颞骨组织切片三维结构重建的制作体会
作者：陈合新 刘小蓉 颜玲
单位：陈合新(第一军医大学南方医院耳鼻咽喉科，广东 广州 510515)；刘小蓉(第一军医大学组织胚胎教研室，广东 广州 510515)；颜玲(第一军医大学南方医院整形科，广东 广州 510515)
关键词：颞骨；三维重建
第一军医大学学报000135 中图分类号：R76 文献标识码：A 文章编号：1000-2588(2000)01-0021-01
颞骨内部结构复杂，组织成份较多，常规组织切片所示为二维图像，建立三维结构比较困难，所以在临床及教学中该部位为一难点。采用CT及MRI进行的三维重建对精细的中内耳特别是膜性结构显示往往不太满意。作者采用颞骨火棉胶包埋连续片技术行中内耳及其毗邻结构的三维重建，取得满意的结果。现将制作过程和体会报告如下。
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1 制作过程
选用较为新鲜的头颅标本，用3.6%盐酸浸泡4周，期间更换液体1次。系列酒精脱水，每个梯度1周。常规用2%、4%、6%、8%、10%和12%梯度火棉胶溶液，每梯度浸胶1月以上[1，2]。用10%的火棉胶溶液包埋，20 min后将标本倒置于氯仿溶液中24 h。于70%酒精溶液中以备切片。将包埋块加以修整，用直径为0.5 mm的钻头于包埋块四个角垂直打洞，为扫描时定位用，注意勿损伤组织[3]。注射器抽吸4%明胶加等量的墨汁洞内注射，4～6 h后切片，对准定位孔，应用透光扫描。
2 制作体会
2.1脱钙选择新鲜的头颅标本，其内部的粘膜及其它软组织保存较好，便于精细结构观察。脱钙时间过长或应用盐酸浓度过高易损伤软组织。脱钙的颞骨硬度如鼻尖即可，用细针比较容易刺入为宜。脱钙不充分不仅易损伤刀片，同时对组织结构也易造成损伤。
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2.2 浸胶
组织学中包埋的方法较多，如明胶、石蜡包埋等，但这些方法易使组织块皱缩，切片韧性差，不能保证每张切片都较完整点，不太适合大块颞骨组织。采用火棉胶包埋组织不易收缩，保证了组织的正常结构，由于其柔韧性好，切片不易碎裂，成功率高[4]。在较长时间的浸胶过程中磨口瓶口应涂以少量的凡士林，防止空气中的水分进入。若溶液与空气中的水分接触，溶液变白呈胶冻样。如果此情况发生，应将火棉胶重新配制，从最低浓度重新浸胶。
3.3 包埋
用10%火棉胶包埋优于12%的，它不易产生气泡，火棉胶与包埋框四周的接触较为完全。由于包埋液浓度低，放置氯仿液中浸泡时间应延长到24 h。
2.4 切片
酒精可使蛋白凝固，所以不用蛋白甘油做玻片的粘合剂。预备的玻片涂以4%铬矾明胶。其粘附性较好，可以防止染色和脱水过程中的脱片。如切片卷曲可用同样大小的纸片，浸湿后贴附于标本的表面，这样组织切片平坦地附于纸片上，可有效地防止切片的卷曲。由于定位的洞存在，所以勿施用丁香油溶解火棉胶。
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2.5 扫描
将定位孔对准非常关键，否则重建的结构不精确。扫描时应用透光扫描，可以获得较为清晰的图像。作者采用本校医工系编制的TAIWAN 32软件对结构进行勾画，可同时对12个结构进行三维的多方位立体显示[5]。
参考文献
[1]耿 慧，丁大连. 豚鼠颞骨火棉胶制片技术[J].中华耳鼻咽喉科杂志, 1996, 31(5):262～263.
[2]齐 玲. 火棉胶制片技术的改进[J]. 哈尔滨医科大学学报, 1987, 6:59～62.
[3]戴 朴，姜泗长. 听骨链的计算机三维重建及力学模型建立[J]. 中华耳鼻咽喉科杂志，1991, 1:17～21
[4]战 雅. 火棉胶石蜡整块染色耳蜗的制作[J]. 解剖科学进展，1998, 4(3):282～283.
[5]吕庆文，李树祥，江贵平. 大脑CT图像三维重建的快速内插技术[J]. 第一军医大学学报，1995, 15(3):276～277.
