血清MIA检测在恶性黑素瘤诊断中的临床价值
作者：高勇 贺祥 谢渭芬 王杰军 李舰
单位：高勇(第二军医大学长征医院肿瘤科，上海 200003)；王杰军(第二军医大学长征医院肿瘤科，上海 200003)；贺祥(科研部)；谢渭芬(长征医院消化内科)；李舰(长征医院消化内科)
关键词：黑素瘤抑制蛋白；黑素瘤
第二军医大学学报000205 摘 要：目的：探讨血清黑素瘤抑制蛋白(melonoma-inhibiting activity protein, MIA)在恶性黑素瘤诊断中的价值。方法：采用ELISA方法，检测不同临床分期的黑素瘤及其他恶性肿瘤患者，以及正常人血清MIA浓度。结果：正常成人(n=20)和肺癌(n=10)、肝癌(n=12)、结肠癌(n=12)患者血清MIA浓度全部低于正常(6.5 ng/ml)水平，黑素瘤患者血清MIA浓度明显升高，阳性率达77.3%(17/22)，其中Ⅲ，Ⅳ期患者阳性率达100%(15/15)。乳腺癌患者阳性率26.7% (4/15)。结论：血清MIA水平是临床诊断黑素瘤的一个较好指标。
, 百拇医药
分类号：R 739.504 文献标识码：A
文章编号：0258-879X(2000)02-0114-03
The clinical value of quantitated serum levels of
MIA protein in diagnosis of malignant melanomas
GAO Yong
(Department of Oncology, Changzheng Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200003, China)
WANG Jie-Jun
, 百拇医药
(Department of Oncology, Changzheng Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200003, China)
HE Xiang
(Ministry of Science and Research)
XIE Wei-Fen
(Department of Gastroenterology, Changzheng Hospital)
LI Jian
(Department of Gastroenterology, Changzheng Hospital)
, 百拇医药
ABSTRACT：Objective: To determine clinical value of serum melanoma-inhibiting activity(MIA) in patients with malignant melanomas. Methods: The serum levels of MIA were detected by means of a nonradioactive ELISA. Results: The enhanced MIA serum levels were detected in 26.7%(4/15) of patients with breast cancer, and in 77.3% (17/22) of patients with melanoma, of which 100% (15/15) were patients with stage Ⅲ or stage Ⅳ melanoma. Conclusion: MIA represents a novel serum marker for advanced malignant melanoma revealing the highest sensitivity and specificity among currently avaliable markers.
, http://www.100md.com
KEY WORDS：melanoma-inhibiting activity protein; melanoma▲
恶性黑素瘤抑制蛋白(melanoma-inhibiting activity protein, MIA)是Bogdahn等[1]1989年在研究恶性黑素瘤细胞株HTZ-19时，分离到的一个能够抑制恶性黑素瘤细胞增殖的蛋白。其基因定位于染色体19q13.32-13.33[2]，并证实与随后在软骨细胞内发现的CD-RAP (cartilage-derived retinoic acid-sensitive protein)基因是同样的一个基因[3]。MIA/CD-RAP与恶性黑素瘤的转移有密切的关系，正常组织和器官并不表达该蛋白。恶性肿瘤中，除了恶性黑素瘤细胞高表达该蛋白和恶性乳腺癌细胞高表达外[4]，其他的大多数恶性肿瘤均无或低水平表达MIA。本研究通过检测肿瘤患者血清MIA水平，以探讨MIA在诊断恶性黑素瘤的价值。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 标本 恶性黑素瘤患者血清标本22份，正常成人血清标本20份，其他中晚期恶性肿瘤患者血清49份(肺癌10例、乳腺癌15例、结肠癌12例、肝癌12例)，均冻存于-20℃备用。
