CD44v6和nm23-H1表达与大肠癌淋巴结转移相关性的研究
作者：赵华 冯大作 雷三林
单位：赵华(湖南医科大学第二附属医院普外科(长沙 410011))；冯大作(湖南医科大学第二附属医院普外科(长沙 410011))；雷三林(湖南医科大学第二附属医院普外科(长沙 410011))
关键词：大肠癌；免疫组化；淋巴结转移
中国现代医学杂志000221 目的：探讨CD44v6和nm23-H1表达与大肠癌淋巴结转移的关系。方法：应用免疫组化S-P法对52例大肠癌标本的CD44v6和nm23-H1的表达进行研究。结果：CD44v6的高表达和nm23-H1的低表达与大肠癌的浸润程度和淋巴结转移均有关(P<0.05)。在本组转移淋巴结中CD44v6阳性表达为89.3%(25/28)。在大肠癌中CD44v6和nm23-H1表达呈负相关(P<0.05)。结论：CD44v6和nm23-H1表达在大肠癌进展和淋巴结转移中起作用。同时检测CD44v6和nm23-H1表达可作为预测大肠癌进展程度和淋巴结转移的一项比较客观的指标。
, 百拇医药
分类号 R735.3
本研究应用免疫组化的方法(S-P法)检测52例大肠癌标本中CD44v6和nm23-H1的表达状况，探讨它们在淋巴结转移中的相互关系及对大肠癌淋巴结转移的判断效果，希望能对临床治疗和随访提供帮助。
1 资料和方法
1.1 一般资料
标本来源于1996年～1997年4月间在我院普外科手术的52例原发性大肠癌患者，均行根治手术切除和D3～D4的淋巴结清扫。每例至少检查12个淋巴结，平均16个淋巴结，分为伴淋巴结转移组28例，和无淋巴结转移组24例。年龄22～77岁，平均53.5岁。均经10%福尔马林固定，石腊包埋。按全国大肠癌诊断会议(1987)标准依病理诊断，同时根据细胞分化将52例大肠癌分为高分化腺癌8例，中分化腺癌25例，低分化腺癌11例，粘液癌8例。
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1.2 方法
S-P免疫组化染色，具体步骤按试剂盒说明进行，将4μm石腊切片脱腊和水化后，用PBS冲洗3次，逐次加试剂A(过氧化酶阻断剂)、试剂B、试剂C(二抗)、试剂D(链亲和素-过氧化物酶)，再加AEC，显微镜下观察，自来水冲洗、苏木素复染，AEC封注剂湿封，CD44v6组在A液阻断后用加热煮沸法行抗原修复。采用PBS液代替一抗作阴性对照，采用已知CD44v6和nm23-H1表达阳性的乳腺癌标本作阳性对照。按阳性细胞所占比例判断结果，CD44v6阳性细胞<10%为阴性，10%～30%为弱阳性，≥50%为高表达。统计学处理用χ2检验。
2 结果
CD44v6和nm23-H1在大肠癌中的表达状况及意义：52例大肠癌中，CD44v6表达阳性率57.7%(30/52)。28例转移淋巴结中CD44v6阳性率89.3%(25/28)，其原发瘤中阳性表达为75%(21/28)；无转移者为37.5%(9/24)，两者间有显著性差异(P<0.01)。CD44v6阳性表达在Dukes C/D期肿瘤中高于A，B期(P<0.01)。
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nm23-H1表达水平及意义：52例大肠癌中nm23-H1高表达59.6%(31/52)，低表达36.5%(19/52)。在伴淋巴结转移的原发瘤中nm23-H1低表达率为60.7%(17/28)，而无转移者仅为16.7%(4/24)，两者间有显著性差异(P<0.01)。Dukes C/D期肿瘤的nm23-H1低表达多于A，B期(P<0.01)。
CD44v6和nm23-H1的共同表达与大肠癌浸润转移的关系。
CD44v6阳性和nm23-H1低表达者淋巴结转移率87.5%显著高于CD44v6阴性、nm23-H1高表达者17.6%(P<0.01)。
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我们用串联方法检测上述两项指标评价淋巴结转移状态，其特异度达91.7%，阳性预测值为87.5%。
3 讨论
CD44是一种细胞表面跨膜糖蛋白[1]，通过其V区外显子选择性剪接产生多种不同的变异体，其中以含有外显子v6的CD44变异体与肿瘤转移的关系密切，本研究发现CD44v6表达在duckes C/D期较A、B期高，有淋巴结转移者较无转移者高，表明CD44v6与大肠癌恶性进展和淋巴结转移有关。
