载脂蛋白AI-CⅢ基因区域多态性与冠心病的关系
作者：翁国路 韩琴琴 陈灏珠
单位：翁国路(福建医科大学附属第二医院内科，泉州 362000)；韩琴琴 陈灏珠(上海医科大学附属中山医院心内科,上海 200032)
关键词：载脂蛋白A；冠状动脉疾病；多态现象(遗传学)；基因
福建医科大学学报000202
摘要:目的 探讨载脂蛋白的AI-CⅢ基因区域多态性与冠心病的关系。方法 应用PCR方法检测50例正常人(汉族)及50例冠心病患者(汉族，其中38例为陈旧性心肌梗塞患者)ApoAI-CⅢ基因区域PstI、SstI和MspI酶切位点上限制性片段长度多态性(RFLPs)，并作单倍型分析。结果 50例正常人中，P2、S2、M2等位基因频率分别为25%,33%和46%；50例冠心病患者为28%,62%和40%。冠心病患者S2等位基因频率与正常人比较差异有显著性(P<0.01)，M2和P2差异无显著性(P>0.05)。单倍型频率及连锁平衡程度分析,S1、S2、P1、P2及M1、M2之间处于连锁不平衡状态(P<0.01)。单倍型S1P2、S1M2和M2P1S1频率在冠心病人与正常人比较差异有显著性(P<0.05)。结论 S2等位基因和单倍型S1P2、S1M2和M2P1S1频率的升高与冠心病有关，可考虑作为该疾病易患性基因的标志。
, 百拇医药
中图分类号:R543.3;R977.6 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)02-0096-04
Relationship of Apolipoprotein AI and CⅢ Loci Gene Polymorphism and Coronary Artery Disease
WENG Guo-lu,HAN Qin-qin,CHEN Hao-zhu
(The Affiliated Second Hospital,Fujian Medical Univercity,Quanzhou 362000,China)
ABSTRACT:Objective To study the relationship of the apolipoprotenin AI-CⅢ loci with coronary artery disease.Methods Using the polymerase chain reaction(PCR) to amplificate Chinese human Apo AI-CⅢ gene which includig Pst-I,SstI and MspI restrict enzyme polymorphism loci,then digesting it with these three restrict enzyme,it detected three restriction fragments.Results It was found that P2,S2 and M2 allele gene frequencies is 25%,33% and 46% in the normal individuals,28%,62% and 40%in the patients with coronary artery disease.The S2 allele frequency of the patients with cornary artery diseases statistically significant as compared with the normal individuals(P<0.01).Haplotypes S1P2,S1M2 and M2P1S1 frequency in the patients with coronary artery disease was significantly greater than that in the normal individuals(P<0.05).Conclusion It indicated that SstI polymorphic site was associated with coronary artery disease.It is possible that the SstI polymorphic site and the haplotypes S1P2,S1M2 and M2P1S1 are a susceptible genetic marker of coronary artery disease.
, http://www.100md.com
KEY WORDS:apolipoprotein A-Ⅱ;coronary artery disease;gene polymorphism,heredity;gene
笔者于1990年10月～1992年10月采用PCR方法对50例正常人和50例冠心病患者载脂蛋白ApoAI-CⅢ基因中含有PstI、SstI及MspI限制性内切酶多态性位点片段进行体外扩增，用相应的三种限制性内切酶进行酶切，得到三种不同的酶切片段长度，报告如下。
1 对象和方法
1.1 对象 正常人(汉族)50例(A组)，经检查无心脑血管疾病、糖尿病及甲状腺等内分泌系统疾病。其中男性37例，女性13例，年龄55±8.7岁。冠心病患者50例(B组)，均为汉族，主要来自本院心内科、专科门诊和病房，其中男性38例，女性12例，年龄57±6.8岁；其中陈旧性心梗38名。
