HPLC测定复方长效氨茶碱片中茶碱和苯巴比妥含量
作者：张怡
单位：张怡(上海延安制药厂 上海 200050)
关键词：
药物分析杂志000224 复方长效氨茶碱片是由茶碱 、氨茶碱 、苯巴比妥为主药，滑石粉、虫胶等为赋形剂制成的片剂，临床上主要用于支气管哮喘等疾病的治疗，地方标准中对本品中含有的茶碱采用硫氰酸铵滴定法定量，对苯巴比妥采用分光光度法定量，分析时间长，操作繁锁。本文采用HPLC法，同时测定2个成分的含量，方法专属性强，结果准确可靠，并且其它成分不干扰测定。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(Waters 510泵、UV 486检测器、810色谱工作台)；DU-7紫外分光光度仪(美国贝克曼);茶碱对照品、苯巴比妥对照品由中国药品生物制品检定所出品，3批样品由上海延安制药厂出品，甲醇(HPLC级)由上海陆都实业有限公司出品，水为超纯水。
, 百拇医药
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:μBondpack C18柱(10 μm，3.9 mm×300 mm)；流动相：甲醇-水(25∶75)；流速：0.8 mL。min-1；检测器：UV 220 nm，室温。在上述色谱条件下，茶碱的保留时间为3.9 min，苯巴比妥的保留时间为7.2 min，2个成分得到有效的分离(图1)，分离度>1.5。
图1 复方长效氨茶碱色谱图
1.茶碱(3.9 min) 2.苯巴比妥(7.2 min)
2.2 检测波长的选择 取茶碱、苯巴比妥对照品适量，分别用25%甲醇配制成25 μg。mL-1的溶液，在200～400 nm波长范围内扫描，结果茶碱在271 nm和211 nm处有最大吸收，苯巴比妥在209 nm有最大吸收，但在波长220 nm处，苯巴比妥的吸收值高于茶碱，考虑到处方中苯巴比妥的量远远小于茶碱，因此选择220 nm为测定波长。
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2.3 流动相的选择 本实验比较了多种流动相系统，如甲醇-水、乙腈-水、甲醇-醋酸铵溶液，最后选择了甲醇-水(25∶75)为流动相，2个成分峰形好、出峰时间合适、分离度均较理想。
2.4 线性关系考察 精密称取茶碱对照品、苯巴比妥对照品适量，用25%甲醇配制成5种不同浓度的对照品溶液，浓度分别为750 μg。mL-1和45 μg。mL-1，1 mg。mL-1和60 μg。mL-1，1.25 mg。mL-1和75 μg。mL-1，1.5 mg。mL-1和90 μg。mL-1，1.75 mg。mL-1和105 μg。mL-1，各进样15 μL，按所选择的色谱条件测定，分别以各成分的峰面积(A)对进样量(W)进行回归分析，得茶碱、苯巴比妥回归方程分别为：
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A=2.170×106W+1.49×106 r=0.999 7
A=2.200×107W-1.19×105 r=0.998 8
线性范围分别为11～26 μg和0.6～1.5 μg。结果表明，在所测定浓度的60%～140%范围内，2个成分均呈良好的线性关系。
2.5 回收率实验 按处方配比，配制空白辅料5份，分别加入对照品茶碱250 mg、苯巴比妥15 mg，混匀。按“2.7”项方法测定，结果表明本法回收率良好。茶碱和苯巴比妥平均回收率分别为101.2%和100.8%，RSD分别为0.60%和0.70%。
2.6 精密度实验 取970302批复方长效氨茶碱片样品溶液连续进样9次，每次15 μL，按所选的色谱条件测定，结果2个成分的RSD均不超过2%。
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2.7 样品测定 取片剂20片，称重，研成粉末，精密称定(约0.45 g，相当于茶碱0.25 g)，加甲醇50 mL，超声10 min，溶解后加水至200 mL，过滤，精密吸取续滤液5 mL，用25%甲醇稀释至50 mL，摇匀，作为样品溶液。另分别精密称取茶碱对照品250 mg、 苯巴比妥对照品15 mg ，置于200 mL量瓶中，与样品溶液同法操作，得对照品溶液，照上述色谱条件测定，进样量为15 μL，按外标法以峰面积计算含量，结果见表1。
表1 样品测定结果(标示量 %) 批 号
茶碱
苯巴比妥
970302
96.86
93.24
, 百拇医药
970303
98.49
99.11
970304
97.90
98.79
2.8 稳定性实验和干扰性实验 取样品溶液于1，2，4，6 h照上述色谱条件测定，分别进样15 μL，结果6 h内峰面积几乎无变化，说明稳定性良好。取空白辅料按“2.7”项方法测定，结果在2个组分的出峰处未出现色谱峰，说明辅料不干扰测定。
3 小结
复方长效氨茶碱片为棕-白双色片剂。苯巴比妥在白色层中，按地方标准对其测定时，须小心刮取白色层以排除干扰，然后用分光光度法定量，因此难以得到准确的片重，影响了结果的准确性。按地方标准对茶碱定量时，反应温度对测定结果有较大的影响。本文采用HPLC法同时测定2个成分的含量，避免了双色片的剥离等不利因素，方法简便可靠，完全可以代替前者用于复方长效氨茶碱片生产过程中的质量控制。
(本文于1999年9月7日收到), http://www.100md.com
