用吸收度比值导数分光光度法测定撒痛风注射液含量
作者：孔璋 刘世庆 王凤霞 宫宏波 刘寒梅 王艳
单位：孔璋 刘世庆 王凤霞 宫宏波(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015)；刘寒梅(沈阳市皇姑区药品监督检验所，沈阳 110036)；王艳(辽宁省肿瘤医院)
关键词：吸收度比值导数分光光度法；撒痛风注射液；水杨酸钠；咖啡因；安替比林
沈阳药科大学学报000212 摘 要：用吸收度比值导数分光光度法测定了撤痛风注射液合成样品与实际样品中水杨酸钠、咖啡因、安替比林的含量，平均回收率分别为99.7%、101.4%、99.3%，相对标准偏差分别为1.7%、1.8%、1.2%.将实际样品测定结果与标准法结果比较，经t检验表明两种方法结果间无显著性差异(t95，8).
分类号：R927.2
, http://www.100md.com Simultaneous Determination of Three Components in the Satongfeng Injection by the Ratio Spectrum-Deriv-ative Spectrophotometry
Kong Zhang Liu Shiqing Wang Fengxia Gong Hongbo Liu Hanmei Wang Yan
(Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract：The ratio spectrum-derivative spectrophotometry was used for the simultaneous determination of sodium salicylate,coffeine and phenazone in the Satongfeng Injection.The mean recoveries of sodium salicylate,coffeine and phenazone in synthetic samples were 99.7%,101.4% and 99.3% respectively. The relative standard deviations (RSD) were 1.7%,1.8% and 1.2%(n=5). The results of this method were compared with those of the standard method by the t test, showing no significant difference(t95，8).
, 百拇医药
Key words：ratio spectrum-derivative spectrophotometric method; Satongfeng Injection; sodium salicylate;coffeine;phenazone▲
光度分析中利用各种数学方法同时测定多组分体系的研究已有许多报道〔1,2〕，其中导数光谱法是一种很有应用价值的方法，但用导数光谱法测定两组分时结果较好，测三组分时为提高分辨率往往采用高阶导数，由于增加了求导噪音且寻找消除相互干扰的定量波长非常困难，从而限制了导数光谱法的应用。吸收度比值导数分光光度法〔3,4〕很方便的将重叠吸收带分开而消除干扰，与普通导数光谱法比较，其具有分辨率更高、更灵敏、计算简便的优点，但至今仍未见用于药物多组分同时测定的报道。作者应用该法测定了撒痛风注射液中水杨酸钠、咖啡因和安替比林含量，取得了满意的结果.
1 方法原理
, http://www.100md.com
当混合物中有x、y、z三组分时，如果各组分溶液在可见-紫外光区的吸收度与其浓度间符合比尔定律，且其吸收度具有加和性，则它们之间可用下式表达：
(1)
式(1)中Ai为混合物的总吸收度，εxi、εyi、εzi分别为x、y、z在波长i处的摩尔吸收系数，Cx,Cy，Cz分别为x、y、z的浓度.以浓度为C0x的X组分标准溶液的吸收光谱作除数因子，去除式(1)，并对波长求导，则得：
(2)
由式(2)可见混合物的吸收度比值导数与组分Cx无关.当固定C0x，在
的波长下时，其比值导数只与Cz有关.用此波长下的比值导数值对Cz作图，即得组分z的标准曲线.同理，可进行x分和y组分的测定.
, 百拇医药
2 仪器与试药
岛津UV-2201紫外-可见分光光度计；水杨酸钠、安替比林、咖啡因、 EDTA、焦亚硫酸钠均为药用规格；其它试剂均为分析纯；撤痛风注射液为市售.
3 实验部分
3.1 吸收光谱的绘制与稳定性的考察
以水为溶剂，按处方比例配制各组分、稳定剂及混合溶液，以水为参比，在220～350 nm间绘制紫外吸收光谱，如图1.稳定剂在250 nm以上基本无吸收.上述各试液至少在24 h内吸收度稳定.
Fig.1 UV spectrum
1—Compound solution;2—Anodynine;3—Sodium salicylate;4—Coffeine;5—Excipient
, 百拇医药
3.2 测定条件的选择
3.2.1 吸收度的测定
精密称量水杨酸钠、安替比林、咖啡因各适量，溶于水中，分别配制成适宜浓度，用1 cm石英比色皿，以水为参比，在250～290 nm范围内间隔一定波长测定吸收度.在求导数时，Δλ大小对比值导数有影响，过大过小均会造成较大误差，通过预实验选择Δλ=2 nm.
