蝮蛇毒中类狼疮抗凝蛋白体内抗凝作用的研究
作者：杨斌 黎肇炎 陈美芳 班建东 黄君度 林发全
单位：杨斌 黎肇炎 陈美芳(广西医科大学药理学教研室 南宁 530021)；班建东 黄君度 林发全(广西医科大学蛇毒研究所)
关键词：蝮蛇毒；类狼疮抗凝蛋白；抗凝
广西医科大学学报000202
摘要 目的：从中国产蝮蛇蛇毒中分离纯化电泳纯度的类狼疮抗凝 蛋白，研究其对动物体内的抗凝作用及机制。方法：测定蝮蛇毒中类狼疮抗凝蛋白对新西兰白兔的活化部分凝血 活酶时间、凝血酶原时间和凝血酶时间的影响；对小鼠凝血时间的影响；对大鼠静脉血栓和 血小板聚集功能的影响，以及类狼疮抗凝蛋白的溶血性试验。结果：类狼疮抗凝蛋白能显著地延长活化部分凝血活酶时间和凝血 时间，明显地抑制静脉血栓的形成，无溶血作用。结论：类狼疮抗凝蛋白具有体内抗凝血作用，作用机制可能与其干 扰磷脂有关。从中国产蝮蛇蛇毒中分离纯化电泳纯度的类狼疮抗凝 蛋白，研究其对动物体内的抗凝作用及机制。方法：测定蝮蛇毒中类狼疮抗凝蛋白对新西兰白兔的活化部分凝血 活酶时间、凝血酶原时间和凝血酶时间的影响；对小鼠凝血时间的影响；对大鼠静脉血栓和 血小板聚集功能的影响，以及类狼疮抗凝蛋白的溶血性试验。结果：类狼疮抗凝蛋白能显著地延长活化部分凝血活酶时间和凝血 时间，明显地抑制静脉血栓的形成，无溶血作用。结论：类狼疮抗凝蛋白具有体内抗凝血作用，作用机制可能与其干 扰磷脂有关。
, http://www.100md.com
中国图书资料分类法分类号 R963
THE ANTICOAGULANT EFFECT OF LUPUS ANTICOAGULANT-LIKE PROTEIN FROM AGKI STRODON HALYS BREVICAUDUS VENOM IN VIVO
Yang Bin，Li Zhaoyan，Chen Meifang
(Department of Pharmacology,Gu angxi Medical University,Nanning,530021 China)
Abstract Objective:To study anticoagulant effect and mechanis m of Lupus anticoagulant-like protein(LALP),an electrophoresis purity LALP puri f ied by ion exchange and gel filtraration chromatography from agkistrodon halys b revicaudus.Methods:To measure prothrombin time (PT),activated partial thr omboplastin time (APTT),thrombin time (TT);clotting time (CT);venous thrombosis and platelet aggregation in the presence of LALP in rabbit;mice;rat,respectively .Results:It was showed that APTT and CT in the presence of LALP were markedly prolonged,the formation of venous thrombosis was obviously preven ted without any hemolyzation.Conclusion:LALP has anticoagulant effect in vivo,and the effe ctive mechanism may interfere with phosphatide.
