脂质过氧化所致内皮细胞损伤在冠心病患者中的关系
作者：高飞 刘丁
单位：第三军医大学大坪医院检验科 重庆 400042
关键词：
重庆医学000235 动脉粥样硬化(AS)病因复杂，ROSS提出了“损伤反应学说” [1]，即血管内皮损害是AS发生的始动环节逐渐为广大学者采纳。脂质过氧化对血管 内皮的损害已早为体外实验所证实[2、3、4]，体内静脉注射脂质过氧化物后也可 观察 到内皮的损害。而直接反映活体脂质过氧化与内皮损害的临床报道并不多见。为此，我们对 24例冠心病患者进行了循环内皮细胞与脂质过氧化物(MDA)及NO的变化，对脂质过氧化引起 内皮损伤功能障碍与AS发病进行了初步探讨，现报告如下。
1 对象及方法
1.1 对象 冠心病患者24 例。男16例，女8例。年龄50～82岁，平均64岁。符合世界卫生组织冠心病诊断标准。急性 心肌梗塞8例，陈旧性心肌梗塞4例，典型心绞痛12例。正常对照24例，来自健康献血者。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 CEC检测 采用密度梯度离心法。单位：×107/L。离心液由第三 军医大学创伤外科实验室提供。CEC经间接免疫荧光法Ⅷ因子相关抗原鉴定。
1.2.2 MDA检测 硫代巴比妥酸法。以四乙氧基丙烷为标准品，721分光光 度计测定532nm吸光度，单位为μmol/L。试剂由军事科学院放射免疫研究所提供。
1.2.3 NO测定 参考文献[5]测定NO所用试剂，分析前新鲜配制： 样本NO浓度按标准曲线方程求得，浓度μmol/L。试剂由军事科学院放射免疫研究所提供 。
1.2.4 统计学处理 数据以x±s表示，分别进行t检验、 直线相关回归分析。
2 结 果
, 百拇医药
2.1 冠心病组与正常对照比较 血MDA及CEC显著增高，而NO显著降低， P<0.01，见表1。
表1 冠心病、正常对照血MDA、CEC、NO变化 组 别
n
MDA(μmol/L)
CEC( x107/L)
NO(μmol/L)
对照组
24
4.2±1.4
3.2±0.7
, http://www.100md.com 76.29±9.52
冠心病组
24
9.3±1.6△
11.4±3.6△
29.73±7.16△
注：△P<0.01
2.2 急性心肌梗塞组8例与非梗 塞组16例比较。
表2 心肌梗塞组、非梗塞组血MDA、CEC、NO变化 组 别
n
CEC(X107/L)
, http://www.100md.com
MOA(μmol/L)
NO(μmol/L)
心肌梗塞组
8
13.74±3.1
11.02±0.11
18.14±3.02
非心肌梗塞组
16
7.4±2.8△
7.8±1.2△
34.21±6.15△
, 百拇医药
注：△P<0.01
2.3 MDA与CEC相关分析显示两者呈显著正相关。相关系数r=0.857(P<0. 01)；MDA与NO相关分析显示两者呈负相关，相关系数r=-0.804(P<0.01)。
3 讨 论
血管内皮不仅起着机械屏障的作用，已证实它是人体最大的内分泌器官，具有重要的生理学 活性，是抗AS的重要环节[6]。生理EC功能表现为抑制性，抑制平滑肌收缩，血小 板粘附，白细胞聚集及抗凝。引起AS的多种病因首先是引起内皮细胞损伤，功能受损；表现 为内皮剥脱，或内皮渗透性及胞饮作用增加，血浆中脂质通过内膜，沉积于内膜下，并发生 氧化修饰，活化血小板粘附于损伤处，释放血小板生长因子PDGF，进而单核巨噬细胞和成纤 维细胞、平滑肌细胞向内膜下迁移。摄取脂质后，巨噬细胞及SMC转变为泡沫细胞并产生大 量胶原、纤维、粘多糖，上述成分一起沉积于受损内膜下，形成AS硬化斑。
, http://www.100md.com
前列环素PGI是已知最强的扩血管物质，通过增加细胞内环-磷酸腺苷及抑制血小板聚集而 发挥其作用，内皮受损后，PGI合成酶活性被抑制，血栓烷TAX合成显著增加，促使血小板聚 集及血栓形成，引起冠脉痉挛及狭窄。NO是内皮合成的另一类重要的舒血管物质，已证实内 皮源性舒血管因子EDRF生物学活性在大部分与NO有关，故认为两者是同一物质[7] 。通过增加细胞内环鸟苷酸，使SMC舒张并抑制其生长。内皮受损，NO合成减少，而引发血 管强烈收缩的内皮素分泌增加，成为冠脉持续痉挛也是引发心肌梗塞的重要原因。
