雌激素对大鼠血小板聚集性的影响
作者：董凤英 吴赛珠
单位：
关键词：雌二醇；血小板凝集；一氧化氮；前列环素；血栓烷A2
第一军医大学学报000215 摘要: 目的 研究大鼠人工绝经及补充雌激素 (estrogen, E) 后血小板聚集性的变化及其部分机制。方法 将24只SD雌性大鼠随机分为3组：假手术组、单纯去势组、去势+补充雌激素组。观察其血小板聚集性、一氧化氮(Nitric oxide, NO)、前列环素(Prostacyclin, PGI2)、血栓烷A2 (Thromboxane A2, TXA2) 及血栓烷A2与前列环素的比值(TXA2/PGI2)的变化。结果 单纯去势组大鼠血小板聚集性较假手术组明显增加，去势+补充雌激素组较单纯去势组下降；单纯去势后雌性大鼠TXA2/PGI2上升，补充雌激素组下降；去势后雌性大鼠NO明显降低，补充雌激素后升高。结论 绝经后补充雌激素可通过降低TXA2/PGI2、升高NO 抑制血小板聚集，对绝经后妇女冠心病有防治作用。
, 百拇医药
中图分类号：R579.13; R977.12 文献标识码：A
文章编号：1000-2588 (2000)-02-0187-02
Effects of estrogen on platelet adhesiveness in female rats
DONG Feng-ying
(Department of Cardiology, 466 Hospital of PLA, Beijing 100081, China)
WU Sai-zhu
(Department of Cardiology, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
, 百拇医药
Abstract：Objective To study platelet adhesiveness after ovariectomy with estrogen replacement therapy and explore the mechanism. Methods Twenty-four female rats were randomly divided into 3 groups (sham-ovariectomized, ovariectomy and ovariectomy with estrogen replacement therapy) and corresponding treatment was administered. The platelet adhesiveness was observed and plasma levels of NO, PGI2, TXA2 and the ratio of TXA2 to PGI2 determined. Results Platelet adhesiveness in the group subjected to ovariectomy with estrogen replacement therapy was lower than that of the ovariectomy group, and the latter was markedly higher than that of the sham-ovariectomized group. The ratio of TXA2 to PGI2 balance was increased in ovariectomy group, and decreased in group of ovariectomy with estrogen replacement therapy. Plasma levels of NO was lower in ovariectomy group and higher in the group of ovariectomy with estrogen replacement therapy. Conclusion After menopausal, inhibition of platelet adhesiveness by decreasing ratio of TXA2 to PGI2 and increasing NO level are beneficial for the prevention of coronary artery diseases.
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Key words: estradiol benzoate; platelet aggregation; nitric oxide; prostacyclin; thromboxane A2
雌激素替代治疗(ERT)可降低绝经后妇女冠心病(CHD)的危险性[1]，其可能的机制是改善血脂和脂蛋白代谢、抑制血管平滑肌增殖与收缩、扩张血管、保护内皮细胞结构及功能、调整NO与内皮素(ET)的合成[2]等。流行病学资料显示[3]，口服避孕药可增加妇女血栓栓塞的危险性，如下肢深静脉血栓及肺栓塞。血小板聚集参与动脉粥样硬化斑块及斑块破裂后血栓栓塞的过程。然而，雌激素对血小板功能的影响仍不明确。本实验研究了雌性大鼠人工绝经及补充雌激素后血小板聚集性的变化及其部分机制。
1 材料和方法
1.1 实验材料
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1.1.1 实验动物 成年SD雌性大鼠，体质量200～300 g，由南方医院动物所提供。
1.1.2 药物 苯甲酸雌二醇(Estradiol benzoate, BE2)；黄体酮(Progesterone, P); 3%戊巴比妥钠；二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate, ADP); 胶原。
1.2 实验方法
1.2.1动物模型及分组 手术在3%戊巴比妥纳(0.1mg/ml)腹腔麻醉下，由双侧背部切开皮肤及背肌，结扎卵巢及其下输卵管并切除。假手术组(A组)只暴露卵巢而不行切除。雌激素补充组(C组)于卵巢切除后第10 d开始给予BE25 μg/次隔日肌注，持续30 d。假手术组及单纯卵巢去势组(B组)同期给予等量花生油肌注，注射部位选在大腿外侧肌肉隆起处。
