毛细管区带电泳法测定马钱子及其制剂中士的宁和马钱子碱的含量
作者：柴逸峰 张国庆 纪松岗 李翔 李捷玮 殷学平
单位：柴逸峰(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；纪松岗(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；李翔(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；张国庆(东方肝胆外科医院药局)；李捷玮(东方肝胆外科医院药局)；殷学平(科研部)
关键词：电泳；毛细管区带；马钱子；士的宁；马钱子碱
第二军医大学学报000215 摘 要：目的：建立毛细管区带电泳法(CZE)测定马钱子及其制剂“治伤消淤丸”中士的宁和马钱子碱的含量。方法：选择含0.2 mol/L醋酸的20 mmol/L醋酸铵(pH 3.64)溶液为分离用缓冲液，以盐酸多巴胺为内标，采用3.5 kPa进样5 s，运行电压25 kV，紫外检测波长214 nm。结果：士的宁和马钱子碱的浓度在5～100 μg/ml内时，具有良好的线性关系和重现性，相关系数r分别为0.999 6和0.999 5，RSD<4.5%，加样回收率均在95%～105%，最低检测限分别为0.06和0.04 μg/ml。结论：CZE可有效地分离、测定马钱子及其制剂“治伤消淤丸”中的士的宁和马钱子碱的含量，方法简便、快速、准确、可靠。
, 百拇医药
分类号：R 282.710.3 文献标识码：A
文章编号：0258-879X(2000)02-0146-03
Separation and determination of strychnine and brucine in Strychnos nux-vomica L.by capillary zone electrophoresis
CHAI Yi-Feng
(Department of Pharmaceutical Analysis, College of Pharmacy,Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
JI Song-Gang
, 百拇医药
(Department of Pharmaceutical Analysis, College of Pharmacy,Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
LI Xiang
(Department of Pharmaceutical Analysis, College of Pharmacy,Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
ZHANG Guo-Qing
(Department of Pharmacy, Eastern Hospital of Hepatobiliary Surgery)
, 百拇医药
LI Jie-Wei2,(Department of Pharmacy, Eastern Hospital of Hepatobiliary Surgery)
YING Xue-Ping3
(Ministry of Science and Research)
ABSTRACT：Objective：To determine the strychnine and brucine in Strychnos nux-vomica L. and it′s preparation Zhishangxiaoyuwan. Methods: The capillary zone electrophoresis method was used. The optimal condition of the running buffer solution was 20 mmol/L ammonium acetate containing 0.2 mol/L acetic acid at pH 3.64. The samples were injected with pressure at 3.5 kPa for 5 s. The applied voltage was 25 kV and the wavelength of the detection was 214 nm. Dopamine hydrochloride was chosen as the internal standard. Results: The method had good linearity and reproducibility in the range 5-100 μg/ml of strychnine and brucine, the correlation coefficients (r) were 0.999 6 and 0.999 5. The RSD was less than 4.5%. The results of the added recovery were 95%-105%. Conclusion: In this condition strychnine and brucine can be well separated from the other components. The advantages of the method is convenient, rapid, accurate and reliable.