虽然内皮的功能及受损变化已日益为学者们所认识，但大多数试验均在体外进行。而CEC来 自损伤脱落的静脉血管EC，故CEC检测是目前活性特异而直接反映血管内皮损伤的指标。我 们实验也观测到冠心病患者血中CEC显著高于正常，而NO低于正常；心肌梗塞组CEC高于非梗 塞组，而NO低于非梗塞组；CEC与NO呈负相关。即血管内皮损害后其血管紧张性调节功能紊 乱，并与病情轻重程度有关。
, http://www.100md.com
在引起血管内皮损害的诸多因素中，脂质过氧化的损伤作用已引起广泛重视。在证明与VEC 培养液中加入脂质过氧化物可引起内皮损害后，动物实验也表明脂质过氧化物可导致内皮细 胞收缩，生物膜损伤，渗透性增高，胞饮作用增强，甚至内皮脱落。已证明高脂血症作为冠 心病的首要危险因素，主要在于氧化修饰的低密度脂蛋白(oxLDL)的毒性作用[8]。 LDL氧化修饰首先从其多不饱合脂肪酸发生过氧化，随后自由基迅速扩散，脂肪链断裂，产 生高度活化产物丙二醛(MDA)，并与脂蛋白氧基侧链相互作用，形成新表位。使得ox-LDL不 为LDL受体识别，却能被巨噬细胞“清道夫”受体识别，并且摄入不受细胞内固醇浓度调控 ，造成LDL不被LDL受体清除，局部ox-LDL大量堆积，促使泡沫细胞形成。ox-LDL显然还具 有化学趋从性及阻止巨噬细胞迂回血循环的特性，使巨噬细胞增多，加速LDL氧化修饰，形 成恶性循环。我们观察到24例冠心病患者血MDA显然高于对照组，且心肌梗塞组高于非梗塞 组。MDA与CEC呈正相关，而与NO呈负相关。提示冠心病患者内皮损害，氧自由基损害是一主 要病理基础，过氧化脂质与AS关系密切。
, http://www.100md.com
本研究表明，EC在冠心病发生、发展中有重要作用，脂质过氧化是EC损害的重要原因，CEC 及MDA检测可作为病理轻重及预后的一个判断指标，而NO也可反映EC受损程度。■
参考文献：
[1]Ross R.The pathopenesis of atherosclerosis-an update.N Eed J Med,1986, 314(2):488
[2]陈铁真，宋继渴，杨向红，等.脂质过氧化物对培养人内皮细胞损害作用.中华 病理杂志，1989，18(1)：15
[3]Ranasnamy S,Penn MS,Saidel GM,et al.Exogenous oxidized Low-density lip oprotion injures and alters the barrier function of edothelium in rats in vivo.C irculation Res,1997,80(1):37
, 百拇医药
[4]杨映波，王正国，刘怀琼.血循环中内皮细胞数量变化意义的初探，第三军医大 学学报，1990，12(3)：209
[5]许宏击，冯友贤，董立均，等.比色法测定血清亚硝酸盐和硝酸盐及初步临床应 用.临床检验杂志，1996，14(1)：28
[6]James P,Peter G,Albert W.Lethal damage to endothelial cells by ox-LDL, role of selenoperoxidases in cytoprotection against lipid hydroperoxide and iron -mediated reactions.J Lipid Res,1993,34(3):479
[7]Moncada SR,Hannai K,Fei H,et al.Endothelium-derived relaxing factor.Bi ochem Pharme,1998,27(9):2495
[8]Bernd C,Simon LD,Cunningham,et al.Oxidized Low-density Lipoproteins ca usc contraction and inhibit endothelium-dependent relaxation in the pig coronary arlery.J Clin Invest,1990,86(1):75, http://www.100md.com