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1.2 方法
1.2.1 化学试剂 EDAT抗凝剂、溶血试剂、ProteinaseK溶液、电泳缓冲液、PCR试剂盒(购自华美生物工程公司)。
1.2.2 PCR引物 三种目的基因由中科院生物化学研究所合成。
ApoAI基因MspⅠ：
引物1： 5＇ GCTAAAGTAAGGACCCAGCC 3＇
引物2： 5＇ GAAGACAGCCCACACAGTCTTG 3＇
ApoAI基因邻近区PstⅠ：
引物1： 5＇ CTACACTCTCCCTTACCAAC 3＇
, 百拇医药
引物2： 5＇ AACTCCAGCCGTTCACTTG 3＇
ApoCⅢ基因SstⅠ：
引物1： 5＇ TGAAAGACTACTGGAGCACC 3＇
引物2： 5＇ AGACACAGATGGCACTTG 3＇
1.2.3 仪器 高速冷冻离心机(TGLL-18型，中科院上海生物化学研究所)；真空干燥离心机(LNG-T83型，上海生物化学研究所)；PCR 扩增仪(Mastercyler 5332型，美国惠普公司)。
1.2.4 处理方法
等位基因频率的计算：
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各组间等位基因频率及单倍型频率的差别、遗传平衡及连锁平衡程度用χ2检验。
1.3 DNA多态性分析 白细胞染色体DNA的提取：取新鲜静脉血0.3 ml，置于1.5 ml的塑料离心管中，加入溶血试剂0.5 ml，混匀；高速冷冻离心1200 r/min×10 min，弃去上清液，加入溶液试剂0.5 ml；重复上述操作2～3次，直至沉淀转为白色；PCR缓冲器中加入0.3 ml，轻轻辗转离心管使沉淀扩散，加蛋白酶K溶液0.5 ml(10 mg/ml)。置于55°C水浴箱中4 h。消化核蛋白，然后煮沸95°C蛋白酶K 10 ml。
1.3.1 ApoAI与ApoCⅢ基因紧密连锁及其多态性酶切位点(附图)
附图 ApoAI-CⅢ基因及多态性酶切位点示意图
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1.3.2 ApoAI基因第三个内含子中含有一个Msp-I多态性酶切位点。笔者设计一段包含MspI多态位点在内的一段307 bp DNA片段作为PCR扩增模板合成一对引物，扩增后经Msp-I酶切处理，如果该酶切位点存在，则电泳图上可见139 bp和168 bp两条片段，该等位基因称为M1；如果酶切位点消失，则电泳图上仅见307 bp一条片段，该等位基因称为M2；如果两条姐妹染色体DNA(一条来自父亲，另一条来自母亲)均有M1或M2等位基因，则电泳图上出现M1M1或M2M2纯合子基因型；如果一条染色体的DNA等位基因是M1，另一条染色体的DNA等位基因是M2， 则电泳图上出现M1M2杂合子基因型。
1.3.3 ApoAI基因3'端有一PstI多态性酶切位点存在，笔者设计一段包含PstI多态性位点在内的306 bp DNA片段作为PCR 扩增模板合成一对引物，扩增后经PstI酶切处理，如果酶切位点存在，则在电泳图上可见107 bp和199 bp两条片段，该等位基因称P1；如果该酶切位点消失，则电泳图上仅见一条306 bp片段，该等位基因称P2。
, 百拇医药
1.3.4 ApoCⅢ 3'非编码区存在有SstI多态性酶切位点，笔者设计一段包含SstI多态位点在内的311 bp DNA片段作为PCR扩增模板合成一对引物，扩增后经SstI酶切处理。如果此位点存在，则电泳图上可见136 bp和175 bp两条片段，该等位基因称S2；如果不存在该酶切位点，则电泳图仅见一条311 bp片段，该等位基因称S1。
2 结 果
2.1 中国汉族人ApoAI-CⅢ基因多态性 A、B两组共100人，取每人静脉血0.3 ml，如上法提取白细胞染色体DNA，分别用三对不同的引物进行PCR扩增，然后对扩增产物用三种相对应的内切酶水解，PAGE电泳鉴定DNA基因多态性。得到二组研究对象的三种内切酶引起的不同基因型频率,表明中国汉族人ApoAI-CⅢ基因组存在MspI，PstI和SstI多态性位点且M2、P2、S2等位基因并不罕见。M2和P2等位基因频率组间比较，差异无显著性。但S2等位基因频率在B组中，频率高于A组，差异有显著性(P<0.01)。ApoAI-CⅢ MspI，SstI，和PstI基因型频率均符合遗传平衡。
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2.2 S1、S2与M1、M2，S1、S2与P1、P2和M1、M2与P1、P2构成的单倍型及连锁平衡程度分析 A、B两组进行单倍型分析均未发现S2S2M1M1,S2S2M1M2和S2S2P2P2这三种表现型。但S1、S2与M1、M2,S1、S2与P1、P2和M1、M2与P1、P2等位基因之间处于连锁不平衡状态(连锁不平衡值d分别等于0.1364，0.0156和0.0506 )，与假设的处于连锁平衡状态群体的单倍型表现型频率比较，差异有极显著性(P<0.01)。
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2.3 单倍型分布差异的检验(表1)