, 百拇医药
KEY WORDS：electrophoresis, capillary zone; Strychnos nux-vomica L.; strychnine; brucine▲
马钱子为马钱科植物马钱 Strychnos nux-vomica L.或云南马钱Strychnos pierriana A. W. Hill的干燥成熟种子，具有通络止痛、散结消肿之功效，主要用于风湿顽痹、麻木瘫痪、跌扑损伤、痈疽肿痛；小儿麻痹后遗症、类风湿性关节痛[1]。马钱子中的主要活性成分是士的宁和马钱子碱，它们都具有使中枢神经系统兴奋等多种作用，但因其有效剂量与中毒剂量非常接近，易发生中毒。同时，虽然《药典》对马钱子的炮制有统一规定，但实际上马钱子因为产地和炮制程度的不同，士的宁和马钱子碱的含量亦有很大差异，即使经加工为中成药应用，使用者还时有毒副反应发生[2]。目前，士的宁和马钱子碱常用的含量测定方法有紫外分光光度法[1]、薄层扫描法[3]和高效液相色谱法[4～6]等。紫外分光光度法的选择性差、杂质干扰多；薄层扫描法精密度低，重现性较差；高效液相色谱法是目前中药测定最常用的方法，但是因为中药成分复杂，易污染色谱柱，对样品的预处理要求较高，同时，色谱柱的价格较贵，流动相消耗大量有机溶剂，实验成本高，环保差。毛细管电泳法是近十几年迅速发展起来的一种新型分离技术，具有分离效率高、快速、微量和成本低、环保好等优点。本文报告用毛细管区带电泳(CZE)测定马钱子及其制剂“治伤消淤丸”中士的宁和马钱子碱含量，结果令人满意。
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1 材料和方法
1.1 药品和试剂 标准品：士的宁(strychnine)和马钱子碱(brucine)化学对照品购自中国药品生物制品检定所，士的宁批号为705-9004；马钱子碱批号为706-9002。盐酸多巴胺(dopamine hydrochloride)由重庆合成制药厂提供。样品：马钱子购于上海市医药公司和长海医院中药房，并经生药教研室鉴定为中药马钱子。治伤消淤丸由上海中药制药一厂生产，批号为971112A。甲醇为色谱纯，氯仿、氨水、冰醋酸、醋酸铵等均为分析纯，实验用水为重蒸馏水。
1.2 仪器和电泳条件 Beckman P/ACE System 5000 HPCE ，紫外检测器Gold系列数据处理软件；Branson SB3200超声仪；pHS-3C型精密pH计(上海雷磁分析仪器厂)。电泳条件：空心熔融石英毛细管柱，50 cm×75 μm(I.D.)×365 μm(O.D.)；恒压25 kV；恒温25℃；进样压力3.5 kPa，时间5 s；检测波长214 nm；运行缓冲液20 mmol/L醋酸铵含0.2 mol/L冰醋酸(pH 3.64)。
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1.3 标准溶液的制备 精密称取士的宁标准品8.0 mg，马钱子碱标准品17.6 mg，分别置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，制得士的宁或马钱子碱标准溶液，置冰箱中保存。精密称取盐酸多巴胺内标102.7 mg，置于50 ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，制得盐酸多巴胺标准溶液，置冰箱中保存。
1.4 标准曲线的绘制 精密量取士的宁和马钱子碱溶液适量经稀释并加入内标后，使士的宁和马钱子碱的浓度分别为5，10，20，40，60，80，100 μg/ml，内标浓度为60 μg/ml。按上述电泳条件进行测定。以士的宁和马钱子碱峰与内标峰面积之比Y对浓度X进行线性回归。
1.5 日内和日间精密度考察 分别对浓度为5，40，100 μg/ml的士的宁和马钱子碱标准溶液进行日内和日间考察，按上述电泳条件进行分离操作，计算精密度。
1.6 加样回收率考察 精密称取马钱子样品30 mg，精密加入士的宁和马钱子碱标准溶液0.825，0.170 ml，按1.7.1步骤进行操作，计算加样回收率。
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1.7 样品的制备
1.7.1 马钱子样品的制备 精密称取马钱子样品(a:药材公司，b:长海医院)各30 mg，置于100 ml圆底烧瓶中，用0.5 ml氨水润湿5 min后，加入20 ml氯仿浸泡30 min，加热回流60 min，放冷至室温后，减压过滤提取液，残渣用甲醇洗涤3次，每次5 ml，合并提取液，旋转蒸发至干，用甲醇溶解并转移至25 ml容量瓶中，加入内标溶液0.750 ml，用甲醇定容至刻度，按上述电泳条件进行分离测定。
