血小板中神经肽Y在血液透析过程的变化及其意义
作者：罗南萍 孟建中 杨道理 孔立新 齐法莲 武翠华 刘文渊
单位：罗南萍(250031 济南军区总医院免疫科)；孟建中(250031 济南军区总医院免疫科)；杨道理(250031 济南军区总医院免疫科)；孔立新(250031 济南军区总医院免疫科)；齐法莲(250031 济南军区总医院免疫科)；武翠华(250031 济南军区总医院免疫科)；刘文渊(250031 济南军区总医院免疫科)
关键词：神经肽Y；血小板；血液透析
临床内科杂志000219
摘 要：目的：探讨神经肽Y(NPY)在血液透析(HD)中的意义。方法：采用放射免疫分析法对35例HD患者进行血小板提取液和血浆中NPY含量检测，并以30例健康人作为对照。结果：HD患者血小板中NPY含量明显低于对照组，HD后增高；血浆中NPY水平高于对照组，HD后降低；提取液中NPY水平减少与血浆增高呈显著负相关。结论：HD患者血小板中NPY由于病理因素大量释放入血浆，参与了缩血管效应。
, 百拇医药
分类号：R692 文献标识码：A
文章编号：1001-9057(2000)02-0111-02
Change and significance of neuropeptide Y in platelet during hematodialysis
LUO Nanping, MENG Jianzhong, YANG Daoli, et al.
Department of Immunology, Jinan General Hospital of PLA, Jinan 250031,China
Abstract：Objective：To evaluate change and significance of neuropeptide Y (NPY) in platelet of patients during hematodialysis. Methods：The NPY contents in platelet and plasma of 35 patients were detected by radioimmunoassay indergoing hematodialysis, and 30 healthy peoples as control. Results：The NPY content in patients platelet in the patient were signifcantly lower than that in control and increased after hematodialysis. The NPY contents in plasma were signficantly higher than those in control and decreased after hematodialysis. The decrease of NPY in extract was negatively correlated with the increase of NPY in plasma. Conclusion NPY in patients platelet largely release that into plasma ,which may play an important role in pathophysiologg of the patients.
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Key words：Neuropeptide Y； Platelet； Hematodialysis
神经肽Y(Neuropeptide Y, NPY)是一种富含酪氨酸的多肽，作为神经递质与去甲肾上腺素共存于交感神经末梢[1]。近几年研究[2]表明，NPY还可在大鼠原始巨核细胞合成，并储存于血小板中，在血小板活化过程中，NPY可被释放出来参与其它活性物质的缩血管效应。自1987年Ericsson[3]等提出血小板中也存在NPY，至今对血小板储存释入NPY的缩血管功能以及与疾病的关系了解甚少，我们采用特异性放射免疫分析法(RIA)对慢性肾功能衰竭(CRF)患者进行血小板提取液与贫血小板血浆中NPY免疫活性检测分析，探讨血小板中NPY缩血管效应以及在肾脏疾病发病中的重要作用。
对象与方法
一、对象： 维持性血液透析(HD)患者35例，男性19例，女性16例，平均年龄(46.5±5.5)岁。所有病例均来自本院血液净化中心。原发病分别为慢性肾炎21例、肾小球动脉硬化4例、糖尿病肾病5例、肾盂肾炎3例、多囊肾2例。透析时间6～74个月(平均39个月)。全部患者内生肌酐清除率(Ccr)均小于10 ml/min。每周透析3次，每次4.0 ～5 h。选择30例经健康查体的献血员作为对照组，男性17例，女性13例。平均年龄(32.5±12.0)岁。
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二、方法
(一)血小板提取液制备：分别于HD前、后即刻抽取静脉血(对照组抽取空腹静脉血)3 ml，注入含有EDTA的试管中，轻轻摇匀后于4℃500 r/min离心30 min， 吸取全部血浆于另一硅化塑料试管中，4℃ 2 000 r/min再次离心30 min。将上清倾入另一试管中，作为贫血小板的血浆标本，沉淀即为血小板。将此沉淀以生理盐水冲洗一次，离心后倾去上清，加入1 ml生理盐水，充分混匀后在F800血球计数仪上行血小板计数，并调整血小板数为1×109/L。将血小板混悬液与血浆置于-30℃以下待测。