3.2.2 测量波长的选择
选择水杨酸为标准组分，绘制咖啡因及安替比林的比值导数光谱图，如图2.咖啡因的比值导数在260 nm通过零点，而安替比林在此波长下有较大导数值，故选择260 nm作为安替比林的测定波长，在此波长下水杨酸钠、咖啡因不干扰测定.安替比林的比值导数在254 nm通过零点，而咖啡因在此波长下有较大的导数值，故选择254 nm作为咖啡因的测定波长，在此波长下水杨酸钠、安替比林不干扰测定.同理，以咖啡因为标准组分，绘制水杨酸钠和安替比林的比值导数光谱图，如图3.安替比林在244 nm处通过零点，水杨酸钠在此波长下有较大的导数值，可选择244 nm作为水杨酸钠的测定波长，安替比林和咖啡因则不干扰.
, http://www.100md.com
Fig.2 Derivative of ratio spectrum of coffeine (1) and phenazone(2) (34μg/mL sodium salicylate as the divisor)
Fig.3 Derivative of ratio spectrum of sodium salicylate (1) and (2) phenazone (6μg/mL coffeine as the divisor)
3.2.3 标准组分浓度的选择
作为除数因子的标准组分，其浓度对比值导数有很大影响，从而影响测定结果.用前述配制的不同浓度溶液的吸收度为除数因子，以所得结果的回收率和精密度为衡量指标，选择水杨酸钠、咖啡因浓度分别为34 μg/mL、6 μg/mL为佳.
, http://www.100md.com
3.2.4 线性关系考察
在所选波长下各组分比值导数对浓度的标准曲线：水杨酸钠在13.5～51.4 μg/mL,安替比林在4～15.9 μ g/mL，咖啡因在2.3～9.3 μg/mL范围内其比值导数呈线性.回归方程分别为D244=0.012 4+0.019 6C水(r=0.999 9)；D254=-0.005 3-0.128C咖(r=0.999 9)；D260=0.020 8+0.16C安(r=0.999 3).
3.2.5 方法效能的考察
用正交表按处方比配制相当各组分标示量80%、90%、100%、110%、120%的组分及适量稳定剂的混合样品5份，用前述方法以稳定剂为参比测定.由回归方程求得各组分的含量，结果见表1.
, http://www.100md.com
Tab.1 Results of ratio-spectrum derivative spectrophotometry Sampe
Added/μg。mL-1
Tested/μg。mL-1
Recovery/%
SS
AD
CF
SS
AD
CF
, http://www.100md.com
SS
AD
CF
1
20.4
8.0
8.4
20.0
8.2
8.3
98.3
102.5
98.5
, http://www.100md.com
2
27.2
14.0
6.0
6.8
14.2
5.9
98.6
101.4
98.3
3
34.0
12.0
, 百拇医药
3.6
34.9
11.8
3.7
102.6
98.3
101.4
4
40.8
10.0
4.8
40.6
10.3
, 百拇医药
4.8
99.6
103.0
99.1
5
47.6
6.0
7.2
47.2
6.1
7.2
99.2
102.0
, http://www.100md.com
99.2
MR
99.7
101.4
99.3
RSD
1.7
1.8
1.2
SS—Sodium salicylate; AD—Anodynine;CF—Coffeine;MR—Mean recovery3.2.6 样品的测定
取撒痛风注射液10支，倒入烧杯中，混匀.按本法测定并与地方标准法〔5〕作对照，每种方法对每个样品重复测定5次.结果见表2.经t检验表明，两种方法结果间无显著性差异.
, 百拇医药
Tab.2 Results of ratio-spectrum derivative spectrophotometry and the standard method Batch
Ratio-spectrum derivative method/%
Standard method/%
SS
AD
CF
SS
AD
CF
9510031
, 百拇医药
101.2
98.8
98.4
99.6
98.2
97.2
9510032
101.1
100.7
97.1
99.4
99.2
97.9
, 百拇医药
4 讨论 吸收度比值导数分光光度法是对导数光谱法的一种改进.它相当把两组分测定简化为单组分测定，把三组分测定简化为两组分测定，所以很容易推广应用于三组分的同时测定.而导数光谱法在用于三组分体系中的同时测定时，则需采用高阶导数，它除很难找到消除相互干扰的中间波长外，还会增加测量误差.
本法的关键是测定中间波长作为除数因子标准组分的浓度以及求导数的波长间隔Δλ的选择，故应通过试验仔细选择，否则将不会得到好的结果.