1.7.2 治伤消淤丸样品的制备 精密称取治伤消淤丸样品500 mg，置于100 ml圆底烧瓶中，用1 ml氨水润湿5 min后，加入30 ml氯仿浸泡30 min，其余操作同1.7.1。
2 结果和讨论
2.1 方法学评价 回归方程和线性范围：士的宁5.00～100.00 μg/ml， Y=-0.008 858+0.021 80X， r = 0.999 6；马钱子碱5.01～100.20 μg/ml， Y=-0.004 588+0.027 24X， r = 0.999 5。以信噪比等于3∶1为标准，测定士的宁和马钱子碱的最小检测浓度分别为0.06和0.04 μg/ml。日内和日间精密度见表1。士的宁和马钱子碱加样回收率分别为102.9%，98.5%；RSD分别为2.23%，2.32% (n=3)。
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表1 日内和日间精密度
Tab 1 Inter-day and intra-day accuracy
(n=3) Concentration
[ρB/(g.ml-1)]
RSD (%)
Inter-day
Intra-days
Strychnine
Brucine
Strychnine
, 百拇医药
Brucine
5
3.11
3.50
3.51
4.22
40
2.43
2.82
2.74
3.03
100
1.20
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1.64
1.36
1.57
2.2 分离条件的选择
2.2.1 缓冲液的种类和浓度 考察了醋酸铵和醋酸钠缓冲液对分离效果的影响。将20 mmol/L醋酸铵溶液与20 mmol/L醋酸钠溶液以不同比例(10∶0，8∶2，6∶4，4∶6，2∶8，0∶10)分别均匀混合，考察其对分离的影响。结果表明，20 mmol/L醋酸铵溶液作为运行缓冲液的分离效果最佳，随着醋酸钠溶液在缓冲液中比例的增加，分离效果和峰形会逐渐变差。另外，还考察了不同浓度的醋酸铵缓冲液(10，20，40 mmol/L)对分离效果的影响。结果表明，20 mmol/L的醋酸铵缓冲液的分离效果和峰形最佳，10 mmol/L醋酸铵溶液的峰形较差，而40 mmol/L醋酸铵溶液的运行电流不稳定。
, 百拇医药
2.2.2 缓冲液的pH值 考察了pH值对分离效果的影响。在20 mmol/L醋酸铵缓冲液中添加不同浓度的冰醋酸溶液(0.1，0.2，0.5 mol/L，相应pH值分别为3.91，3.64，3.28)。结果表明，在醋酸铵缓冲液中添加冰醋酸，降低溶液的pH值，会使分离效果得到明显改善，其中以含0.2 mol/L冰醋酸的醋酸铵缓冲液的分离效果最佳 ，在电泳图谱中出现相近的3个峰。但随着pH值的进一步降低，会使出峰时间延长，导致峰严重拖尾，影响分离效果。
2.2.3 有机改性剂 考察了在醋酸铵缓冲液中加入有机改性剂对分离效果的影响。使用不同甲醇或乙腈含量(10%，20%，40%，80%，100%)的醋酸铵缓冲液进行分离。结果表明，加入甲醇或乙腈对马钱子及其制剂中士的宁和马钱子碱的分离无明显改善，并且随着浓度的增高，会使出峰时间延长，导致峰严重拖尾，分离效果降低。
2.2.4 检测波长的选择 考察了不同检测波长(200，214，254 nm)的灵敏度。结果表明，在214 nm处，士的宁和马钱子碱的吸收值最大，灵敏度最高。所以，选用含0.2 mol/L醋酸的20 mmol/L醋酸铵溶液(pH 3.64)为分离用缓冲液，214 nm为紫外检测波长。根据此实验条件所得到的电泳图见图1。
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图1 对照品和样品的电泳图
Fig 1 Electropherograms of the reference and samples
A: Standard sample; B: Strychnos nux-vomica L.; C: Zhishangxiaoyuwan; IS: Dopamine hydrochloride; 1: Strychnine; 2: Brucine
2.3 测定结果
2.3.1 马钱子的测定 马钱子中士的宁和马钱子碱的含量分别为a：22.60，9.08 g/mg，RSD (%)：1.17，1.90 (n=3)； b：22.17，10.83 g/mg，RSD (%)：2.42，3.09 (n=3)。