, 百拇医药
Key words agkistrodun venom;lupus anticoagulant like protein; anticoagulant
1996年Li等[1]首次发现在中国短尾蝮蛇蛇毒中存在着一种类似系统性红斑狼 疮患者血浆中出现的狼疮性抗凝物(Lupus Anticoagulant，LA)，它的分子量、等电点、作 用性质及体外对血液凝固的影响与LA十分相似，是一种类狼疮抗凝蛋白(Lupus Anticoagula nts Like Protein,LALP)。至于LALP体内是否亦具有抗凝作用，目前国内外尚未见有报道。 因此，本研究的目的旨在通过研究蛇毒中LALP在体内的抗凝作用及机制，以期研制新型的抗 磷酶抗凝生物制剂，将在防治血栓性疾病中具有重要基础理论和实际意义。
1 材料与方法
1.1材料
, http://www.100md.com
1.1.1 动物：昆明种小鼠，体质量18～22 g；Wistar大鼠，体质量200～300 g；新西兰白 兔，体质量2.0～2.5 kg；动物雌雄兼用，均由广西医科大学实验动物中心提供。
1.1.2 蝮蛇毒类狼疮抗凝蛋白(LALP)：由广西医科大学蛇毒研究所从中国短尾蝮蛇毒中 分离纯化，批号：980921。
1.1.3 试剂：Automated APTT和Thromboplastin Reagent 均为Organon Teknika Corpor ation产品。
1.1.4 仪器：PAM-2型PPP自动平衡血小板聚集仪，江苏省丹阳无线电厂生产。
1.2 方法
1.2.1 LALP对活化部分凝血酶原时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)及凝血酶时间(TT) 的影响：新西兰白兔20只，随机分为4组：生理盐水对照组，LALP高、中、低剂量组。各兔 于耳缘静脉给药前、给药后30 min、1 h、2 h、3 h，分别从耳动脉取血4.5 ml，用3.8% 枸橼酸钠0.5 ml抗凝，2 500 r/min离心10 min，分离贫血小板血 浆，按方法[2]测定APTT、PT、TT。
, 百拇医药
1.2.2 LALP对凝血时间的影响：取小鼠40只，随机分为4组：生理盐水对照组，LALP高剂 量(4 mg/kg)、中剂量(2 mg/kg)、低剂量(1 mg/kg)组。各鼠尾静脉注射等体积的药液(0.2 ml/10 g)。1 h后用玻璃毛细管插入小鼠眼内眦球后静脉丛，轻轻转动再缩回，自血液流入 管内开始计时，血液注满后取出毛细管平放于桌面上，每隔30 s折断两端毛细管约0.5 cm ，观察折断处血凝丝出现为止，所历时间即为血凝时间，毛细管两端数据的平均值即为该鼠 的血凝时间，如大于180 s，则以180 s来计算。
1.2.3 LALP对大鼠静脉血栓形成的影响：取大鼠10只，随机分为2组：生理盐水对照组、 LALP组。两组均按0.2 ml/100 g尾静脉注射，分别给予生理盐水和LALP。给药后，立即腹 腔麻醉大鼠，剖开腹腔，在左肾静脉下方结扎腹腔静脉，缝合腹腔。2 h后，重新打开腹腔 ，在结扎下方2 cm处，用止血钳夹住静脉，纵行切开此段静脉，用滤纸吸干血液，记录血栓 形成数，并取出血栓，放入真空干燥器内24 h，取出准确称重，即为血栓干重。
, 百拇医药
1.2.4 LALP对大鼠血小板聚集功能的影响：取大鼠10只，随机分为2组：生理盐水对照组 和LALP组。于尾静脉给药1 h，腹腔麻醉大鼠，腹主动脉取血，3.8%枸橼酸钠抗凝，离心分 别制得血小板富血浆和贫血浆，然后用血小板聚集测定仪，测定血小板的最大聚集率[ 3]。
1.2.5 LALP的溶血性试验：取一只大鼠，麻醉后，打开腹腔，腹主动脉取血15 ml,制备2 %的红细胞悬液。然后取8只试管，按表4加入各种溶液，各管轻轻摇匀，在37℃水浴中保温1 h，2 000 r/min离心5 min，取上清液用721分光光度计测定在540 nm波长处的各 管吸光度(OD值)[4]。
2 结 果
2.1LALP对APTT、PT和TT的影响：给药前PT和TT分别与给药后30 min、1h、2h、3h的PT和TT比较明显变化，表明LALP对外源性凝血系统和纤溶系统无明显影响；LALP高、中、 低剂量组均能显性延长APTT，而且在给药后30 min即明显延长，1h达高峰，3h后逐渐恢 复。结果见表1。
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表1 LALP对APTT的影响(
±s,t/s) 组 别
动物数
(只)
剂量
(mg/kg)
药前
药后
30 min
1 h
2 h
3 h
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生理盐水
5
等容积
52.2±5.2
50.8±4.4
54.0± 3.3
52.4±3.4
53.2±2.8
LALP
5
2.0
52.8±2.7
84.0±11.9**
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116.0±27. 7**
