肾病综合征患儿外周血单个核细胞白细胞介素13的变化
作者：潘晓勤 陈荣华 张爱华 吴元俊 黄文彦 蔡毅
单位：潘晓勤(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 210029)； 陈荣华(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 210029)； 张爱华(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 210029)； 吴元俊(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 210029)； 黄文彦(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 210029)； 蔡毅(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 210029)
关键词：白细胞介素13；肾病综合征；外周血单个核细胞
肾病综合征患儿外周血单个核细胞白细胞介素13的变化 摘 要：目的 研究小儿原发性肾病综合征时白细胞介素13(IL-13)的变化。方法 对50例肾病综合征患儿和30例正常健康儿童外周血单个核细胞进行分离、培养，并应用双抗体夹心ELISA法检测培养上清中由Th2细胞来源的细胞因子IL-13的水平。结果 (1)原发性肾病综合征患儿急性期外周血单个核细胞培养上清中IL-13水平较缓解期和正常对照组显著升高，而缓解期降至正常水平。(2)肾炎性肾病患儿急性期IL-13水平显著高于单纯性肾病患儿。结论 IL-13在肾病综合征的发病机制中发挥着重要的作用。外周血单个核细胞培养上清中IL-13水平的变化可作为观察病情活动状态的一个免疫学指标。
, 百拇医药
白细胞介素13(IL-13)是新近发现的一种主要由Th2细胞产生的免疫调节性细胞因子，可抑制单核巨噬细胞和中性粒细胞炎症性细胞因子IL-6、IL-8、IL-1α、IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF)的产生以及促进IL-1受体拮抗剂(IL-1RA)的合成。近年来研究发现IL-13 mRNA在抗肾小球基底膜抗体诱导的肾小球肾炎早期表达增加[1]。但尚未见有IL-13在小儿肾病综合征中变化的报道，为此我们于1997年9月～1998年12月检测了50例肾病综合征患儿外周血单个核细胞(PBMC)培养上清中IL-13的变化，以探讨其在肾病综合征中的临床意义。
材料和方法
一、检测对象
肾病综合征组50例，男30例，女20例；平均年龄7.8(3～14)岁。其中单纯性肾病27例，男16例，女11例，平均年龄8.19(3～13)岁；肾炎性肾病23例，男16例，女7例，平均年龄7.35(3～11)岁。病理改变为微小病变型2例；系膜增殖性肾小球肾炎17例；膜增殖性肾小球肾炎1例；膜性肾病1例和局灶节段性肾小球硬化2例。肾病综合征的诊断符合全国儿科肾脏病科研协作组制定的诊断标准[2]。
, 百拇医药
正常对照组30例，男16例，女14例，平均年龄6.0(1.5～12)岁，均为正常的健康体检儿童。
二、方法
1.取材条件
于患儿入院后分别在激素治疗前尿蛋白阳性(急性期)和激素治疗后尿蛋白阴性时(缓解期)收集外周静脉血标本。
2.PBMC分离及培养
按泛影葡胺聚蔗糖法分离出PBMC，经Hanks液和RPMI1640液洗涤，台盼蓝拒染法观察细胞活性，调整细胞浓度至2×106/ml。在PHA终浓度为20 μg/ml，37℃和5%CO2条件下，培养48小时，收集培养上清，-70℃保存待检。
3.IL-13检测
, http://www.100md.com
应用特异性双抗体夹心ELISA法检测培养上清中IL-13浓度，试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司。按说明书操作。
三、统计学处理
检测结果以均数±标准差表示，实验数据经对数转换后采用t检验进行统计学处理。P<0.05表示有统计学意义。
结 果
一、肾病综合征患儿PBMC培养上清中IL-13水平的变化(见表1)
由表1可见，肾病综合征患儿急性期PBMC培养上清中IL-13水平显著高于缓解期和正常对照组(P<0.01)，而缓解期与正常对照组相比较无显著差异(P>0.05)。
表1 原发性肾病综合征患儿PBMC培养上清中IL-13的变化(
±s)
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例数
IL-13水平(pg/ml)
正常对照组
30
35.22±4.42
肾病综合征组
50
急性期
48.86±13.58*△
缓解期
37.72±8.33**
与正常对照组比较，P<0.01；**与正常对照组比较，P>0.05；△与缓解期比较，P<0.01
, 百拇医药
二、不同临床类型PBMC培养上清中IL-13的变化(见表2) 表2 单纯性肾病和肾炎性肾病患儿PBMC培养上清中IL-13的变化(±s)
分组
例数
IL-13水平(pg/ml)
单纯性肾病急性期