表1 正常人与冠心病人之间单倍型分布差异的检验(n,%) 单倍型表现型
A组(n=50)
B组(n=50)
S1M1/S1M1
28
18
S1M1/S2M2
17
, 百拇医药
12
S2M2/S2M2
1(94)
1(64)
S1M1/S2M1
1
1
S1M1/S1M2
2
16
, 百拇医药
S1M2/S2M2
0(6)
1(36)
S1M2/S1M2
1
1
S1P1/S1P1
20
10
, 百拇医药
S1P1/S2P1
10
1
S1P1/S2P2
2(88)
9(56)
S2P1/S2P1
8
6
S2P1/S2P2
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4
2
S1P1/S1P2
4
19
S1P2/S1P2
0(12)
2(44)*
S1P2/S2P2
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2
1
M1P1/M1P2
18(36)
20(40)
M1P1/M1P2
7(14)
5(10)
M1P2/M1P2
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1(2)
2(2)
M1P1/M2P1
10(20)
9(18)
M1P1/M2P2
8(16)
8(16)
M1P2/M2P2
, 百拇医药
2(4)
2(4)
M2P1/M2P1
3(6)
1(2)
M2P1/M2P2
1(2)
1(2)
M2P2/M2P2
, 百拇医药
0(0)
2(4)
与A组比较，*：P<0.01.
B组中具有S1M2单倍型的个体占36%,具有S1P2单倍型个体占44%,A组中具有S1M2单倍型和S1P2单倍型的个体占6%和12%,二者比较差异有显著性(P<0.01)。
2.4 正常人与冠心病患者ApoAI-CⅢ3种多态性酶切位点(MspI,SstI和PstI)单倍型频率分析(表2)
表2 正常人与冠心病患者ApoAI-CⅢ基因区域三种限制性内切酶片段的单倍型及频率(n,%) 单倍型表现型
, 百拇医药
A组(n=50)
B组(n=50)
M1P1S1
14(28)
7(14)
M1P1S2
6(12)
13(26)
M1P2S1
1(2)
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2(4)
M1P2S2
1(2)
1(2)
M2P1S1
10(20)
17(34)*
M2P1S2
15(30)
8(16)
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M2P2S1
2(4)
1(2)
M2P2S2
1(2)
1(2)
与A组比较，*：P<0.05.
B组中具有M2P1S1单倍型的频率为0.34；而在A组中只占0.2，两组差异有显著性(P<0.05)。
3 讨 论
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冠心病的发病是多因素的，但确切的发病机理迄今尚未阐明。近年来，一些研究人员从事研究载脂蛋白基因的多态性与冠心病之间的关系。Vavatsi等研究发现，ApoAI-CⅢ-AIV基因中P2等位基因频率的增高与冠心病有关[1]；但青宏等研究证实，S2等位基因的相对频率随着冠状动脉病变支数的增多而增高[2]。笔者的结果也证实，中国汉族人ApoAI-CⅢ基因区域也存在有PstI、MspI和SstI多态位点。所得到的突变型等位基因P2、M2和S2频率与白种人比较，这些等位基因并不罕见[3～5]，说明确实存在种族差异。经χ2检验，两组人群的三种内切酶组成的各种基因型分布符合遗传平衡规律。三种内切酶的突变型等位基因分析,只有P2等位基因在正常人中与甘油三酯水平有关。是否P2等位基因在正常人中有决定甘油三酯水平的作用，这一点需要进一步研究。
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笔者所见的四种等位基因的单倍型连锁分析未发现有S2M1单倍型的存在，与文献报道一致[6]。S1、S2、M1、M2、P1、P2 等位基因之间处于连锁不平衡状态，d值分别为:0.1364,0.0156和0.0506。笔者观察到，三种单倍型S1S2、S1P2、M2P1S1在冠心病人中的频率高于正常人，其差异在统计学上有显著性。
有关ApoAI-CⅢ基于区域限制性片段长度多态性(RFLPs)及单倍型频率的升高与冠心病之间的内在联系机制还不十分明了。有人认为S2等位基因的出现，说明这一基因区域的DNA顺序发生了改变，影响了CⅢ基因的调节[7]。笔者认为，冠心病的发生是基因因素和环境因素综合作用的缘故，可能的原因是：基因的突变导致基因的异常表达，使载脂蛋白的结构、含量和功能发生改变。在此基础上，加上如高脂饮食、吸烟、糖尿病等不良环境因素，引起脂类代谢异常，从而导致动脉粥样硬化，发生冠心病。
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很明显，SstI多态位点可作为冠心病的易患性基因标志，单一的MspI和PstI位点则不能，但单倍型S1M2、S1P2和M2P1S1仍可考虑作为这种疾病的易患性基因标志。
基金项目:国家自然科学基金资助项目(3880412)
作者简介:翁国路(1964～)，男，主治医师，医学硕士.