, 百拇医药 1.2.2 前列环素(PGI2)、血栓烷A2(TXA2)含量的测定 各组大鼠均于末次给药后次日上午腹主动脉取血2 mL, 0.2 g/L EDTA-Na2(含0.07 g/L氯化钠)1：9(V/V)抗凝，4℃、3 000 r/min离心20 min，取上清-20℃冰箱保存。用苏州医学院放免分析试剂盒测定6-酮-前列腺素F1a及血栓烷A2。
1.2.3 一氧化氮(NO)测定 腹主动脉取血2 mL，4℃、3 000 r/min离心20 min，取上清-70℃冰箱保存，硝酸还原法测定NO浓度。
1.2.4 血小板聚集性测定 按前述方法取枸橼酸钠抗凝血3 ml以1 000 r/min离心10 min，取上层血浆即为富含血小板血浆(PRP)；余血以3 000 r/min离心30 min，取上层透亮液体即为贫血小板血浆(PPP)。计数PRP、PPP，用PPP将PRP中血小板调至45万/μl后取0.5 ml加入比浊管，采用比浊法，应用血小板聚集仪(北京生化仪器厂生产BS631型)测定血小板最大聚集率，诱导剂分别为ADP(终浓度为2μmol/L)及胶原。
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1.2.5 资料统计学处理 所有数据均用
±s表示，进行完全随机设计的方差分析及q检验。
2 结果与讨论
各组实验数据见表1。
本实验切除成年雌性大鼠双侧卵巢并补充接近生理计量的雌激素，建立模拟绝经及ERT的动物模型，观察其血小板聚集性和NO、PGI2、TXA2 含量的变化。结果显示，单纯去势组大鼠血小板聚集性较假手术组明显增强，去势+补充雌激素组较单纯去势组下降。生理计量雌激素对血小板聚集性的抑制作用可能是其保护绝经后妇女心血管的机制之一。PGI2主要由血管内皮细胞合成，是目前已知的体内最强的血小板聚集抑制剂，不仅能阻止血小板粘附与聚集，而且还能使已聚集的血小板分开。TXA2是体内PGI2的生理拮抗剂，主要来自血小板，具有强烈的促血小板聚集作用[4]。由于PGI2、TXA2在体内半衰期很短，故需测定其稳定代谢产物6-酮-前列腺素F1a及血栓烷A2含量来衡量其水平。单纯去势后雌性大鼠TXA2/PGI2比例上升，补充雌激素组则下降，说明雌激素对TXA2/PGI2平衡的调节作用是其抗血小板聚集的机理之一。去势后雌性大鼠NO明显降低，补充雌激素后升高，说明生理计量雌激素可促进内皮细胞合成及释放NO，而NO可通过刺激可溶性鸟甘酸环化酶增加cAMP的浓度来抑制血小板功能，与PGI2具有协同作用，二者都可抑制细胞内Ca2+升高和血小板聚集[5]。口服避孕药是在生理浓度雌激素基础上额外服用雌激素、孕激素，其对血小板聚集性影响可能与ERT不同，需进一步研究。
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表1各组实验结果( n = 8 )
Tab.1 Results of each group (n=8) Group
NO (μmol/ml)
PGI2(pg/ml)
TXA2 (pg/ml)
TXA2/
PGI2
Max coagulation rate of platelet
ADP(%)
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Collagen ( %)
A
B
C
39.96±10.76**
17.71±7.91
30.51±7.22**
13.63±3.19*
8.50±2.49
10.87±3.41
72.88±17.01**
148.45±86.70
, 百拇医药
51.63±21.28**
5.74±2.20**
20.01±13.65
5.14±2.64**
30.0±7.5*
38.0±9.1
27.0±2.3*
35.8±7.5*
44.4±9.2
33.6±7.4*
P<0.05, ** P<0.01 vs the ovariectomy group
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总之，绝经后补充雌激素可通过降低TXA2/PGI2比例、提高NO水平而抑制血小板聚集， 对CHD有防治作用。
作者简介：董凤英(1970-)，女，河北隆尧县人，1993年本科毕业于白求恩医科大学，硕士，主治医师
董凤英(解放军第466医院心脏内科，北京 100089)
吴赛珠(第一军医大学南方医院心胸内科，广东 广州 510515)
参考文献
1，赵智深, 黄从新, 江 红. 雌激素对女性心血管系统的保护作用[J]. 国外医学.内科学分册, 1998, 25(90):371～4.
2，Best PJ, Berger PB, Miller VM et al. The effect of estrogen replacement therapy on plasma nitric oxide and endothelin-1 levels in postmenopausal women [J]. Ann Inter Med, 1998, 128(4):285～8.
, 百拇医药
3，Grady D, Hulley SB, Furberg C. Venous thromboembolic events associated with hormone replacement therapy[J]. JAMA, 1997, 278(6): 477.
4，冯 健, 魏英杰. 心血管活性物质与心血管疾病[M]. 北京: 北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社, 1997. 308～22.
5，Nakano Y, Oshima T, Matsuura H et al. Effect of 17-beta-estradiol on inhibition of platelet aggregation in vitro is mediated by an increase in NO synthesis[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 1998, 16(6):961～7.
