蒲黄及不同炮制品中总黄酮和多糖含量分析
作者：席先蓉 李寿星
单位：席先蓉(贵阳中医学院 药学系，贵州 贵阳 550002)；李寿星(贵州省神奇制药厂，贵州 龙里 551200)
关键词：蒲黄；炮制；总黄酮；多糖；含量测定
中国中药杂志000109 摘 要：目的：探讨蒲黄炮制与其有效成分总黄酮、多糖含量的关系。方法：分光光度法。结果：蒲黄及各炮制品中总黄酮含量按如下顺序减少：生蒲黄>酒炒蒲黄>醋炒蒲黄>140 ℃烘蒲黄>炒蒲黄>180 ℃烘蒲黄>焦蒲黄>220 ℃烘蒲黄>炭蒲黄，除酒炒蒲黄外，各炮制品中总黄酮含量与生蒲黄相比差异极显著；醋炒蒲黄、140 ℃烘蒲黄、炒蒲黄、180 ℃烘蒲黄和焦蒲黄中多糖含量与生蒲黄相比明显增加，炭蒲黄则显著降低，酒炒蒲黄和220 ℃烘蒲黄却无显著性差异。结论：炮制温度、辅料黄酒和米醋能使蒲黄中总黄酮和多糖含量产生变化。
Analysis on Contents of Flavonoids and Polysaccharides
, 百拇医药
in Pollen of Typha angustifolia L. and
Its Different Processed Products
XI Xian-rong
(Department of Pharmacy,Guiyang Colllege of TCM,Guizhou Guiyang 550002，China)
LI Shou-xing
(Guizhou Provincial Shenqi Pharmaceutical Factory, Guizhou Longli 551200,China)
Abstract：Objective:To explore the relationship between processing of the pollen of Typha angustifolia (TA)and the fluctuation of contents of its effective components—— flavonoids and polysaccharieds.Method:The contents of flavonoids and polysaccharides in TA and in the different processed products of TA were determined by spectrophotometry. Results:The contents of flavonoids in TA changed as follows:unprocessed TA(1)>TA stir fried with yellow wine(2)>TA stir fried with vinegar(3)>TA dried at 140℃(4)>parched TA(5)>TA dried at 180℃(6)>scorched TA(7)>TA dried at 220℃(8)>charcoal TA(9).The statisticd analysis showed that the flavonoid contents in raw TA were significantly different from those in the different processed products(P<0.01)of TA except 2.The polysaccharied contents increased in 4,5,6 and 7 significntly (P<0.01 or P<0.05),while decreased in 9 significantly(P<0.01).As compared with the polysaccharide contents in 1,no significant changes occured in those in 2 and 8.Conclusion:Processing temperature,yellow wine and vinegar could stimulate the content change of chemical constituents in TA,influencing flavonoids and polysaccharides in different degrees.
, 百拇医药
Kew words：pollen of Typhaangustifolia;drug-processing;flavonoids;
