黑色变种等耐药性较强的菌珠也能获得较为满意的杀灭效果,戊二醛消毒剂不失为医院临床较为理想的消毒剂。
, 百拇医药
(本文承蒙河北医科大学刘殿武教授指导，特此致谢)■
参考文献：
[1]曹月升,张立志,刘朱梅,等.常用消毒剂杀灭绿脓杆菌最低有效浓度的测定.中国消毒学杂志,1997,14(1)：32
[2]王云峰,王有森,白竟玉,等.消毒技术规范.北京：卫生部,1991.34～40
[3]王枢群,张邦燮,医院感染学.科学技术文献出版社重庆分社,1990.561～571
[4]李少岚,冯伶.过氧化氢与戊二醛对细菌芽胞协同杀灭作用的研究.中国消毒学杂志,1998,15(4):203
[5]陈胤忠,袁朝森,胡琳,等.过氧化氢复方消毒剂杀菌影响因素及其它性能的实验观察.中国消毒学杂志,1998,15(3):144
收稿日期：1999-07-21, 百拇医药
单位：河北省人民医院检验科(石家庄 050071)
关键词：戊二醛；药理学；消毒药；分析；葡萄球菌，金黄色；大肠杆菌；杀菌
河北医科大学学报000111摘 要：目的 探讨强化戊二醛杀菌效果的影响因素，提高该消毒液的杀菌效果。方法 分别对消毒液的酸碱度、温度、作用时间、有机物(血清)等条件，设置不同的变量值，选用几种试验菌做杀菌试验。 结果 2 %强化戊二醛在常规条件下，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的杀灭率在99.90 %以上，对枯草杆菌黑色变种杀灭率为90.26 %。同时检出了在不同变量条件下的细菌杀灭率。结论 强化戊二醛的杀菌效果随着pH值的增加、温度的升高、作用时间的延长而提高，随着有机物浓度的增加而减弱。
分类号：R446.5
, http://www.100md.com
STUDY ON FACTORS INFLUENCING GERMICIDAL EFFICACY OF GLUTARALDEHYDE
Cao Yuesheng Ren Yuxi Zhang Lizhi Liu Zhumei
(Department of Laboratory,Hebei Provincial People's Hospital(Shijiazhuang 050071))
ABSTRACT：Objective To explore the factors influencing germicidal efficacy of glutaraldehyde,so as to improve its germicidal efficacy.Methods The germicidal experiments were done separately on some test bacteria under the states of the different pH value, temperature, contact time and organic substance. Results Under normal condifion,killing rate of 2 % intensive glutaraldehyde on S.aureaus,E.coli and C.albicans was above 99.99 %,and that on B.subtilis Var.niger was 90.26 %.Meanwhile,the killing rate was examined under different conditions.Conclusion Glutaraldehyde increases its killing effect with pH increase,higher temperature and loger acting time,but decreased its action with more organic substance.
, 百拇医药
KEYWORDS：glutaraldehyde/pharmacol; disinfectants/anal; staphylococcus, aureus; escherichia coli; sterilization▲
继常用消毒剂杀灭绿脓杆菌最低有效浓度的测定[1]之后，本文对临床上最常用的戊二醛消毒剂杀灭金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌黑色变种和白色念珠菌等多种细菌，在不同变量值的溶液酸碱度、温度、作用时间、有机物浓度等情况下的杀灭率做了观察，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料：2 %强化戊二醛，由天津市消毒药械有限公司生产。试验菌为金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、大肠杆菌(ATCC 25922)、枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)、白色念珠菌(ATCC 10231)。
, 百拇医药
1.2 菌悬液制备：将试验菌37 ℃24 h斜面培养物，用0.03 mol/l的磷酸盐缓冲液(PBS)洗脱，稀释成含菌量为10 cfu的菌悬液。
1.3 定量杀菌试验[2]：当消毒剂2 %强化戊二醛，对4种试验菌进行溶液酸碱度、温度、作用时间等影响杀菌效果试验时，将装有试验浓度消毒液的试管与装有菌悬液的试管，置试验规定的水浴箱内恒温后，将0.5 ml菌悬液加入盛有4.5 ml消毒液(对照管为无菌蒸馏水)的试管中，混匀，作用至规定时间，取0.5 ml菌药混合液，加入4.5 ml中和剂(含0.5 %甘氨酸磷酸盐溶液)，混匀，中和作用10 min。取该液或稀释液1 ml接种平皿，倾注普通营养琼脂(白色念珠菌为沙氏葡萄糖琼脂)，混匀，于37 ℃培养24 h(白色念珠菌于28 ℃培养5 d)，作活菌计数，计算杀灭率。
在进行有机物影响试验时，以人血清代表有机物，在菌悬液加入不同量的人血清观察。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 杀菌效果：试验表明，2 %强化戊二醛消毒剂在30 ℃ 、pH 7、作用时间5 min的条件下，可杀灭金黄色葡萄球菌 99.95 %、大肠杆菌 99.97 %、枯草杆菌黑色变种 90.26 %、白色念珠菌 99.94 %，见表1。
表1 戊二醛溶液杀菌效果
Table 1 Germicidal efficacy of glutaraldehyde solution Bateria
Control group
(cfu/ml)
Disinfected group
