原发性乳腺癌中p16和c-erbB-2蛋白表达的意义
作者：郑维 文明星 康红
单位：郑维(海南省人民医院普外科(海口 570311))；文明星(湖南医科大学附属二院普外科(长沙 410011))；康红(海南人民医院肿瘤内科(海口 570311))
关键词：乳腺癌；p16基因；c-erbB-2基因；免疫组化
中国现代医学杂志000206 我们采用免疫组化技术，检测50例原发性乳腺癌p16和c-erbB-2蛋白的表达情况。结果显示：17例(34.00%)p16蛋白表达阳性，24例(48.00%)c-erbB-2蛋白表达阳性。p16蛋白表达与乳腺癌的临床病理因素及预后无明显相关性。c-erbB-2蛋白表达在有淋巴结转移的乳腺癌中较多见(p=0.0237)，且5年生存率低于阴性组(P=0.0169)。p16和c-erbB-2蛋白表达之间不存在一致性关系。结论：c-erbB-2蛋白表达在乳腺癌伴淋巴结转移中较多见，并降低远期生存率。
, http://www.100md.com
分类号 R737.9
THE SIGNIFICANCE OF THE EXPRESSION OF P16 AND c-erbB-2
PROTEINS IN PRIMARY BREAST CANCER
Zheng Wei, Kang Hong, Wen Mingxing
(Department of General Surgery, Public Hospital of Hainan Province, Haikou, Hainan 570311)
Objectives:To study the expression of P16 and c-erbB-2 and its clinical significance in primary breast cancer.Methods:The expression of P16 and c-erbB-2 were detected with immunohistochemical technique in 50 cases of primary breast cancer, 10 cases of papilloma within lactiferous duct and 10 cases of normal breast specimens.Results:P
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ositive P16 protein expressed in 17 cases of breast cancer (34%) and positive c-erbB-2 protein expressed in 24 cases of breast cancer (48%). There was not a significant correlation between the expression of P16 protein and the clinical pathological factors and the prognosis of breast cancer. The expression of c-erbB-2 protein increased significantly in the breast cancer with lymphatic metastasis (P<0.05), which had a lower five-year survival rate than that in the cases without lymphatic metastasis (P<0.05). There was not an expression consistency between P16 and c-erbB-2 proteins.Conclusions:Higher expression of c-erbB-2 occurs in the breast cancer with lymphatic metastasis and decreases the late survival rate of the patients.
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Key Words:Breast Cancer;P16 Gene;c-erbB-2 Gene;Immunohistochemistry;Protein Expressi
on
乳腺上皮细胞分子遗传学特征的改变与乳腺癌的发生、演进密切相关，数种癌基因的扩增和过表达及抑癌基因的突变均不同程度地存在于乳腺癌细胞中[1]。我们采用免疫组化技术检测了50例乳腺癌抑癌基因MTSI(p16)和癌基因c-erbB-2蛋白的表达情况，旨在探讨p16和c-erbB-2蛋白表达与乳腺癌的生物学行为及预后之间的关系。
1 材料与方法
1.1 研究对象