参考文献:
[1]Vavatsi NA,Kouidou SA,Geleris PN,et al.Increased frequency of the rare PstI allele(PZ) in Z population of CAD patients in northern Greece [J].Clin Genet,1995,47(1):22～26.
, http://www.100md.com
[2]但青宏,黄元伟,彭章平,等.冠心病的载脂蛋白的AI-CⅢ-AIV基因族多态性分析[J].中华医学杂志,1995,75(10):584～587.
[3]Ordovas JM,Schaefer EF,Salem D,et al.Apolipoprotein AI gene polymorphism associated with premature coronary artery disease and familial hypoalphalipoproteinemia[J].N Engl J Med,1986,314(11):671～677.
[4]Kessling A.Study of DNA polymorphisms around the human apolipoprotein AI gene in hyperlipidemic and normal individuals[J].Clin Genet,1985,28:296～306.
, http://www.100md.com
[5]Ferns GA,Galton DJ.Haplotypes of human apoprotein AI-CⅢ-AIV gene cluster in cornary atherosclerosis[J].Hum Genet,1986,73:245～249.
[6]Rees A.Haplotypes identified by DNA polymorpisms at the apolipoprotein AI and C-Ⅲ-AV gene cluster[J].Hum Genet,1986,72:168～171.
[7]Ress.Deoxyribonucleic acid polymorphisms in the apolipoprotein AI-CⅢ gene cluster association with hypertriglyceridemia[J].J Clin Invert,1985,76:1090～1095.
收稿日期:2000-02-25, http://www.100md.com
单位：翁国路(福建医科大学附属第二医院内科，泉州 362000)；韩琴琴 陈灏珠(上海医科大学附属中山医院心内科,上海 200032)
关键词：载脂蛋白A；冠状动脉疾病；多态现象(遗传学)；基因
福建医科大学学报000202
摘要:目的 探讨载脂蛋白的AI-CⅢ基因区域多态性与冠心病的关系。方法 应用PCR方法检测50例正常人(汉族)及50例冠心病患者(汉族，其中38例为陈旧性心肌梗塞患者)ApoAI-CⅢ基因区域PstI、SstI和MspI酶切位点上限制性片段长度多态性(RFLPs)，并作单倍型分析。结果 50例正常人中，P2、S2、M2等位基因频率分别为25%,33%和46%；50例冠心病患者为28%,62%和40%。冠心病患者S2等位基因频率与正常人比较差异有显著性(P<0.01)，M2和P2差异无显著性(P>0.05)。单倍型频率及连锁平衡程度分析,S1、S2、P1、P2及M1、M2之间处于连锁不平衡状态(P<0.01)。单倍型S1P2、S1M2和M2P1S1频率在冠心病人与正常人比较差异有显著性(P<0.05)。结论 S2等位基因和单倍型S1P2、S1M2和M2P1S1频率的升高与冠心病有关，可考虑作为该疾病易患性基因的标志。
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中图分类号:R543.3;R977.6 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)02-0096-04
Relationship of Apolipoprotein AI and CⅢ Loci Gene Polymorphism and Coronary Artery Disease
WENG Guo-lu,HAN Qin-qin,CHEN Hao-zhu
(The Affiliated Second Hospital,Fujian Medical Univercity,Quanzhou 362000,China)
ABSTRACT:Objective To study the relationship of the apolipoprotenin AI-CⅢ loci with coronary artery disease.Methods Using the polymerase chain reaction(PCR) to amplificate Chinese human Apo AI-CⅢ gene which includig Pst-I,SstI and MspI restrict enzyme polymorphism loci,then digesting it with these three restrict enzyme,it detected three restriction fragments.Results It was found that P2,S2 and M2 allele gene frequencies is 25%,33% and 46% in the normal individuals,28%,62% and 40%in the patients with coronary artery disease.The S2 allele frequency of the patients with cornary artery diseases statistically significant as compared with the normal individuals(P<0.01).Haplotypes S1P2,S1M2 and M2P1S1 frequency in the patients with coronary artery disease was significantly greater than that in the normal individuals(P<0.05).Conclusion It indicated that SstI polymorphic site was associated with coronary artery disease.It is possible that the SstI polymorphic site and the haplotypes S1P2,S1M2 and M2P1S1 are a susceptible genetic marker of coronary artery disease.
