p21WAF1/CIP1和p53在喉癌癌变过程中表达及其临床病理意义
作者：王建波 王金泉 娄卫华 董明敏
单位：王建波(山东省济宁市第一人民医院耳鼻咽喉科，山东 济宁 272111)；王金泉(山东省济宁市第一人民医院耳鼻咽喉科，山东 济宁 272111)；娄卫华(河南医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科，河南 郑州 450052)；董明敏(河南医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科，河南 郑州 450052)
关键词：喉肿瘤；p53基因；p21WAF1/CIP1基因；免疫组织化学
癌症000227
中图分类号：R739.65 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(2000)02-0181-02
研究证实细胞周期调控异常是肿瘤发生发展的内在原因[1]。p21WAF1/CIP1和p53是细胞周期调控的重要的负性调控因子。本实验以喉正常粘膜、喉粘膜不典型增生病变和喉癌为研究对象，采用免疫组化方法检测两种基因蛋白产物，观察在喉癌癌变过程中变化及相互关系。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料
喉癌60例，喉粘膜不典型增生病变组40例，正常粘膜20例。
1.2 方法
按免疫组化SP法试剂盒提供说明进行，免疫组化检测设阳、阴性对照。参考文献[2]确定本实验结果的判断标准：p21WAF1/CIP1、p53阳性反应均为棕黄色颗粒，定位于细胞核。以细胞核出现棕黄色颗粒作为阳性细胞，阴性(-)：无阳性细胞或阳性细胞数<5%；阳性(+)：阳性细胞数≥5%。
2 结果
2.1 p21WAF1/CIP1、p53阳性细胞的表达 (见图1～4)。
, 百拇医药
图1 p21WAF1/CIP1在不典型增生中的阳性表达，SP法×350；
p21WAF1/CIP1出现在上皮的全层，呈散在分布。
图2 p53在不典型增生中的阳性表达，SP法×350；
p53阳性表达出现在上皮的中下层，呈弥漫性分布。
图3 p21WAF1/CIP1在喉癌中的阳性表达，SP法×350；
p21WAF1/CIP1阳性细胞以散在分布于喉癌组织内。
, 百拇医药
图4 p53在喉癌中的阳性表达，SP法×350；
p53阳性表达以弥漫性分布于喉癌组织内。
2.2 两种基因蛋白产物在喉癌癌变过程中的表达
p21WAF1/CIP1在喉正常粘膜、喉不典型增生病变和喉癌中阳性表达分别为：95%(19/20)、75.0%(30/40)和63.3%(38/60)，喉癌组明显低于对照组(P<0.05)。p53在喉癌癌变中阳性表达率分别为：0、30.0%(12/40)和61.7%(37/60)，喉癌组明显高于对照组(P<0.01)。
2.3 两种基因蛋白表达与临床病理参数的关系
由表1可知：p21WAF1/CIP1在高、中、低分化的喉癌中阳性表达率呈逐渐下降的趋势，高分化组明显高于低分化组(P<0.05)。p21WAF1/CIP1和p53阳性表达率与喉癌的性别、临床分型、T分型、临床分期无显著性差异(P>0.05)。
, http://www.100md.com
表1 喉癌中p21WAF1/CIP1、p53表达与临床病理参数的关系 临床病理参数
n
p21WAF1/CIP1
p53
-
+
-
+
性别
男
55
30
, 百拇医药
25
21
34
女
5
2
3
2
3
分化程度
高分化
21
5
16*
, 百拇医药
7
14
中分化
29
10
19
12
17
低分化
10
7
3
4
6
, 百拇医药
临床分型
声门上型
18
8
10
8
10
声门型
31
11
20
14
17
声门下型
, 百拇医药
11
3
8
1
10
T分期
T1～2
18
9
9
6
12
T3～4
, 百拇医药
42
13
29
17
25
临床分期
Ⅰ～Ⅱ
12
5
7
4
8
Ⅲ～Ⅳ
48
, 百拇医药
17
31
19
29
χ2=6.34 P<0.05
2.4 p21WAF1/CIP1与p53的相关性分析
60例喉癌，两者共同阳性23例，共同阴性8例，相关性分析P>0.05。
3 讨论
p21WAF1/CIP1基因作用是直接参与细胞生长抑制、DNA复制、发育和分化等调控过程，与肿瘤的发生发展机制密切相关[3]。本实验中，p21WAF1/CIP1基因蛋白阳性表达率在喉癌癌变过程中呈逐渐降低的趋势，由于p21WAF1/CIP1是一种罕见突变的肿瘤抑制基因[4]，免疫组化检出的p21WAF1/CIP1均有生物学功能，本实验结果提示p21WAF1/CIP1基因在喉癌癌变过程中，其蛋白表达水平的降低参与喉癌的发生。研究表明，p21WAF1/CIP1阳性表达与肿瘤细胞分化有关[5]。本实验发现喉癌中，高、中、低分化组p21WAF1/CIP1阳性表达率呈逐渐降低的趋势，高分化组明显低于低分化组。表明p21WAF1/CIP1阳性表达与喉鳞状上皮细胞癌分化程度有关，与文献[5,6]结果一致。
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p53基因突变是肿瘤发生的原因之一。野生型p53基因为肿瘤抑制基因，其蛋白半衰期较短，免疫组化难于检测，该基因突变失活后，表达产物稳定性增强，并失去正常的抑制作用，免疫组化易于检测。本实验所采用DO-7单抗主要检测突变型p53，结果显示：在喉癌癌变过程中，p53阳性表达率喉癌组明显高于对照组，而且p53表达与临床分期、细胞分化程度、肿瘤的部位无关。提示p53基因异常在喉癌形成过程中起重要作用，其异常表达出现在喉癌发生早期阶段，与文献报道[5]结果相符。