随机选择湖南医科大学附二医院原发性乳腺癌蜡块1989年5月～1992年9月30例及1997年3～10月20例，共50例。10例乳腺乳管内乳头状瘤和10例正常乳腺组织标本作良性和正常对照。组织用福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚5μm。全部为女性，年龄28～72岁，平均(48.7±11.1)岁。乳腺癌的分型和临床分期按中国常见恶性肿瘤诊治规范[2]进行。组织学分级参照改良的Bloom和Richardson标准[3]。所有病例手术前后均未接受系统的放疗和/或化疗。1989年5月～1992年9月30例病人随访5年以上。
, 百拇医药
1.2 主要试剂
兔抗人p16多克隆抗体(美国Santa Cruz Biotechorology公司产品)。兔抗人c-erbB-2多克隆抗体(A-485)(Dako公司产品)。兔抗鼠免疫球蛋白(Dako公司产品)。ABC试剂盒(Vector Laboratories,Inc产品)。
1.3 方法
采用抗生物素蛋白-生物素免疫复合物(Avidin-Biotin Complex,ABC)法。石蜡片脱脂，水化，封闭非特异性背景，每片滴加1∶50的兔抗人p16多克隆
抗体或1∶100的兔抗人c-erbB-2多克隆抗体，孵化，DAB液显色，复染，脱水，透明，封片。用已知的强阳性肝癌和膀胱癌标本同乳腺癌标本一起染色，分别作p16和c-erbB-2蛋白表达的阳性对照。用正常血清代替各自的一抗作阴性对照。p16免疫染色以肿瘤细胞浆(20%以上)，呈明确的棕黄色为阳性表达。c-erbB-2免疫染色以肿瘤细胞膜(50%以上)呈明确的棕黄色为阳性表达。
, 百拇医药
1.4 统计学方法
计量资料的平均值用均数±标准差表示，均数比较采用t检验。计数资料的比较用连续校正卡方检验或精确概率法。一致性检验采用Kappa检验。
2 结果
2.1 p16蛋白表达与乳腺癌临床病理因素及预后的关系
50例乳腺癌标本中17例(34.00%)有p16蛋白表达，阳性物质主要分布于癌细胞浆内，2例同时伴弱的细胞膜着色，呈弥漫性棕黄色颗粒，阳性细胞弥漫分布于癌细胞区域，其比例20%～90%不等。良性对照组仅1例有p16蛋白表达，为细胞浆着色，伴弱细胞膜着色，阳性细胞集中在非典型增生细胞部分。正常对照组无p16蛋白表达。
p16蛋白表达与乳腺癌不同组织类型之间无显著相关。p16蛋白表达阳性组患者年龄为(48.4±10.2)岁，阴性组患者年龄为(49.3±11.7)岁，两均数经t检验显示：t=0.1492,P=0.8820,故p16表达与患者的年龄无关。p16蛋白表达亦与乳腺癌的肿瘤体积、病理类型、临床分期、组织分级、淋巴结有无转移、ER和PR之间无明显相关性。p16蛋白表达在近、远期生存组之间无明显差异。
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2.2 c-erbB-2蛋白表达与乳腺癌临床病理因素及预后的关系
50例乳腺癌标本中24例(48.00%)有c-erbB-2蛋白表达，阳性染色主要分布于癌细胞膜上，3例伴弱的细胞浆染色，呈弥漫性棕黄色颗粒，阳性细胞比例大多在50%～100%之间。良性对照组仅1例c-erbB-2表达阳性，阳性反应为瘤细胞膜呈棕黄色颗粒，集中分布于重度非典型增生细胞上。正常对照组未见阳性染色细胞。
c-erbB-2蛋白表达与乳腺-2多克隆抗体，孵化，DAB液显色，复染，脱水，透明，封片。用已知的强阳性肝癌和膀胱癌标本同乳腺癌标本一起染色，分别作p16和c-erbB-2蛋白表达的阳性对照。用正常血清代替各自的一抗作阴性对照。p16免疫染色以肿瘤细胞浆(20%以上)，呈明确的棕黄色为阳性表达。c-erbB-2免疫染色以肿瘤细胞膜(50%以上)呈明确的棕黄色为阳性表达。
1.4 统计学方法
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计量资料的平均值用均数±标准差表示，均数比较采用t检验。计数资料的比较用连续校正卡方检验或精确概率法。一致性检验采用Kappa检验。
2 结果
2.1 p16蛋白表达与乳腺癌临床病理因素及预后的关系
50例乳腺癌标本中17例(34.00%)有p16蛋白表达，阳性物质主要分布于癌细胞浆内，2例同时伴弱的细胞膜着色，呈弥漫性棕黄色颗粒，阳性细胞弥漫分布于癌细胞区域，其比例20%～90%不等。良性对照组仅1例有p16蛋白表达，为细胞浆着色，伴弱细胞膜着色，阳性细胞集中在非典型增生细胞部分。正常对照组无p16蛋白表达。
p16蛋白表达与乳腺癌不同组织类型之间无显著相关。p16蛋白表达阳性组患者年龄为(48.4±10.2)岁，阴性组患者年龄为(49.3±11.7)岁，两均数经t检验显示：t=0.1492,P=0.8820,故p16表达与患者的年龄无关。p16蛋白表达亦与乳腺癌的肿瘤体积、病理类型、临床分期、组织分级、淋巴结有无转移、ER和PR之间无明显相关性。p16蛋白表达在近、远期生存组之间无明显差异。
