树酯包埋技术在光镜制片中的应用
作者：沈志刚 丁华野 田玉旺
单位：北京军区总医院病理科 100700
关键词：
诊断病理学杂志000228分类号：R36 文献标识码：A
文章编号：1007-8096(2000)02-0145-02 树酯切片最初用于电子显微镜的观察，当人们为准确提供电镜观察区域而在光镜下进行定位时，便发现1um树酯切片在光镜下观察的效果极佳。经改进的树酯包埋技术具有切片薄、细胞无重叠、人为损伤小等优点，其常规制片质量优于石蜡切片。国外60年代，国内80年代至今，少数单位已相继开展了树酯包埋光镜制片的研究工作[1～13]。尤其是近些年来，树酯切片的许多优点越来越受到人们的普遍重视，不少研究结果显示，正逐步趋向于采用树酯包埋方法，完善多种技术功能，具有广阔的应用前景。
, 百拇医药 1 常用树酯包埋材料
目前有两种广为专业技术人员所接受的包埋剂，即甲基丙烯酸羟基乙基酯(hydrooxyethyl methacrylate HEMA，又名Glycolmethacrylate GMA)和甲基丙烯酸甲酯(methl methacrylateMMA)，HEMA是一种亲水性包埋剂，组织于树酯包埋前不需将水份脱尽，聚合反应时发热量比MMA低，且毒性比MMA小，染色时无需把切片上的树酯片基去掉，染色效果与石蜡切片相似。MMA是一种疏水性包埋剂，除与HEMA的部分理化性质相同外，组织包埋前必须彻底脱水，切片染色前需将树酯去掉。MMA最大的优点是能包埋不脱钙骨组织，国外学者在包埋骨髓活检时，仍将MMA作为首选包埋剂[10]。HEMA和MMA一般情况下为液体状，但经促进剂/增塑剂或加热.以及紫外光的作用下，单体便会聚合成硬块，形成一个坚硬的支架结构。另外，为防止丙烯酸单体自发性聚合，使用前需除去抑聚剂，并将单体存放在深色瓶内，以减少紫外光的影响，在4℃冰箱内保存为宜。
, http://www.100md.com
2基本包埋程序
取材时标本块不宜过大，采用非凝固性固定剂进行组织固定[2]，否则易引起组织的聚合不全，软心或空洞，造成切片困难，应用HEMA包埋，组织浸透前在室温条件下进行简单的梯度乙醇脱水。如应用MMA包埋，组织于树酯浸透前必需彻底脱水与透明，经脱水处理的组织可在预先配好的树酯浸透液内于室温下浸泡12～18h或过夜。待组织沉于浸透液底部并呈半透明状态时，可进行组织的包埋。连续搅拌及减压，特别是组织变成负压后浸透技术可明显加快组织的浸透速度[9]。包埋时将组织置于模具盒底部的中央处，并在顶部加盖，以防止包埋液内含氧量过高，影响聚合。因树酯聚合块较硬，修块时可用钢锉。当修至表面及周边靠近组织外周时，便将包埋块夹在石蜡切片机上进行切片，应慢速切，切片烤干后便可染色。(全文详见pdf)
参考文献：
[1]Carnegie JA，McCully ME，Robertson HA.Embedment in glycol methacrylate at low temperature allow immunoflurescent localization of labile tissue Protein，J Histochem Cytochem，1980,28:308-10
, http://www.100md.com
[2]徐世雄.塑料薄切片技术，细胞生物学杂志，1980,2:31-33
[3]潘春华，组织病理切片乙二醇甲基丙烯酸酯包埋技术.中华病理学杂志,1983,12:70-71
[4]应红光.国产塑料包埋剂在薄切片中的应用，中华血液学杂志，1985,6:104-105
[5]张承志.软型塑料包埋剂GMA制作半薄片的原理及应用，解剖学杂志,1986,9:73-74
[6]呼守生.乙二醇甲基丙烯酸单体作不脱钙骨组织及软组织包埋介质的应用，中华病理学杂志,1992,2l:187-188
[7]刘尚勤.一种用于骨髓活检标本酶组织化学和免疫组织化学的新方法.中华病理学杂志，1993,22:77-79
, 百拇医药
[8]GIMRRAY，SWBEWEN，Anew approach to enzyme histoche mical analy sis of biopsy specimens,J Clin pathol，1989,42:767-771
[9]Erben RG，Erbea，Embedding of bone samples in methylmethacrylate：an improved method suitable for bone Histomorphometry，histochemistry-and immunohistochemistry，Histochem cytochem，1997,45:307-313
[10]Church RJ.Hand NM，Rex M.Non-isotopic in sltu hybrldization to detect chick sox gene mRNA in platic-embedded tissue Histochemical J，1997；29:625-629
[11]Murray GL，Ewen SW.A novel method for optimum biopsy specimen preservation for histochemical and immunohistochemical analysis Am J Clin pathol，1991,95:131-6
收稿日期：1999-08-27
修稿日期：1999-10-12, 百拇医药
单位：北京军区总医院病理科 100700