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KEY WORDS:apolipoprotein A-Ⅱ;coronary artery disease;gene polymorphism,heredity;gene
笔者于1990年10月～1992年10月采用PCR方法对50例正常人和50例冠心病患者载脂蛋白ApoAI-CⅢ基因中含有PstI、SstI及MspI限制性内切酶多态性位点片段进行体外扩增，用相应的三种限制性内切酶进行酶切，得到三种不同的酶切片段长度，报告如下。
1 对象和方法
1.1 对象 正常人(汉族)50例(A组)，经检查无心脑血管疾病、糖尿病及甲状腺等内分泌系统疾病。其中男性37例，女性13例，年龄55±8.7岁。冠心病患者50例(B组)，均为汉族，主要来自本院心内科、专科门诊和病房，其中男性38例，女性12例，年龄57±6.8岁；其中陈旧性心梗38名。
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1.2 方法
1.2.1 化学试剂 EDAT抗凝剂、溶血试剂、ProteinaseK溶液、电泳缓冲液、PCR试剂盒(购自华美生物工程公司)。
1.2.2 PCR引物 三种目的基因由中科院生物化学研究所合成。
ApoAI基因MspⅠ：
引物1： 5＇ GCTAAAGTAAGGACCCAGCC 3＇
引物2： 5＇ GAAGACAGCCCACACAGTCTTG 3＇
ApoAI基因邻近区PstⅠ：
引物1： 5＇ CTACACTCTCCCTTACCAAC 3＇
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引物2： 5＇ AACTCCAGCCGTTCACTTG 3＇
ApoCⅢ基因SstⅠ：
引物1： 5＇ TGAAAGACTACTGGAGCACC 3＇
引物2： 5＇ AGACACAGATGGCACTTG 3＇
1.2.3 仪器 高速冷冻离心机(TGLL-18型，中科院上海生物化学研究所)；真空干燥离心机(LNG-T83型，上海生物化学研究所)；PCR 扩增仪(Mastercyler 5332型，美国惠普公司)。
1.2.4 处理方法
等位基因频率的计算：
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各组间等位基因频率及单倍型频率的差别、遗传平衡及连锁平衡程度用χ2检验。
1.3 DNA多态性分析 白细胞染色体DNA的提取：取新鲜静脉血0.3 ml，置于1.5 ml的塑料离心管中，加入溶血试剂0.5 ml，混匀；高速冷冻离心1200 r/min×10 min，弃去上清液，加入溶液试剂0.5 ml；重复上述操作2～3次，直至沉淀转为白色；PCR缓冲器中加入0.3 ml，轻轻辗转离心管使沉淀扩散，加蛋白酶K溶液0.5 ml(10 mg/ml)。置于55°C水浴箱中4 h。消化核蛋白，然后煮沸95°C蛋白酶K 10 ml。
1.3.1 ApoAI与ApoCⅢ基因紧密连锁及其多态性酶切位点(附图)
附图 ApoAI-CⅢ基因及多态性酶切位点示意图
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1.3.2 ApoAI基因第三个内含子中含有一个Msp-I多态性酶切位点。笔者设计一段包含MspI多态位点在内的一段307 bp DNA片段作为PCR扩增模板合成一对引物，扩增后经Msp-I酶切处理，如果该酶切位点存在，则电泳图上可见139 bp和168 bp两条片段，该等位基因称为M1；如果酶切位点消失，则电泳图上仅见307 bp一条片段，该等位基因称为M2；如果两条姐妹染色体DNA(一条来自父亲，另一条来自母亲)均有M1或M2等位基因，则电泳图上出现M1M1或M2M2纯合子基因型；如果一条染色体的DNA等位基因是M1，另一条染色体的DNA等位基因是M2， 则电泳图上出现M1M2杂合子基因型。
1.3.3 ApoAI基因3'端有一PstI多态性酶切位点存在，笔者设计一段包含PstI多态性位点在内的306 bp DNA片段作为PCR 扩增模板合成一对引物，扩增后经PstI酶切处理，如果酶切位点存在，则在电泳图上可见107 bp和199 bp两条片段，该等位基因称P1；如果该酶切位点消失，则电泳图上仅见一条306 bp片段，该等位基因称P2。
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1.3.4 ApoCⅢ 3'非编码区存在有SstI多态性酶切位点，笔者设计一段包含SstI多态位点在内的311 bp DNA片段作为PCR扩增模板合成一对引物，扩增后经SstI酶切处理。如果此位点存在，则电泳图上可见136 bp和175 bp两条片段，该等位基因称S2；如果不存在该酶切位点，则电泳图仅见一条311 bp片段，该等位基因称S1。
2 结 果