1.2 MIA检测 MIA检测试剂盒由美国华盛顿大学医学院Sandell博士惠赠。采用一步ELISA法，具体操作如下：已标被兔抗人MIA血清的聚乙烯酶标板，每孔加待测血清样品100 μl，另取6孔加不同稀释浓度的标准样品100 μl，另设阴性对照，置湿盒，37℃，2 h，PBS-Tween20洗涤3次后加入小鼠抗人MIA单克隆抗体，100 μl/孔，湿盒37℃ 2 h，洗涤，加入辣根过氧化酶(HRP)标记的羊抗小鼠Ig的抗体，100 μl/孔，湿盒37℃ 1 h，洗涤后加底物显色30 min，最后加入2 mol/L H2SO4，30 μl/孔终止反应。
, 百拇医药
2 结 果
正常成人及不同肿瘤患者血清MIA水平见表1。 参考Bosserhoff等[5]的临床研究结果，将血清MIA水平超过6.5 ng/ml者定为阳性，其可信度范围为95%。结果表明，正常成人和肺癌、肝癌、结肠癌患者血清MIA浓度全部低于6.5 ng/ml水平，乳腺癌患者有4例血清MIA水平超过6.5 ng/ml，临床分期均为Ⅳ期，2例伴有骨转移。恶性黑素瘤患者MIA阳性率显著高于乳腺癌患者，仅有5例血清MIA水平低于6.5 ng/ml，均为Ⅰ期和Ⅱ期，余15例Ⅲ期和Ⅳ期患者MIA水平均明显超过6.5 ng/ml，最高达91.4 ng/ml。另有5例Ⅱ～Ⅲ期患者，比较手术前后的血清MIA水平，结果两周以后的血清MIA水平均降至正常限以下。血清MIA水平与恶性黑素瘤分期如图1。
图1 恶性黑素瘤患者血清MIA水平和临床分期
, 百拇医药
Fig 1 Serum MIA levels of malignant melanomas
patients with different clinical stages
表1 正常人和不同肿瘤患者的血清MIA水平
Tab 1 Serum MIA level in normal person and patients with different cancer Group
n
Age
(
±s,year)
Clinical stage
, 百拇医药
MIA level [ρB/(ng.ml-1)]
MIA positive (>6.5 ng/ml)
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ±s
Range
n
Rate(%)
Malignant
, 百拇医药
melanomas
22
66.0±12.3
2
5
6
9
25.8±22.8
83.2(8.2～91.4)
17
77.3*
Lung cancer
, 百拇医药
10
58.0±14.6
4
6
4.1± 0.5
1.8(2.5～4.3)
0
Liver cancer
12
47.0±19.3
3
9
3.7± 0.3
, http://www.100md.com
1.5(3.1～4.6)
0
Colon cancer
12
62.0± 8.1
4
8
4.2± 0.6
2.4(2.7～5.1)
0
Breast cancer
15
, http://www.100md.com
57.0± 8.5
3
5
7
6.8± 3.2
19.9(3.6～23.5)
4
20.6
Normal
control
20
46.0±11.3
3.2± 0.2
, 百拇医药
0.7(2.4～3.1)
0
χ2=9.306, * P<0.01 vs breast cancer
3 讨 论
恶性黑素瘤血清学诊断长期以来一直没有非常敏感及特异的指标。S100虽是一个较好的诊断恶性黑素瘤的血清学指标，但敏感性不高，即使是晚期的恶性黑素瘤患者，其阳性率也仅有60%[5,6]。最近发现并进行了大量研究的MIA/CD-RAP不仅在软骨发育中具有重要的生理意义[7]，而且在乳腺芽胚发育[8]、恶性黑素瘤的转移及乳腺癌的发生中均具有特殊的意义。
MIA/CD-RAP作为一个分泌型蛋白[9]，已证实在恶性黑素细胞有高水平的表达和分泌，而正常皮肤的黑素细胞中则没有或仅有极低水平的表达。RT-PCR及免疫组化研究证实乳腺癌组织中也有高水平MIA/CD-RAP基因转录和表达[10]。其他恶性肿瘤则很少或没有该基因的转录和表达[11]。提示MIA可作为血清学指标用于临床诊断恶性黑素瘤。Bosserhoff等[5]收集了112例不同分期的恶性黑素瘤患者的血清进行研究，证实了上述的判断，Ⅲ期和Ⅳ期恶性黑素瘤患者血清中MIA 100%明显升高，而早期恶性黑素瘤血清MIA阳性率较低，不超过20%。手术切除肿瘤病灶，MIA/CD-RAP迅速降至正常。转移或复发，又可检测到MIA/CD-RAP升高。本研究采用ELISA法检测了恶性黑素瘤患者血清MIA水平，结果证实15例中晚期患者血清水平100%升高，Ⅰ～Ⅱ期恶性黑素瘤血清MIA/CD-RAP部分升高，其中5例手术切除后的血清MIA水平在术后2周降至正常限以下，其他恶性肿瘤除乳腺癌仅有低水平的升高外，其余均阴性，提示检测血清MIA/CD-RAP可作为临床诊断恶性黑素瘤及其术后随访的重要指标。
, 百拇医药
作者简介：高勇(1966～)，男(汉族)，硕士，主治医师
参考文献：
[1]Bogdahn U, Apfel, Hahn M, et al. Autocrine tumor cell growth inhibiting activities from human malignant melanoma[J]. Cancer Res, 1989,49(19):5358-5363.
