复方磺胺甲唑片的胶束薄层色谱分析
作者：米慕真 周密 宋红斌
单位：米慕真 周密(沈阳药科大学基础部，沈阳 110015)；宋红斌(本校药学系1995级学生)
关键词：正相胶束薄层色谱；复方磺胺甲唑片；甲氧苄氨嘧啶；磺胺甲唑
沈阳药科大学学报000215 摘 要：以十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液为展开剂、聚酰胺薄膜为固定相，对复方磺胺甲
唑片(复方新诺明)中两组分进行定量分析.磺胺甲基异唑(SMZ)和甲氧苄氨嘧啶(TMP)分别在4.0～12.0 mmo/L和3.5～10.5 mmol/L范围内吸收峰面积和浓度呈良好的线性关系.相关系数分别为0.999 5和0.999 8，回收率分别为101.4%和99.5%，RSD(%)分别为0.58和1.60.
分类号：R914.1
, 百拇医药
Determination of the Compound Sulfamethoxazole Tablets Using Micellar Thin Layer Chromatography
Mi Muzhen Zhou Mi Song Hongbin
(Department of Basic Courses,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract：Two compositions of the Compound Sulfamethoxazole Tablets can be separated and quantified on polyamide TLC sheets,using aqueous micellar solution of sodium dodecylsulfate as the mobile phase.The linear relationships between the quantity of SMZ or TMP and their peek area are good.The correlation coefficients are 0.999 5 and 0.999 8 respectively.The average recoveries are 101.4% and 99.5%.RSD are 0.58% and 1.60%(n=3).It is a practical method for determining the Compound Sulfamethoxazole Tablets.
, 百拇医药
Key words：micellar thin layer chromatography;the Compound Sulfamethoxazole Tablets;SMZ;TMP▲
复方磺胺甲唑(复方新诺明)，是一种常用的广谱抗菌药.用于多数革兰氏阳性及革兰氏阴性菌引起的感染.其主要成分为磺胺甲唑(SMZ)和甲氧苄氨嘧啶(TMP).其中TMP为增效剂.正相胶束薄层色谱是以表面活性剂水溶液为展开剂的薄层色谱.自1979年Armstrong等人开创胶束色谱以来〔1〕，由于其特殊的选择性、无毒、价廉等优点而获得较大发展.但胶束薄层色谱用于药物分析尤其是定量分析方面的文章尚不多见〔2〕.作者以正相胶束薄层色谱法，对复方磺胺甲唑片中两组分分别定量，取得满意结果.
1 仪器与试药
1.1 仪器
, http://www.100md.com
层析缸(4 cm×4 cm×8 cm)和(12 cm×4 cm×8 cm)、定量毛细管0.5～2.0 μL、吹风机、岛津CS-930薄层扫描仪、恒温水浴、紫外灯.
1.2 试药
十二烷基硫酸钠(SDS)、无水乙醇、乙酸乙酯、冰醋酸等皆为分析纯；聚酰胺薄膜(浙江黄岩四青生化材料厂)；磺胺甲基异唑(SMZ)对照品和甲氧苄氨嘧啶(TMP)对照品(东北制药六厂)；复方新诺明片(市售).
2 实验方法与结果
2.1 溶液的配制
用以pH=5.0的去离子水配制SDS系列浓度水溶液(mol/L)0.01、0.03、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5.SMZ和TMP的对照品分别配成4.0 mol/L和3.5 mol/L的乙醇溶液.取10片复方磺胺甲唑，求得平均片重，研磨成粉状，准确称取约1/4片重，置50 mL容量瓶中，用无水乙醇溶解定容.过滤，取续滤液作为样品溶液.
, 百拇医药
2.2 胶束浓度的选择
将对照品溶液点于3 cm×7 cm的聚酰胺薄膜上，分别以SDS系列浓度水溶液为展开剂，在20℃恒温水浴中上行展开.展距约5 cm，取出用吹风机吹干，在254 nm、365 nm UV灯下检识定位.分别以第一溶剂前沿和第二溶剂前沿(俗称假前沿，即胶束层与水层的分界线)为准计算Rf值(Rf1和Rf2)，结果见表1.
