自体外周血CD34阳性细胞的纯化及其移植治疗非何杰金氏淋巴瘤
作者：冯茹 孟凡义 刘启发 伍柏松 周淑芸 杨艺 牛京娜
单位：冯茹(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)；孟凡义(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)；刘启发(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)；伍柏松(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)；周淑芸(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)；杨艺(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)；牛京娜(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)
关键词：自体造血干细胞；移植
第一军医大学学报000229 中图分类号：R457 文献标识码：B
文章编号：1000-2588(2000)02-0112-01
自体造血干细胞移植作为恶性肿瘤治疗的重要措施之一已被临床广泛应用，为降低自体造血干细胞移植后肿瘤复发的可能性，多种体外净化的方法相继而生。近年来通过筛选CD34阳性造血干/祖细胞的净化方法已从实验室过渡到临床，并显示出移植后效果的优越性[1、2]，我们在1999年6月进行了1例自体外周血CD34阳性细胞移植，现报告如下。
, 百拇医药
1 临床资料
患者，男，24岁，因上腹部疼痛伴血便3 d于1998年6月入院。剖腹探查术中发现升结肠肿物，直径约15 cm, 即行右半结肠切除及周围淋巴结清扫术。病理活检示：弥漫型T细胞性。高度恶性非何杰金氏淋巴瘤。当时未发现其他部位淋巴结肿大，骨髓检查未见肿瘤细胞浸润，1998年7月22日起第1次行CHOP方案化疗(CTX 0.8 g×1 d, ADM 60 mg×1 d, VCR 2 mg×1 d, Pred 60 mg/d×5 d)，此后又先后行CHOP 3次：CHOP+Epi 2次；Ara-C(2.0/d×3 d)+ VP16(300 mg/d×3 d)1次，化疗后多次腹部CT检查未发现异常。1999年5月7日用CTX 1.0/d×1 d，Ara-C 2.0/d×3 d，VP16 300 mg/d×3 d及G-CSF 300 mg/d×7 d，GM-CSF 150 m g/d×4 d进行外周造血干细胞动员，动态观察外周血细胞总数及外周血中CD34阳性细胞百分率。第1次分离时WBC为9.0×109/L，CD34阳性细胞2.6%，共分离三次(Baxter公司，CS-3000 Plus)。将第1次产品置于室温(25℃)保存，24 h后分离得到第2次产品，取部分与第1次混合后进行CD34阳性细胞纯化，而剩余部分及第3次分离产品直接用CP1冷冻保存液进行–80℃一步法冷冻保存备用。准备CD34阳性细胞筛选的有核细胞计数为5×1010，利用CliniMACS(德国Amcell公司)免疫磁珠方法进行CD34阳性细胞的纯化。纯化前细胞悬液中CD34阳性细胞为4.4%、纯化后为88.1%，CD34阳性细胞回收率44%、活力98%，产品同样用CP1冷冻保护液进行–80℃一步法冷冻保存，总体积100 ml。1999年6月22日病人经过TBI 10 Gy，CTX 120 mg/kg预处理后进行自体CD34阳性细胞移植，共输入CD34阳性细胞14.4×106/kg.b.w.，活力检测为97%，过程顺利。移植后1 d开始用G-CSF 300 m g/d，中性粒细胞>0.5×109/L为+14 d，血小板>30×109/L+22 d，骨髓增生活跃亦为移植后22 d，但巨核细胞增生受抑。移植6个月后腹膜及其他部位未发现肿瘤性淋巴结。为了解CD34阳性细胞筛选的净化作用，对该病人移植前后的骨髓及CD34阳性细胞纯化后产品分别进行TCRVγI-Jγ基因重排的检测，结果发现纯化后的CD34阳性细胞中未见阳性结果，而移植前后的骨髓中均有极弱的阳性条带。
, 百拇医药
2 讨论
外周造血干细胞移植与骨髓细胞移植相比具有造血和免疫功能重建快、并发症少、患者易接受、费用低等优点，有替代骨髓移植的趋势[3]，但自体移植仍存在复发的可能性且异基因移植时慢性GVHD(cGVHD)发生率较高。CD34阳性细胞的正净化方法利用许多恶性肿瘤细胞不表达人类造血干/祖细胞表达的CD34抗原这一特点，克服了以上不足，初步研究显示具有以下优点:(1)避免了其他方法净化时对正常造血干/祖细胞的影响；(2)步骤简便，污染机会少；(3)去除T细胞达24个对数级；(4)缩小冷冻体积，减少DMSO的输入量[4～6]等。
NHL是一种不表达CD34抗原的血液系统恶性肿瘤。此患者的移植成功再次证实纯化后CD34阳性细胞具有造血和免疫功能重建的能力，为今后进一步开展此项工作奠定了基础，而且其移植物中TCRVγI-Jγ基因重排检测为阴性，通过密切观察该病人移植后的状况，可追踪观察复发时肿瘤细胞的来源，为探讨自体造血干细胞移植后肿瘤复发的原因提供依据。
, 百拇医药
作者简介：冯 茹(1961-)，女，天津人，1983年毕业于第四军医大学，副教授，副主任医师，电话：85141411
参考文献
1，Hohaus S, PforsichM, Murea S et al. Immunomagnetic selection of CD34+ peripheral blood stem cells for autografting in patients with breast cancer[J]. Br J Haematol, 1997, 97(4): 881～8.