[2]Koehler MR, Bosserhoff A, von Beust G. Assignment of the human melanoma inhibitory activity gene (MIA) to 19q13.32-q13.33 by fluorescence in situ hybridization (FISH)[J]. Genomics，1996,35(1):265-267.
, 百拇医药
[3]Bosserhoff AK, Kondo S, Moser M, et al. Mouse CD-RAP/MIA gene: structure, chromosomal localization, and expression in cartilage and chondrosarcoma[J]. Dev Dyn, 1997,208(4):516-525.
[4]Lu J, Pei H, Kaeck M, et al. Gene expression changes associated with chemically induced rat mammary carcinogenesis[J]. Mol Carcinog, 1997, 20(2):204-215.
[5]Bosserhoff AK, Kaufmann M, Kaluza B, Bartke I, et al. Melanoma-inhibiting activity, a novel serum marker for progression of malignant melanoma[J]. Cancer Res，1997, 57(15):3149-3153.
, 百拇医药
[6]Guo HB, Stoffel-Wagner B, Bierwirth T， et al. Clinical significance of serum S100 in metastatic malignant melanoma[J]. Eur J Cancer，1995,31A:1898-1902.
[7]Xie WF, Kondo S, Sandell LJ. Regulation of the mouse cartilage-derived retinoic acid-sensitive protein gene by the transcription factor AP-2[J]. J Biol Chem，1998, 273(9): 5026-5032.
[8]谢渭芬，高 勇，贺 祥,等. 黑素瘤抑制蛋白在转基因小鼠胚胎乳腺组织中的表达[J]. 第二军医大学学报，2000，21(1)：29-30.
, 百拇医药
[9]Dietz UH, Sandell LJ. Cloning of a retinoic acid-sensitive mRNA expressed in cartilage and during chondrogenesis[J]. J Biol Chem, 1996, 271(6):3311-3316.
[10]高 勇，贺 祥，谢渭芬，等. 黑素瘤抑制蛋白MIA/CD-RAP在人乳腺癌组织中的表达[J]. 第二军医大学学报，2000，21(1)：90.
[11]Bosserhoff AK, Moser M, Hein R, et al. In situ expression patterns of melanoma-inhibiting activity (MIA) in melanomas and breast cancers[J]. J Pathol，1999,187(4):446-454.
收稿日期：1999-09-15
修稿日期：2000-01-17, http://www.100md.com
单位：高勇(第二军医大学长征医院肿瘤科，上海 200003)；王杰军(第二军医大学长征医院肿瘤科，上海 200003)；贺祥(科研部)；谢渭芬(长征医院消化内科)；李舰(长征医院消化内科)
关键词：黑素瘤抑制蛋白；黑素瘤
第二军医大学学报000205 摘 要：目的：探讨血清黑素瘤抑制蛋白(melonoma-inhibiting activity protein, MIA)在恶性黑素瘤诊断中的价值。方法：采用ELISA方法，检测不同临床分期的黑素瘤及其他恶性肿瘤患者，以及正常人血清MIA浓度。结果：正常成人(n=20)和肺癌(n=10)、肝癌(n=12)、结肠癌(n=12)患者血清MIA浓度全部低于正常(6.5 ng/ml)水平，黑素瘤患者血清MIA浓度明显升高，阳性率达77.3%(17/22)，其中Ⅲ，Ⅳ期患者阳性率达100%(15/15)。乳腺癌患者阳性率26.7% (4/15)。结论：血清MIA水平是临床诊断黑素瘤的一个较好指标。
, 百拇医药
分类号：R 739.504 文献标识码：A
文章编号：0258-879X(2000)02-0114-03
The clinical value of quantitated serum levels of
MIA protein in diagnosis of malignant melanomas
GAO Yong
(Department of Oncology, Changzheng Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200003, China)
WANG Jie-Jun
, 百拇医药
(Department of Oncology, Changzheng Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200003, China)
HE Xiang
(Ministry of Science and Research)
XIE Wei-Fen
(Department of Gastroenterology, Changzheng Hospital)
LI Jian
(Department of Gastroenterology, Changzheng Hospital)
, 百拇医药
ABSTRACT：Objective: To determine clinical value of serum melanoma-inhibiting activity(MIA) in patients with malignant melanomas. Methods: The serum levels of MIA were detected by means of a nonradioactive ELISA. Results: The enhanced MIA serum levels were detected in 26.7%(4/15) of patients with breast cancer, and in 77.3% (17/22) of patients with melanoma, of which 100% (15/15) were patients with stage Ⅲ or stage Ⅳ melanoma. Conclusion: MIA represents a novel serum marker for advanced malignant melanoma revealing the highest sensitivity and specificity among currently avaliable markers.