Tab.1 The results of SMZ and TMP developed on aqueous solution of SDS Conc.of SDS/mol.L-1
0.01
0.03
0.05
, 百拇医药
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
Solvent front 1/mm
49
50
51
50
51
51
49
, 百拇医药
51
Solvent front 2/mm
7
21
31
39
41
39
38
31
The position of SMZ/mm
5
10
, http://www.100md.com
1
17
18
16
17
16
Rf1 of SMZ
0.10
0.20
0.22
0.34
0.35
0.31
, 百拇医药
0.35
0.31
Rf2 of SMZ
0.71
0.48
0.36
0.44
0.44
0.41
0.45
0.52
The position of TMP/mm
, 百拇医药
13
25
40
45
46
45
42
44
Rf1 of TMP
0.27
0.50
0.78
0.90
, http://www.100md.com
0.90
0.88
0.86
0.86
Rf2 of TMP
1.86
1.19
1.29
1.15
1.12
1.15
1.11
1.42
, http://www.100md.com
Time of develop/min
14
16
17
20
30
31
36
40
依据表1，综合考虑组分的Rf值、斑点展开效果及展开时间三个方面，选择SDS浓度在0.1 mol/L较宜.
2.3 有机改性剂的选择
单独使用SDS水溶液作展开剂时，SMZ、TMP斑点有拖尾现象.在展开剂中加入有机改性剂会改善展开效果.经试验比较，最后以无水乙醇、冰醋酸和水体积比为5∶0.5∶20的展开效果最佳.斑点清晰，小而圆.
, http://www.100md.com
2.4 定性依据
展出的薄膜立即用吹风机吹干，在254 nm、365 nm UV灯下观察对照品和样品荧光斑点的颜色、形状、Rf值.并对其进行薄层扫描.扫描参数:SX=1,λS=277 nm,λR=350 nm(SMZ)和λS=287 nm，λR=350 nm(TMP)，见图1.
Fig.1 Thin-layer chromatography-scanning of the sample and the standard substances
a—SMZ and sample;b—TMP and sample
在样品和对照品斑点上分别绘制UV吸收光谱.结果UV吸收曲线完全一致.
, 百拇医药
2.5 样品定量测定
2.5.1 标准曲线的绘制
在薄膜片上点SMZ和TMP对照品溶液各1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 μL，测定吸收峰积分面积并进行回归分析.
色谱峰面积A和对照品浓度C的关系式为：
SMZ:A=6.436×10-5C-0.819 3；
TMP：A=1.025×10-4C-1.290.
相关系数分别为0.999 5和0.999 8.显示SMZ和TMP的对照品浓度分别在4.0～12.0 mmol/L和3.5～10.5 mmol/L范围内与其吸收峰面积呈良好的线性关系.
, 百拇医药
2.5.2 稳定性和重复性考察
定时重复扫描展开后的同一斑点，考察斑点稳定性.
对同一样品斑点重复扫描5次，考察重复性.
2.5.3 精密度测定
在同一薄膜上重复点5个同浓度的样点，展开后扫描，考察精密度.
2.5.4 回收率实验
按《中国药典》1995年版二部〔3〕 ，精确称取SMZ和TMP及附加剂，制得浓度分别为3.2 mmol/L和0.6 mmol/L、4.0 mmol/L和0.8 mmol/L、4.8 mmol/L和1.0 mmol/L的溶液3批，然后按模拟样方法测定.
Tab.2 Relations between amount of the sample and the area of the peak Amount of the sample/μL
, 百拇医药
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
Area of SMZ peak
28 034
36 172
43 832
52 099
58 876
Area of TMP peak
, 百拇医药
22 256
27 135
32 312
36 983
41 697
Tab.3 Stability of spots(area of peak) Samples
Passed time/h
RSD/%
0
1
4
8
, 百拇医药
24
SMZ
42 854
42 639
42 204
42 026
42 383
0.78
TMP
22 604
20 863
20 507
/
, http://www.100md.com
/
5.20
Tab.4 Repeatability(area of peak) Samples
n
RSD/%
1
2
3
4
5
SMZ
29 758
29 754
, http://www.100md.com
29 788
29 606
29 626
0.28
TMP
14 649
14 739
14 683
14 763
14 588
0.47
Tab.5 Precision(area of peak) Samples
, 百拇医药
n
RSD/%
1
2
3
4
5
SMZ
47 319
48 422
50 798
52 963
50 976
, 百拇医药
4.5
TMP
24 437
26 023
24 548
25 131
25 581
2.6
Tab.6 Recovery/% Samples
n
Mean
RSD/%
, 百拇医药
1
2
3
SMZ
101.6
100.7
101.8
101.4
0.58
TMP
98.2
101.3
99.1
, http://www.100md.com
99.5
1.60
2.5.5 样品测定
取SMZ对照品溶液1.5、2.5 μL、TMP对照品溶液1.0、1.5 μL，取样品液(测SMZ)1.0 μL、(测TMP)2.0 μL，点在同一聚酰胺薄膜上展开，扫描后用外标两点法分别计算SMZ和TMP的含量.市售三个厂家生产的复方新诺明片中SMZ和TMP的含量(g/片)测定结果见表7.Tab.7 The content of each component in tablets(n=3) Sample
SMZ
RSD/%
TMP
RSD/%
, 百拇医药
A
0.417
2.5
0.082
3.4
B
0.396
2.8
0.079
4.7
C
0.413
1.3
, 百拇医药
0.083
4.6
3 讨论 a.在正相胶束色谱中，溶质的分配是在固定相、水相、胶束相三者之间进行.其分配机理较普通色谱复杂，目前认为静电作用、亲疏水性和空间效应是其主要的分配机理.亲水性强的组分多分配于水层中，亲水性相对较弱的组分多分配于胶束层中.在本实验条件下TMP分配在两前沿之间的水层，SMZ则分配在胶束层，表现的极性差异与文献值一致.