polysaccharids;content determination▲
蒲黄系香蒲科香蒲属多种植物的花粉，药用历史悠久。汉代《神农本草经》列为上品。具有止血、化瘀、通淋的功效。用于血瘀所致经闭、痛经、产后瘀滞腹痛、跌打损伤等。对崩漏、吐血、衄血、尿血、便血等症有止血作用。在临床应用时，除直接用生品外，还广泛用其炮制品。其炮制前后临床药效的改变，首栽于宋大明日华子《诸家本草》：“破血消肿者，生用之；补血止血者，须炒用”。现代对炮制作用的认识与古代基本相同，认为生品偏于活血行瘀，止痛，炮制后偏于止血。有文献[1]报道，生蒲黄具有延长小鼠凝血时间和较大剂量下的促纤溶活性，而炒蒲黄和炭蒲黄则能明显缩短小鼠凝血时间，无促纤溶活性。另据文献[2]，蒲黄水煎液及提取物总黄酮、有机酸、多糖等对ADP、花生四烯酸及胶原诱导家兔体内外血小板聚集功能均有明显抑制作用，其中黄酮类化合物为蒲黄抗血小板聚集的主要成分。Gibbs等[3]从蒲黄中分离得到一种多糖，此多糖既具有抗凝血活性，又具有促凝血活性(活性和浓度有关)。因此选择蒲黄中有效成分黄酮类化合物及多糖为指标，测定蒲黄及不同炒制品，不同烘制品中含量变化，以探讨蒲黄炮制的意义。
, http://www.100md.com
1 仪器、药品及试剂
UV-240型分光光度计(日本岛津)，721-B型分光光度计(上海分析仪器三厂)。
对照品芦丁购自中国药品生物制品检定所。其余试剂均为分析纯。生品蒲黄经药学系中药鉴定教研室刘副教授鉴定为香蒲科香蒲属植物水烛香蒲Typha angustifolia L.的干燥花粉。
2 蒲黄及不同炮制品中总黄酮、多糖含量测定
2.1 药品炮制
生蒲黄：揉碎结块，过180目筛。
炒蒲黄：取净蒲黄置热锅中，用文火炒至橙黄色，取出，放凉。焦蒲黄：取净蒲黄置热锅中，用文武火炒至褐色，取出，放凉。炭蒲黄：取净蒲黄置热锅中，用武火炒至表面黑褐色，间见少许均匀的棕黄色星点者，喷淋清水少许，熄灭火星，取出，晾干。酒炒蒲黄：取净蒲黄，按10∶2加入黄酒，喷匀，文火炒干。醋炒蒲黄：取净蒲黄，按10∶1.5加米醋，喷匀，文火炒干。蒲黄5个炒品的得率依次分别为95.03%，87.06%，78.40%，97.46%和97.89%。
, http://www.100md.com
分别取净蒲黄，平摊于搪瓷盘内，入电热恒温烘箱，各于140 ℃，180 ℃和220 ℃烘10 min，取出放凉即得。3种烘制品的颜色分别为浅褐、褐色和黑褐色，得率则依次分别为93.85%,86.21%和80.28%。
2.2 样品溶液制备
取生蒲黄及各炮制品各约2 g，精密称定，用滤纸包好。分置于索氏提取器中，用石油醚(60～90 ℃)水浴回流脱脂2次(每次2 h)。弃石油醚提取液。蒲黄挥干石油醚后，加入80%乙醇，水浴回流3 h，提尽黄酮。另用少量80%乙醇多次洗涤蒲黄，并入提取液中，定量转移入100 ml容量瓶中，加80%乙醇至刻度，摇匀，即得测总黄酮之各蒲黄样品液。
提尽黄酮后之蒲黄，用80%乙醇继续提取以除去单糖及一些甙类。弃提取液。取出蒲黄残渣，挥干乙醇后，转移入烧杯中，加入适量蒸馏水，水浴煎煮3次(每次6 h)。减压抽滤，各次滤液合并。水浴浓缩后，用蒸馏水定容至200 ml，即为测多糖之各蒲黄样品液。
, 百拇医药
2.3 总黄酮含量测定[4]
2.3.1 标准曲线的制备 精密吸取0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5和3.0 ml芦丁80%乙醇对照液(0.104 mg.ml-1)，分置于10 ml容量瓶中，各加入0.2 mol.L-1三氯化铝溶液2.5 ml，1 mol.L-1醋酸钾溶液4.0 ml，80%乙醇稀至刻度，摇匀，放置5 min。以第1管作空白，在波长272 nm处测定吸收度A值。以浓度C对吸收度A进行直线回归，得回归方程A=0.05917+2.707C，r=0.9995。
2.3.2 样品测定 分别将测总黄酮之各样品液定量稀释5倍后，再精密吸取各稀释液适量于10 ml容量瓶中，照标准曲线制备项下方法操作，测定吸收度，由回归方程求出各稀释液中总黄酮浓度，然后计算百分含量。结果见表1。
, http://www.100md.com
表1 蒲黄及不同炮制品中总黄酮与多糖含量 % 样品
总黄酮
多糖
RSD
RSD
生蒲黄
1.965
1.63
5.539
2.34
, http://www.100md.com
炒蒲黄
1.660
0.75
5.941
1.14
焦蒲黄
1.278
1.80
5.854
1.03
炭蒲黄
0.870