单位：第三军医大学大坪医院检验科 重庆 400042
关键词：
重庆医学000235 动脉粥样硬化(AS)病因复杂，ROSS提出了“损伤反应学说” [1]，即血管内皮损害是AS发生的始动环节逐渐为广大学者采纳。脂质过氧化对血管 内皮的损害已早为体外实验所证实[2、3、4]，体内静脉注射脂质过氧化物后也可 观察 到内皮的损害。而直接反映活体脂质过氧化与内皮损害的临床报道并不多见。为此，我们对 24例冠心病患者进行了循环内皮细胞与脂质过氧化物(MDA)及NO的变化，对脂质过氧化引起 内皮损伤功能障碍与AS发病进行了初步探讨，现报告如下。
1 对象及方法
1.1 对象 冠心病患者24 例。男16例，女8例。年龄50～82岁，平均64岁。符合世界卫生组织冠心病诊断标准。急性 心肌梗塞8例，陈旧性心肌梗塞4例，典型心绞痛12例。正常对照24例，来自健康献血者。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 CEC检测 采用密度梯度离心法。单位：×107/L。离心液由第三 军医大学创伤外科实验室提供。CEC经间接免疫荧光法Ⅷ因子相关抗原鉴定。
1.2.2 MDA检测 硫代巴比妥酸法。以四乙氧基丙烷为标准品，721分光光 度计测定532nm吸光度，单位为μmol/L。试剂由军事科学院放射免疫研究所提供。
1.2.3 NO测定 参考文献[5]测定NO所用试剂，分析前新鲜配制： 样本NO浓度按标准曲线方程求得，浓度μmol/L。试剂由军事科学院放射免疫研究所提供 。
1.2.4 统计学处理 数据以x±s表示，分别进行t检验、 直线相关回归分析。
2 结 果
, 百拇医药
2.1 冠心病组与正常对照比较 血MDA及CEC显著增高，而NO显著降低， P<0.01，见表1。
表1 冠心病、正常对照血MDA、CEC、NO变化 组 别
n
MDA(μmol/L)
CEC( x107/L)
NO(μmol/L)
对照组
24
4.2±1.4
3.2±0.7
, http://www.100md.com 76.29±9.52
冠心病组
24
9.3±1.6△
11.4±3.6△
29.73±7.16△
注：△P<0.01
2.2 急性心肌梗塞组8例与非梗 塞组16例比较。
表2 心肌梗塞组、非梗塞组血MDA、CEC、NO变化 组 别
n
CEC(X107/L)
, http://www.100md.com
MOA(μmol/L)
NO(μmol/L)
心肌梗塞组
8
13.74±3.1
11.02±0.11
18.14±3.02
非心肌梗塞组
16
7.4±2.8△
7.8±1.2△
34.21±6.15△
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注：△P<0.01
2.3 MDA与CEC相关分析显示两者呈显著正相关。相关系数r=0.857(P<0. 01)；MDA与NO相关分析显示两者呈负相关，相关系数r=-0.804(P<0.01)。
3 讨 论
血管内皮不仅起着机械屏障的作用，已证实它是人体最大的内分泌器官，具有重要的生理学 活性，是抗AS的重要环节[6]。生理EC功能表现为抑制性，抑制平滑肌收缩，血小 板粘附，白细胞聚集及抗凝。引起AS的多种病因首先是引起内皮细胞损伤，功能受损；表现 为内皮剥脱，或内皮渗透性及胞饮作用增加，血浆中脂质通过内膜，沉积于内膜下，并发生 氧化修饰，活化血小板粘附于损伤处，释放血小板生长因子PDGF，进而单核巨噬细胞和成纤 维细胞、平滑肌细胞向内膜下迁移。摄取脂质后，巨噬细胞及SMC转变为泡沫细胞并产生大 量胶原、纤维、粘多糖，上述成分一起沉积于受损内膜下，形成AS硬化斑。
, http://www.100md.com
前列环素PGI是已知最强的扩血管物质，通过增加细胞内环-磷酸腺苷及抑制血小板聚集而 发挥其作用，内皮受损后，PGI合成酶活性被抑制，血栓烷TAX合成显著增加，促使血小板聚 集及血栓形成，引起冠脉痉挛及狭窄。NO是内皮合成的另一类重要的舒血管物质，已证实内 皮源性舒血管因子EDRF生物学活性在大部分与NO有关，故认为两者是同一物质[7] 。通过增加细胞内环鸟苷酸，使SMC舒张并抑制其生长。内皮受损，NO合成减少，而引发血 管强烈收缩的内皮素分泌增加，成为冠脉持续痉挛也是引发心肌梗塞的重要原因。