27
45.30±12.58
肾炎性肾病急性期
23
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53.02±13.78
表2结果提示，肾炎性肾病急性期PBMC培养上清中IL-13水平高于单纯性肾病，差异有非常显著性意义(P<0.05)。 讨 论
在肾小球肾炎的炎症反应过程中，肾脏固有细胞以及局部浸润的单核巨噬细胞和淋巴细胞受到炎症刺激后，可分泌多种炎症性细胞因子和其它炎症介质，如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α等，这些炎症介质又作用于肾脏固有细胞以及局部浸润的炎症细胞，造成炎症反应的瀑布效应，从而加重肾脏损害。IL-13是一种主要由Th2细胞产生的多功能的免疫调节性细胞因子，具有促进B细胞增殖、分化，增强NK细胞和单核巨噬细胞活性的作用。近年来的研究发现，IL-13可抑制单核巨噬细胞炎症性细胞因子的基因转录和蛋白合成。这些炎症因子主要有：IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α等，并且能够促单核巨噬细胞和中性粒细胞IL-1受体拮抗剂(IL-1RA)的产生[3]。由此我们设想，该细胞因子可能在体内对巨噬细胞功能也具有调节作用。通过抑制单核巨噬细胞、中性粒细胞分泌炎症性细胞因子以及促进IL-1RA的产生而发挥抗炎作用。
, http://www.100md.com
本研究结果表明，原发性肾病综合征患儿急性期，PBMC培养上清中IL-13水平较正常对照组显著升高，而缓解期降至正常，提示IL-13在肾病综合征的发病机制中发挥着一定的作用。Lakkis等[1]应用逆转-录聚合酶链反应研究IL-13 mRNA在抗肾小球基底膜抗体诱导的肾小球肾炎中的表达时发现，肾小球局部IL-13 mRNA在炎症诱导后48小时内表达增加，而对照组肾组织中IL-13 mRNA的表达未超过基准值。Saura等[4]研究证实IL-13可抑制TNF-α、IL-1β、IFN-γ及LPS激活的肾小球系膜细胞一氧化氮(NO)的产生及NO合酶mRNA的表达。Matsumoto等[5]研究证实IL-13可呈剂量依赖性地抑制脂质性肾病患者PBMC中血管通透因子(VPF)的释放。该作者同时还发现IL-13可显著抑制自发性和LPS活化的IgA肾病(IgAN)患者外周血单核细胞TNF和IL-8的产生[6]。这些研究结果提示：IL-13作为一种免疫调节性细胞因子，可通过抑制单核巨噬细胞炎症性细胞因子的产生和肾小球系膜细胞NO的合成而在肾小球肾炎的炎症反应中发挥抗炎作用。增高的IL-13可能是作为炎症介质分泌增加的一种反应，通过抑制炎症介质的产生而在肾小球炎症反应中发挥抗炎作用。
, http://www.100md.com
本研究结果发现，原发性肾病综合征急性期IL-13水平较缓解期显著增高，缓解期与正常对照组相比无显著差异，且急性期肾炎性肾病显著高于单纯性肾病。因此，我们认为细胞产生IL-13的能力与病程及临床类型有一定的关系，将IL-13水平的变化作为观察病情活动状态的一个免疫学指标具有一定的临床意义。■
基金项目：本课题由江苏省卫生厅科研基金资助(H9709)
参考文献：
[1]Lakkis FG，Cruet EN.Cloning of rat interleukin-13(IL-13) cDNA and analysis of IL-13 gene expressin in experimental glomerulonephritis. Biochem Biophys Res Commun，1993，197：612-618.
, 百拇医药 [2]姜新猷，陈荣华，王宝琳.《关于小儿肾小球疾病临床分类及治疗的建议》的修订意见.中华儿科杂志，1981，19：241-243.
[3]张爱华，蔡毅.白细胞介素13与肾脏疾病.国外医学泌尿系统分册，1998，18：118-121.
[4]Saura M，Martinez DR，Minty S，et al.Interleukin-13 inhibits inducible nitric oxide syntheses expression in human mesangial cells.Biochem J，1996，313：641-646.
[5]Matsumoto K，Ohi H，Kanmatsuse K.Interleukin-10 and interleukin-13 synergize to inhibit vascular permeability factor release by peripheral blood mononuclear cells from patients with lipoid nephrosis.Nephron，1997，77：212-218.
[6]Matsumoto K.Interleukin-13 inhibits cytokin secretion by blood monocyte from patients with IgA nephropathy.Nephron，1997，75：295-302.