, http://www.100md.com
KEY WORDS：melanoma-inhibiting activity protein; melanoma▲
恶性黑素瘤抑制蛋白(melanoma-inhibiting activity protein, MIA)是Bogdahn等[1]1989年在研究恶性黑素瘤细胞株HTZ-19时，分离到的一个能够抑制恶性黑素瘤细胞增殖的蛋白。其基因定位于染色体19q13.32-13.33[2]，并证实与随后在软骨细胞内发现的CD-RAP (cartilage-derived retinoic acid-sensitive protein)基因是同样的一个基因[3]。MIA/CD-RAP与恶性黑素瘤的转移有密切的关系，正常组织和器官并不表达该蛋白。恶性肿瘤中，除了恶性黑素瘤细胞高表达该蛋白和恶性乳腺癌细胞高表达外[4]，其他的大多数恶性肿瘤均无或低水平表达MIA。本研究通过检测肿瘤患者血清MIA水平，以探讨MIA在诊断恶性黑素瘤的价值。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 标本 恶性黑素瘤患者血清标本22份，正常成人血清标本20份，其他中晚期恶性肿瘤患者血清49份(肺癌10例、乳腺癌15例、结肠癌12例、肝癌12例)，均冻存于-20℃备用。
1.2 MIA检测 MIA检测试剂盒由美国华盛顿大学医学院Sandell博士惠赠。采用一步ELISA法，具体操作如下：已标被兔抗人MIA血清的聚乙烯酶标板，每孔加待测血清样品100 μl，另取6孔加不同稀释浓度的标准样品100 μl，另设阴性对照，置湿盒，37℃，2 h，PBS-Tween20洗涤3次后加入小鼠抗人MIA单克隆抗体，100 μl/孔，湿盒37℃ 2 h，洗涤，加入辣根过氧化酶(HRP)标记的羊抗小鼠Ig的抗体，100 μl/孔，湿盒37℃ 1 h，洗涤后加底物显色30 min，最后加入2 mol/L H2SO4，30 μl/孔终止反应。
, 百拇医药
2 结 果
正常成人及不同肿瘤患者血清MIA水平见表1。 参考Bosserhoff等[5]的临床研究结果，将血清MIA水平超过6.5 ng/ml者定为阳性，其可信度范围为95%。结果表明，正常成人和肺癌、肝癌、结肠癌患者血清MIA浓度全部低于6.5 ng/ml水平，乳腺癌患者有4例血清MIA水平超过6.5 ng/ml，临床分期均为Ⅳ期，2例伴有骨转移。恶性黑素瘤患者MIA阳性率显著高于乳腺癌患者，仅有5例血清MIA水平低于6.5 ng/ml，均为Ⅰ期和Ⅱ期，余15例Ⅲ期和Ⅳ期患者MIA水平均明显超过6.5 ng/ml，最高达91.4 ng/ml。另有5例Ⅱ～Ⅲ期患者，比较手术前后的血清MIA水平，结果两周以后的血清MIA水平均降至正常限以下。血清MIA水平与恶性黑素瘤分期如图1。
图1 恶性黑素瘤患者血清MIA水平和临床分期
, 百拇医药
Fig 1 Serum MIA levels of malignant melanomas
patients with different clinical stages
表1 正常人和不同肿瘤患者的血清MIA水平
Tab 1 Serum MIA level in normal person and patients with different cancer Group
n
Age
(
±s,year)Clinical stage
, 百拇医药
MIA level [ρB/(ng.ml-1)]
MIA positive (>6.5 ng/ml)
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
±sRange
n
Rate(%)
Malignant
, 百拇医药
melanomas
22
66.0±12.3
2
5
6
9
25.8±22.8
83.2(8.2～91.4)
17
77.3*
Lung cancer
, 百拇医药
10
58.0±14.6
4
6
4.1± 0.5
1.8(2.5～4.3)
0
Liver cancer
12
47.0±19.3
3
9
3.7± 0.3
, http://www.100md.com
1.5(3.1～4.6)
0
Colon cancer
12
62.0± 8.1
4
8
4.2± 0.6
2.4(2.7～5.1)
0
Breast cancer
15
, http://www.100md.com
57.0± 8.5
3
5
7
6.8± 3.2
19.9(3.6～23.5)
4
20.6
Normal
control
20
46.0±11.3
3.2± 0.2
, 百拇医药
0.7(2.4～3.1)
0
χ2=9.306, * P<0.01 vs breast cancer
3 讨 论
恶性黑素瘤血清学诊断长期以来一直没有非常敏感及特异的指标。S100虽是一个较好的诊断恶性黑素瘤的血清学指标，但敏感性不高，即使是晚期的恶性黑素瘤患者，其阳性率也仅有60%[5,6]。最近发现并进行了大量研究的MIA/CD-RAP不仅在软骨发育中具有重要的生理意义[7]，而且在乳腺芽胚发育[8]、恶性黑素瘤的转移及乳腺癌的发生中均具有特殊的意义。