关键词：
诊断病理学杂志000228分类号：R36 文献标识码：A
文章编号：1007-8096(2000)02-0145-02 树酯切片最初用于电子显微镜的观察，当人们为准确提供电镜观察区域而在光镜下进行定位时，便发现1um树酯切片在光镜下观察的效果极佳。经改进的树酯包埋技术具有切片薄、细胞无重叠、人为损伤小等优点，其常规制片质量优于石蜡切片。国外60年代，国内80年代至今，少数单位已相继开展了树酯包埋光镜制片的研究工作[1～13]。尤其是近些年来，树酯切片的许多优点越来越受到人们的普遍重视，不少研究结果显示，正逐步趋向于采用树酯包埋方法，完善多种技术功能，具有广阔的应用前景。
, 百拇医药 1 常用树酯包埋材料
目前有两种广为专业技术人员所接受的包埋剂，即甲基丙烯酸羟基乙基酯(hydrooxyethyl methacrylate HEMA，又名Glycolmethacrylate GMA)和甲基丙烯酸甲酯(methl methacrylateMMA)，HEMA是一种亲水性包埋剂，组织于树酯包埋前不需将水份脱尽，聚合反应时发热量比MMA低，且毒性比MMA小，染色时无需把切片上的树酯片基去掉，染色效果与石蜡切片相似。MMA是一种疏水性包埋剂，除与HEMA的部分理化性质相同外，组织包埋前必须彻底脱水，切片染色前需将树酯去掉。MMA最大的优点是能包埋不脱钙骨组织，国外学者在包埋骨髓活检时，仍将MMA作为首选包埋剂[10]。HEMA和MMA一般情况下为液体状，但经促进剂/增塑剂或加热.以及紫外光的作用下，单体便会聚合成硬块，形成一个坚硬的支架结构。另外，为防止丙烯酸单体自发性聚合，使用前需除去抑聚剂，并将单体存放在深色瓶内，以减少紫外光的影响，在4℃冰箱内保存为宜。
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2基本包埋程序
取材时标本块不宜过大，采用非凝固性固定剂进行组织固定[2]，否则易引起组织的聚合不全，软心或空洞，造成切片困难，应用HEMA包埋，组织浸透前在室温条件下进行简单的梯度乙醇脱水。如应用MMA包埋，组织于树酯浸透前必需彻底脱水与透明，经脱水处理的组织可在预先配好的树酯浸透液内于室温下浸泡12～18h或过夜。待组织沉于浸透液底部并呈半透明状态时，可进行组织的包埋。连续搅拌及减压，特别是组织变成负压后浸透技术可明显加快组织的浸透速度[9]。包埋时将组织置于模具盒底部的中央处，并在顶部加盖，以防止包埋液内含氧量过高，影响聚合。因树酯聚合块较硬，修块时可用钢锉。当修至表面及周边靠近组织外周时，便将包埋块夹在石蜡切片机上进行切片，应慢速切，切片烤干后便可染色。(全文详见pdf)
参考文献：
[1]Carnegie JA，McCully ME，Robertson HA.Embedment in glycol methacrylate at low temperature allow immunoflurescent localization of labile tissue Protein，J Histochem Cytochem，1980,28:308-10
, http://www.100md.com
[2]徐世雄.塑料薄切片技术，细胞生物学杂志，1980,2:31-33
[3]潘春华，组织病理切片乙二醇甲基丙烯酸酯包埋技术.中华病理学杂志,1983,12:70-71
[4]应红光.国产塑料包埋剂在薄切片中的应用，中华血液学杂志，1985,6:104-105
[5]张承志.软型塑料包埋剂GMA制作半薄片的原理及应用，解剖学杂志,1986,9:73-74
[6]呼守生.乙二醇甲基丙烯酸单体作不脱钙骨组织及软组织包埋介质的应用，中华病理学杂志,1992,2l:187-188
[7]刘尚勤.一种用于骨髓活检标本酶组织化学和免疫组织化学的新方法.中华病理学杂志，1993,22:77-79
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[8]GIMRRAY，SWBEWEN，Anew approach to enzyme histoche mical analy sis of biopsy specimens,J Clin pathol，1989,42:767-771
[9]Erben RG，Erbea，Embedding of bone samples in methylmethacrylate：an improved method suitable for bone Histomorphometry，histochemistry-and immunohistochemistry，Histochem cytochem，1997,45:307-313
[10]Church RJ.Hand NM，Rex M.Non-isotopic in sltu hybrldization to detect chick sox gene mRNA in platic-embedded tissue Histochemical J，1997；29:625-629
[11]Murray GL，Ewen SW.A novel method for optimum biopsy specimen preservation for histochemical and immunohistochemical analysis Am J Clin pathol，1991,95:131-6
收稿日期：1999-08-27
修稿日期：1999-10-12, 百拇医药