2，6-二叔丁基对甲酚对大鼠毒作用的实验研究
作者：郑河新 任燕红 雍爱伦 曾迎 吴立军 谭佳红
单位：北京市劳动卫生职业病防治研究所，北京 100020
关键词：
卫生毒理学杂志000218 2，6-二叔丁基对甲酚(BHT)在我国生产历史十分短暂，主要用于合成橡胶、聚乙烯及聚丙烯纤维的稳定剂。此外还用于食品工业中的氧化剂。
流行病学调查发现工人在BHT生产过程中不可避免地吸入一定浓度的BHT粉尘。目前国内外关于BHT毒理及防护的资料很少。为初步探讨BHT对大鼠的某些毒副作用，我们进行了本研究。
1 材料与方法
1.1 实验用BHT为白色晶体，沸点为265 ℃，溶点为70 ℃，分子量为220.36，由北京燕山石化公司提供。BHT不易溶于水，易溶于有机溶剂。将BHT研磨成粒径小于10 μm占90 %以上的粉尘，染毒前用灭菌的生理盐水-吐温80配成混悬液并加入青霉素80万和链霉毒40万单位。
, 百拇医药
1.2 选用医科院动物中心提供的雄性健康Wistar大鼠，体重190～230 g，随机分为4组，各组体重分布大致相等。
1.3 采用气管注入法染毒。左右支气管各注入0.5 ml BHT悬液。间隔1周后再染毒1次，共计2次。各组剂量参照拉扎列夫大鼠经口LD50=1.95～2.45 g/kg设计[1](表1)。
1.4 观察指标及方法
1.4.1 每周测体重及肛温各1次；染毒前、染毒后24 h、染毒后第12周进行血常规检查。
表1 各组染毒剂量 组别
动物数*
(只)
, 百拇医药
BHT混悬液浓度
(mg/ml)
总染毒剂量
(mg/只)
低剂量组
14
4
8
中剂量组
14
20
40
高剂量组
, http://www.100md.com
8
100
200
对照组
10
0
0
1.4.2 全血胆碱酯酶活性测定(DTNB法)；肝细胞色素P-450含量测定(比色法)；血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量测定[2，3]。
1.4.3 解剖学及病理组织学检查。
2 结果
2.1 大鼠染毒后表现 主要为静卧，四肢无力，活动受抑制。高剂量组8只大鼠活动抑制明显，静卧长达4 h以上，而中、低剂量组仅有2～3只大鼠活动受抑制，且静卧时间短，只有1 h左右。染毒后大鼠多数不进食，上述症状24 h后才消失。对照组活动无异常。各组大鼠未见胆碱能神经兴奋的表现。3个剂量组大鼠体重增长均较对照组迟缓(P<0.05)
, http://www.100md.com
2.2 肝细胞色素P450含量测定(表2)
表2 肝细胞色素P450含量测定(nmol/mg蛋白) 组别
染毒后4周
染毒后12周
动物数
(只)
P450含量
动物数
(只)
P450含量
低剂量组
7
, 百拇医药
34.74±36.17
7
64.64±54.02
中剂量组
6
12.26± 6.26
8
52.53±52.51
高剂量组
3
19.68±11.48
5
, 百拇医药 112.88±81.64*
对照组
4
14.19±12.18
6
80.73±50.06
与对照组比较，P<0.052.3 血清SOD、MDA测定 其结果未发现有统计学意义
2.4 脏器系数 3个剂量组肺体比、脾体比与对照组比较差异有显著性，考虑为肺炎症病变的结果。其余脏器系数未见异常(表3)。
表3 各组脏器系数测量结果 (%) 组别
, 百拇医药 肺体比
脾体比
肝体比
心体比
肾体比
低剂量组
3.8±0.5
1.3±0.2Δ
3.0±0.5
2.9±0.3
6.3±0.4
中剂量组
4.7±1.3*
, 百拇医药
2.2±0.4*
3.3±0.8
2.9±0.3
6.1±0.4
高剂量组
4.9±1.2
1.7±0.4
3.1±0.3
3.2±0.5
6.2±0.5
对照组
3.5±0.3
, http://www.100md.com
1.5±0.3
3.0±0.4
2.8±0.2
5.8±0.5
与对照组比较，*P<0.05，与中剂量组比较，ΔP<0.052.5 大鼠肺干重、湿重测定值 结果未发现统计学意义。2.6 大体解剖 3个剂量组大鼠可见炎症或粘连等炎症渗出后改变，少数大鼠肺叶上有大小不等的脓肿，有的有肺实变，未触及结节。其他肺器未见异常。各组间差异不明显。对照组未见上述异常。
2.7 病理学检查 镜下3个剂量组可见肺泡腔内有中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞，偶见嗜酸粒细胞；某些支气管腔中有炎性渗出物和脱落的纤毛上皮细胞；肺泡隔增厚，肺泡壁毛细血管扩张充血，一些血管周围局部有散在细胞小结节。各组肺部病理变化主要是急慢性炎症——以血管反应为中心的渗出性病变，而炎症的变质与增生并不明显。镜下未见大鼠有肺纤维化改变的明显证据。各组大鼠肝、脾、心、肾、肾上腺均未见有病理意义的改变。对照组未见上述异常。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 国外文献报道，经口或灌胃多次给药，BHT使体温下降，氧化酶受抑制，胆碱能神经兴奋[1]。但本研究经支气管染毒后各时期，大鼠肛温均在正常范围内，胆碱酯酶、SOD活性及MDA含量无明显变化，也未见胆碱能神经兴奋的表现。支气管染毒方式决定给药剂量不可能太大；且BHT不易溶于水，易溶于有机溶剂，进入肺内不易吸收入血循环，且本品慢性毒作用带较宽，蓄积毒性较低。故在染毒后12周内得到的结果与文献报道不一致。
3.2 高剂量组在染毒后第12周肝细胞色素P450含量明显高于染毒后第4周，提示BHT有诱导肝微粒体酶活性的作用。由于BHT可作为抗氧化剂加入食品中，因此此诱导作用对其他食品添加剂毒性的影响还有待于进一步研究[4]。
3.3 3个剂量组肺重与对照组无明显差异；病理组织学检查肺脏以炎症反应为主，未见明显的肺组织成纤维化改变。考虑BHT的化学作用特性——抗氧化作用，保护了细胞膜，减弱了过氧基损伤细胞膜的作用所致。本研究显示BHT不引起肺纤维化改变。
, http://www.100md.com
参考文献
[1] 拉扎列夫.工业生产中的有害物质手册.第1卷.修订第7版.北京：化学工业出版社，1987.687-689.