MIA/CD-RAP作为一个分泌型蛋白[9]，已证实在恶性黑素细胞有高水平的表达和分泌，而正常皮肤的黑素细胞中则没有或仅有极低水平的表达。RT-PCR及免疫组化研究证实乳腺癌组织中也有高水平MIA/CD-RAP基因转录和表达[10]。其他恶性肿瘤则很少或没有该基因的转录和表达[11]。提示MIA可作为血清学指标用于临床诊断恶性黑素瘤。Bosserhoff等[5]收集了112例不同分期的恶性黑素瘤患者的血清进行研究，证实了上述的判断，Ⅲ期和Ⅳ期恶性黑素瘤患者血清中MIA 100%明显升高，而早期恶性黑素瘤血清MIA阳性率较低，不超过20%。手术切除肿瘤病灶，MIA/CD-RAP迅速降至正常。转移或复发，又可检测到MIA/CD-RAP升高。本研究采用ELISA法检测了恶性黑素瘤患者血清MIA水平，结果证实15例中晚期患者血清水平100%升高，Ⅰ～Ⅱ期恶性黑素瘤血清MIA/CD-RAP部分升高，其中5例手术切除后的血清MIA水平在术后2周降至正常限以下，其他恶性肿瘤除乳腺癌仅有低水平的升高外，其余均阴性，提示检测血清MIA/CD-RAP可作为临床诊断恶性黑素瘤及其术后随访的重要指标。
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作者简介：高勇(1966～)，男(汉族)，硕士，主治医师
参考文献：
[1]Bogdahn U, Apfel, Hahn M, et al. Autocrine tumor cell growth inhibiting activities from human malignant melanoma[J]. Cancer Res, 1989,49(19):5358-5363.
[2]Koehler MR, Bosserhoff A, von Beust G. Assignment of the human melanoma inhibitory activity gene (MIA) to 19q13.32-q13.33 by fluorescence in situ hybridization (FISH)[J]. Genomics，1996,35(1):265-267.
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[3]Bosserhoff AK, Kondo S, Moser M, et al. Mouse CD-RAP/MIA gene: structure, chromosomal localization, and expression in cartilage and chondrosarcoma[J]. Dev Dyn, 1997,208(4):516-525.
[4]Lu J, Pei H, Kaeck M, et al. Gene expression changes associated with chemically induced rat mammary carcinogenesis[J]. Mol Carcinog, 1997, 20(2):204-215.
[5]Bosserhoff AK, Kaufmann M, Kaluza B, Bartke I, et al. Melanoma-inhibiting activity, a novel serum marker for progression of malignant melanoma[J]. Cancer Res，1997, 57(15):3149-3153.
, 百拇医药
[6]Guo HB, Stoffel-Wagner B, Bierwirth T， et al. Clinical significance of serum S100 in metastatic malignant melanoma[J]. Eur J Cancer，1995,31A:1898-1902.
[7]Xie WF, Kondo S, Sandell LJ. Regulation of the mouse cartilage-derived retinoic acid-sensitive protein gene by the transcription factor AP-2[J]. J Biol Chem，1998, 273(9): 5026-5032.
[8]谢渭芬，高 勇，贺 祥,等. 黑素瘤抑制蛋白在转基因小鼠胚胎乳腺组织中的表达[J]. 第二军医大学学报，2000，21(1)：29-30.
, 百拇医药
[9]Dietz UH, Sandell LJ. Cloning of a retinoic acid-sensitive mRNA expressed in cartilage and during chondrogenesis[J]. J Biol Chem, 1996, 271(6):3311-3316.
[10]高 勇，贺 祥，谢渭芬，等. 黑素瘤抑制蛋白MIA/CD-RAP在人乳腺癌组织中的表达[J]. 第二军医大学学报，2000，21(1)：90.
[11]Bosserhoff AK, Moser M, Hein R, et al. In situ expression patterns of melanoma-inhibiting activity (MIA) in melanomas and breast cancers[J]. J Pathol，1999,187(4):446-454.
收稿日期：1999-09-15
修稿日期：2000-01-17, http://www.100md.com