b.在本实验条件下，TMP对照品出现3个荧光斑点，样品中的TMP也同样有3个荧光斑点.前二个斑点在胶束层，斑点较小较暗，可能为TMP的其它形体.第3点在水相，斑点清晰，故以此点作定量用.这在其它薄层文献报道中都未曾提及，说明TMP在SDS水溶液中可能形成三种形体，胶束薄层色谱又具有独特的分离能力，能将它们明显分离.
c.SDS水溶液展开过程中有溶剂脱混现象(SDBS、CTMAB、吐温-80等都有此现象)〔4〕，部分证明了胶束形成理论中的“假相模型”的合理性，而第二溶剂前沿往往成为亲疏水性物质分离的界线.它的位置与表面活性剂的浓度有关、与加入改性剂有关、与pH、温度等因素也有关.组分斑点分别以第一、第二溶剂前沿计算的Rf值(Rf1、Rf2)的变化规律常不相同(见表1).作者认为Rf2值更能反映物质的分配机理，应予以观测.
, 百拇医药
参考文献：
[1]Armstrong D W,Marguerite McNeely.Use of micelles in the TLC separation of polynuclear aromatic compounds and amino acids.Anal Lett,1979,12(A12):1285～1290
[2]李志良，林辉概，林润国.表面活性剂在色谱分析中的应用与进展.分析试验室，1991，10(5)：48～55
[3]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典：二部.北京：人民卫生出版社，1995.498
[4]米慕真,文艳秋，依素萍.胶束薄层色谱分离鉴定金银花和银翘解毒丸中的氯原酸.药物分析，1995,15(增刊)：588～590
收稿日期：1999-07-22, 百拇医药
单位：米慕真 周密(沈阳药科大学基础部，沈阳 110015)；宋红斌(本校药学系1995级学生)
关键词：正相胶束薄层色谱；复方磺胺甲唑片；甲氧苄氨嘧啶；磺胺甲唑
沈阳药科大学学报000215 摘 要：以十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液为展开剂、聚酰胺薄膜为固定相，对复方磺胺甲
唑片(复方新诺明)中两组分进行定量分析.磺胺甲基异唑(SMZ)和甲氧苄氨嘧啶(TMP)分别在4.0～12.0 mmo/L和3.5～10.5 mmol/L范围内吸收峰面积和浓度呈良好的线性关系.相关系数分别为0.999 5和0.999 8，回收率分别为101.4%和99.5%，RSD(%)分别为0.58和1.60.分类号：R914.1
, 百拇医药
Determination of the Compound Sulfamethoxazole Tablets Using Micellar Thin Layer Chromatography
Mi Muzhen Zhou Mi Song Hongbin
(Department of Basic Courses,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract：Two compositions of the Compound Sulfamethoxazole Tablets can be separated and quantified on polyamide TLC sheets,using aqueous micellar solution of sodium dodecylsulfate as the mobile phase.The linear relationships between the quantity of SMZ or TMP and their peek area are good.The correlation coefficients are 0.999 5 and 0.999 8 respectively.The average recoveries are 101.4% and 99.5%.RSD are 0.58% and 1.60%(n=3).It is a practical method for determining the Compound Sulfamethoxazole Tablets.