单位：张怡(上海延安制药厂 上海 200050)
关键词：
药物分析杂志000224 复方长效氨茶碱片是由茶碱 、氨茶碱 、苯巴比妥为主药，滑石粉、虫胶等为赋形剂制成的片剂，临床上主要用于支气管哮喘等疾病的治疗，地方标准中对本品中含有的茶碱采用硫氰酸铵滴定法定量，对苯巴比妥采用分光光度法定量，分析时间长，操作繁锁。本文采用HPLC法，同时测定2个成分的含量，方法专属性强，结果准确可靠，并且其它成分不干扰测定。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(Waters 510泵、UV 486检测器、810色谱工作台)；DU-7紫外分光光度仪(美国贝克曼);茶碱对照品、苯巴比妥对照品由中国药品生物制品检定所出品，3批样品由上海延安制药厂出品，甲醇(HPLC级)由上海陆都实业有限公司出品，水为超纯水。
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2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:μBondpack C18柱(10 μm，3.9 mm×300 mm)；流动相：甲醇-水(25∶75)；流速：0.8 mL。min-1；检测器：UV 220 nm，室温。在上述色谱条件下，茶碱的保留时间为3.9 min，苯巴比妥的保留时间为7.2 min，2个成分得到有效的分离(图1)，分离度>1.5。
图1 复方长效氨茶碱色谱图
1.茶碱(3.9 min) 2.苯巴比妥(7.2 min)
2.2 检测波长的选择 取茶碱、苯巴比妥对照品适量，分别用25%甲醇配制成25 μg。mL-1的溶液，在200～400 nm波长范围内扫描，结果茶碱在271 nm和211 nm处有最大吸收，苯巴比妥在209 nm有最大吸收，但在波长220 nm处，苯巴比妥的吸收值高于茶碱，考虑到处方中苯巴比妥的量远远小于茶碱，因此选择220 nm为测定波长。
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2.3 流动相的选择 本实验比较了多种流动相系统，如甲醇-水、乙腈-水、甲醇-醋酸铵溶液，最后选择了甲醇-水(25∶75)为流动相，2个成分峰形好、出峰时间合适、分离度均较理想。
2.4 线性关系考察 精密称取茶碱对照品、苯巴比妥对照品适量，用25%甲醇配制成5种不同浓度的对照品溶液，浓度分别为750 μg。mL-1和45 μg。mL-1，1 mg。mL-1和60 μg。mL-1，1.25 mg。mL-1和75 μg。mL-1，1.5 mg。mL-1和90 μg。mL-1，1.75 mg。mL-1和105 μg。mL-1，各进样15 μL，按所选择的色谱条件测定，分别以各成分的峰面积(A)对进样量(W)进行回归分析，得茶碱、苯巴比妥回归方程分别为：
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A=2.170×106W+1.49×106 r=0.999 7
A=2.200×107W-1.19×105 r=0.998 8
线性范围分别为11～26 μg和0.6～1.5 μg。结果表明，在所测定浓度的60%～140%范围内，2个成分均呈良好的线性关系。
2.5 回收率实验 按处方配比，配制空白辅料5份，分别加入对照品茶碱250 mg、苯巴比妥15 mg，混匀。按“2.7”项方法测定，结果表明本法回收率良好。茶碱和苯巴比妥平均回收率分别为101.2%和100.8%，RSD分别为0.60%和0.70%。
2.6 精密度实验 取970302批复方长效氨茶碱片样品溶液连续进样9次，每次15 μL，按所选的色谱条件测定，结果2个成分的RSD均不超过2%。
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2.7 样品测定 取片剂20片，称重，研成粉末，精密称定(约0.45 g，相当于茶碱0.25 g)，加甲醇50 mL，超声10 min，溶解后加水至200 mL，过滤，精密吸取续滤液5 mL，用25%甲醇稀释至50 mL，摇匀，作为样品溶液。另分别精密称取茶碱对照品250 mg、 苯巴比妥对照品15 mg ，置于200 mL量瓶中，与样品溶液同法操作，得对照品溶液，照上述色谱条件测定，进样量为15 μL，按外标法以峰面积计算含量，结果见表1。
表1 样品测定结果(标示量 %) 批 号
茶碱
苯巴比妥
970302
96.86
93.24
, 百拇医药
970303
98.49
99.11
970304
97.90
98.79
2.8 稳定性实验和干扰性实验 取样品溶液于1，2，4，6 h照上述色谱条件测定，分别进样15 μL，结果6 h内峰面积几乎无变化，说明稳定性良好。取空白辅料按“2.7”项方法测定，结果在2个组分的出峰处未出现色谱峰，说明辅料不干扰测定。
3 小结
复方长效氨茶碱片为棕-白双色片剂。苯巴比妥在白色层中，按地方标准对其测定时，须小心刮取白色层以排除干扰，然后用分光光度法定量，因此难以得到准确的片重，影响了结果的准确性。按地方标准对茶碱定量时，反应温度对测定结果有较大的影响。本文采用HPLC法同时测定2个成分的含量，避免了双色片的剥离等不利因素，方法简便可靠，完全可以代替前者用于复方长效氨茶碱片生产过程中的质量控制。
(本文于1999年9月7日收到), http://www.100md.com