nm23-H1基因是1988年Steeg等从具有不同转移能力的小鼠黑色素K-1735细胞系中分离鉴定出来的一种带有活力的新基因。目前已签定出两种人类的nm23-H1与癌细胞转移的关系更为密切[2]，本研究结果显示，伴区域淋巴结转移者，其nm23-H1的表达水平低于无转移者，说明nm23-H1基因在抑制大肠癌淋巴结转移过程中发挥了重要的免疫调控作用。
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肿瘤转移涉及多种相关基因的调控，肿瘤细胞转移相关基因的激活和转移抑制相关基因的失活，均可诱发肿瘤细胞转移表型而导致转移的发生。本研究发现CD44v6阳性表达和nm23-H1低表达的大肠癌发生淋巴结转移高达87.5%(14/16)，可能是由于CD44v6分子介导了肿瘤细胞与淋巴结的特异性受体的粘附及nm23-H1的改变导致肿瘤细胞的运动能力增强这两种因素。说明增殖力强的肿瘤细胞通过CD44v6和nm23-H1的改变获得转移表型，促使转移形成。
本研究显示，并联应用两个指标预测淋巴结转移有较高的敏感性(89.3%)，而串联应用两个指标有较高的特异性(91.7%)。故术前对活检标本进行上述基因表达水平的检测，对大肠癌，特别是直肠癌的淋巴结转移状态的预测，可对患者的术式选择、切除范围有指导意义，并可估计大肠癌的预后，为今后开展的基因治疗积累更多的临床资料。
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参考文献
1 Tanabe KK,Ellis LM,Saya H.Expression of CD44R1 adhesion molecule in colon carcinomas of metastases.Lancet，1993；341:725～726
2 Cohn KH,Wang FS,Desoto-Lapaix F,et al.Association of nm23-H1 allelic deletions with distant metastases in colorectal carcinoma.Lancet,1991;338:722
收稿日期：1999-07-20, 百拇医药
单位：赵华(湖南医科大学第二附属医院普外科(长沙 410011))；冯大作(湖南医科大学第二附属医院普外科(长沙 410011))；雷三林(湖南医科大学第二附属医院普外科(长沙 410011))
关键词：大肠癌；免疫组化；淋巴结转移
中国现代医学杂志000221 目的：探讨CD44v6和nm23-H1表达与大肠癌淋巴结转移的关系。方法：应用免疫组化S-P法对52例大肠癌标本的CD44v6和nm23-H1的表达进行研究。结果：CD44v6的高表达和nm23-H1的低表达与大肠癌的浸润程度和淋巴结转移均有关(P<0.05)。在本组转移淋巴结中CD44v6阳性表达为89.3%(25/28)。在大肠癌中CD44v6和nm23-H1表达呈负相关(P<0.05)。结论：CD44v6和nm23-H1表达在大肠癌进展和淋巴结转移中起作用。同时检测CD44v6和nm23-H1表达可作为预测大肠癌进展程度和淋巴结转移的一项比较客观的指标。
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分类号 R735.3
本研究应用免疫组化的方法(S-P法)检测52例大肠癌标本中CD44v6和nm23-H1的表达状况，探讨它们在淋巴结转移中的相互关系及对大肠癌淋巴结转移的判断效果，希望能对临床治疗和随访提供帮助。
1 资料和方法
1.1 一般资料
标本来源于1996年～1997年4月间在我院普外科手术的52例原发性大肠癌患者，均行根治手术切除和D3～D4的淋巴结清扫。每例至少检查12个淋巴结，平均16个淋巴结，分为伴淋巴结转移组28例，和无淋巴结转移组24例。年龄22～77岁，平均53.5岁。均经10%福尔马林固定，石腊包埋。按全国大肠癌诊断会议(1987)标准依病理诊断，同时根据细胞分化将52例大肠癌分为高分化腺癌8例，中分化腺癌25例，低分化腺癌11例，粘液癌8例。
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1.2 方法