2，Tricot G, Gazitt Y, Leemhuis T et al. Collection, tumor contamination, and engraftment kinetics of highly purified hematopoietic progenitor cells to support high dose therapy in multiple myeloma[J]. Blood, 1998, 91(12): 4489～95.
, 百拇医药
3，Demorer T, Bensinger WI, Rowley S et al. Comparison of rhG-CSF mobilized peripheral blood stem cells and bone marrow for autologous transplantation in tients with acute myelogerous leukemia (AML) [J]. Blood, 1995, 86 (suppl 1): 99.
4，Kruger W, Gruber M, Hennings S et al. Purging and haemopoietic progenitor cell selection by CD34+ cell separation[J]. Bone Marrow Transplant, 1998, 21(7): 665～7671
5，Voso MT; Hohaus S; Moos M et al. Autografting with CD34+ peripheral blood stem cells: retained engraftment capability and reduced tumour cell content[J]. Br J Haematol, 1999, 104(2): 382～91.
6，Urbano Ispizua A, Solano C, Brunet S et al. Allogeneic transplantation of selected CD34+ cells from peripheral blood: experience of 62 cases using immunoadsorption or immunomagnetic technique. Spanish Group of Allo-PBT[J]. Bone Marrow Transplant, 1998, 22(6): 519～25.
收稿日期：1999-12-13, 百拇医药
单位：冯茹(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)；孟凡义(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)；刘启发(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)；伍柏松(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)；周淑芸(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)；杨艺(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)；牛京娜(第一军医大学南方医院血液科，广东 广州510515)
关键词：自体造血干细胞；移植
第一军医大学学报000229 中图分类号：R457 文献标识码：B
文章编号：1000-2588(2000)02-0112-01
自体造血干细胞移植作为恶性肿瘤治疗的重要措施之一已被临床广泛应用，为降低自体造血干细胞移植后肿瘤复发的可能性，多种体外净化的方法相继而生。近年来通过筛选CD34阳性造血干/祖细胞的净化方法已从实验室过渡到临床，并显示出移植后效果的优越性[1、2]，我们在1999年6月进行了1例自体外周血CD34阳性细胞移植，现报告如下。
, 百拇医药
1 临床资料
患者，男，24岁，因上腹部疼痛伴血便3 d于1998年6月入院。剖腹探查术中发现升结肠肿物，直径约15 cm, 即行右半结肠切除及周围淋巴结清扫术。病理活检示：弥漫型T细胞性。高度恶性非何杰金氏淋巴瘤。当时未发现其他部位淋巴结肿大，骨髓检查未见肿瘤细胞浸润，1998年7月22日起第1次行CHOP方案化疗(CTX 0.8 g×1 d, ADM 60 mg×1 d, VCR 2 mg×1 d, Pred 60 mg/d×5 d)，此后又先后行CHOP 3次：CHOP+Epi 2次；Ara-C(2.0/d×3 d)+ VP16(300 mg/d×3 d)1次，化疗后多次腹部CT检查未发现异常。1999年5月7日用CTX 1.0/d×1 d，Ara-C 2.0/d×3 d，VP16 300 mg/d×3 d及G-CSF 300 mg/d×7 d，GM-CSF 150 m g/d×4 d进行外周造血干细胞动员，动态观察外周血细胞总数及外周血中CD34阳性细胞百分率。第1次分离时WBC为9.0×109/L，CD34阳性细胞2.6%，共分离三次(Baxter公司，CS-3000 Plus)。将第1次产品置于室温(25℃)保存，24 h后分离得到第2次产品，取部分与第1次混合后进行CD34阳性细胞纯化，而剩余部分及第3次分离产品直接用CP1冷冻保存液进行–80℃一步法冷冻保存备用。准备CD34阳性细胞筛选的有核细胞计数为5×1010，利用CliniMACS(德国Amcell公司)免疫磁珠方法进行CD34阳性细胞的纯化。