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2.2 c-erbB-2蛋白表达与乳腺癌临床病理因素及预后的关系
50例乳腺癌标本中24例(48.00%)有c-erbB-2蛋白表达，阳性染色主要分布于癌细胞膜上，3例伴弱的细胞浆染色，呈弥漫性棕黄色颗粒，阳性细胞比例大多在50%～100%之间。良性丢?3.2 c-erbB-2异常表达在原发性乳腺癌中的意义
本实验表明，c-erbB-2在乳腺不典型增生导管及癌细胞中表达，而在正常乳腺组织及良性组织中不表达，这提示c-erbB-2检测对乳腺良、恶性病变的鉴别和乳腺癌的早期诊断具有一定的价值。我们对不同组织类型乳腺癌的分析发现c-erbB-2表达阳性率在浸润性导管癌最高(66.67%),与国外的文献报道一致[8]。一些少见的被认为预后较好的类型,如粘液腺癌、髓样癌、高分化腺癌、筛状癌和乳头状癌c-erbB-2表达较为少见，在小叶癌中更为罕见[8]。这表明c-erbB-2可望成为识别乳腺癌一个特殊亚群的标志物。
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Slamon等[7]发现c-erbB-2的扩增在乳腺癌中的发生率很高，并指出基因扩增与淋巴结转移及预后均有关。本研究中，c-erbB-2表达与乳腺癌淋巴结转移呈正相关，提示c-erbB-2与乳腺癌的转移有密切关系。但未发生c-erbB-2表达与乳腺癌临床病理因素之间有相关关系，也许与病例选择、标本量大小、抗体选择等有关。Wright等[9]认为c-erbB-2癌基因蛋白的表达是仅次于淋巴结转移，具有第二位预后意义的指标。本研究也证实c-erbB-2表达者5年生存率显著低于阴性表达者。说明c-erbB-2与乳腺癌的预后密切相关，因此，对早期和被传统指标认为有较好预后乳腺癌病人进一步检测c-erbB-2表达是十分必要的。
参考文献
1 Yamashita H,Kobayashi S,Iwase H,et al.Analysis of oncogenes and tumor suppressor genes in human breast cancer.Jpn J Cancer Res,1993;84:871～878
, http://www.100md.com
2 卫生部医政司编.中国常见恶性肿瘤诊治规范(乳腺).北京：北京医科大学与中国协和医院医科大学联合出版社，1991：53～56
3 Bloom HJG,Richardson WW.Histological grading and prognosis in breast cancer.Br J Cancer, 1957;11:359～377
4 Tam SW, Shay JW,Pagano M.Differential expression and cell cycle regulation of the cyclin dependent kinase 4 inhibitor p16 INK4.Cancer Res,1994;54:5816～5820
5 郭山春，疗松林，丁华野，等.p16蛋白在乳腺癌中的表达及其与预后的关系.中华病理学杂志，1997；26(3)：175～176
, http://www.100md.com
6 Mariam G,Noona A,Anne EL,et al.Effect of mtsl(S100A4) expression on he progression of human brest cancer cells.Int J Cancer, 1996:67:831～841
7 Slamon DJ,Clark GM,Wong SG,et al.Human breast cancer:Correlation of relapse and survival with amplification of the HER-2/neu oncogene.Science,1987;235(4785):177～182
8 Soomro S,Shousha S,Taylor P,et al.c-erbB-2 expression in different histological types of invasive breast carcinoma.J Clin Pathol,1991;44(3):211～214
9 Wright C,Angus B,Nicholoson S,et al.Expression of c-erbB-2 oncoprotein:A prognostic indictor in human breast cancer.Cancer Res,1989;49:2087～2092
收稿日期：1999-06-25, 百拇医药