1.59
, http://www.100md.com
5.155
1.02
酒炒蒲黄
1.955
0.32
5.592
2.27
醋炒蒲黄
1.868
0.38
5.818
2.42
140℃烘蒲黄
, 百拇医药
1.690
0.44
5.928
1.21
180℃烘蒲黄
1.518
0.61
7.178
1.72
220℃烘蒲黄
0.900
0.50
5.505
, http://www.100md.com
0.46
注：n=3
2.3.3 回收试验 精密称取生蒲黄适量，加入芦丁对照品适量，按样品液制备和样品测定方法操作，测得平均回收率为96.87%，RSD=1.63%(n=3)。
2.3.4 稳定性考察 按样品测定方法操作，测定同一供试液在不同时间吸收度。结果表明，吸收度值在5～30 min内基本不变。因此测定应控制在30 min内完成。
2.4 多糖含量测定[5]
2.4.1 样品测定 以葡萄糖作对照品，用硫酸-苯酚法测得回归直线方程为：A=3.929×10-4+1.760×10-3C，r=0.9993(n=8)。然后用蒲黄精制多糖(自制)测定换算因子为1.783。在此基础上测定各样品中多糖含量。结果见表1。
, 百拇医药
2.4.2 稳定性试验 用硫酸-苯酚法测定同一样品液在不同时间吸收度，吸收度值至少在48 h内不变。
2.4.3 回收率测定 精密称取生蒲黄适量，加入精制蒲黄多糖适量，按样品液制备和多糖含量测定方法操作，测得多糖平均回收率为98.48%，RSD=1.46%(n=3)。
3 数据统计分析
分别对各样品液总黄酮含量和多糖含量测定数据作单因素试验的方差分析，以检验各样品液的总黄酮含量或多糖含量间有无显著差异，方差分析结果见表2。
表2 方差分析 样品
方差来源
离差平方和
自由度
, 百拇医药
方差
F值
临界值
结论
总黄酮
组间
4.2669
8
0.5334
2319.1
F0.005=4.14
P< 0.005
组内
, http://www.100md.com
0.0041
18
0.0002
总和
4.2710
26
多糖
组间
13.8580
8
1.7323
184.29
F0.005=4.14
, 百拇医药
P< 0.005
组内
0.1695
18
0.0094
总和
14.0580
26
方差分析结果显示，在显著水平α=0.005下，炮制方法不同，对蒲黄中总黄酮及多糖含量影响均极显著。为了具体了解各样品间总黄酮及多糖含量差异是否显著，进一步作多重q检验。比较结果列于表3。 表3 各样品液中总黄酮和多糖含量多重q检验 两两样品液
总黄酮1)
, 百拇医药
P
多糖1)
P
生蒲黄，炒蒲黄
0.305
<0.01
0.403
<0.01
生蒲黄，焦蒲黄
0.687
<0.01
0.315
<0.05
, 百拇医药
生蒲黄，炭蒲黄
1.095
<0.01
0.384
<0.01
生蒲黄，酒炒蒲黄
0.010
0.053
生蒲黄，醋炒蒲黄
0.097
<0.01
0.279
, http://www.100md.com <0.05
生蒲黄，140℃烘蒲黄
0.275
<0.01
0.389
<0.01
生蒲黄，180℃烘蒲黄
0.447
<0.01
1.639
<0.01
生蒲黄，220℃烘蒲黄
, 百拇医药
1.066
<0.01
0.034
炒蒲黄，焦蒲黄
0.382
<0.01
0.087
炒蒲黄，炭蒲黄
0.790
<0.01
0.786
<0.01
炒蒲黄，酒炒蒲黄
, 百拇医药
0.295
<0.01
0.349
<0.01
炒蒲黄，醋炒蒲黄
0.208
<0.01
0.123
炒蒲黄，140℃烘蒲黄
0.030
0.013
炒蒲黄，180℃烘蒲黄
, 百拇医药
0.142
<0.01
1.237
<0.01
炒蒲黄，220℃烘蒲黄
0.760
<0.01
0.436
<0.01
焦蒲黄，炭蒲黄
0.408
<0.01
, 百拇医药 0.699
<0.01
焦蒲黄，酒炒蒲黄
0.677
<0.01
0.262
<0.01
焦蒲黄，醋炒蒲黄
0.596
<0.01
0.036
焦蒲黄，140℃烘蒲黄
0.412
, 百拇医药
<0.01
0.072
焦蒲黄，180℃烘蒲黄
0.240
<0.01
1.324
<0.01
焦蒲黄，220℃烘蒲黄
0.378
<0.01
0.349
<0.01
, http://www.100md.com 炭蒲黄，酒炒蒲黄
1.085
<0.01
0.437
<0.01
炭蒲黄，醋炒蒲黄
0.998
<0.01
0.663
<0.01