参考文献：
[1]于盛茂，于连生，邵淑海，等.双波长吸收度比值 KZ数法同时测定三组分体系的研究与应用.分析实验室，1994，13(1)：52～53
[2]杨清华，孟怡，张国清.导数光谱法在药物分析中的应用.药物分析杂志，1985，4(3)：148～150
, http://www.100md.com
[3]Berzas JN,Guiberteau C.Spectrophotometric resolution of ternary mixtures of salicylaldehyde,3-hydroxybenzaldehyde and 4-hydroxybenzalaehyde by the derivative ratiospectrum-aero crossing method.Talate,1992,39(5):547～553
[4]刘葵，耿玉珍，杨景芝，等.比值光谱导数法同时测定铝合金中铁、铜、锌.分析化学，1998，26(10)：1201～1204
[5]辽宁省卫生厅.辽宁省药品标准.沈阳：辽宁科技出版社，1980.492～493
收稿日期：1999-07-16, 百拇医药
单位：孔璋 刘世庆 王凤霞 宫宏波(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015)；刘寒梅(沈阳市皇姑区药品监督检验所，沈阳 110036)；王艳(辽宁省肿瘤医院)
关键词：吸收度比值导数分光光度法；撒痛风注射液；水杨酸钠；咖啡因；安替比林
沈阳药科大学学报000212 摘 要：用吸收度比值导数分光光度法测定了撤痛风注射液合成样品与实际样品中水杨酸钠、咖啡因、安替比林的含量，平均回收率分别为99.7%、101.4%、99.3%，相对标准偏差分别为1.7%、1.8%、1.2%.将实际样品测定结果与标准法结果比较，经t检验表明两种方法结果间无显著性差异(t95，8).
分类号：R927.2
, http://www.100md.com Simultaneous Determination of Three Components in the Satongfeng Injection by the Ratio Spectrum-Deriv-ative Spectrophotometry
Kong Zhang Liu Shiqing Wang Fengxia Gong Hongbo Liu Hanmei Wang Yan
(Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract：The ratio spectrum-derivative spectrophotometry was used for the simultaneous determination of sodium salicylate,coffeine and phenazone in the Satongfeng Injection.The mean recoveries of sodium salicylate,coffeine and phenazone in synthetic samples were 99.7%,101.4% and 99.3% respectively. The relative standard deviations (RSD) were 1.7%,1.8% and 1.2%(n=5). The results of this method were compared with those of the standard method by the t test, showing no significant difference(t95，8).
, 百拇医药
Key words：ratio spectrum-derivative spectrophotometric method; Satongfeng Injection; sodium salicylate;coffeine;phenazone▲
光度分析中利用各种数学方法同时测定多组分体系的研究已有许多报道〔1,2〕，其中导数光谱法是一种很有应用价值的方法，但用导数光谱法测定两组分时结果较好，测三组分时为提高分辨率往往采用高阶导数，由于增加了求导噪音且寻找消除相互干扰的定量波长非常困难，从而限制了导数光谱法的应用。吸收度比值导数分光光度法〔3,4〕很方便的将重叠吸收带分开而消除干扰，与普通导数光谱法比较，其具有分辨率更高、更灵敏、计算简便的优点，但至今仍未见用于药物多组分同时测定的报道。作者应用该法测定了撒痛风注射液中水杨酸钠、咖啡因和安替比林含量，取得了满意的结果.
1 方法原理
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当混合物中有x、y、z三组分时，如果各组分溶液在可见-紫外光区的吸收度与其浓度间符合比尔定律，且其吸收度具有加和性，则它们之间可用下式表达：
(1)式(1)中Ai为混合物的总吸收度，εxi、εyi、εzi分别为x、y、z在波长i处的摩尔吸收系数，Cx,Cy，Cz分别为x、y、z的浓度.以浓度为C0x的X组分标准溶液的吸收光谱作除数因子，去除式(1)，并对波长求导，则得：
(2)由式(2)可见混合物的吸收度比值导数与组分Cx无关.当固定C0x，在
的波长下时，其比值导数只与Cz有关.用此波长下的比值导数值对Cz作图，即得组分z的标准曲线.同理，可进行x分和y组分的测定., 百拇医药
2 仪器与试药
岛津UV-2201紫外-可见分光光度计；水杨酸钠、安替比林、咖啡因、 EDTA、焦亚硫酸钠均为药用规格；其它试剂均为分析纯；撤痛风注射液为市售.
3 实验部分
3.1 吸收光谱的绘制与稳定性的考察
以水为溶剂，按处方比例配制各组分、稳定剂及混合溶液，以水为参比，在220～350 nm间绘制紫外吸收光谱，如图1.稳定剂在250 nm以上基本无吸收.上述各试液至少在24 h内吸收度稳定.
Fig.1 UV spectrum
1—Compound solution;2—Anodynine;3—Sodium salicylate;4—Coffeine;5—Excipient
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3.2 测定条件的选择
3.2.1 吸收度的测定
精密称量水杨酸钠、安替比林、咖啡因各适量，溶于水中，分别配制成适宜浓度，用1 cm石英比色皿，以水为参比，在250～290 nm范围内间隔一定波长测定吸收度.在求导数时，Δλ大小对比值导数有影响，过大过小均会造成较大误差，通过预实验选择Δλ=2 nm.