2.3.2 治伤消淤丸的测定结果 治伤消淤丸中士的宁和马钱子碱的含量分别为1.80，0.89 g/mg，RSD (%)：2.28，2.13 (n=3)。
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2.4 提取条件的选择 考察了甲醇超声提取(Ⅰ)、氯仿超声提取(Ⅱ)、甲醇加热提取(Ⅲ)、氯仿加热提取(Ⅳ)和氨水-氯仿加热提取(Ⅴ)等5种提取方法的提取效率。结果表明，以氨水浸润30 min后，氯仿加热提取1 h，提取效率最高，杂质最少。
本研究建立了CZE分离测定马钱子及其制剂中土的宁和马钱子碱的含量的方法。与HPLC法相比，该方法简便，样品无需预处理，可提取后测定；且快速、准确、可靠。为马钱子及其制剂的质量控制提供了一种新的有效的分析手段。
基金项目：全军摼盼鍞医学科研基金课题 (98M074)
作者简介：柴逸峰(1965～)，男(汉族)，博士，讲师
参考文献：
[1]中华人民共和国药典委员会编. 中华人民共和国药典[M]. 1995年版(一部).广州：广东科技出版社，1995. 38.
, 百拇医药
[2]阴 健. 中药现代研究与临床应用(1)[M].北京：学苑出版社，1993. 118-119.
[3]定天明，张又平. 风湿片中士的宁、马钱子碱及麻黄碱的薄层扫描测定[J]. 药物分析杂志，1993，13(5)：334-336.
[4]傅应华，韩伟东，徐宏祥，等. 高效液相色谱法同时测定制马钱子中士的宁和马钱子碱的含量[J]. 中国药科大学学报，1998, 29(4)：281-283.
[5]顾志平，张曙明，王春兰，等. 高效液相色谱法同时测定马钱属植物中士的宁和马钱子碱的含量[J]. 药学学报，1997， 32(10)：791-794.
[6]顾志平，连文琰，刘慧灵，等. 中药马钱子商品中士的宁和马钱子碱的含量测定[J]. 中国药学杂志，1996, 31(12)：747-749.
收稿日期：1999-08-18
修稿日期：1999-11-26, http://www.100md.com
单位：柴逸峰(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；纪松岗(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；李翔(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；张国庆(东方肝胆外科医院药局)；李捷玮(东方肝胆外科医院药局)；殷学平(科研部)
关键词：电泳；毛细管区带；马钱子；士的宁；马钱子碱
第二军医大学学报000215 摘 要：目的：建立毛细管区带电泳法(CZE)测定马钱子及其制剂“治伤消淤丸”中士的宁和马钱子碱的含量。方法：选择含0.2 mol/L醋酸的20 mmol/L醋酸铵(pH 3.64)溶液为分离用缓冲液，以盐酸多巴胺为内标，采用3.5 kPa进样5 s，运行电压25 kV，紫外检测波长214 nm。结果：士的宁和马钱子碱的浓度在5～100 μg/ml内时，具有良好的线性关系和重现性，相关系数r分别为0.999 6和0.999 5，RSD<4.5%，加样回收率均在95%～105%，最低检测限分别为0.06和0.04 μg/ml。结论：CZE可有效地分离、测定马钱子及其制剂“治伤消淤丸”中的士的宁和马钱子碱的含量，方法简便、快速、准确、可靠。
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分类号：R 282.710.3 文献标识码：A
文章编号：0258-879X(2000)02-0146-03
Separation and determination of strychnine and brucine in Strychnos nux-vomica L.by capillary zone electrophoresis
CHAI Yi-Feng
(Department of Pharmaceutical Analysis, College of Pharmacy,Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
JI Song-Gang
, 百拇医药
(Department of Pharmaceutical Analysis, College of Pharmacy,Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