炭蒲黄，140℃烘蒲黄
0.820
<0.01
, 百拇医药
0.773
<0.01
炭蒲黄，180℃烘蒲黄
0.648
<0.01
2.203
<0.01
炭蒲黄，220℃烘蒲黄
0.030
0.350
<0.01
酒炒蒲黄，醋炒蒲黄
, 百拇医药
0.087
<0.01
0.226
酒炒蒲黄，140℃烘蒲黄
0.265
<0.01
0.336
<0.05
酒炒蒲黄，180℃烘蒲黄
0.437
<0.01
1.586
, 百拇医药
<0.01
酒炒蒲黄，220℃烘蒲黄
1.056
<0.01
0.087
醋炒蒲黄，140℃烘蒲黄
0.178
<0.01
0.110
醋炒蒲黄，180℃烘蒲黄
0.350
<0.01
, 百拇医药
1.360
<0.01
醋炒蒲黄，220℃烘蒲黄
0.968
<0.01
0.313
<0.05
140℃烘蒲黄，180℃烘蒲黄
0.172
<0.01
1.250
<0.01
, 百拇医药
140℃烘蒲黄，220℃烘蒲黄
0.790
<0.01
0.423
<0.01
180℃烘蒲黄，220℃烘蒲黄
0.618
<0.01
1.673
<0.01
注：1)为两两样品液中总黄酮或多糖百分含量差值之绝对值
, http://www.100md.com 4 小结与讨论
4.1 未加辅料的蒲黄不同炒制品或烘制品总黄酮含量分别按生蒲黄、炒蒲黄、焦蒲黄、炭蒲黄或140 ℃烘蒲黄、180 ℃烘蒲黄、220 ℃烘蒲黄次序依次减少。数据经统计分析后显示它们的含量有极显著差异。这应当与黄酮类化合物在高温下不稳定，结构易发生变化或遭到破坏有关，而且温度越高，破坏性越大，含量减少越多。正常人体内血液凝固和纤维蛋白溶解这两个过程处于动态平衡，即血液在生理功能上存在凝血抗凝血两个对立而统一的矛盾过程，二者相辅相成。血小板聚集性与血液凝固性紧密相关。活血化瘀药药理作用之一是明显抗血小板聚集，其终极结果是改善器官的血液循环，使血流通达。蒲黄中总黄酮具明显抗血小板聚集作用[2]，是蒲黄活血化瘀主要有效成分之一。蒲黄经过炮制后，活血化瘀有效成分总黄酮含量减少，则止血作用相对增强。这说明蒲黄“生则能行，熟则能止”是有一定道理的。
4.2 多糖含量测定结果为：180 ℃烘蒲黄>炒蒲黄>140 ℃烘蒲黄>焦蒲黄>醋炒蒲黄>酒炒蒲黄>生蒲黄>220 ℃烘蒲黄>炭蒲黄。炒蒲黄、焦蒲黄、醋炒蒲黄或140 ℃烘蒲黄、180 ℃烘蒲黄，其花粉经过短时间加热，细胞壁破裂，有利于多糖的溶出，因此含量较生蒲黄明显增加。特别应指出的是，180 ℃烘品多糖含量最高，这可能是在180 ℃烘10 min，蒲黄花粉的细胞壁破裂得最彻底，而多糖结构在此条件下又未遭到破坏，故多糖含量最高。炭蒲黄可能是由于受热温度高，药材部分炭化，多糖结构破坏剧裂，而造成含量显著降低。Gibbs等人的研究表明，蒲黄中的多糖浓度低于100 μg.ml-1时，可加速血浆复钙时间，较高浓度时则抑制血浆复钙时间。生蒲黄及炒蒲黄等多糖含量高，炭蒲黄含量低，也说明了蒲黄“生则能行、熟则能止”是有一定依据的。当然从多糖含量这个角度来说，“熟”指的是将蒲黄炒炭。
, 百拇医药
4.3 酒炒蒲黄与生蒲黄相比，总黄酮及多糖含量均无显著性差异，而醋炒蒲黄与生蒲黄相比，总黄酮含量显著减少(P< 0.01)，多糖含量明显增加(P<0.05)。此外，酒炒蒲黄与醋炒蒲黄都经过一定时间的加热。这一实验结果提示，炮制时加酒或醋均对蒲黄的化学成分含量变化产生影响，而且产生的影响各不相同(如测定结果显示炮制时加酒抵消了加热对总黄酮、多糖的影响，加醋则不能)。
4.4 用烘法和炒法炮制蒲黄，前者易于操作，温度容易控制，受热均匀，能再现实验结果，成品得率高，有效成分损失少。
参考文献：
[1]刘 斌，陆蕴如，孙建宁.蒲黄不同炮制品药理活性比较研究.中成药，1998,20(3)：135
[2]尹玉良，俞腾飞，贾世山.中药蒲黄的药理研究进展.中国中药杂志，1992,17(6)：374
, 百拇医药
[3]Gibbs A,Green C,Doctor V M， et al.Isolation and Anticoagulant Properties of Polysaccharides of Typha angustata and Daemonorops Species.Thromb Res,1983，32(2):27
[4]孟宪纾，陈发奎.中成药分析.北京：人民卫生出版社，1990.323
[5]Dubois M,Gilles K A, Hamilton J K,et al.Anal Chem,1956,28:350