3.2.2 测量波长的选择
选择水杨酸为标准组分，绘制咖啡因及安替比林的比值导数光谱图，如图2.咖啡因的比值导数在260 nm通过零点，而安替比林在此波长下有较大导数值，故选择260 nm作为安替比林的测定波长，在此波长下水杨酸钠、咖啡因不干扰测定.安替比林的比值导数在254 nm通过零点，而咖啡因在此波长下有较大的导数值，故选择254 nm作为咖啡因的测定波长，在此波长下水杨酸钠、安替比林不干扰测定.同理，以咖啡因为标准组分，绘制水杨酸钠和安替比林的比值导数光谱图，如图3.安替比林在244 nm处通过零点，水杨酸钠在此波长下有较大的导数值，可选择244 nm作为水杨酸钠的测定波长，安替比林和咖啡因则不干扰.
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Fig.2 Derivative of ratio spectrum of coffeine (1) and phenazone(2) (34μg/mL sodium salicylate as the divisor)
Fig.3 Derivative of ratio spectrum of sodium salicylate (1) and (2) phenazone (6μg/mL coffeine as the divisor)
3.2.3 标准组分浓度的选择
作为除数因子的标准组分，其浓度对比值导数有很大影响，从而影响测定结果.用前述配制的不同浓度溶液的吸收度为除数因子，以所得结果的回收率和精密度为衡量指标，选择水杨酸钠、咖啡因浓度分别为34 μg/mL、6 μg/mL为佳.
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3.2.4 线性关系考察
在所选波长下各组分比值导数对浓度的标准曲线：水杨酸钠在13.5～51.4 μg/mL,安替比林在4～15.9 μ g/mL，咖啡因在2.3～9.3 μg/mL范围内其比值导数呈线性.回归方程分别为D244=0.012 4+0.019 6C水(r=0.999 9)；D254=-0.005 3-0.128C咖(r=0.999 9)；D260=0.020 8+0.16C安(r=0.999 3).
3.2.5 方法效能的考察
用正交表按处方比配制相当各组分标示量80%、90%、100%、110%、120%的组分及适量稳定剂的混合样品5份，用前述方法以稳定剂为参比测定.由回归方程求得各组分的含量，结果见表1.
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Tab.1 Results of ratio-spectrum derivative spectrophotometry Sampe
Added/μg。mL-1
Tested/μg。mL-1
Recovery/%
SS
AD
CF
SS
AD
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SS
AD
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1
20.4
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102.5
98.5
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2
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RSD
1.7
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1.2
SS—Sodium salicylate; AD—Anodynine;CF—Coffeine;MR—Mean recovery3.2.6 样品的测定
取撒痛风注射液10支，倒入烧杯中，混匀.按本法测定并与地方标准法〔5〕作对照，每种方法对每个样品重复测定5次.结果见表2.经t检验表明，两种方法结果间无显著性差异.
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Tab.2 Results of ratio-spectrum derivative spectrophotometry and the standard method Batch
Ratio-spectrum derivative method/%
Standard method/%
SS
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SS
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9510031
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101.2
98.8
98.4
99.6
98.2
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100.7
97.1
99.4
99.2
97.9
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4 讨论 吸收度比值导数分光光度法是对导数光谱法的一种改进.它相当把两组分测定简化为单组分测定，把三组分测定简化为两组分测定，所以很容易推广应用于三组分的同时测定.而导数光谱法在用于三组分体系中的同时测定时，则需采用高阶导数，它除很难找到消除相互干扰的中间波长外，还会增加测量误差.
本法的关键是测定中间波长作为除数因子标准组分的浓度以及求导数的波长间隔Δλ的选择，故应通过试验仔细选择，否则将不会得到好的结果.
参考文献：
[1]于盛茂，于连生，邵淑海，等.双波长吸收度比值 KZ数法同时测定三组分体系的研究与应用.分析实验室，1994，13(1)：52～53
[2]杨清华，孟怡，张国清.导数光谱法在药物分析中的应用.药物分析杂志，1985，4(3)：148～150
, http://www.100md.com
[3]Berzas JN,Guiberteau C.Spectrophotometric resolution of ternary mixtures of salicylaldehyde,3-hydroxybenzaldehyde and 4-hydroxybenzalaehyde by the derivative ratiospectrum-aero crossing method.Talate,1992,39(5):547～553
[4]刘葵，耿玉珍，杨景芝，等.比值光谱导数法同时测定铝合金中铁、铜、锌.分析化学，1998，26(10)：1201～1204
[5]辽宁省卫生厅.辽宁省药品标准.沈阳：辽宁科技出版社，1980.492～493
收稿日期：1999-07-16, 百拇医药