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Key words：micellar thin layer chromatography;the Compound Sulfamethoxazole Tablets;SMZ;TMP▲
复方磺胺甲唑(复方新诺明)，是一种常用的广谱抗菌药.用于多数革兰氏阳性及革兰氏阴性菌引起的感染.其主要成分为磺胺甲唑(SMZ)和甲氧苄氨嘧啶(TMP).其中TMP为增效剂.正相胶束薄层色谱是以表面活性剂水溶液为展开剂的薄层色谱.自1979年Armstrong等人开创胶束色谱以来〔1〕，由于其特殊的选择性、无毒、价廉等优点而获得较大发展.但胶束薄层色谱用于药物分析尤其是定量分析方面的文章尚不多见〔2〕.作者以正相胶束薄层色谱法，对复方磺胺甲唑片中两组分分别定量，取得满意结果.
1 仪器与试药
1.1 仪器
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层析缸(4 cm×4 cm×8 cm)和(12 cm×4 cm×8 cm)、定量毛细管0.5～2.0 μL、吹风机、岛津CS-930薄层扫描仪、恒温水浴、紫外灯.
1.2 试药
十二烷基硫酸钠(SDS)、无水乙醇、乙酸乙酯、冰醋酸等皆为分析纯；聚酰胺薄膜(浙江黄岩四青生化材料厂)；磺胺甲基异唑(SMZ)对照品和甲氧苄氨嘧啶(TMP)对照品(东北制药六厂)；复方新诺明片(市售).
2 实验方法与结果
2.1 溶液的配制
用以pH=5.0的去离子水配制SDS系列浓度水溶液(mol/L)0.01、0.03、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5.SMZ和TMP的对照品分别配成4.0 mol/L和3.5 mol/L的乙醇溶液.取10片复方磺胺甲唑，求得平均片重，研磨成粉状，准确称取约1/4片重，置50 mL容量瓶中，用无水乙醇溶解定容.过滤，取续滤液作为样品溶液.
, 百拇医药
2.2 胶束浓度的选择
将对照品溶液点于3 cm×7 cm的聚酰胺薄膜上，分别以SDS系列浓度水溶液为展开剂，在20℃恒温水浴中上行展开.展距约5 cm，取出用吹风机吹干，在254 nm、365 nm UV灯下检识定位.分别以第一溶剂前沿和第二溶剂前沿(俗称假前沿，即胶束层与水层的分界线)为准计算Rf值(Rf1和Rf2)，结果见表1.
Tab.1 The results of SMZ and TMP developed on aqueous solution of SDS Conc.of SDS/mol.L-1
0.01
0.03
0.05
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0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
Solvent front 1/mm
49
50
51
50
51
51
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51
Solvent front 2/mm
7
21
31
39
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39
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The position of SMZ/mm
5
10
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1
17
18
16
17
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Rf1 of SMZ
0.10
0.20
0.22
0.34
0.35
0.31
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0.35
0.31
Rf2 of SMZ
0.71
0.48
0.36
0.44
0.44
0.41
0.45
0.52
The position of TMP/mm
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25
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Rf1 of TMP
0.27
0.50
0.78
0.90
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0.90
0.88
0.86
0.86
Rf2 of TMP
1.86
1.19
1.29
1.15
1.12
1.15
1.11
1.42
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Time of develop/min
14
16
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依据表1，综合考虑组分的Rf值、斑点展开效果及展开时间三个方面，选择SDS浓度在0.1 mol/L较宜.
2.3 有机改性剂的选择
单独使用SDS水溶液作展开剂时，SMZ、TMP斑点有拖尾现象.在展开剂中加入有机改性剂会改善展开效果.经试验比较，最后以无水乙醇、冰醋酸和水体积比为5∶0.5∶20的展开效果最佳.斑点清晰，小而圆.
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2.4 定性依据
展出的薄膜立即用吹风机吹干，在254 nm、365 nm UV灯下观察对照品和样品荧光斑点的颜色、形状、Rf值.并对其进行薄层扫描.扫描参数:SX=1,λS=277 nm,λR=350 nm(SMZ)和λS=287 nm，λR=350 nm(TMP)，见图1.
Fig.1 Thin-layer chromatography-scanning of the sample and the standard substances
a—SMZ and sample;b—TMP and sample
在样品和对照品斑点上分别绘制UV吸收光谱.结果UV吸收曲线完全一致.
, 百拇医药
2.5 样品定量测定
2.5.1 标准曲线的绘制
在薄膜片上点SMZ和TMP对照品溶液各1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 μL，测定吸收峰积分面积并进行回归分析.