收稿日期：1999-04-24, 百拇医药
单位：
关键词：雌二醇；血小板凝集；一氧化氮；前列环素；血栓烷A2
第一军医大学学报000215 摘要: 目的 研究大鼠人工绝经及补充雌激素 (estrogen, E) 后血小板聚集性的变化及其部分机制。方法 将24只SD雌性大鼠随机分为3组：假手术组、单纯去势组、去势+补充雌激素组。观察其血小板聚集性、一氧化氮(Nitric oxide, NO)、前列环素(Prostacyclin, PGI2)、血栓烷A2 (Thromboxane A2, TXA2) 及血栓烷A2与前列环素的比值(TXA2/PGI2)的变化。结果 单纯去势组大鼠血小板聚集性较假手术组明显增加，去势+补充雌激素组较单纯去势组下降；单纯去势后雌性大鼠TXA2/PGI2上升，补充雌激素组下降；去势后雌性大鼠NO明显降低，补充雌激素后升高。结论 绝经后补充雌激素可通过降低TXA2/PGI2、升高NO 抑制血小板聚集，对绝经后妇女冠心病有防治作用。
, 百拇医药
中图分类号：R579.13; R977.12 文献标识码：A
文章编号：1000-2588 (2000)-02-0187-02
Effects of estrogen on platelet adhesiveness in female rats
DONG Feng-ying
(Department of Cardiology, 466 Hospital of PLA, Beijing 100081, China)
WU Sai-zhu
(Department of Cardiology, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
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Abstract：Objective To study platelet adhesiveness after ovariectomy with estrogen replacement therapy and explore the mechanism. Methods Twenty-four female rats were randomly divided into 3 groups (sham-ovariectomized, ovariectomy and ovariectomy with estrogen replacement therapy) and corresponding treatment was administered. The platelet adhesiveness was observed and plasma levels of NO, PGI2, TXA2 and the ratio of TXA2 to PGI2 determined. Results Platelet adhesiveness in the group subjected to ovariectomy with estrogen replacement therapy was lower than that of the ovariectomy group, and the latter was markedly higher than that of the sham-ovariectomized group. The ratio of TXA2 to PGI2 balance was increased in ovariectomy group, and decreased in group of ovariectomy with estrogen replacement therapy. Plasma levels of NO was lower in ovariectomy group and higher in the group of ovariectomy with estrogen replacement therapy. Conclusion After menopausal, inhibition of platelet adhesiveness by decreasing ratio of TXA2 to PGI2 and increasing NO level are beneficial for the prevention of coronary artery diseases.
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Key words: estradiol benzoate; platelet aggregation; nitric oxide; prostacyclin; thromboxane A2
雌激素替代治疗(ERT)可降低绝经后妇女冠心病(CHD)的危险性[1]，其可能的机制是改善血脂和脂蛋白代谢、抑制血管平滑肌增殖与收缩、扩张血管、保护内皮细胞结构及功能、调整NO与内皮素(ET)的合成[2]等。流行病学资料显示[3]，口服避孕药可增加妇女血栓栓塞的危险性，如下肢深静脉血栓及肺栓塞。血小板聚集参与动脉粥样硬化斑块及斑块破裂后血栓栓塞的过程。然而，雌激素对血小板功能的影响仍不明确。本实验研究了雌性大鼠人工绝经及补充雌激素后血小板聚集性的变化及其部分机制。
1 材料和方法
1.1 实验材料
, http://www.100md.com
1.1.1 实验动物 成年SD雌性大鼠，体质量200～300 g，由南方医院动物所提供。
1.1.2 药物 苯甲酸雌二醇(Estradiol benzoate, BE2)；黄体酮(Progesterone, P); 3%戊巴比妥钠；二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate, ADP); 胶原。
1.2 实验方法
1.2.1动物模型及分组 手术在3%戊巴比妥纳(0.1mg/ml)腹腔麻醉下，由双侧背部切开皮肤及背肌，结扎卵巢及其下输卵管并切除。假手术组(A组)只暴露卵巢而不行切除。雌激素补充组(C组)于卵巢切除后第10 d开始给予BE25 μg/次隔日肌注，持续30 d。假手术组及单纯卵巢去势组(B组)同期给予等量花生油肌注，注射部位选在大腿外侧肌肉隆起处。