收稿日期：1999-04-05
修稿日期：1999-10-21, http://www.100md.com
单位：潘晓勤(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 210029)； 陈荣华(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 210029)； 张爱华(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 210029)； 吴元俊(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 210029)； 黄文彦(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 210029)； 蔡毅(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 210029)
关键词：白细胞介素13；肾病综合征；外周血单个核细胞
肾病综合征患儿外周血单个核细胞白细胞介素13的变化 摘 要：目的 研究小儿原发性肾病综合征时白细胞介素13(IL-13)的变化。方法 对50例肾病综合征患儿和30例正常健康儿童外周血单个核细胞进行分离、培养，并应用双抗体夹心ELISA法检测培养上清中由Th2细胞来源的细胞因子IL-13的水平。结果 (1)原发性肾病综合征患儿急性期外周血单个核细胞培养上清中IL-13水平较缓解期和正常对照组显著升高，而缓解期降至正常水平。(2)肾炎性肾病患儿急性期IL-13水平显著高于单纯性肾病患儿。结论 IL-13在肾病综合征的发病机制中发挥着重要的作用。外周血单个核细胞培养上清中IL-13水平的变化可作为观察病情活动状态的一个免疫学指标。
, 百拇医药
白细胞介素13(IL-13)是新近发现的一种主要由Th2细胞产生的免疫调节性细胞因子，可抑制单核巨噬细胞和中性粒细胞炎症性细胞因子IL-6、IL-8、IL-1α、IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF)的产生以及促进IL-1受体拮抗剂(IL-1RA)的合成。近年来研究发现IL-13 mRNA在抗肾小球基底膜抗体诱导的肾小球肾炎早期表达增加[1]。但尚未见有IL-13在小儿肾病综合征中变化的报道，为此我们于1997年9月～1998年12月检测了50例肾病综合征患儿外周血单个核细胞(PBMC)培养上清中IL-13的变化，以探讨其在肾病综合征中的临床意义。
材料和方法
一、检测对象
肾病综合征组50例，男30例，女20例；平均年龄7.8(3～14)岁。其中单纯性肾病27例，男16例，女11例，平均年龄8.19(3～13)岁；肾炎性肾病23例，男16例，女7例，平均年龄7.35(3～11)岁。病理改变为微小病变型2例；系膜增殖性肾小球肾炎17例；膜增殖性肾小球肾炎1例；膜性肾病1例和局灶节段性肾小球硬化2例。肾病综合征的诊断符合全国儿科肾脏病科研协作组制定的诊断标准[2]。
, 百拇医药
正常对照组30例，男16例，女14例，平均年龄6.0(1.5～12)岁，均为正常的健康体检儿童。
二、方法
1.取材条件
于患儿入院后分别在激素治疗前尿蛋白阳性(急性期)和激素治疗后尿蛋白阴性时(缓解期)收集外周静脉血标本。
2.PBMC分离及培养
按泛影葡胺聚蔗糖法分离出PBMC，经Hanks液和RPMI1640液洗涤，台盼蓝拒染法观察细胞活性，调整细胞浓度至2×106/ml。在PHA终浓度为20 μg/ml，37℃和5%CO2条件下，培养48小时，收集培养上清，-70℃保存待检。
3.IL-13检测
, http://www.100md.com
应用特异性双抗体夹心ELISA法检测培养上清中IL-13浓度，试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司。按说明书操作。
三、统计学处理
检测结果以均数±标准差表示，实验数据经对数转换后采用t检验进行统计学处理。P<0.05表示有统计学意义。
结 果
一、肾病综合征患儿PBMC培养上清中IL-13水平的变化(见表1)
由表1可见，肾病综合征患儿急性期PBMC培养上清中IL-13水平显著高于缓解期和正常对照组(P<0.01)，而缓解期与正常对照组相比较无显著差异(P>0.05)。
表1 原发性肾病综合征患儿PBMC培养上清中IL-13的变化(
±s), http://www.100md.com
例数
IL-13水平(pg/ml)
正常对照组
30
35.22±4.42
肾病综合征组
50
急性期
48.86±13.58*△
缓解期
37.72±8.33**
与正常对照组比较，P<0.01；**与正常对照组比较，P>0.05；△与缓解期比较，P<0.01
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二、不同临床类型PBMC培养上清中IL-13的变化(见表2) 表2 单纯性肾病和肾炎性肾病患儿PBMC培养上清中IL-13的变化(
±s)分组
例数
IL-13水平(pg/ml)
单纯性肾病急性期
27
45.30±12.58
肾炎性肾病急性期
23