研究表明：p21WAF1/CIP1诱导表达存在依赖p53和不依赖p53表达的两条途径[2,5,6]。本文结果显示：p21WAF1/CIP1和p53阳性表达无相关性，在非小细胞肺癌中也证实p21WAF1/CIP1表达不依赖于p53基因或蛋白的改变[6]。提示：喉癌中p21WAF1/CIP1诱导表达存在不依赖p53的途径，而且在喉癌发展中可能起重要作用。
, http://www.100md.com
通讯作者：王建波：Tel：86-537-2253120
[参考文献]
[1] Sherr CJ, Roberts JM . Inhibitors of mammalian G1 cyclin-dependent kinaes [J]. Genes Develop,1995,9 ：1149～1163.
[2] Ellis PA , Lonning PE , Borresen Dale A , et al . Absence of p21 expression is associated with abnormal p53 in human breast carcinomas [J]. Br J Cancer ,1997, 76：480～485.
[3] Hartwell LH , Kastam MB. Cell cycle control and cancer [J]. Science,1994, 266： 1821～1828.
, 百拇医药
[4] Shiohara M , El Deing WS , Wada W, et al . Absence of WAF1 mutation in a variety of human malignancies [J] . Blood， 1994, 84：3781～3784.
[5] Nadal A， Jares P , Cazorla M ,et al. p21WAF1/CIP1 expression is associated with cell differentition but not with p53 mutations in squamous cell carcinomas of larynx [J]. J Pathol, 1997,183：156～163.
[6] Marchetti A , Doglionp C , Barbareschi M, et al . p21 RNA and protein expre-ssion in non-small cell lung carcinomas ： evidence of p53 indepent expression and association with tumoral differentiation [J]. Oncogene，1996,12：1319～1324.
收稿日期：1999-06-01；修回日期：1999-06-15, 百拇医药
单位：王建波(山东省济宁市第一人民医院耳鼻咽喉科，山东 济宁 272111)；王金泉(山东省济宁市第一人民医院耳鼻咽喉科，山东 济宁 272111)；娄卫华(河南医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科，河南 郑州 450052)；董明敏(河南医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科，河南 郑州 450052)
关键词：喉肿瘤；p53基因；p21WAF1/CIP1基因；免疫组织化学
癌症000227
中图分类号：R739.65 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(2000)02-0181-02
研究证实细胞周期调控异常是肿瘤发生发展的内在原因[1]。p21WAF1/CIP1和p53是细胞周期调控的重要的负性调控因子。本实验以喉正常粘膜、喉粘膜不典型增生病变和喉癌为研究对象，采用免疫组化方法检测两种基因蛋白产物，观察在喉癌癌变过程中变化及相互关系。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料
喉癌60例，喉粘膜不典型增生病变组40例，正常粘膜20例。
1.2 方法
按免疫组化SP法试剂盒提供说明进行，免疫组化检测设阳、阴性对照。参考文献[2]确定本实验结果的判断标准：p21WAF1/CIP1、p53阳性反应均为棕黄色颗粒，定位于细胞核。以细胞核出现棕黄色颗粒作为阳性细胞，阴性(-)：无阳性细胞或阳性细胞数<5%；阳性(+)：阳性细胞数≥5%。
2 结果
2.1 p21WAF1/CIP1、p53阳性细胞的表达 (见图1～4)。
, 百拇医药
图1 p21WAF1/CIP1在不典型增生中的阳性表达，SP法×350；
p21WAF1/CIP1出现在上皮的全层，呈散在分布。
图2 p53在不典型增生中的阳性表达，SP法×350；
p53阳性表达出现在上皮的中下层，呈弥漫性分布。
图3 p21WAF1/CIP1在喉癌中的阳性表达，SP法×350；
p21WAF1/CIP1阳性细胞以散在分布于喉癌组织内。
, 百拇医药
图4 p53在喉癌中的阳性表达，SP法×350；
p53阳性表达以弥漫性分布于喉癌组织内。
2.2 两种基因蛋白产物在喉癌癌变过程中的表达
p21WAF1/CIP1在喉正常粘膜、喉不典型增生病变和喉癌中阳性表达分别为：95%(19/20)、75.0%(30/40)和63.3%(38/60)，喉癌组明显低于对照组(P<0.05)。p53在喉癌癌变中阳性表达率分别为：0、30.0%(12/40)和61.7%(37/60)，喉癌组明显高于对照组(P<0.01)。
2.3 两种基因蛋白表达与临床病理参数的关系
由表1可知：p21WAF1/CIP1在高、中、低分化的喉癌中阳性表达率呈逐渐下降的趋势，高分化组明显高于低分化组(P<0.05)。p21WAF1/CIP1和p53阳性表达率与喉癌的性别、临床分型、T分型、临床分期无显著性差异(P>0.05)。