, 百拇医药 1.2.2 前列环素(PGI2)、血栓烷A2(TXA2)含量的测定 各组大鼠均于末次给药后次日上午腹主动脉取血2 mL, 0.2 g/L EDTA-Na2(含0.07 g/L氯化钠)1：9(V/V)抗凝，4℃、3 000 r/min离心20 min，取上清-20℃冰箱保存。用苏州医学院放免分析试剂盒测定6-酮-前列腺素F1a及血栓烷A2。
1.2.3 一氧化氮(NO)测定 腹主动脉取血2 mL，4℃、3 000 r/min离心20 min，取上清-70℃冰箱保存，硝酸还原法测定NO浓度。
1.2.4 血小板聚集性测定 按前述方法取枸橼酸钠抗凝血3 ml以1 000 r/min离心10 min，取上层血浆即为富含血小板血浆(PRP)；余血以3 000 r/min离心30 min，取上层透亮液体即为贫血小板血浆(PPP)。计数PRP、PPP，用PPP将PRP中血小板调至45万/μl后取0.5 ml加入比浊管，采用比浊法，应用血小板聚集仪(北京生化仪器厂生产BS631型)测定血小板最大聚集率，诱导剂分别为ADP(终浓度为2μmol/L)及胶原。
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1.2.5 资料统计学处理 所有数据均用
±s表示，进行完全随机设计的方差分析及q检验。2 结果与讨论
各组实验数据见表1。
本实验切除成年雌性大鼠双侧卵巢并补充接近生理计量的雌激素，建立模拟绝经及ERT的动物模型，观察其血小板聚集性和NO、PGI2、TXA2 含量的变化。结果显示，单纯去势组大鼠血小板聚集性较假手术组明显增强，去势+补充雌激素组较单纯去势组下降。生理计量雌激素对血小板聚集性的抑制作用可能是其保护绝经后妇女心血管的机制之一。PGI2主要由血管内皮细胞合成，是目前已知的体内最强的血小板聚集抑制剂，不仅能阻止血小板粘附与聚集，而且还能使已聚集的血小板分开。TXA2是体内PGI2的生理拮抗剂，主要来自血小板，具有强烈的促血小板聚集作用[4]。由于PGI2、TXA2在体内半衰期很短，故需测定其稳定代谢产物6-酮-前列腺素F1a及血栓烷A2含量来衡量其水平。单纯去势后雌性大鼠TXA2/PGI2比例上升，补充雌激素组则下降，说明雌激素对TXA2/PGI2平衡的调节作用是其抗血小板聚集的机理之一。去势后雌性大鼠NO明显降低，补充雌激素后升高，说明生理计量雌激素可促进内皮细胞合成及释放NO，而NO可通过刺激可溶性鸟甘酸环化酶增加cAMP的浓度来抑制血小板功能，与PGI2具有协同作用，二者都可抑制细胞内Ca2+升高和血小板聚集[5]。口服避孕药是在生理浓度雌激素基础上额外服用雌激素、孕激素，其对血小板聚集性影响可能与ERT不同，需进一步研究。
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表1各组实验结果( n = 8 )
Tab.1 Results of each group (n=8) Group
NO (μmol/ml)
PGI2(pg/ml)
TXA2 (pg/ml)
TXA2/
PGI2
Max coagulation rate of platelet
ADP(%)
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Collagen ( %)
A
B
C
39.96±10.76**
17.71±7.91
30.51±7.22**
13.63±3.19*
8.50±2.49
10.87±3.41
72.88±17.01**
148.45±86.70
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51.63±21.28**
5.74±2.20**
20.01±13.65
5.14±2.64**
30.0±7.5*
38.0±9.1
27.0±2.3*
35.8±7.5*
44.4±9.2
33.6±7.4*
P<0.05, ** P<0.01 vs the ovariectomy group
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总之，绝经后补充雌激素可通过降低TXA2/PGI2比例、提高NO水平而抑制血小板聚集， 对CHD有防治作用。
作者简介：董凤英(1970-)，女，河北隆尧县人，1993年本科毕业于白求恩医科大学，硕士，主治医师
董凤英(解放军第466医院心脏内科，北京 100089)
吴赛珠(第一军医大学南方医院心胸内科，广东 广州 510515)
参考文献
1，赵智深, 黄从新, 江 红. 雌激素对女性心血管系统的保护作用[J]. 国外医学.内科学分册, 1998, 25(90):371～4.
2，Best PJ, Berger PB, Miller VM et al. The effect of estrogen replacement therapy on plasma nitric oxide and endothelin-1 levels in postmenopausal women [J]. Ann Inter Med, 1998, 128(4):285～8.
, 百拇医药
3，Grady D, Hulley SB, Furberg C. Venous thromboembolic events associated with hormone replacement therapy[J]. JAMA, 1997, 278(6): 477.
4，冯 健, 魏英杰. 心血管活性物质与心血管疾病[M]. 北京: 北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社, 1997. 308～22.
5，Nakano Y, Oshima T, Matsuura H et al. Effect of 17-beta-estradiol on inhibition of platelet aggregation in vitro is mediated by an increase in NO synthesis[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 1998, 16(6):961～7.
收稿日期：1999-04-24, 百拇医药