收稿日期：1999-01-13, 百拇医药
单位：席先蓉(贵阳中医学院 药学系，贵州 贵阳 550002)；李寿星(贵州省神奇制药厂，贵州 龙里 551200)
关键词：蒲黄；炮制；总黄酮；多糖；含量测定
中国中药杂志000109 摘 要：目的：探讨蒲黄炮制与其有效成分总黄酮、多糖含量的关系。方法：分光光度法。结果：蒲黄及各炮制品中总黄酮含量按如下顺序减少：生蒲黄>酒炒蒲黄>醋炒蒲黄>140 ℃烘蒲黄>炒蒲黄>180 ℃烘蒲黄>焦蒲黄>220 ℃烘蒲黄>炭蒲黄，除酒炒蒲黄外，各炮制品中总黄酮含量与生蒲黄相比差异极显著；醋炒蒲黄、140 ℃烘蒲黄、炒蒲黄、180 ℃烘蒲黄和焦蒲黄中多糖含量与生蒲黄相比明显增加，炭蒲黄则显著降低，酒炒蒲黄和220 ℃烘蒲黄却无显著性差异。结论：炮制温度、辅料黄酒和米醋能使蒲黄中总黄酮和多糖含量产生变化。
Analysis on Contents of Flavonoids and Polysaccharides
, 百拇医药
in Pollen of Typha angustifolia L. and
Its Different Processed Products
XI Xian-rong
(Department of Pharmacy,Guiyang Colllege of TCM,Guizhou Guiyang 550002，China)
LI Shou-xing
(Guizhou Provincial Shenqi Pharmaceutical Factory, Guizhou Longli 551200,China)
Abstract：Objective:To explore the relationship between processing of the pollen of Typha angustifolia (TA)and the fluctuation of contents of its effective components—— flavonoids and polysaccharieds.Method:The contents of flavonoids and polysaccharides in TA and in the different processed products of TA were determined by spectrophotometry. Results:The contents of flavonoids in TA changed as follows:unprocessed TA(1)>TA stir fried with yellow wine(2)>TA stir fried with vinegar(3)>TA dried at 140℃(4)>parched TA(5)>TA dried at 180℃(6)>scorched TA(7)>TA dried at 220℃(8)>charcoal TA(9).The statisticd analysis showed that the flavonoid contents in raw TA were significantly different from those in the different processed products(P<0.01)of TA except 2.The polysaccharied contents increased in 4,5,6 and 7 significntly (P<0.01 or P<0.05),while decreased in 9 significantly(P<0.01).As compared with the polysaccharide contents in 1,no significant changes occured in those in 2 and 8.Conclusion:Processing temperature,yellow wine and vinegar could stimulate the content change of chemical constituents in TA,influencing flavonoids and polysaccharides in different degrees.
, 百拇医药
Kew words：pollen of Typhaangustifolia;drug-processing;flavonoids;