(二)样本NPY测定：(1)实验前将血小板混悬液于-30℃～37℃反复冻融三次，镜下观察血小板形态大部分裂解、破碎，用抽干机抽干使其浓缩，再加入1 ml生理盐水复溶，充分混匀后进行NPY测定。(2)采用放射免疫非平衡法进行标准曲线及样本的复管检测。NPY试剂盒由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。测量仪器为FT-630G微机多探头γ-计数仪。(3)样本浓度计算：血小板提取液(ng/109BPC)=
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(三)统计学处理：所有数据以
±s表示，均数之间比较采用t检验。
结 果
血小板提取液与血浆中NPY水平见表1，由表1可见，HD前血小板中NPY水平明显低于对照组，HD后增高(P<0.01)；HD前血浆NPY水平明显高于对照组，HD后明显下降(P<0.01)；HD患者血小板中NPY含量减少与血浆NPY增高呈显著负相关(r=-0.69,P<0.01)。
表1 血小板提取液与血浆中NPY水平检测(±s) 组 别
例数
NPY
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血小板提取液(ng/109BPC)
血 浆
(ng/L)
对照组
30
58.19±21.29
144.06±33.83
HD前
35
33.77±19.8
423.26±54.94
HD后
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35
65.57±28.27*
315.49±50.10*
注：与HD前比较*P<0.01。讨 论
Myets[4]发现大鼠血循环中NPY大部分来自血小板。1991年Ericsson[5]又进一步证实大鼠血小板中有与NPY合成相关联的mRAN，表明血小板是合成NPY的主要细胞。本组结果发现HD患者血小板提取液中NPY水平明显低于对照组，而血浆中含有大量的NPY，推测血小板上可能存在NPY受体，HD患者由于体内毒素作用、凝血机制障碍等原因，诱导血小板聚集，并释放大量NPY入血浆，致使血浆中NPY浓度增高。这一结果与Myets动物实验报道相一致。
, 百拇医药
HD后血小板中NPY水平较HD前明显增高，而血浆NPY水平降低，其原因可能为：(1)HD作为一种中等强度刺激使病人应激，交感神经处于兴奋状态而使血小板合成释放增加；(2)HD过程机械性损伤，血小板随血循环与透析膜接触从而被激活的过程；(3)HD过程采用中空纤维透析器的透析膜截留分子量最大为12 000， NPY为4 271的中分子多肽，故能透过透析膜，是HD后血浆中NPY明显减少的重要原因。
文献报道，NPY对血管收缩具有很大影响。血小板释放NPY可能作为血小板与血管间的一种传递者直接或与其它缩血管物质(如5-羟色胺等)协同作用，发挥缩血管效应[6]。在本组维持性HD患者中，85%的患者同时伴有高血压的发生，可能与血小板中NPY释放入血浆引起血管的收缩有关。
参考文献：
[1] 杨耀芳. 血小板释放的一种多肽—神经肽Y. 国外医学输血及血液分册，1992，15(1)∶197-198.
, 百拇医药
[2] Ericsson A, Hemsen A, Lundbery JM, et al. Detertion of neutropetide Y-like immuno-reactivity and messenger RNA in rat platelets; the effects of vinblastine ressrping, and dexamethasone on NPY expression in blood cells. Exp cells Res, 1991, 192(2)∶604-611.
[3] Ercsson A, Schaling M, Mclntyre k, et al. Detection of neuropeptide Y and its mRNA in meyakaryocytes: Enhanced levels in certain autoimmune mine. Proc Natl Acad Sci. USA 1987,84∶5585-5589.
, 百拇医药
[4] Myets A K, Farhat MY, Vaz cA, et al. Release of Immunoreactive-neuropeptide by rat platelets. Biochem Biophys Res Comm, 1988，155(11)∶118-158.
[5] Ericsson A, Nemsen A, Landbery JM. et al. Detection of neuropeptide Y Like immunoreactivity and messenger RNA in rat platelets: The effects of vinblastine reserpine, and dexamethasone on NPY expression in bloods cells. Rrper Cells Res, 1991,192(2)∶604-611.
[6] 杨耀芳，杨丽华，施广璞. 大鼠血小板的神经肽丫及其对血管收缩的影响. 生理学报，1993，45∶400-404.