2.1 中国汉族人ApoAI-CⅢ基因多态性 A、B两组共100人，取每人静脉血0.3 ml，如上法提取白细胞染色体DNA，分别用三对不同的引物进行PCR扩增，然后对扩增产物用三种相对应的内切酶水解，PAGE电泳鉴定DNA基因多态性。得到二组研究对象的三种内切酶引起的不同基因型频率,表明中国汉族人ApoAI-CⅢ基因组存在MspI，PstI和SstI多态性位点且M2、P2、S2等位基因并不罕见。M2和P2等位基因频率组间比较，差异无显著性。但S2等位基因频率在B组中，频率高于A组，差异有显著性(P<0.01)。ApoAI-CⅢ MspI，SstI，和PstI基因型频率均符合遗传平衡。
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2.2 S1、S2与M1、M2，S1、S2与P1、P2和M1、M2与P1、P2构成的单倍型及连锁平衡程度分析 A、B两组进行单倍型分析均未发现S2S2M1M1,S2S2M1M2和S2S2P2P2这三种表现型。但S1、S2与M1、M2,S1、S2与P1、P2和M1、M2与P1、P2等位基因之间处于连锁不平衡状态(连锁不平衡值d分别等于0.1364，0.0156和0.0506 )，与假设的处于连锁平衡状态群体的单倍型表现型频率比较，差异有极显著性(P<0.01)。
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2.3 单倍型分布差异的检验(表1)
表1 正常人与冠心病人之间单倍型分布差异的检验(n,%) 单倍型表现型
A组(n=50)
B组(n=50)
S1M1/S1M1
28
18
S1M1/S2M2
17
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12
S2M2/S2M2
1(94)
1(64)
S1M1/S2M1
1
1
S1M1/S1M2
2
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S1M2/S2M2
0(6)
1(36)
S1M2/S1M2
1
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S1P1/S1P1
20
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S1P1/S2P1
10
1
S1P1/S2P2
2(88)
9(56)
S2P1/S2P1
8
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S2P1/S2P2
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4
2
S1P1/S1P2
4
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S1P2/S1P2
0(12)
2(44)*
S1P2/S2P2
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2
1
M1P1/M1P2
18(36)
20(40)
M1P1/M1P2
7(14)
5(10)
M1P2/M1P2
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1(2)
2(2)
M1P1/M2P1
10(20)
9(18)
M1P1/M2P2
8(16)
8(16)
M1P2/M2P2
, 百拇医药
2(4)
2(4)
M2P1/M2P1
3(6)
1(2)
M2P1/M2P2
1(2)
1(2)
M2P2/M2P2
, 百拇医药
0(0)
2(4)
与A组比较，*：P<0.01.
B组中具有S1M2单倍型的个体占36%,具有S1P2单倍型个体占44%,A组中具有S1M2单倍型和S1P2单倍型的个体占6%和12%,二者比较差异有显著性(P<0.01)。
2.4 正常人与冠心病患者ApoAI-CⅢ3种多态性酶切位点(MspI,SstI和PstI)单倍型频率分析(表2)
表2 正常人与冠心病患者ApoAI-CⅢ基因区域三种限制性内切酶片段的单倍型及频率(n,%) 单倍型表现型
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A组(n=50)
B组(n=50)
M1P1S1
14(28)
7(14)
M1P1S2
6(12)
13(26)
M1P2S1
1(2)
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2(4)
M1P2S2
1(2)
1(2)
M2P1S1
10(20)
17(34)*
M2P1S2
15(30)
8(16)
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M2P2S1
2(4)
1(2)
M2P2S2
1(2)
1(2)
与A组比较，*：P<0.05.