107.0±21.7**
68.0±7.6**
LALP
5
1.0
52.4±6.0
80.4±18.5**
111.4±19. 7**
93.6±21.6**
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71.6±10.0**
LALP
5
0.5
53.0±3.4
71.6±12.9**
104.4±9.4 **
91.2±17.2**
68.0±7.6**
与生理盐水对照组比较：**P<0.01
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2.2 LALP对小鼠凝血时间的影响：生理盐水对照组的凝血时间为(79.5±30.9)s。LALP 高、中、低剂量组给药后1 h的凝血时间分别为(177.0±9.5)s，(167.5±25.1)s，(157 .5±30.2)s，与生理盐水对照组比较均有显著性差异(P<0.01),表明LALP能明显延长 凝血时间。
2.3 LALP对大鼠静脉血栓的影响：LALP组血栓形成率为20%，明显低于生理盐水对照组100 %形成率，而且LALP组血栓干重比生理盐水对照组明显减轻(P<0.01)，说明LALP对大 鼠静脉血栓形成有明显的抑制作用，结果见表2。
表2 LALP对大鼠静脉血栓的影响 组 别
动物数
剂量
(mg/kg)
, 百拇医药
血栓形成数
(个)
血栓形成率
(%)
血栓 质量
(±s,m/mg)
生理盐水
5
等容积
5
100
4.38±0.79
, 百拇医药
LALP
5
2.0
1
20
0.78±1.74**
与生理盐水对照组比较：**P<0.01
2.4 LALP对大鼠血小板聚集功能的影响：生理盐水对照组的血小板最大聚集率为(59.6± 9.7)%,而LALP组的血小板最大聚集率为(59.8±7.1)%，两者比较无显著性差异(P>0 .05)，表明LALP对大鼠血小板聚集功能无明显的抑制作用。
2.5 LALP的溶血性试验：6支不同浓度LALP测定管的吸光度与生理盐水对照管吸光度比较 无明显差异，表明LALP无溶血作用，结果见表3。
, http://www.100md.com
表3 LALP的溶血性试验 试 液
1
2
3
4
5
6
7
8
LALP(0.162g/L)
0.05
0.1
0.2
, 百拇医药
0.3
0.4
0.5
-
-
生理盐水(V/ml)
2.45
2.4
2.3
2.2
2.1
2.0
2.5
, 百拇医药
蒸馏水2.5
2%红细胞悬液(V/ml)
2.50
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
结果(OD)
0.19
0.20
, 百拇医药
0.19
0.18
0.20
0.18
0.19
1.2
3 讨 论
LALP是中国短尾蝮蛇毒中分离纯化的一种相对分子质量为25 500 u,等电点为5.6的蛋白质。经体外实验证实[1]，其能显著性延长APTT和蝰蛇蛇毒时间(DRVVT), 高浓度情况下，亦能轻微延长PT，并且延长的DRVVT能被高浓度磷脂所纠正。表明其体外抗 凝作用主要是干扰血凝的磷脂依赖试验而不是直接作用于任何特异性的凝固蛋白，此作用与 LA十分相似，是一种类狼疮抗凝蛋白。我们的体内抗凝研究结果表明，LALP不能延长PT和TT ，对血小板聚集亦无抑制作用，表明其对外源性凝血系统和纤溶系统无明显影响。但LALP能 显著延长APTT和凝血时间，说明LALP抗凝作用主要是干扰内源性凝血系统，可能与其干扰磷 脂的作用有关。
, 百拇医药
静脉血栓形成的主要原因为凝血机制的活化、静脉血流的淤滞和静脉内膜的损伤。我们 的实验为结扎大鼠腹腔静脉，使腹腔静脉血流淤滞，缺氧使血管内皮受损，胶原纤维暴露， 激活因子Ⅻ启动内源性凝血系统，加上血流淤滞使结扎下段血管内活化的凝血因子浓度大大 提高，这些条件都有利于血栓的形成[5]。对照组在结扎腹腔静脉2 h后，血栓形成 率为100%，血栓干重为(4.38±0.79)mg,而LALP的血栓形成率20%，血栓干重为(0.78±1 .74)mg，两者相比较有显著性差异，证明LALP有预防静脉血栓形成的效果，其作用与其抗 凝效应有关。
蛇毒中磷脂酶A2 (Phospholipase A2,PLA2)是蛇毒中研究领域里十分注目的一种 酶,PLA2特异的化学结构和复杂的生理功能是研究脂代谢生物膜磷脂结构和酶系脂蛋白间 相互作用，以及有关凝血和溶血机制等方面的重要工具酶。蝮蛇蛇毒中可纯化出3种PLA2 (中性、酸性、碱性)，它们的相对分子质量相近约为14 000 u，其中中性PLA2是 突触前神经毒素，酸性PLA2是血小板聚集抑制剂，碱性PLA2有极强的溶血活性[6 ]。而蝮蛇蛇毒中纯化的LALP相对分子质量为25 000
, 百拇医药
u，实验证实其无明显的溶 血活性和血小板聚集抑制作用，说明LALP是一种有别于PLA2，通过对磷脂的作用而干扰内 源性凝血系统的抗凝物质，至于其如何作用于磷脂，有待于进一步的研究。
广西自然(青年、回国)科学基金资助项目
参 考 文 献