LI Xiang
(Department of Pharmaceutical Analysis, College of Pharmacy,Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
ZHANG Guo-Qing
(Department of Pharmacy, Eastern Hospital of Hepatobiliary Surgery)
, 百拇医药
LI Jie-Wei2,(Department of Pharmacy, Eastern Hospital of Hepatobiliary Surgery)
YING Xue-Ping3
(Ministry of Science and Research)
ABSTRACT：Objective：To determine the strychnine and brucine in Strychnos nux-vomica L. and it′s preparation Zhishangxiaoyuwan. Methods: The capillary zone electrophoresis method was used. The optimal condition of the running buffer solution was 20 mmol/L ammonium acetate containing 0.2 mol/L acetic acid at pH 3.64. The samples were injected with pressure at 3.5 kPa for 5 s. The applied voltage was 25 kV and the wavelength of the detection was 214 nm. Dopamine hydrochloride was chosen as the internal standard. Results: The method had good linearity and reproducibility in the range 5-100 μg/ml of strychnine and brucine, the correlation coefficients (r) were 0.999 6 and 0.999 5. The RSD was less than 4.5%. The results of the added recovery were 95%-105%. Conclusion: In this condition strychnine and brucine can be well separated from the other components. The advantages of the method is convenient, rapid, accurate and reliable.
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KEY WORDS：electrophoresis, capillary zone; Strychnos nux-vomica L.; strychnine; brucine▲
马钱子为马钱科植物马钱 Strychnos nux-vomica L.或云南马钱Strychnos pierriana A. W. Hill的干燥成熟种子，具有通络止痛、散结消肿之功效，主要用于风湿顽痹、麻木瘫痪、跌扑损伤、痈疽肿痛；小儿麻痹后遗症、类风湿性关节痛[1]。马钱子中的主要活性成分是士的宁和马钱子碱，它们都具有使中枢神经系统兴奋等多种作用，但因其有效剂量与中毒剂量非常接近，易发生中毒。同时，虽然《药典》对马钱子的炮制有统一规定，但实际上马钱子因为产地和炮制程度的不同，士的宁和马钱子碱的含量亦有很大差异，即使经加工为中成药应用，使用者还时有毒副反应发生[2]。目前，士的宁和马钱子碱常用的含量测定方法有紫外分光光度法[1]、薄层扫描法[3]和高效液相色谱法[4～6]等。紫外分光光度法的选择性差、杂质干扰多；薄层扫描法精密度低，重现性较差；高效液相色谱法是目前中药测定最常用的方法，但是因为中药成分复杂，易污染色谱柱，对样品的预处理要求较高，同时，色谱柱的价格较贵，流动相消耗大量有机溶剂，实验成本高，环保差。毛细管电泳法是近十几年迅速发展起来的一种新型分离技术，具有分离效率高、快速、微量和成本低、环保好等优点。本文报告用毛细管区带电泳(CZE)测定马钱子及其制剂“治伤消淤丸”中士的宁和马钱子碱含量，结果令人满意。