polysaccharids;content determination▲
蒲黄系香蒲科香蒲属多种植物的花粉，药用历史悠久。汉代《神农本草经》列为上品。具有止血、化瘀、通淋的功效。用于血瘀所致经闭、痛经、产后瘀滞腹痛、跌打损伤等。对崩漏、吐血、衄血、尿血、便血等症有止血作用。在临床应用时，除直接用生品外，还广泛用其炮制品。其炮制前后临床药效的改变，首栽于宋大明日华子《诸家本草》：“破血消肿者，生用之；补血止血者，须炒用”。现代对炮制作用的认识与古代基本相同，认为生品偏于活血行瘀，止痛，炮制后偏于止血。有文献[1]报道，生蒲黄具有延长小鼠凝血时间和较大剂量下的促纤溶活性，而炒蒲黄和炭蒲黄则能明显缩短小鼠凝血时间，无促纤溶活性。另据文献[2]，蒲黄水煎液及提取物总黄酮、有机酸、多糖等对ADP、花生四烯酸及胶原诱导家兔体内外血小板聚集功能均有明显抑制作用，其中黄酮类化合物为蒲黄抗血小板聚集的主要成分。Gibbs等[3]从蒲黄中分离得到一种多糖，此多糖既具有抗凝血活性，又具有促凝血活性(活性和浓度有关)。因此选择蒲黄中有效成分黄酮类化合物及多糖为指标，测定蒲黄及不同炒制品，不同烘制品中含量变化，以探讨蒲黄炮制的意义。
, http://www.100md.com
1 仪器、药品及试剂
UV-240型分光光度计(日本岛津)，721-B型分光光度计(上海分析仪器三厂)。
对照品芦丁购自中国药品生物制品检定所。其余试剂均为分析纯。生品蒲黄经药学系中药鉴定教研室刘副教授鉴定为香蒲科香蒲属植物水烛香蒲Typha angustifolia L.的干燥花粉。
2 蒲黄及不同炮制品中总黄酮、多糖含量测定
2.1 药品炮制
生蒲黄：揉碎结块，过180目筛。
炒蒲黄：取净蒲黄置热锅中，用文火炒至橙黄色，取出，放凉。焦蒲黄：取净蒲黄置热锅中，用文武火炒至褐色，取出，放凉。炭蒲黄：取净蒲黄置热锅中，用武火炒至表面黑褐色，间见少许均匀的棕黄色星点者，喷淋清水少许，熄灭火星，取出，晾干。酒炒蒲黄：取净蒲黄，按10∶2加入黄酒，喷匀，文火炒干。醋炒蒲黄：取净蒲黄，按10∶1.5加米醋，喷匀，文火炒干。蒲黄5个炒品的得率依次分别为95.03%，87.06%，78.40%，97.46%和97.89%。
, http://www.100md.com
分别取净蒲黄，平摊于搪瓷盘内，入电热恒温烘箱，各于140 ℃，180 ℃和220 ℃烘10 min，取出放凉即得。3种烘制品的颜色分别为浅褐、褐色和黑褐色，得率则依次分别为93.85%,86.21%和80.28%。
2.2 样品溶液制备
取生蒲黄及各炮制品各约2 g，精密称定，用滤纸包好。分置于索氏提取器中，用石油醚(60～90 ℃)水浴回流脱脂2次(每次2 h)。弃石油醚提取液。蒲黄挥干石油醚后，加入80%乙醇，水浴回流3 h，提尽黄酮。另用少量80%乙醇多次洗涤蒲黄，并入提取液中，定量转移入100 ml容量瓶中，加80%乙醇至刻度，摇匀，即得测总黄酮之各蒲黄样品液。
提尽黄酮后之蒲黄，用80%乙醇继续提取以除去单糖及一些甙类。弃提取液。取出蒲黄残渣，挥干乙醇后，转移入烧杯中，加入适量蒸馏水，水浴煎煮3次(每次6 h)。减压抽滤，各次滤液合并。水浴浓缩后，用蒸馏水定容至200 ml，即为测多糖之各蒲黄样品液。
, 百拇医药
2.3 总黄酮含量测定[4]
2.3.1 标准曲线的制备 精密吸取0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5和3.0 ml芦丁80%乙醇对照液(0.104 mg.ml-1)，分置于10 ml容量瓶中，各加入0.2 mol.L-1三氯化铝溶液2.5 ml，1 mol.L-1醋酸钾溶液4.0 ml，80%乙醇稀至刻度，摇匀，放置5 min。以第1管作空白，在波长272 nm处测定吸收度A值。以浓度C对吸收度A进行直线回归，得回归方程A=0.05917+2.707C，r=0.9995。
2.3.2 样品测定 分别将测总黄酮之各样品液定量稀释5倍后，再精密吸取各稀释液适量于10 ml容量瓶中，照标准曲线制备项下方法操作，测定吸收度，由回归方程求出各稀释液中总黄酮浓度，然后计算百分含量。结果见表1。
, http://www.100md.com
表1 蒲黄及不同炮制品中总黄酮与多糖含量 % 样品
总黄酮
多糖
RSD
RSD
生蒲黄
1.965
1.63
5.539
2.34
, http://www.100md.com
炒蒲黄
1.660
0.75
5.941
1.14
焦蒲黄
1.278
1.80
5.854
1.03
炭蒲黄
0.870
1.59