1，Zhao Yanli,Xiao Weiwu,Tie Fuyu,et al.Purification and characterizatio n of Lupus anticoagulants like protein from Agkistrodon Halys brevicaudus venom .Throbosis and Haemostasis,1996,76(6),993-997.
2，张均田主编.现代药理实验方法.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合 出版社,1997.1 171-1 212.
, 百拇医药
3，张均田主编.现代药理实验方法.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合 出版社，1997.1 151-1 153.
4，陈 奇主编.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1993.168-169.
5，Reyers L.Failure of different doses to modify experimental thrombosis in rats.Throm Res.1980,18:669.
6，武祥福，陈远聪.浙江蝮蛇毒中三种磷脂酶的比较.生物化学与生物物理学报， 1984,16:664.
收稿日期：2000-01-08, 百拇医药
单位：杨斌 黎肇炎 陈美芳(广西医科大学药理学教研室 南宁 530021)；班建东 黄君度 林发全(广西医科大学蛇毒研究所)
关键词：蝮蛇毒；类狼疮抗凝蛋白；抗凝
广西医科大学学报000202
摘要 目的：从中国产蝮蛇蛇毒中分离纯化电泳纯度的类狼疮抗凝 蛋白，研究其对动物体内的抗凝作用及机制。方法：测定蝮蛇毒中类狼疮抗凝蛋白对新西兰白兔的活化部分凝血 活酶时间、凝血酶原时间和凝血酶时间的影响；对小鼠凝血时间的影响；对大鼠静脉血栓和 血小板聚集功能的影响，以及类狼疮抗凝蛋白的溶血性试验。结果：类狼疮抗凝蛋白能显著地延长活化部分凝血活酶时间和凝血 时间，明显地抑制静脉血栓的形成，无溶血作用。结论：类狼疮抗凝蛋白具有体内抗凝血作用，作用机制可能与其干 扰磷脂有关。从中国产蝮蛇蛇毒中分离纯化电泳纯度的类狼疮抗凝 蛋白，研究其对动物体内的抗凝作用及机制。方法：测定蝮蛇毒中类狼疮抗凝蛋白对新西兰白兔的活化部分凝血 活酶时间、凝血酶原时间和凝血酶时间的影响；对小鼠凝血时间的影响；对大鼠静脉血栓和 血小板聚集功能的影响，以及类狼疮抗凝蛋白的溶血性试验。结果：类狼疮抗凝蛋白能显著地延长活化部分凝血活酶时间和凝血 时间，明显地抑制静脉血栓的形成，无溶血作用。结论：类狼疮抗凝蛋白具有体内抗凝血作用，作用机制可能与其干 扰磷脂有关。
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中国图书资料分类法分类号 R963
THE ANTICOAGULANT EFFECT OF LUPUS ANTICOAGULANT-LIKE PROTEIN FROM AGKI STRODON HALYS BREVICAUDUS VENOM IN VIVO
Yang Bin，Li Zhaoyan，Chen Meifang
(Department of Pharmacology,Gu angxi Medical University,Nanning,530021 China)
Abstract Objective:To study anticoagulant effect and mechanis m of Lupus anticoagulant-like protein(LALP),an electrophoresis purity LALP puri f ied by ion exchange and gel filtraration chromatography from agkistrodon halys b revicaudus.Methods:To measure prothrombin time (PT),activated partial thr omboplastin time (APTT),thrombin time (TT);clotting time (CT);venous thrombosis and platelet aggregation in the presence of LALP in rabbit;mice;rat,respectively .Results:It was showed that APTT and CT in the presence of LALP were markedly prolonged,the formation of venous thrombosis was obviously preven ted without any hemolyzation.Conclusion:LALP has anticoagulant effect in vivo,and the effe ctive mechanism may interfere with phosphatide.