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1 材料和方法
1.1 药品和试剂 标准品：士的宁(strychnine)和马钱子碱(brucine)化学对照品购自中国药品生物制品检定所，士的宁批号为705-9004；马钱子碱批号为706-9002。盐酸多巴胺(dopamine hydrochloride)由重庆合成制药厂提供。样品：马钱子购于上海市医药公司和长海医院中药房，并经生药教研室鉴定为中药马钱子。治伤消淤丸由上海中药制药一厂生产，批号为971112A。甲醇为色谱纯，氯仿、氨水、冰醋酸、醋酸铵等均为分析纯，实验用水为重蒸馏水。
1.2 仪器和电泳条件 Beckman P/ACE System 5000 HPCE ，紫外检测器Gold系列数据处理软件；Branson SB3200超声仪；pHS-3C型精密pH计(上海雷磁分析仪器厂)。电泳条件：空心熔融石英毛细管柱，50 cm×75 μm(I.D.)×365 μm(O.D.)；恒压25 kV；恒温25℃；进样压力3.5 kPa，时间5 s；检测波长214 nm；运行缓冲液20 mmol/L醋酸铵含0.2 mol/L冰醋酸(pH 3.64)。
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1.3 标准溶液的制备 精密称取士的宁标准品8.0 mg，马钱子碱标准品17.6 mg，分别置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，制得士的宁或马钱子碱标准溶液，置冰箱中保存。精密称取盐酸多巴胺内标102.7 mg，置于50 ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，制得盐酸多巴胺标准溶液，置冰箱中保存。
1.4 标准曲线的绘制 精密量取士的宁和马钱子碱溶液适量经稀释并加入内标后，使士的宁和马钱子碱的浓度分别为5，10，20，40，60，80，100 μg/ml，内标浓度为60 μg/ml。按上述电泳条件进行测定。以士的宁和马钱子碱峰与内标峰面积之比Y对浓度X进行线性回归。
1.5 日内和日间精密度考察 分别对浓度为5，40，100 μg/ml的士的宁和马钱子碱标准溶液进行日内和日间考察，按上述电泳条件进行分离操作，计算精密度。
1.6 加样回收率考察 精密称取马钱子样品30 mg，精密加入士的宁和马钱子碱标准溶液0.825，0.170 ml，按1.7.1步骤进行操作，计算加样回收率。
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1.7 样品的制备
1.7.1 马钱子样品的制备 精密称取马钱子样品(a:药材公司，b:长海医院)各30 mg，置于100 ml圆底烧瓶中，用0.5 ml氨水润湿5 min后，加入20 ml氯仿浸泡30 min，加热回流60 min，放冷至室温后，减压过滤提取液，残渣用甲醇洗涤3次，每次5 ml，合并提取液，旋转蒸发至干，用甲醇溶解并转移至25 ml容量瓶中，加入内标溶液0.750 ml，用甲醇定容至刻度，按上述电泳条件进行分离测定。
1.7.2 治伤消淤丸样品的制备 精密称取治伤消淤丸样品500 mg，置于100 ml圆底烧瓶中，用1 ml氨水润湿5 min后，加入30 ml氯仿浸泡30 min，其余操作同1.7.1。
2 结果和讨论
2.1 方法学评价 回归方程和线性范围：士的宁5.00～100.00 μg/ml， Y=-0.008 858+0.021 80X， r = 0.999 6；马钱子碱5.01～100.20 μg/ml， Y=-0.004 588+0.027 24X， r = 0.999 5。以信噪比等于3∶1为标准，测定士的宁和马钱子碱的最小检测浓度分别为0.06和0.04 μg/ml。日内和日间精密度见表1。士的宁和马钱子碱加样回收率分别为102.9%，98.5%；RSD分别为2.23%，2.32% (n=3)。
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表1 日内和日间精密度
Tab 1 Inter-day and intra-day accuracy
(n=3) Concentration
[ρB/(g.ml-1)]
RSD (%)
Inter-day
Intra-days
Strychnine
Brucine
Strychnine