(cfu/ml)
, 百拇医药
S.aureus
2 060 000
1 030
E.coli
3 936 000
1 180
B.subtilis Var.niger
4 074 000
30 147
C.albicans
1 875 000
1 125
, 百拇医药
2.2 影响因素
2.2.1 溶液酸碱度：将消毒剂的酸碱度设置pH 5,6,7,8的变量值,在30 ℃下作用5min。试验表明溶液呈碱性时杀菌效果较好,见表2。表2 pH值对戊二醛溶液杀菌效果的影响
Table 2 Influence of pH Value on efficacy of
glutaraldehyde solution
(%) Bateria
Average killing rate in different pH of disinfectant
5
6
, 百拇医药
7
8
S.aureus
99.90
99.92
99.95
100
E.coli
99.91
99.94
99.97
100
B.subtilis Var.niger
, 百拇医药
90.00
90.10
90.26
91.40
C.albicans
99.90
99.91
99.94
99.96
2.2.2 温度:将溶液的温度设置20 ℃、30 ℃、42 ℃的变量值，在pH 7.0条件下，作用5 min,试验表明溶液温度越高杀菌效果越好,见表3。表3 温度对戊二醛溶液杀菌效果的影响
, http://www.100md.com Table 3 Influence of temerature on efficacy of
glutaraldehyde solution
(%) Bacteria
Average killing rate in different temperature of disinfectant
20 ℃
30 ℃
42 ℃
S.aureus
99.91
99.95
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100
E.coli
99.94
99.97
100
B.subtilis Var.niger
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C.albicans
99.90
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2.2.3 作用时间:将消毒剂作用时间设置1、5、10、15 min的变量值，在pH 7.0、30 ℃条件下试验，结果表明作用时间越长杀菌效果越好,见表4。表4 作用时间对戊二醛溶液杀菌效果的影响
Table 4 Influence of contact time on efficacy of
glutaraldehyde solution
(%) Bacteria
Average killing rate after exposure for different periods of time
1min
, 百拇医药
5min
10min
15min
S.aureus
91.80
99.95
99.99
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E.coli
94.85
99.97
100.0
100.0
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B.subtilis Var.niger
84.90
90.26
92.50
99.90
C.albicans
89.85
99.94
99.97
100
2.2.4 血清浓度：将人血清浓度设置0%、5 %、10 %变量值，消毒剂在pH7.0、30 ℃、作用5 min,结果表明杀菌效果随着血清浓度的升高而降低，见表5。
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表5 有机物对戊二醛溶液杀菌效果的影响
Table 5 Influence of organic substance on germicidal in
efficacy of glutaraldehyde solution
(%) Bacteria
Average killing rate in different serum concentration
0 %
5 %
10 %
S.aureus
, 百拇医药
99.95
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99.30
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99.97
99.85
99.30
B.subtilis Var.niger
90.26
90.00
88.20
C.albicans
, 百拇医药
99.94
99.75
99.00
3 讨 论
戊二醛是国内外公认的广谱高效、快速、低毒的化学消毒剂，是继甲醛、环氧乙烷之后化学消毒剂发展史上的第3个里程碑[3]。强化戊二醛是通过对戊二醛的2个醛基活化处理，使其醛基更加活泼，更发挥其活性，杀菌作用剧增,主要成份含2 %戊二醛及0.3 %碳酸氢钠[4,5]。通过对2 %强化戊二醛杀菌效果各种影响因素检测，结果表明：在pH 7.0、30 ℃、作用时间5 min条件下，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌，均能杀灭 99.90 %以上,对枯草杆菌杀灭 90.26 %。其杀菌效果随着pH值的增加、温度的升高、作用时间的延长而提高；随着有机物浓度的增加而减弱。这些规律的取得有助于对该消毒剂的正确使用，对枯草杆菌黑色变种等耐药性较强的菌珠也能获得较为满意的杀灭效果,戊二醛消毒剂不失为医院临床较为理想的消毒剂。
, 百拇医药
(本文承蒙河北医科大学刘殿武教授指导，特此致谢)■
参考文献：
[1]曹月升,张立志,刘朱梅,等.常用消毒剂杀灭绿脓杆菌最低有效浓度的测定.中国消毒学杂志,1997,14(1)：32
[2]王云峰,王有森,白竟玉,等.消毒技术规范.北京：卫生部,1991.34～40
[3]王枢群,张邦燮,医院感染学.科学技术文献出版社重庆分社,1990.561～571
[4]李少岚,冯伶.过氧化氢与戊二醛对细菌芽胞协同杀灭作用的研究.中国消毒学杂志,1998,15(4):203
[5]陈胤忠,袁朝森,胡琳,等.过氧化氢复方消毒剂杀菌影响因素及其它性能的实验观察.中国消毒学杂志,1998,15(3):144
收稿日期：1999-07-21, 百拇医药