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Key words agkistrodun venom;lupus anticoagulant like protein; anticoagulant
1996年Li等[1]首次发现在中国短尾蝮蛇蛇毒中存在着一种类似系统性红斑狼 疮患者血浆中出现的狼疮性抗凝物(Lupus Anticoagulant，LA)，它的分子量、等电点、作 用性质及体外对血液凝固的影响与LA十分相似，是一种类狼疮抗凝蛋白(Lupus Anticoagula nts Like Protein,LALP)。至于LALP体内是否亦具有抗凝作用，目前国内外尚未见有报道。 因此，本研究的目的旨在通过研究蛇毒中LALP在体内的抗凝作用及机制，以期研制新型的抗 磷酶抗凝生物制剂，将在防治血栓性疾病中具有重要基础理论和实际意义。
1 材料与方法
1.1材料
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1.1.1 动物：昆明种小鼠，体质量18～22 g；Wistar大鼠，体质量200～300 g；新西兰白 兔，体质量2.0～2.5 kg；动物雌雄兼用，均由广西医科大学实验动物中心提供。
1.1.2 蝮蛇毒类狼疮抗凝蛋白(LALP)：由广西医科大学蛇毒研究所从中国短尾蝮蛇毒中 分离纯化，批号：980921。
1.1.3 试剂：Automated APTT和Thromboplastin Reagent 均为Organon Teknika Corpor ation产品。
1.1.4 仪器：PAM-2型PPP自动平衡血小板聚集仪，江苏省丹阳无线电厂生产。
1.2 方法
1.2.1 LALP对活化部分凝血酶原时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)及凝血酶时间(TT) 的影响：新西兰白兔20只，随机分为4组：生理盐水对照组，LALP高、中、低剂量组。各兔 于耳缘静脉给药前、给药后30 min、1 h、2 h、3 h，分别从耳动脉取血4.5 ml，用3.8% 枸橼酸钠0.5 ml抗凝，2 500 r/min离心10 min，分离贫血小板血 浆，按方法[2]测定APTT、PT、TT。
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1.2.2 LALP对凝血时间的影响：取小鼠40只，随机分为4组：生理盐水对照组，LALP高剂 量(4 mg/kg)、中剂量(2 mg/kg)、低剂量(1 mg/kg)组。各鼠尾静脉注射等体积的药液(0.2 ml/10 g)。1 h后用玻璃毛细管插入小鼠眼内眦球后静脉丛，轻轻转动再缩回，自血液流入 管内开始计时，血液注满后取出毛细管平放于桌面上，每隔30 s折断两端毛细管约0.5 cm ，观察折断处血凝丝出现为止，所历时间即为血凝时间，毛细管两端数据的平均值即为该鼠 的血凝时间，如大于180 s，则以180 s来计算。
1.2.3 LALP对大鼠静脉血栓形成的影响：取大鼠10只，随机分为2组：生理盐水对照组、 LALP组。两组均按0.2 ml/100 g尾静脉注射，分别给予生理盐水和LALP。给药后，立即腹 腔麻醉大鼠，剖开腹腔，在左肾静脉下方结扎腹腔静脉，缝合腹腔。2 h后，重新打开腹腔 ，在结扎下方2 cm处，用止血钳夹住静脉，纵行切开此段静脉，用滤纸吸干血液，记录血栓 形成数，并取出血栓，放入真空干燥器内24 h，取出准确称重，即为血栓干重。
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1.2.4 LALP对大鼠血小板聚集功能的影响：取大鼠10只，随机分为2组：生理盐水对照组 和LALP组。于尾静脉给药1 h，腹腔麻醉大鼠，腹主动脉取血，3.8%枸橼酸钠抗凝，离心分 别制得血小板富血浆和贫血浆，然后用血小板聚集测定仪，测定血小板的最大聚集率[ 3]。
1.2.5 LALP的溶血性试验：取一只大鼠，麻醉后，打开腹腔，腹主动脉取血15 ml,制备2 %的红细胞悬液。然后取8只试管，按表4加入各种溶液，各管轻轻摇匀，在37℃水浴中保温1 h，2 000 r/min离心5 min，取上清液用721分光光度计测定在540 nm波长处的各 管吸光度(OD值)[4]。