单位：郑维(海南省人民医院普外科(海口 570311))；文明星(湖南医科大学附属二院普外科(长沙 410011))；康红(海南人民医院肿瘤内科(海口 570311))
关键词：乳腺癌；p16基因；c-erbB-2基因；免疫组化
中国现代医学杂志000206 我们采用免疫组化技术，检测50例原发性乳腺癌p16和c-erbB-2蛋白的表达情况。结果显示：17例(34.00%)p16蛋白表达阳性，24例(48.00%)c-erbB-2蛋白表达阳性。p16蛋白表达与乳腺癌的临床病理因素及预后无明显相关性。c-erbB-2蛋白表达在有淋巴结转移的乳腺癌中较多见(p=0.0237)，且5年生存率低于阴性组(P=0.0169)。p16和c-erbB-2蛋白表达之间不存在一致性关系。结论：c-erbB-2蛋白表达在乳腺癌伴淋巴结转移中较多见，并降低远期生存率。
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分类号 R737.9
THE SIGNIFICANCE OF THE EXPRESSION OF P16 AND c-erbB-2
PROTEINS IN PRIMARY BREAST CANCER
Zheng Wei, Kang Hong, Wen Mingxing
(Department of General Surgery, Public Hospital of Hainan Province, Haikou, Hainan 570311)
Objectives:To study the expression of P16 and c-erbB-2 and its clinical significance in primary breast cancer.Methods:The expression of P16 and c-erbB-2 were detected with immunohistochemical technique in 50 cases of primary breast cancer, 10 cases of papilloma within lactiferous duct and 10 cases of normal breast specimens.Results:P
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ositive P16 protein expressed in 17 cases of breast cancer (34%) and positive c-erbB-2 protein expressed in 24 cases of breast cancer (48%). There was not a significant correlation between the expression of P16 protein and the clinical pathological factors and the prognosis of breast cancer. The expression of c-erbB-2 protein increased significantly in the breast cancer with lymphatic metastasis (P<0.05), which had a lower five-year survival rate than that in the cases without lymphatic metastasis (P<0.05). There was not an expression consistency between P16 and c-erbB-2 proteins.Conclusions:Higher expression of c-erbB-2 occurs in the breast cancer with lymphatic metastasis and decreases the late survival rate of the patients.
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Key Words:Breast Cancer;P16 Gene;c-erbB-2 Gene;Immunohistochemistry;Protein Expressi
on
乳腺上皮细胞分子遗传学特征的改变与乳腺癌的发生、演进密切相关，数种癌基因的扩增和过表达及抑癌基因的突变均不同程度地存在于乳腺癌细胞中[1]。我们采用免疫组化技术检测了50例乳腺癌抑癌基因MTSI(p16)和癌基因c-erbB-2蛋白的表达情况，旨在探讨p16和c-erbB-2蛋白表达与乳腺癌的生物学行为及预后之间的关系。
1 材料与方法
1.1 研究对象