收稿日期：1998-10-30
修回日期：1999-11-05, 百拇医药
单位：罗南萍(250031 济南军区总医院免疫科)；孟建中(250031 济南军区总医院免疫科)；杨道理(250031 济南军区总医院免疫科)；孔立新(250031 济南军区总医院免疫科)；齐法莲(250031 济南军区总医院免疫科)；武翠华(250031 济南军区总医院免疫科)；刘文渊(250031 济南军区总医院免疫科)
关键词：神经肽Y；血小板；血液透析
临床内科杂志000219
摘 要：目的：探讨神经肽Y(NPY)在血液透析(HD)中的意义。方法：采用放射免疫分析法对35例HD患者进行血小板提取液和血浆中NPY含量检测，并以30例健康人作为对照。结果：HD患者血小板中NPY含量明显低于对照组，HD后增高；血浆中NPY水平高于对照组，HD后降低；提取液中NPY水平减少与血浆增高呈显著负相关。结论：HD患者血小板中NPY由于病理因素大量释放入血浆，参与了缩血管效应。
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分类号：R692 文献标识码：A
文章编号：1001-9057(2000)02-0111-02
Change and significance of neuropeptide Y in platelet during hematodialysis
LUO Nanping, MENG Jianzhong, YANG Daoli, et al.
Department of Immunology, Jinan General Hospital of PLA, Jinan 250031,China
Abstract：Objective：To evaluate change and significance of neuropeptide Y (NPY) in platelet of patients during hematodialysis. Methods：The NPY contents in platelet and plasma of 35 patients were detected by radioimmunoassay indergoing hematodialysis, and 30 healthy peoples as control. Results：The NPY content in patients platelet in the patient were signifcantly lower than that in control and increased after hematodialysis. The NPY contents in plasma were signficantly higher than those in control and decreased after hematodialysis. The decrease of NPY in extract was negatively correlated with the increase of NPY in plasma. Conclusion NPY in patients platelet largely release that into plasma ,which may play an important role in pathophysiologg of the patients.
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Key words：Neuropeptide Y； Platelet； Hematodialysis
神经肽Y(Neuropeptide Y, NPY)是一种富含酪氨酸的多肽，作为神经递质与去甲肾上腺素共存于交感神经末梢[1]。近几年研究[2]表明，NPY还可在大鼠原始巨核细胞合成，并储存于血小板中，在血小板活化过程中，NPY可被释放出来参与其它活性物质的缩血管效应。自1987年Ericsson[3]等提出血小板中也存在NPY，至今对血小板储存释入NPY的缩血管功能以及与疾病的关系了解甚少，我们采用特异性放射免疫分析法(RIA)对慢性肾功能衰竭(CRF)患者进行血小板提取液与贫血小板血浆中NPY免疫活性检测分析，探讨血小板中NPY缩血管效应以及在肾脏疾病发病中的重要作用。
对象与方法
一、对象： 维持性血液透析(HD)患者35例，男性19例，女性16例，平均年龄(46.5±5.5)岁。所有病例均来自本院血液净化中心。原发病分别为慢性肾炎21例、肾小球动脉硬化4例、糖尿病肾病5例、肾盂肾炎3例、多囊肾2例。透析时间6～74个月(平均39个月)。全部患者内生肌酐清除率(Ccr)均小于10 ml/min。每周透析3次，每次4.0 ～5 h。选择30例经健康查体的献血员作为对照组，男性17例，女性13例。平均年龄(32.5±12.0)岁。
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二、方法
(一)血小板提取液制备：分别于HD前、后即刻抽取静脉血(对照组抽取空腹静脉血)3 ml，注入含有EDTA的试管中，轻轻摇匀后于4℃500 r/min离心30 min， 吸取全部血浆于另一硅化塑料试管中，4℃ 2 000 r/min再次离心30 min。将上清倾入另一试管中，作为贫血小板的血浆标本，沉淀即为血小板。将此沉淀以生理盐水冲洗一次，离心后倾去上清，加入1 ml生理盐水，充分混匀后在F800血球计数仪上行血小板计数，并调整血小板数为1×109/L。将血小板混悬液与血浆置于-30℃以下待测。