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表1 喉癌中p21WAF1/CIP1、p53表达与临床病理参数的关系 临床病理参数
n
p21WAF1/CIP1
p53
-
+
-
+
性别
男
55
30
, 百拇医药
25
21
34
女
5
2
3
2
3
分化程度
高分化
21
5
16*
, 百拇医药
7
14
中分化
29
10
19
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17
低分化
10
7
3
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, 百拇医药
临床分型
声门上型
18
8
10
8
10
声门型
31
11
20
14
17
声门下型
, 百拇医药
11
3
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T分期
T1～2
18
9
9
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12
T3～4
, 百拇医药
42
13
29
17
25
临床分期
Ⅰ～Ⅱ
12
5
7
4
8
Ⅲ～Ⅳ
48
, 百拇医药
17
31
19
29
χ2=6.34 P<0.05
2.4 p21WAF1/CIP1与p53的相关性分析
60例喉癌，两者共同阳性23例，共同阴性8例，相关性分析P>0.05。
3 讨论
p21WAF1/CIP1基因作用是直接参与细胞生长抑制、DNA复制、发育和分化等调控过程，与肿瘤的发生发展机制密切相关[3]。本实验中，p21WAF1/CIP1基因蛋白阳性表达率在喉癌癌变过程中呈逐渐降低的趋势，由于p21WAF1/CIP1是一种罕见突变的肿瘤抑制基因[4]，免疫组化检出的p21WAF1/CIP1均有生物学功能，本实验结果提示p21WAF1/CIP1基因在喉癌癌变过程中，其蛋白表达水平的降低参与喉癌的发生。研究表明，p21WAF1/CIP1阳性表达与肿瘤细胞分化有关[5]。本实验发现喉癌中，高、中、低分化组p21WAF1/CIP1阳性表达率呈逐渐降低的趋势，高分化组明显低于低分化组。表明p21WAF1/CIP1阳性表达与喉鳞状上皮细胞癌分化程度有关，与文献[5,6]结果一致。
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p53基因突变是肿瘤发生的原因之一。野生型p53基因为肿瘤抑制基因，其蛋白半衰期较短，免疫组化难于检测，该基因突变失活后，表达产物稳定性增强，并失去正常的抑制作用，免疫组化易于检测。本实验所采用DO-7单抗主要检测突变型p53，结果显示：在喉癌癌变过程中，p53阳性表达率喉癌组明显高于对照组，而且p53表达与临床分期、细胞分化程度、肿瘤的部位无关。提示p53基因异常在喉癌形成过程中起重要作用，其异常表达出现在喉癌发生早期阶段，与文献报道[5]结果相符。
研究表明：p21WAF1/CIP1诱导表达存在依赖p53和不依赖p53表达的两条途径[2,5,6]。本文结果显示：p21WAF1/CIP1和p53阳性表达无相关性，在非小细胞肺癌中也证实p21WAF1/CIP1表达不依赖于p53基因或蛋白的改变[6]。提示：喉癌中p21WAF1/CIP1诱导表达存在不依赖p53的途径，而且在喉癌发展中可能起重要作用。
, http://www.100md.com
通讯作者：王建波：Tel：86-537-2253120
[参考文献]
[1] Sherr CJ, Roberts JM . Inhibitors of mammalian G1 cyclin-dependent kinaes [J]. Genes Develop,1995,9 ：1149～1163.
[2] Ellis PA , Lonning PE , Borresen Dale A , et al . Absence of p21 expression is associated with abnormal p53 in human breast carcinomas [J]. Br J Cancer ,1997, 76：480～485.
[3] Hartwell LH , Kastam MB. Cell cycle control and cancer [J]. Science,1994, 266： 1821～1828.
, 百拇医药
[4] Shiohara M , El Deing WS , Wada W, et al . Absence of WAF1 mutation in a variety of human malignancies [J] . Blood， 1994, 84：3781～3784.
[5] Nadal A， Jares P , Cazorla M ,et al. p21WAF1/CIP1 expression is associated with cell differentition but not with p53 mutations in squamous cell carcinomas of larynx [J]. J Pathol, 1997,183：156～163.
[6] Marchetti A , Doglionp C , Barbareschi M, et al . p21 RNA and protein expre-ssion in non-small cell lung carcinomas ： evidence of p53 indepent expression and association with tumoral differentiation [J]. Oncogene，1996,12：1319～1324.
收稿日期：1999-06-01；修回日期：1999-06-15, 百拇医药