S-P免疫组化染色，具体步骤按试剂盒说明进行，将4μm石腊切片脱腊和水化后，用PBS冲洗3次，逐次加试剂A(过氧化酶阻断剂)、试剂B、试剂C(二抗)、试剂D(链亲和素-过氧化物酶)，再加AEC，显微镜下观察，自来水冲洗、苏木素复染，AEC封注剂湿封，CD44v6组在A液阻断后用加热煮沸法行抗原修复。采用PBS液代替一抗作阴性对照，采用已知CD44v6和nm23-H1表达阳性的乳腺癌标本作阳性对照。按阳性细胞所占比例判断结果，CD44v6阳性细胞<10%为阴性，10%～30%为弱阳性，≥50%为高表达。统计学处理用χ2检验。
2 结果
CD44v6和nm23-H1在大肠癌中的表达状况及意义：52例大肠癌中，CD44v6表达阳性率57.7%(30/52)。28例转移淋巴结中CD44v6阳性率89.3%(25/28)，其原发瘤中阳性表达为75%(21/28)；无转移者为37.5%(9/24)，两者间有显著性差异(P<0.01)。CD44v6阳性表达在Dukes C/D期肿瘤中高于A，B期(P<0.01)。
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nm23-H1表达水平及意义：52例大肠癌中nm23-H1高表达59.6%(31/52)，低表达36.5%(19/52)。在伴淋巴结转移的原发瘤中nm23-H1低表达率为60.7%(17/28)，而无转移者仅为16.7%(4/24)，两者间有显著性差异(P<0.01)。Dukes C/D期肿瘤的nm23-H1低表达多于A，B期(P<0.01)。
CD44v6和nm23-H1的共同表达与大肠癌浸润转移的关系。
CD44v6阳性和nm23-H1低表达者淋巴结转移率87.5%显著高于CD44v6阴性、nm23-H1高表达者17.6%(P<0.01)。
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我们用串联方法检测上述两项指标评价淋巴结转移状态，其特异度达91.7%，阳性预测值为87.5%。
3 讨论
CD44是一种细胞表面跨膜糖蛋白[1]，通过其V区外显子选择性剪接产生多种不同的变异体，其中以含有外显子v6的CD44变异体与肿瘤转移的关系密切，本研究发现CD44v6表达在duckes C/D期较A、B期高，有淋巴结转移者较无转移者高，表明CD44v6与大肠癌恶性进展和淋巴结转移有关。
nm23-H1基因是1988年Steeg等从具有不同转移能力的小鼠黑色素K-1735细胞系中分离鉴定出来的一种带有活力的新基因。目前已签定出两种人类的nm23-H1与癌细胞转移的关系更为密切[2]，本研究结果显示，伴区域淋巴结转移者，其nm23-H1的表达水平低于无转移者，说明nm23-H1基因在抑制大肠癌淋巴结转移过程中发挥了重要的免疫调控作用。
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肿瘤转移涉及多种相关基因的调控，肿瘤细胞转移相关基因的激活和转移抑制相关基因的失活，均可诱发肿瘤细胞转移表型而导致转移的发生。本研究发现CD44v6阳性表达和nm23-H1低表达的大肠癌发生淋巴结转移高达87.5%(14/16)，可能是由于CD44v6分子介导了肿瘤细胞与淋巴结的特异性受体的粘附及nm23-H1的改变导致肿瘤细胞的运动能力增强这两种因素。说明增殖力强的肿瘤细胞通过CD44v6和nm23-H1的改变获得转移表型，促使转移形成。
本研究显示，并联应用两个指标预测淋巴结转移有较高的敏感性(89.3%)，而串联应用两个指标有较高的特异性(91.7%)。故术前对活检标本进行上述基因表达水平的检测，对大肠癌，特别是直肠癌的淋巴结转移状态的预测，可对患者的术式选择、切除范围有指导意义，并可估计大肠癌的预后，为今后开展的基因治疗积累更多的临床资料。
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参考文献
1 Tanabe KK,Ellis LM,Saya H.Expression of CD44R1 adhesion molecule in colon carcinomas of metastases.Lancet，1993；341:725～726
2 Cohn KH,Wang FS,Desoto-Lapaix F,et al.Association of nm23-H1 allelic deletions with distant metastases in colorectal carcinoma.Lancet,1991;338:722
收稿日期：1999-07-20, 百拇医药