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Brucine
5
3.11
3.50
3.51
4.22
40
2.43
2.82
2.74
3.03
100
1.20
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1.64
1.36
1.57
2.2 分离条件的选择
2.2.1 缓冲液的种类和浓度 考察了醋酸铵和醋酸钠缓冲液对分离效果的影响。将20 mmol/L醋酸铵溶液与20 mmol/L醋酸钠溶液以不同比例(10∶0，8∶2，6∶4，4∶6，2∶8，0∶10)分别均匀混合，考察其对分离的影响。结果表明，20 mmol/L醋酸铵溶液作为运行缓冲液的分离效果最佳，随着醋酸钠溶液在缓冲液中比例的增加，分离效果和峰形会逐渐变差。另外，还考察了不同浓度的醋酸铵缓冲液(10，20，40 mmol/L)对分离效果的影响。结果表明，20 mmol/L的醋酸铵缓冲液的分离效果和峰形最佳，10 mmol/L醋酸铵溶液的峰形较差，而40 mmol/L醋酸铵溶液的运行电流不稳定。
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2.2.2 缓冲液的pH值 考察了pH值对分离效果的影响。在20 mmol/L醋酸铵缓冲液中添加不同浓度的冰醋酸溶液(0.1，0.2，0.5 mol/L，相应pH值分别为3.91，3.64，3.28)。结果表明，在醋酸铵缓冲液中添加冰醋酸，降低溶液的pH值，会使分离效果得到明显改善，其中以含0.2 mol/L冰醋酸的醋酸铵缓冲液的分离效果最佳 ，在电泳图谱中出现相近的3个峰。但随着pH值的进一步降低，会使出峰时间延长，导致峰严重拖尾，影响分离效果。
2.2.3 有机改性剂 考察了在醋酸铵缓冲液中加入有机改性剂对分离效果的影响。使用不同甲醇或乙腈含量(10%，20%，40%，80%，100%)的醋酸铵缓冲液进行分离。结果表明，加入甲醇或乙腈对马钱子及其制剂中士的宁和马钱子碱的分离无明显改善，并且随着浓度的增高，会使出峰时间延长，导致峰严重拖尾，分离效果降低。
2.2.4 检测波长的选择 考察了不同检测波长(200，214，254 nm)的灵敏度。结果表明，在214 nm处，士的宁和马钱子碱的吸收值最大，灵敏度最高。所以，选用含0.2 mol/L醋酸的20 mmol/L醋酸铵溶液(pH 3.64)为分离用缓冲液，214 nm为紫外检测波长。根据此实验条件所得到的电泳图见图1。
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图1 对照品和样品的电泳图
Fig 1 Electropherograms of the reference and samples
A: Standard sample; B: Strychnos nux-vomica L.; C: Zhishangxiaoyuwan; IS: Dopamine hydrochloride; 1: Strychnine; 2: Brucine
2.3 测定结果
2.3.1 马钱子的测定 马钱子中士的宁和马钱子碱的含量分别为a：22.60，9.08 g/mg，RSD (%)：1.17，1.90 (n=3)； b：22.17，10.83 g/mg，RSD (%)：2.42，3.09 (n=3)。
2.3.2 治伤消淤丸的测定结果 治伤消淤丸中士的宁和马钱子碱的含量分别为1.80，0.89 g/mg，RSD (%)：2.28，2.13 (n=3)。
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2.4 提取条件的选择 考察了甲醇超声提取(Ⅰ)、氯仿超声提取(Ⅱ)、甲醇加热提取(Ⅲ)、氯仿加热提取(Ⅳ)和氨水-氯仿加热提取(Ⅴ)等5种提取方法的提取效率。结果表明，以氨水浸润30 min后，氯仿加热提取1 h，提取效率最高，杂质最少。
本研究建立了CZE分离测定马钱子及其制剂中土的宁和马钱子碱的含量的方法。与HPLC法相比，该方法简便，样品无需预处理，可提取后测定；且快速、准确、可靠。为马钱子及其制剂的质量控制提供了一种新的有效的分析手段。
基金项目：全军摼盼鍞医学科研基金课题 (98M074)
作者简介：柴逸峰(1965～)，男(汉族)，博士，讲师
参考文献：
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收稿日期：1999-08-18
修稿日期：1999-11-26, http://www.100md.com