虽然内皮的功能及受损变化已日益为学者们所认识，但大多数试验均在体外进行。而CEC来 自损伤脱落的静脉血管EC，故CEC检测是目前活性特异而直接反映血管内皮损伤的指标。我 们实验也观测到冠心病患者血中CEC显著高于正常，而NO低于正常；心肌梗塞组CEC高于非梗 塞组，而NO低于非梗塞组；CEC与NO呈负相关。即血管内皮损害后其血管紧张性调节功能紊 乱，并与病情轻重程度有关。
, http://www.100md.com
在引起血管内皮损害的诸多因素中，脂质过氧化的损伤作用已引起广泛重视。在证明与VEC 培养液中加入脂质过氧化物可引起内皮损害后，动物实验也表明脂质过氧化物可导致内皮细 胞收缩，生物膜损伤，渗透性增高，胞饮作用增强，甚至内皮脱落。已证明高脂血症作为冠 心病的首要危险因素，主要在于氧化修饰的低密度脂蛋白(oxLDL)的毒性作用[8]。 LDL氧化修饰首先从其多不饱合脂肪酸发生过氧化，随后自由基迅速扩散，脂肪链断裂，产 生高度活化产物丙二醛(MDA)，并与脂蛋白氧基侧链相互作用，形成新表位。使得ox-LDL不 为LDL受体识别，却能被巨噬细胞“清道夫”受体识别，并且摄入不受细胞内固醇浓度调控 ，造成LDL不被LDL受体清除，局部ox-LDL大量堆积，促使泡沫细胞形成。ox-LDL显然还具 有化学趋从性及阻止巨噬细胞迂回血循环的特性，使巨噬细胞增多，加速LDL氧化修饰，形 成恶性循环。我们观察到24例冠心病患者血MDA显然高于对照组，且心肌梗塞组高于非梗塞 组。MDA与CEC呈正相关，而与NO呈负相关。提示冠心病患者内皮损害，氧自由基损害是一主 要病理基础，过氧化脂质与AS关系密切。
, http://www.100md.com
本研究表明，EC在冠心病发生、发展中有重要作用，脂质过氧化是EC损害的重要原因，CEC 及MDA检测可作为病理轻重及预后的一个判断指标，而NO也可反映EC受损程度。■
参考文献：
[1]Ross R.The pathopenesis of atherosclerosis-an update.N Eed J Med,1986, 314(2):488
[2]陈铁真，宋继渴，杨向红，等.脂质过氧化物对培养人内皮细胞损害作用.中华 病理杂志，1989，18(1)：15
[3]Ranasnamy S,Penn MS,Saidel GM,et al.Exogenous oxidized Low-density lip oprotion injures and alters the barrier function of edothelium in rats in vivo.C irculation Res,1997,80(1):37
, 百拇医药
[4]杨映波，王正国，刘怀琼.血循环中内皮细胞数量变化意义的初探，第三军医大 学学报，1990，12(3)：209
[5]许宏击，冯友贤，董立均，等.比色法测定血清亚硝酸盐和硝酸盐及初步临床应 用.临床检验杂志，1996，14(1)：28
[6]James P,Peter G,Albert W.Lethal damage to endothelial cells by ox-LDL, role of selenoperoxidases in cytoprotection against lipid hydroperoxide and iron -mediated reactions.J Lipid Res,1993,34(3):479
[7]Moncada SR,Hannai K,Fei H,et al.Endothelium-derived relaxing factor.Bi ochem Pharme,1998,27(9):2495
[8]Bernd C,Simon LD,Cunningham,et al.Oxidized Low-density Lipoproteins ca usc contraction and inhibit endothelium-dependent relaxation in the pig coronary arlery.J Clin Invest,1990,86(1):75, http://www.100md.com