, http://www.100md.com
5.155
1.02
酒炒蒲黄
1.955
0.32
5.592
2.27
醋炒蒲黄
1.868
0.38
5.818
2.42
140℃烘蒲黄
, 百拇医药
1.690
0.44
5.928
1.21
180℃烘蒲黄
1.518
0.61
7.178
1.72
220℃烘蒲黄
0.900
0.50
5.505
, http://www.100md.com
0.46
注：n=3
2.3.3 回收试验 精密称取生蒲黄适量，加入芦丁对照品适量，按样品液制备和样品测定方法操作，测得平均回收率为96.87%，RSD=1.63%(n=3)。
2.3.4 稳定性考察 按样品测定方法操作，测定同一供试液在不同时间吸收度。结果表明，吸收度值在5～30 min内基本不变。因此测定应控制在30 min内完成。
2.4 多糖含量测定[5]
2.4.1 样品测定 以葡萄糖作对照品，用硫酸-苯酚法测得回归直线方程为：A=3.929×10-4+1.760×10-3C，r=0.9993(n=8)。然后用蒲黄精制多糖(自制)测定换算因子为1.783。在此基础上测定各样品中多糖含量。结果见表1。
, 百拇医药
2.4.2 稳定性试验 用硫酸-苯酚法测定同一样品液在不同时间吸收度，吸收度值至少在48 h内不变。
2.4.3 回收率测定 精密称取生蒲黄适量，加入精制蒲黄多糖适量，按样品液制备和多糖含量测定方法操作，测得多糖平均回收率为98.48%，RSD=1.46%(n=3)。
3 数据统计分析
分别对各样品液总黄酮含量和多糖含量测定数据作单因素试验的方差分析，以检验各样品液的总黄酮含量或多糖含量间有无显著差异，方差分析结果见表2。
表2 方差分析 样品
方差来源
离差平方和
自由度
, 百拇医药
方差
F值
临界值
结论
总黄酮
组间
4.2669
8
0.5334
2319.1
F0.005=4.14
P< 0.005
组内
, http://www.100md.com
0.0041
18
0.0002
总和
4.2710
26
多糖
组间
13.8580
8
1.7323
184.29
F0.005=4.14
, 百拇医药
P< 0.005
组内
0.1695
18
0.0094
总和
14.0580
26
方差分析结果显示，在显著水平α=0.005下，炮制方法不同，对蒲黄中总黄酮及多糖含量影响均极显著。为了具体了解各样品间总黄酮及多糖含量差异是否显著，进一步作多重q检验。比较结果列于表3。 表3 各样品液中总黄酮和多糖含量多重q检验 两两样品液
总黄酮1)
, 百拇医药
P
多糖1)
P
生蒲黄，炒蒲黄
0.305
<0.01
0.403
<0.01
生蒲黄，焦蒲黄
0.687
<0.01
0.315
<0.05
, 百拇医药
生蒲黄，炭蒲黄
1.095
<0.01
0.384
<0.01
生蒲黄，酒炒蒲黄
0.010
0.053
生蒲黄，醋炒蒲黄
0.097
<0.01
0.279
, http://www.100md.com <0.05
生蒲黄，140℃烘蒲黄
0.275
<0.01
0.389
<0.01
生蒲黄，180℃烘蒲黄
0.447
<0.01
1.639
<0.01
生蒲黄，220℃烘蒲黄
, 百拇医药
1.066
<0.01
0.034
炒蒲黄，焦蒲黄
0.382
<0.01
0.087
炒蒲黄，炭蒲黄
0.790
<0.01
0.786
<0.01
炒蒲黄，酒炒蒲黄
, 百拇医药
0.295
<0.01
0.349
<0.01
炒蒲黄，醋炒蒲黄
0.208
<0.01
0.123
炒蒲黄，140℃烘蒲黄
0.030
0.013
炒蒲黄，180℃烘蒲黄
, 百拇医药
0.142
<0.01
1.237
<0.01
炒蒲黄，220℃烘蒲黄
0.760
<0.01
0.436
<0.01
焦蒲黄，炭蒲黄
0.408
<0.01
, 百拇医药 0.699
<0.01
焦蒲黄，酒炒蒲黄
0.677
<0.01
0.262
<0.01
焦蒲黄，醋炒蒲黄
0.596
<0.01
0.036
焦蒲黄，140℃烘蒲黄
0.412
, 百拇医药
<0.01
0.072
焦蒲黄，180℃烘蒲黄
0.240
<0.01
1.324
<0.01
焦蒲黄，220℃烘蒲黄
0.378
<0.01
0.349
<0.01
, http://www.100md.com 炭蒲黄，酒炒蒲黄
1.085
<0.01
0.437
<0.01
炭蒲黄，醋炒蒲黄
0.998
<0.01
0.663
<0.01
炭蒲黄，140℃烘蒲黄
0.820