随机选择湖南医科大学附二医院原发性乳腺癌蜡块1989年5月～1992年9月30例及1997年3～10月20例，共50例。10例乳腺乳管内乳头状瘤和10例正常乳腺组织标本作良性和正常对照。组织用福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚5μm。全部为女性，年龄28～72岁，平均(48.7±11.1)岁。乳腺癌的分型和临床分期按中国常见恶性肿瘤诊治规范[2]进行。组织学分级参照改良的Bloom和Richardson标准[3]。所有病例手术前后均未接受系统的放疗和/或化疗。1989年5月～1992年9月30例病人随访5年以上。
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1.2 主要试剂
兔抗人p16多克隆抗体(美国Santa Cruz Biotechorology公司产品)。兔抗人c-erbB-2多克隆抗体(A-485)(Dako公司产品)。兔抗鼠免疫球蛋白(Dako公司产品)。ABC试剂盒(Vector Laboratories,Inc产品)。
1.3 方法
采用抗生物素蛋白-生物素免疫复合物(Avidin-Biotin Complex,ABC)法。石蜡片脱脂，水化，封闭非特异性背景，每片滴加1∶50的兔抗人p16多克隆
抗体或1∶100的兔抗人c-erbB-2多克隆抗体，孵化，DAB液显色，复染，脱水，透明，封片。用已知的强阳性肝癌和膀胱癌标本同乳腺癌标本一起染色，分别作p16和c-erbB-2蛋白表达的阳性对照。用正常血清代替各自的一抗作阴性对照。p16免疫染色以肿瘤细胞浆(20%以上)，呈明确的棕黄色为阳性表达。c-erbB-2免疫染色以肿瘤细胞膜(50%以上)呈明确的棕黄色为阳性表达。
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1.4 统计学方法
计量资料的平均值用均数±标准差表示，均数比较采用t检验。计数资料的比较用连续校正卡方检验或精确概率法。一致性检验采用Kappa检验。
2 结果
2.1 p16蛋白表达与乳腺癌临床病理因素及预后的关系
50例乳腺癌标本中17例(34.00%)有p16蛋白表达，阳性物质主要分布于癌细胞浆内，2例同时伴弱的细胞膜着色，呈弥漫性棕黄色颗粒，阳性细胞弥漫分布于癌细胞区域，其比例20%～90%不等。良性对照组仅1例有p16蛋白表达，为细胞浆着色，伴弱细胞膜着色，阳性细胞集中在非典型增生细胞部分。正常对照组无p16蛋白表达。
p16蛋白表达与乳腺癌不同组织类型之间无显著相关。p16蛋白表达阳性组患者年龄为(48.4±10.2)岁，阴性组患者年龄为(49.3±11.7)岁，两均数经t检验显示：t=0.1492,P=0.8820,故p16表达与患者的年龄无关。p16蛋白表达亦与乳腺癌的肿瘤体积、病理类型、临床分期、组织分级、淋巴结有无转移、ER和PR之间无明显相关性。p16蛋白表达在近、远期生存组之间无明显差异。
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2.2 c-erbB-2蛋白表达与乳腺癌临床病理因素及预后的关系
50例乳腺癌标本中24例(48.00%)有c-erbB-2蛋白表达，阳性染色主要分布于癌细胞膜上，3例伴弱的细胞浆染色，呈弥漫性棕黄色颗粒，阳性细胞比例大多在50%～100%之间。良性对照组仅1例c-erbB-2表达阳性，阳性反应为瘤细胞膜呈棕黄色颗粒，集中分布于重度非典型增生细胞上。正常对照组未见阳性染色细胞。
c-erbB-2蛋白表达与乳腺-2多克隆抗体，孵化，DAB液显色，复染，脱水，透明，封片。用已知的强阳性肝癌和膀胱癌标本同乳腺癌标本一起染色，分别作p16和c-erbB-2蛋白表达的阳性对照。用正常血清代替各自的一抗作阴性对照。p16免疫染色以肿瘤细胞浆(20%以上)，呈明确的棕黄色为阳性表达。c-erbB-2免疫染色以肿瘤细胞膜(50%以上)呈明确的棕黄色为阳性表达。
1.4 统计学方法
, http://www.100md.com
计量资料的平均值用均数±标准差表示，均数比较采用t检验。计数资料的比较用连续校正卡方检验或精确概率法。一致性检验采用Kappa检验。
2 结果
2.1 p16蛋白表达与乳腺癌临床病理因素及预后的关系
50例乳腺癌标本中17例(34.00%)有p16蛋白表达，阳性物质主要分布于癌细胞浆内，2例同时伴弱的细胞膜着色，呈弥漫性棕黄色颗粒，阳性细胞弥漫分布于癌细胞区域，其比例20%～90%不等。良性对照组仅1例有p16蛋白表达，为细胞浆着色，伴弱细胞膜着色，阳性细胞集中在非典型增生细胞部分。正常对照组无p16蛋白表达。
p16蛋白表达与乳腺癌不同组织类型之间无显著相关。p16蛋白表达阳性组患者年龄为(48.4±10.2)岁，阴性组患者年龄为(49.3±11.7)岁，两均数经t检验显示：t=0.1492,P=0.8820,故p16表达与患者的年龄无关。p16蛋白表达亦与乳腺癌的肿瘤体积、病理类型、临床分期、组织分级、淋巴结有无转移、ER和PR之间无明显相关性。p16蛋白表达在近、远期生存组之间无明显差异。