2 结 果
2.1LALP对APTT、PT和TT的影响：给药前PT和TT分别与给药后30 min、1h、2h、3h的PT和TT比较明显变化，表明LALP对外源性凝血系统和纤溶系统无明显影响；LALP高、中、 低剂量组均能显性延长APTT，而且在给药后30 min即明显延长，1h达高峰，3h后逐渐恢 复。结果见表1。
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表1 LALP对APTT的影响(
±s,t/s) 组 别动物数
(只)
剂量
(mg/kg)
药前
药后
30 min
1 h
2 h
3 h
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生理盐水
5
等容积
52.2±5.2
50.8±4.4
54.0± 3.3
52.4±3.4
53.2±2.8
LALP
5
2.0
52.8±2.7
84.0±11.9**
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116.0±27. 7**
107.0±21.7**
68.0±7.6**
LALP
5
1.0
52.4±6.0
80.4±18.5**
111.4±19. 7**
93.6±21.6**
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71.6±10.0**
LALP
5
0.5
53.0±3.4
71.6±12.9**
104.4±9.4 **
91.2±17.2**
68.0±7.6**
与生理盐水对照组比较：**P<0.01
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2.2 LALP对小鼠凝血时间的影响：生理盐水对照组的凝血时间为(79.5±30.9)s。LALP 高、中、低剂量组给药后1 h的凝血时间分别为(177.0±9.5)s，(167.5±25.1)s，(157 .5±30.2)s，与生理盐水对照组比较均有显著性差异(P<0.01),表明LALP能明显延长 凝血时间。
2.3 LALP对大鼠静脉血栓的影响：LALP组血栓形成率为20%，明显低于生理盐水对照组100 %形成率，而且LALP组血栓干重比生理盐水对照组明显减轻(P<0.01)，说明LALP对大 鼠静脉血栓形成有明显的抑制作用，结果见表2。
表2 LALP对大鼠静脉血栓的影响 组 别
动物数
剂量
(mg/kg)
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血栓形成数
(个)
血栓形成率
(%)
血栓 质量
(
±s,m/mg)生理盐水
5
等容积
5
100
4.38±0.79
, 百拇医药
LALP
5
2.0
1
20
0.78±1.74**
与生理盐水对照组比较：**P<0.01
2.4 LALP对大鼠血小板聚集功能的影响：生理盐水对照组的血小板最大聚集率为(59.6± 9.7)%,而LALP组的血小板最大聚集率为(59.8±7.1)%，两者比较无显著性差异(P>0 .05)，表明LALP对大鼠血小板聚集功能无明显的抑制作用。
2.5 LALP的溶血性试验：6支不同浓度LALP测定管的吸光度与生理盐水对照管吸光度比较 无明显差异，表明LALP无溶血作用，结果见表3。
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表3 LALP的溶血性试验 试 液
1
2
3
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5
6
7
8
LALP(0.162g/L)
0.05
0.1
0.2
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0.3
0.4
0.5
-
-
生理盐水(V/ml)
2.45
2.4
2.3
2.2
2.1
2.0
2.5
, 百拇医药
蒸馏水2.5
2%红细胞悬液(V/ml)
2.50