色谱峰面积A和对照品浓度C的关系式为：
SMZ:A=6.436×10-5C-0.819 3；
TMP：A=1.025×10-4C-1.290.
相关系数分别为0.999 5和0.999 8.显示SMZ和TMP的对照品浓度分别在4.0～12.0 mmol/L和3.5～10.5 mmol/L范围内与其吸收峰面积呈良好的线性关系.
, 百拇医药
2.5.2 稳定性和重复性考察
定时重复扫描展开后的同一斑点，考察斑点稳定性.
对同一样品斑点重复扫描5次，考察重复性.
2.5.3 精密度测定
在同一薄膜上重复点5个同浓度的样点，展开后扫描，考察精密度.
2.5.4 回收率实验
按《中国药典》1995年版二部〔3〕 ，精确称取SMZ和TMP及附加剂，制得浓度分别为3.2 mmol/L和0.6 mmol/L、4.0 mmol/L和0.8 mmol/L、4.8 mmol/L和1.0 mmol/L的溶液3批，然后按模拟样方法测定.
Tab.2 Relations between amount of the sample and the area of the peak Amount of the sample/μL
, 百拇医药
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
Area of SMZ peak
28 034
36 172
43 832
52 099
58 876
Area of TMP peak
, 百拇医药
22 256
27 135
32 312
36 983
41 697
Tab.3 Stability of spots(area of peak) Samples
Passed time/h
RSD/%
0
1
4
8
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24
SMZ
42 854
42 639
42 204
42 026
42 383
0.78
TMP
22 604
20 863
20 507
/
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/
5.20
Tab.4 Repeatability(area of peak) Samples
n
RSD/%
1
2
3
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5
SMZ
29 758
29 754
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29 788
29 606
29 626
0.28
TMP
14 649
14 739
14 683
14 763
14 588
0.47
Tab.5 Precision(area of peak) Samples
, 百拇医药
n
RSD/%
1
2
3
4
5
SMZ
47 319
48 422
50 798
52 963
50 976
, 百拇医药
4.5
TMP
24 437
26 023
24 548
25 131
25 581
2.6
Tab.6 Recovery/% Samples
n
Mean
RSD/%
, 百拇医药
1
2
3
SMZ
101.6
100.7
101.8
101.4
0.58
TMP
98.2
101.3
99.1
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99.5
1.60
2.5.5 样品测定
取SMZ对照品溶液1.5、2.5 μL、TMP对照品溶液1.0、1.5 μL，取样品液(测SMZ)1.0 μL、(测TMP)2.0 μL，点在同一聚酰胺薄膜上展开，扫描后用外标两点法分别计算SMZ和TMP的含量.市售三个厂家生产的复方新诺明片中SMZ和TMP的含量(g/片)测定结果见表7.Tab.7 The content of each component in tablets(n=3) Sample
SMZ
RSD/%
TMP
RSD/%
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A
0.417
2.5
0.082
3.4
B
0.396
2.8
0.079
4.7
C
0.413
1.3
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4.6
3 讨论 a.在正相胶束色谱中，溶质的分配是在固定相、水相、胶束相三者之间进行.其分配机理较普通色谱复杂，目前认为静电作用、亲疏水性和空间效应是其主要的分配机理.亲水性强的组分多分配于水层中，亲水性相对较弱的组分多分配于胶束层中.在本实验条件下TMP分配在两前沿之间的水层，SMZ则分配在胶束层，表现的极性差异与文献值一致.
b.在本实验条件下，TMP对照品出现3个荧光斑点，样品中的TMP也同样有3个荧光斑点.前二个斑点在胶束层，斑点较小较暗，可能为TMP的其它形体.第3点在水相，斑点清晰，故以此点作定量用.这在其它薄层文献报道中都未曾提及，说明TMP在SDS水溶液中可能形成三种形体，胶束薄层色谱又具有独特的分离能力，能将它们明显分离.
c.SDS水溶液展开过程中有溶剂脱混现象(SDBS、CTMAB、吐温-80等都有此现象)〔4〕，部分证明了胶束形成理论中的“假相模型”的合理性，而第二溶剂前沿往往成为亲疏水性物质分离的界线.它的位置与表面活性剂的浓度有关、与加入改性剂有关、与pH、温度等因素也有关.组分斑点分别以第一、第二溶剂前沿计算的Rf值(Rf1、Rf2)的变化规律常不相同(见表1).作者认为Rf2值更能反映物质的分配机理，应予以观测.
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参考文献：
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收稿日期：1999-07-22, 百拇医药