<0.01
, 百拇医药
0.773
<0.01
炭蒲黄，180℃烘蒲黄
0.648
<0.01
2.203
<0.01
炭蒲黄，220℃烘蒲黄
0.030
0.350
<0.01
酒炒蒲黄，醋炒蒲黄
, 百拇医药
0.087
<0.01
0.226
酒炒蒲黄，140℃烘蒲黄
0.265
<0.01
0.336
<0.05
酒炒蒲黄，180℃烘蒲黄
0.437
<0.01
1.586
, 百拇医药
<0.01
酒炒蒲黄，220℃烘蒲黄
1.056
<0.01
0.087
醋炒蒲黄，140℃烘蒲黄
0.178
<0.01
0.110
醋炒蒲黄，180℃烘蒲黄
0.350
<0.01
, 百拇医药
1.360
<0.01
醋炒蒲黄，220℃烘蒲黄
0.968
<0.01
0.313
<0.05
140℃烘蒲黄，180℃烘蒲黄
0.172
<0.01
1.250
<0.01
, 百拇医药
140℃烘蒲黄，220℃烘蒲黄
0.790
<0.01
0.423
<0.01
180℃烘蒲黄，220℃烘蒲黄
0.618
<0.01
1.673
<0.01
注：1)为两两样品液中总黄酮或多糖百分含量差值之绝对值
, http://www.100md.com 4 小结与讨论
4.1 未加辅料的蒲黄不同炒制品或烘制品总黄酮含量分别按生蒲黄、炒蒲黄、焦蒲黄、炭蒲黄或140 ℃烘蒲黄、180 ℃烘蒲黄、220 ℃烘蒲黄次序依次减少。数据经统计分析后显示它们的含量有极显著差异。这应当与黄酮类化合物在高温下不稳定，结构易发生变化或遭到破坏有关，而且温度越高，破坏性越大，含量减少越多。正常人体内血液凝固和纤维蛋白溶解这两个过程处于动态平衡，即血液在生理功能上存在凝血抗凝血两个对立而统一的矛盾过程，二者相辅相成。血小板聚集性与血液凝固性紧密相关。活血化瘀药药理作用之一是明显抗血小板聚集，其终极结果是改善器官的血液循环，使血流通达。蒲黄中总黄酮具明显抗血小板聚集作用[2]，是蒲黄活血化瘀主要有效成分之一。蒲黄经过炮制后，活血化瘀有效成分总黄酮含量减少，则止血作用相对增强。这说明蒲黄“生则能行，熟则能止”是有一定道理的。
4.2 多糖含量测定结果为：180 ℃烘蒲黄>炒蒲黄>140 ℃烘蒲黄>焦蒲黄>醋炒蒲黄>酒炒蒲黄>生蒲黄>220 ℃烘蒲黄>炭蒲黄。炒蒲黄、焦蒲黄、醋炒蒲黄或140 ℃烘蒲黄、180 ℃烘蒲黄，其花粉经过短时间加热，细胞壁破裂，有利于多糖的溶出，因此含量较生蒲黄明显增加。特别应指出的是，180 ℃烘品多糖含量最高，这可能是在180 ℃烘10 min，蒲黄花粉的细胞壁破裂得最彻底，而多糖结构在此条件下又未遭到破坏，故多糖含量最高。炭蒲黄可能是由于受热温度高，药材部分炭化，多糖结构破坏剧裂，而造成含量显著降低。Gibbs等人的研究表明，蒲黄中的多糖浓度低于100 μg.ml-1时，可加速血浆复钙时间，较高浓度时则抑制血浆复钙时间。生蒲黄及炒蒲黄等多糖含量高，炭蒲黄含量低，也说明了蒲黄“生则能行、熟则能止”是有一定依据的。当然从多糖含量这个角度来说，“熟”指的是将蒲黄炒炭。
, 百拇医药
4.3 酒炒蒲黄与生蒲黄相比，总黄酮及多糖含量均无显著性差异，而醋炒蒲黄与生蒲黄相比，总黄酮含量显著减少(P< 0.01)，多糖含量明显增加(P<0.05)。此外，酒炒蒲黄与醋炒蒲黄都经过一定时间的加热。这一实验结果提示，炮制时加酒或醋均对蒲黄的化学成分含量变化产生影响，而且产生的影响各不相同(如测定结果显示炮制时加酒抵消了加热对总黄酮、多糖的影响，加醋则不能)。
4.4 用烘法和炒法炮制蒲黄，前者易于操作，温度容易控制，受热均匀，能再现实验结果，成品得率高，有效成分损失少。
参考文献：
[1]刘 斌，陆蕴如，孙建宁.蒲黄不同炮制品药理活性比较研究.中成药，1998,20(3)：135
[2]尹玉良，俞腾飞，贾世山.中药蒲黄的药理研究进展.中国中药杂志，1992,17(6)：374
, 百拇医药
[3]Gibbs A,Green C,Doctor V M， et al.Isolation and Anticoagulant Properties of Polysaccharides of Typha angustata and Daemonorops Species.Thromb Res,1983，32(2):27
[4]孟宪纾，陈发奎.中成药分析.北京：人民卫生出版社，1990.323
[5]Dubois M,Gilles K A, Hamilton J K,et al.Anal Chem,1956,28:350
收稿日期：1999-01-13, 百拇医药