1999-01-10, 百拇医药
单位：陈合新(第一军医大学南方医院耳鼻咽喉科，广东 广州 510515)；刘小蓉(第一军医大学组织胚胎教研室，广东 广州 510515)；颜玲(第一军医大学南方医院整形科，广东 广州 510515)
关键词：颞骨；三维重建
第一军医大学学报000135 中图分类号：R76 文献标识码：A 文章编号：1000-2588(2000)01-0021-01
颞骨内部结构复杂，组织成份较多，常规组织切片所示为二维图像，建立三维结构比较困难，所以在临床及教学中该部位为一难点。采用CT及MRI进行的三维重建对精细的中内耳特别是膜性结构显示往往不太满意。作者采用颞骨火棉胶包埋连续片技术行中内耳及其毗邻结构的三维重建，取得满意的结果。现将制作过程和体会报告如下。
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1 制作过程
选用较为新鲜的头颅标本，用3.6%盐酸浸泡4周，期间更换液体1次。系列酒精脱水，每个梯度1周。常规用2%、4%、6%、8%、10%和12%梯度火棉胶溶液，每梯度浸胶1月以上[1，2]。用10%的火棉胶溶液包埋，20 min后将标本倒置于氯仿溶液中24 h。于70%酒精溶液中以备切片。将包埋块加以修整，用直径为0.5 mm的钻头于包埋块四个角垂直打洞，为扫描时定位用，注意勿损伤组织[3]。注射器抽吸4%明胶加等量的墨汁洞内注射，4～6 h后切片，对准定位孔，应用透光扫描。
2 制作体会
2.1脱钙选择新鲜的头颅标本，其内部的粘膜及其它软组织保存较好，便于精细结构观察。脱钙时间过长或应用盐酸浓度过高易损伤软组织。脱钙的颞骨硬度如鼻尖即可，用细针比较容易刺入为宜。脱钙不充分不仅易损伤刀片，同时对组织结构也易造成损伤。
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2.2 浸胶
组织学中包埋的方法较多，如明胶、石蜡包埋等，但这些方法易使组织块皱缩，切片韧性差，不能保证每张切片都较完整点，不太适合大块颞骨组织。采用火棉胶包埋组织不易收缩，保证了组织的正常结构，由于其柔韧性好，切片不易碎裂，成功率高[4]。在较长时间的浸胶过程中磨口瓶口应涂以少量的凡士林，防止空气中的水分进入。若溶液与空气中的水分接触，溶液变白呈胶冻样。如果此情况发生，应将火棉胶重新配制，从最低浓度重新浸胶。
3.3 包埋
用10%火棉胶包埋优于12%的，它不易产生气泡，火棉胶与包埋框四周的接触较为完全。由于包埋液浓度低，放置氯仿液中浸泡时间应延长到24 h。
2.4 切片
酒精可使蛋白凝固，所以不用蛋白甘油做玻片的粘合剂。预备的玻片涂以4%铬矾明胶。其粘附性较好，可以防止染色和脱水过程中的脱片。如切片卷曲可用同样大小的纸片，浸湿后贴附于标本的表面，这样组织切片平坦地附于纸片上，可有效地防止切片的卷曲。由于定位的洞存在，所以勿施用丁香油溶解火棉胶。
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2.5 扫描
将定位孔对准非常关键，否则重建的结构不精确。扫描时应用透光扫描，可以获得较为清晰的图像。作者采用本校医工系编制的TAIWAN 32软件对结构进行勾画，可同时对12个结构进行三维的多方位立体显示[5]。
参考文献
[1]耿 慧，丁大连. 豚鼠颞骨火棉胶制片技术[J].中华耳鼻咽喉科杂志, 1996, 31(5):262～263.
[2]齐 玲. 火棉胶制片技术的改进[J]. 哈尔滨医科大学学报, 1987, 6:59～62.
[3]戴 朴，姜泗长. 听骨链的计算机三维重建及力学模型建立[J]. 中华耳鼻咽喉科杂志，1991, 1:17～21
[4]战 雅. 火棉胶石蜡整块染色耳蜗的制作[J]. 解剖科学进展，1998, 4(3):282～283.
[5]吕庆文，李树祥，江贵平. 大脑CT图像三维重建的快速内插技术[J]. 第一军医大学学报，1995, 15(3):276～277.
1999-01-10, 百拇医药