(二)样本NPY测定：(1)实验前将血小板混悬液于-30℃～37℃反复冻融三次，镜下观察血小板形态大部分裂解、破碎，用抽干机抽干使其浓缩，再加入1 ml生理盐水复溶，充分混匀后进行NPY测定。(2)采用放射免疫非平衡法进行标准曲线及样本的复管检测。NPY试剂盒由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。测量仪器为FT-630G微机多探头γ-计数仪。(3)样本浓度计算：血小板提取液(ng/109BPC)=
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(三)统计学处理：所有数据以
±s表示，均数之间比较采用t检验。结 果
血小板提取液与血浆中NPY水平见表1，由表1可见，HD前血小板中NPY水平明显低于对照组，HD后增高(P<0.01)；HD前血浆NPY水平明显高于对照组，HD后明显下降(P<0.01)；HD患者血小板中NPY含量减少与血浆NPY增高呈显著负相关(r=-0.69,P<0.01)。
表1 血小板提取液与血浆中NPY水平检测(
±s) 组 别例数
NPY
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血小板提取液(ng/109BPC)
血 浆
(ng/L)
对照组
30
58.19±21.29
144.06±33.83
HD前
35
33.77±19.8
423.26±54.94
HD后
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35
65.57±28.27*
315.49±50.10*
注：与HD前比较*P<0.01。讨 论
Myets[4]发现大鼠血循环中NPY大部分来自血小板。1991年Ericsson[5]又进一步证实大鼠血小板中有与NPY合成相关联的mRAN，表明血小板是合成NPY的主要细胞。本组结果发现HD患者血小板提取液中NPY水平明显低于对照组，而血浆中含有大量的NPY，推测血小板上可能存在NPY受体，HD患者由于体内毒素作用、凝血机制障碍等原因，诱导血小板聚集，并释放大量NPY入血浆，致使血浆中NPY浓度增高。这一结果与Myets动物实验报道相一致。
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HD后血小板中NPY水平较HD前明显增高，而血浆NPY水平降低，其原因可能为：(1)HD作为一种中等强度刺激使病人应激，交感神经处于兴奋状态而使血小板合成释放增加；(2)HD过程机械性损伤，血小板随血循环与透析膜接触从而被激活的过程；(3)HD过程采用中空纤维透析器的透析膜截留分子量最大为12 000， NPY为4 271的中分子多肽，故能透过透析膜，是HD后血浆中NPY明显减少的重要原因。
文献报道，NPY对血管收缩具有很大影响。血小板释放NPY可能作为血小板与血管间的一种传递者直接或与其它缩血管物质(如5-羟色胺等)协同作用，发挥缩血管效应[6]。在本组维持性HD患者中，85%的患者同时伴有高血压的发生，可能与血小板中NPY释放入血浆引起血管的收缩有关。
参考文献：
[1] 杨耀芳. 血小板释放的一种多肽—神经肽Y. 国外医学输血及血液分册，1992，15(1)∶197-198.
, 百拇医药
[2] Ericsson A, Hemsen A, Lundbery JM, et al. Detertion of neutropetide Y-like immuno-reactivity and messenger RNA in rat platelets; the effects of vinblastine ressrping, and dexamethasone on NPY expression in blood cells. Exp cells Res, 1991, 192(2)∶604-611.
[3] Ercsson A, Schaling M, Mclntyre k, et al. Detection of neuropeptide Y and its mRNA in meyakaryocytes: Enhanced levels in certain autoimmune mine. Proc Natl Acad Sci. USA 1987,84∶5585-5589.
, 百拇医药
[4] Myets A K, Farhat MY, Vaz cA, et al. Release of Immunoreactive-neuropeptide by rat platelets. Biochem Biophys Res Comm, 1988，155(11)∶118-158.
[5] Ericsson A, Nemsen A, Landbery JM. et al. Detection of neuropeptide Y Like immunoreactivity and messenger RNA in rat platelets: The effects of vinblastine reserpine, and dexamethasone on NPY expression in bloods cells. Rrper Cells Res, 1991,192(2)∶604-611.
[6] 杨耀芳，杨丽华，施广璞. 大鼠血小板的神经肽丫及其对血管收缩的影响. 生理学报，1993，45∶400-404.
收稿日期：1998-10-30
修回日期：1999-11-05, 百拇医药