B组中具有M2P1S1单倍型的频率为0.34；而在A组中只占0.2，两组差异有显著性(P<0.05)。
3 讨 论
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冠心病的发病是多因素的，但确切的发病机理迄今尚未阐明。近年来，一些研究人员从事研究载脂蛋白基因的多态性与冠心病之间的关系。Vavatsi等研究发现，ApoAI-CⅢ-AIV基因中P2等位基因频率的增高与冠心病有关[1]；但青宏等研究证实，S2等位基因的相对频率随着冠状动脉病变支数的增多而增高[2]。笔者的结果也证实，中国汉族人ApoAI-CⅢ基因区域也存在有PstI、MspI和SstI多态位点。所得到的突变型等位基因P2、M2和S2频率与白种人比较，这些等位基因并不罕见[3～5]，说明确实存在种族差异。经χ2检验，两组人群的三种内切酶组成的各种基因型分布符合遗传平衡规律。三种内切酶的突变型等位基因分析,只有P2等位基因在正常人中与甘油三酯水平有关。是否P2等位基因在正常人中有决定甘油三酯水平的作用，这一点需要进一步研究。
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笔者所见的四种等位基因的单倍型连锁分析未发现有S2M1单倍型的存在，与文献报道一致[6]。S1、S2、M1、M2、P1、P2 等位基因之间处于连锁不平衡状态，d值分别为:0.1364,0.0156和0.0506。笔者观察到，三种单倍型S1S2、S1P2、M2P1S1在冠心病人中的频率高于正常人，其差异在统计学上有显著性。
有关ApoAI-CⅢ基于区域限制性片段长度多态性(RFLPs)及单倍型频率的升高与冠心病之间的内在联系机制还不十分明了。有人认为S2等位基因的出现，说明这一基因区域的DNA顺序发生了改变，影响了CⅢ基因的调节[7]。笔者认为，冠心病的发生是基因因素和环境因素综合作用的缘故，可能的原因是：基因的突变导致基因的异常表达，使载脂蛋白的结构、含量和功能发生改变。在此基础上，加上如高脂饮食、吸烟、糖尿病等不良环境因素，引起脂类代谢异常，从而导致动脉粥样硬化，发生冠心病。
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很明显，SstI多态位点可作为冠心病的易患性基因标志，单一的MspI和PstI位点则不能，但单倍型S1M2、S1P2和M2P1S1仍可考虑作为这种疾病的易患性基因标志。
基金项目:国家自然科学基金资助项目(3880412)
作者简介:翁国路(1964～)，男，主治医师，医学硕士.
参考文献:
[1]Vavatsi NA,Kouidou SA,Geleris PN,et al.Increased frequency of the rare PstI allele(PZ) in Z population of CAD patients in northern Greece [J].Clin Genet,1995,47(1):22～26.
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[2]但青宏,黄元伟,彭章平,等.冠心病的载脂蛋白的AI-CⅢ-AIV基因族多态性分析[J].中华医学杂志,1995,75(10):584～587.
[3]Ordovas JM,Schaefer EF,Salem D,et al.Apolipoprotein AI gene polymorphism associated with premature coronary artery disease and familial hypoalphalipoproteinemia[J].N Engl J Med,1986,314(11):671～677.
[4]Kessling A.Study of DNA polymorphisms around the human apolipoprotein AI gene in hyperlipidemic and normal individuals[J].Clin Genet,1985,28:296～306.
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[5]Ferns GA,Galton DJ.Haplotypes of human apoprotein AI-CⅢ-AIV gene cluster in cornary atherosclerosis[J].Hum Genet,1986,73:245～249.
[6]Rees A.Haplotypes identified by DNA polymorpisms at the apolipoprotein AI and C-Ⅲ-AV gene cluster[J].Hum Genet,1986,72:168～171.
[7]Ress.Deoxyribonucleic acid polymorphisms in the apolipoprotein AI-CⅢ gene cluster association with hypertriglyceridemia[J].J Clin Invert,1985,76:1090～1095.
收稿日期:2000-02-25, http://www.100md.com