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53.02±13.78
表2结果提示，肾炎性肾病急性期PBMC培养上清中IL-13水平高于单纯性肾病，差异有非常显著性意义(P<0.05)。 讨 论
在肾小球肾炎的炎症反应过程中，肾脏固有细胞以及局部浸润的单核巨噬细胞和淋巴细胞受到炎症刺激后，可分泌多种炎症性细胞因子和其它炎症介质，如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α等，这些炎症介质又作用于肾脏固有细胞以及局部浸润的炎症细胞，造成炎症反应的瀑布效应，从而加重肾脏损害。IL-13是一种主要由Th2细胞产生的多功能的免疫调节性细胞因子，具有促进B细胞增殖、分化，增强NK细胞和单核巨噬细胞活性的作用。近年来的研究发现，IL-13可抑制单核巨噬细胞炎症性细胞因子的基因转录和蛋白合成。这些炎症因子主要有：IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α等，并且能够促单核巨噬细胞和中性粒细胞IL-1受体拮抗剂(IL-1RA)的产生[3]。由此我们设想，该细胞因子可能在体内对巨噬细胞功能也具有调节作用。通过抑制单核巨噬细胞、中性粒细胞分泌炎症性细胞因子以及促进IL-1RA的产生而发挥抗炎作用。
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本研究结果表明，原发性肾病综合征患儿急性期，PBMC培养上清中IL-13水平较正常对照组显著升高，而缓解期降至正常，提示IL-13在肾病综合征的发病机制中发挥着一定的作用。Lakkis等[1]应用逆转-录聚合酶链反应研究IL-13 mRNA在抗肾小球基底膜抗体诱导的肾小球肾炎中的表达时发现，肾小球局部IL-13 mRNA在炎症诱导后48小时内表达增加，而对照组肾组织中IL-13 mRNA的表达未超过基准值。Saura等[4]研究证实IL-13可抑制TNF-α、IL-1β、IFN-γ及LPS激活的肾小球系膜细胞一氧化氮(NO)的产生及NO合酶mRNA的表达。Matsumoto等[5]研究证实IL-13可呈剂量依赖性地抑制脂质性肾病患者PBMC中血管通透因子(VPF)的释放。该作者同时还发现IL-13可显著抑制自发性和LPS活化的IgA肾病(IgAN)患者外周血单核细胞TNF和IL-8的产生[6]。这些研究结果提示：IL-13作为一种免疫调节性细胞因子，可通过抑制单核巨噬细胞炎症性细胞因子的产生和肾小球系膜细胞NO的合成而在肾小球肾炎的炎症反应中发挥抗炎作用。增高的IL-13可能是作为炎症介质分泌增加的一种反应，通过抑制炎症介质的产生而在肾小球炎症反应中发挥抗炎作用。
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本研究结果发现，原发性肾病综合征急性期IL-13水平较缓解期显著增高，缓解期与正常对照组相比无显著差异，且急性期肾炎性肾病显著高于单纯性肾病。因此，我们认为细胞产生IL-13的能力与病程及临床类型有一定的关系，将IL-13水平的变化作为观察病情活动状态的一个免疫学指标具有一定的临床意义。■
基金项目：本课题由江苏省卫生厅科研基金资助(H9709)
参考文献：
[1]Lakkis FG，Cruet EN.Cloning of rat interleukin-13(IL-13) cDNA and analysis of IL-13 gene expressin in experimental glomerulonephritis. Biochem Biophys Res Commun，1993，197：612-618.
, 百拇医药 [2]姜新猷，陈荣华，王宝琳.《关于小儿肾小球疾病临床分类及治疗的建议》的修订意见.中华儿科杂志，1981，19：241-243.
[3]张爱华，蔡毅.白细胞介素13与肾脏疾病.国外医学泌尿系统分册，1998，18：118-121.
[4]Saura M，Martinez DR，Minty S，et al.Interleukin-13 inhibits inducible nitric oxide syntheses expression in human mesangial cells.Biochem J，1996，313：641-646.
[5]Matsumoto K，Ohi H，Kanmatsuse K.Interleukin-10 and interleukin-13 synergize to inhibit vascular permeability factor release by peripheral blood mononuclear cells from patients with lipoid nephrosis.Nephron，1997，77：212-218.
[6]Matsumoto K.Interleukin-13 inhibits cytokin secretion by blood monocyte from patients with IgA nephropathy.Nephron，1997，75：295-302.
收稿日期：1999-04-05
修稿日期：1999-10-21, http://www.100md.com