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
结果(OD)
0.19
0.20
, 百拇医药
0.19
0.18
0.20
0.18
0.19
1.2
3 讨 论
LALP是中国短尾蝮蛇毒中分离纯化的一种相对分子质量为25 500 u,等电点为5.6的蛋白质。经体外实验证实[1]，其能显著性延长APTT和蝰蛇蛇毒时间(DRVVT), 高浓度情况下，亦能轻微延长PT，并且延长的DRVVT能被高浓度磷脂所纠正。表明其体外抗 凝作用主要是干扰血凝的磷脂依赖试验而不是直接作用于任何特异性的凝固蛋白，此作用与 LA十分相似，是一种类狼疮抗凝蛋白。我们的体内抗凝研究结果表明，LALP不能延长PT和TT ，对血小板聚集亦无抑制作用，表明其对外源性凝血系统和纤溶系统无明显影响。但LALP能 显著延长APTT和凝血时间，说明LALP抗凝作用主要是干扰内源性凝血系统，可能与其干扰磷 脂的作用有关。
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静脉血栓形成的主要原因为凝血机制的活化、静脉血流的淤滞和静脉内膜的损伤。我们 的实验为结扎大鼠腹腔静脉，使腹腔静脉血流淤滞，缺氧使血管内皮受损，胶原纤维暴露， 激活因子Ⅻ启动内源性凝血系统，加上血流淤滞使结扎下段血管内活化的凝血因子浓度大大 提高，这些条件都有利于血栓的形成[5]。对照组在结扎腹腔静脉2 h后，血栓形成 率为100%，血栓干重为(4.38±0.79)mg,而LALP的血栓形成率20%，血栓干重为(0.78±1 .74)mg，两者相比较有显著性差异，证明LALP有预防静脉血栓形成的效果，其作用与其抗 凝效应有关。
蛇毒中磷脂酶A2 (Phospholipase A2,PLA2)是蛇毒中研究领域里十分注目的一种 酶,PLA2特异的化学结构和复杂的生理功能是研究脂代谢生物膜磷脂结构和酶系脂蛋白间 相互作用，以及有关凝血和溶血机制等方面的重要工具酶。蝮蛇蛇毒中可纯化出3种PLA2 (中性、酸性、碱性)，它们的相对分子质量相近约为14 000 u，其中中性PLA2是 突触前神经毒素，酸性PLA2是血小板聚集抑制剂，碱性PLA2有极强的溶血活性[6 ]。而蝮蛇蛇毒中纯化的LALP相对分子质量为25 000
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u，实验证实其无明显的溶 血活性和血小板聚集抑制作用，说明LALP是一种有别于PLA2，通过对磷脂的作用而干扰内 源性凝血系统的抗凝物质，至于其如何作用于磷脂，有待于进一步的研究。
广西自然(青年、回国)科学基金资助项目
参 考 文 献
1，Zhao Yanli,Xiao Weiwu,Tie Fuyu,et al.Purification and characterizatio n of Lupus anticoagulants like protein from Agkistrodon Halys brevicaudus venom .Throbosis and Haemostasis,1996,76(6),993-997.
2，张均田主编.现代药理实验方法.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合 出版社,1997.1 171-1 212.
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3，张均田主编.现代药理实验方法.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合 出版社，1997.1 151-1 153.
4，陈 奇主编.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1993.168-169.
5，Reyers L.Failure of different doses to modify experimental thrombosis in rats.Throm Res.1980,18:669.
6，武祥福，陈远聪.浙江蝮蛇毒中三种磷脂酶的比较.生物化学与生物物理学报， 1984,16:664.
收稿日期：2000-01-08, 百拇医药