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2.2 c-erbB-2蛋白表达与乳腺癌临床病理因素及预后的关系
50例乳腺癌标本中24例(48.00%)有c-erbB-2蛋白表达，阳性染色主要分布于癌细胞膜上，3例伴弱的细胞浆染色，呈弥漫性棕黄色颗粒，阳性细胞比例大多在50%～100%之间。良性丢?3.2 c-erbB-2异常表达在原发性乳腺癌中的意义
本实验表明，c-erbB-2在乳腺不典型增生导管及癌细胞中表达，而在正常乳腺组织及良性组织中不表达，这提示c-erbB-2检测对乳腺良、恶性病变的鉴别和乳腺癌的早期诊断具有一定的价值。我们对不同组织类型乳腺癌的分析发现c-erbB-2表达阳性率在浸润性导管癌最高(66.67%),与国外的文献报道一致[8]。一些少见的被认为预后较好的类型,如粘液腺癌、髓样癌、高分化腺癌、筛状癌和乳头状癌c-erbB-2表达较为少见，在小叶癌中更为罕见[8]。这表明c-erbB-2可望成为识别乳腺癌一个特殊亚群的标志物。
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Slamon等[7]发现c-erbB-2的扩增在乳腺癌中的发生率很高，并指出基因扩增与淋巴结转移及预后均有关。本研究中，c-erbB-2表达与乳腺癌淋巴结转移呈正相关，提示c-erbB-2与乳腺癌的转移有密切关系。但未发生c-erbB-2表达与乳腺癌临床病理因素之间有相关关系，也许与病例选择、标本量大小、抗体选择等有关。Wright等[9]认为c-erbB-2癌基因蛋白的表达是仅次于淋巴结转移，具有第二位预后意义的指标。本研究也证实c-erbB-2表达者5年生存率显著低于阴性表达者。说明c-erbB-2与乳腺癌的预后密切相关，因此，对早期和被传统指标认为有较好预后乳腺癌病人进一步检测c-erbB-2表达是十分必要的。
参考文献
1 Yamashita H,Kobayashi S,Iwase H,et al.Analysis of oncogenes and tumor suppressor genes in human breast cancer.Jpn J Cancer Res,1993;84:871～878
, http://www.100md.com
2 卫生部医政司编.中国常见恶性肿瘤诊治规范(乳腺).北京：北京医科大学与中国协和医院医科大学联合出版社，1991：53～56
3 Bloom HJG,Richardson WW.Histological grading and prognosis in breast cancer.Br J Cancer, 1957;11:359～377
4 Tam SW, Shay JW,Pagano M.Differential expression and cell cycle regulation of the cyclin dependent kinase 4 inhibitor p16 INK4.Cancer Res,1994;54:5816～5820
5 郭山春，疗松林，丁华野，等.p16蛋白在乳腺癌中的表达及其与预后的关系.中华病理学杂志，1997；26(3)：175～176
, http://www.100md.com
6 Mariam G,Noona A,Anne EL,et al.Effect of mtsl(S100A4) expression on he progression of human brest cancer cells.Int J Cancer, 1996:67:831～841
7 Slamon DJ,Clark GM,Wong SG,et al.Human breast cancer:Correlation of relapse and survival with amplification of the HER-2/neu oncogene.Science,1987;235(4785):177～182
8 Soomro S,Shousha S,Taylor P,et al.c-erbB-2 expression in different histological types of invasive breast carcinoma.J Clin Pathol,1991;44(3):211～214
9 Wright C,Angus B,Nicholoson S,et al.Expression of c-erbB-2 oncoprotein:A prognostic indictor in human breast cancer.Cancer Res,1989;49:2087～2092
收稿日期：1999-06-25, 百拇医药