纯化前细胞悬液中CD34阳性细胞为4.4%、纯化后为88.1%，CD34阳性细胞回收率44%、活力98%，产品同样用CP1冷冻保护液进行–80℃一步法冷冻保存，总体积100 ml。1999年6月22日病人经过TBI 10 Gy，CTX 120 mg/kg预处理后进行自体CD34阳性细胞移植，共输入CD34阳性细胞14.4×106/kg.b.w.，活力检测为97%，过程顺利。移植后1 d开始用G-CSF 300 m g/d，中性粒细胞>0.5×109/L为+14 d，血小板>30×109/L+22 d，骨髓增生活跃亦为移植后22 d，但巨核细胞增生受抑。移植6个月后腹膜及其他部位未发现肿瘤性淋巴结。为了解CD34阳性细胞筛选的净化作用，对该病人移植前后的骨髓及CD34阳性细胞纯化后产品分别进行TCRVγI-Jγ基因重排的检测，结果发现纯化后的CD34阳性细胞中未见阳性结果，而移植前后的骨髓中均有极弱的阳性条带。
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2 讨论
外周造血干细胞移植与骨髓细胞移植相比具有造血和免疫功能重建快、并发症少、患者易接受、费用低等优点，有替代骨髓移植的趋势[3]，但自体移植仍存在复发的可能性且异基因移植时慢性GVHD(cGVHD)发生率较高。CD34阳性细胞的正净化方法利用许多恶性肿瘤细胞不表达人类造血干/祖细胞表达的CD34抗原这一特点，克服了以上不足，初步研究显示具有以下优点:(1)避免了其他方法净化时对正常造血干/祖细胞的影响；(2)步骤简便，污染机会少；(3)去除T细胞达24个对数级；(4)缩小冷冻体积，减少DMSO的输入量[4～6]等。
NHL是一种不表达CD34抗原的血液系统恶性肿瘤。此患者的移植成功再次证实纯化后CD34阳性细胞具有造血和免疫功能重建的能力，为今后进一步开展此项工作奠定了基础，而且其移植物中TCRVγI-Jγ基因重排检测为阴性，通过密切观察该病人移植后的状况，可追踪观察复发时肿瘤细胞的来源，为探讨自体造血干细胞移植后肿瘤复发的原因提供依据。
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作者简介：冯 茹(1961-)，女，天津人，1983年毕业于第四军医大学，副教授，副主任医师，电话：85141411
参考文献
1，Hohaus S, PforsichM, Murea S et al. Immunomagnetic selection of CD34+ peripheral blood stem cells for autografting in patients with breast cancer[J]. Br J Haematol, 1997, 97(4): 881～8.
2，Tricot G, Gazitt Y, Leemhuis T et al. Collection, tumor contamination, and engraftment kinetics of highly purified hematopoietic progenitor cells to support high dose therapy in multiple myeloma[J]. Blood, 1998, 91(12): 4489～95.
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3，Demorer T, Bensinger WI, Rowley S et al. Comparison of rhG-CSF mobilized peripheral blood stem cells and bone marrow for autologous transplantation in tients with acute myelogerous leukemia (AML) [J]. Blood, 1995, 86 (suppl 1): 99.
4，Kruger W, Gruber M, Hennings S et al. Purging and haemopoietic progenitor cell selection by CD34+ cell separation[J]. Bone Marrow Transplant, 1998, 21(7): 665～7671
5，Voso MT; Hohaus S; Moos M et al. Autografting with CD34+ peripheral blood stem cells: retained engraftment capability and reduced tumour cell content[J]. Br J Haematol, 1999, 104(2): 382～91.
6，Urbano Ispizua A, Solano C, Brunet S et al. Allogeneic transplantation of selected CD34+ cells from peripheral blood: experience of 62 cases using immunoadsorption or immunomagnetic technique. Spanish Group of Allo-PBT[J]. Bone Marrow Transplant, 1998, 22(6): 519～25.
收稿日期：1999-12-13, 百拇医药