[2] 刘毓谷.卫生毒理学基础.第2版.北京：人民卫生出版社，1994.209-210.
[3] 黄幸纾.环境化学致突变致畸致癌实验方法.杭州：浙江科学技术出版社，1985.51-52.
[4] 夏伟.细胞色素P-450的进展.国外医学卫生学分册，2000，27：41-45.
(收稿日期：1999-05-14), 百拇医药
单位：北京市劳动卫生职业病防治研究所，北京 100020
关键词：
卫生毒理学杂志000218 2，6-二叔丁基对甲酚(BHT)在我国生产历史十分短暂，主要用于合成橡胶、聚乙烯及聚丙烯纤维的稳定剂。此外还用于食品工业中的氧化剂。
流行病学调查发现工人在BHT生产过程中不可避免地吸入一定浓度的BHT粉尘。目前国内外关于BHT毒理及防护的资料很少。为初步探讨BHT对大鼠的某些毒副作用，我们进行了本研究。
1 材料与方法
1.1 实验用BHT为白色晶体，沸点为265 ℃，溶点为70 ℃，分子量为220.36，由北京燕山石化公司提供。BHT不易溶于水，易溶于有机溶剂。将BHT研磨成粒径小于10 μm占90 %以上的粉尘，染毒前用灭菌的生理盐水-吐温80配成混悬液并加入青霉素80万和链霉毒40万单位。
, 百拇医药
1.2 选用医科院动物中心提供的雄性健康Wistar大鼠，体重190～230 g，随机分为4组，各组体重分布大致相等。
1.3 采用气管注入法染毒。左右支气管各注入0.5 ml BHT悬液。间隔1周后再染毒1次，共计2次。各组剂量参照拉扎列夫大鼠经口LD50=1.95～2.45 g/kg设计[1](表1)。
1.4 观察指标及方法
1.4.1 每周测体重及肛温各1次；染毒前、染毒后24 h、染毒后第12周进行血常规检查。
表1 各组染毒剂量 组别
动物数*
(只)
, 百拇医药
BHT混悬液浓度
(mg/ml)
总染毒剂量
(mg/只)
低剂量组
14
4
8
中剂量组
14
20
40
高剂量组
, http://www.100md.com
8
100
200
对照组
10
0
0
1.4.2 全血胆碱酯酶活性测定(DTNB法)；肝细胞色素P-450含量测定(比色法)；血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量测定[2，3]。
1.4.3 解剖学及病理组织学检查。
2 结果
2.1 大鼠染毒后表现 主要为静卧，四肢无力，活动受抑制。高剂量组8只大鼠活动抑制明显，静卧长达4 h以上，而中、低剂量组仅有2～3只大鼠活动受抑制，且静卧时间短，只有1 h左右。染毒后大鼠多数不进食，上述症状24 h后才消失。对照组活动无异常。各组大鼠未见胆碱能神经兴奋的表现。3个剂量组大鼠体重增长均较对照组迟缓(P<0.05)
, http://www.100md.com
2.2 肝细胞色素P450含量测定(表2)
表2 肝细胞色素P450含量测定(nmol/mg蛋白) 组别
染毒后4周
染毒后12周
动物数
(只)
P450含量
动物数
(只)
P450含量
低剂量组
7
, 百拇医药
34.74±36.17
7
64.64±54.02
中剂量组
6
12.26± 6.26
8
52.53±52.51
高剂量组
3
19.68±11.48
5
, 百拇医药 112.88±81.64*
对照组
4
14.19±12.18
6
80.73±50.06
与对照组比较，P<0.052.3 血清SOD、MDA测定 其结果未发现有统计学意义
2.4 脏器系数 3个剂量组肺体比、脾体比与对照组比较差异有显著性，考虑为肺炎症病变的结果。其余脏器系数未见异常(表3)。
表3 各组脏器系数测量结果 (%) 组别
, 百拇医药 肺体比
脾体比
肝体比
心体比
肾体比
低剂量组
3.8±0.5
1.3±0.2Δ
3.0±0.5
2.9±0.3
6.3±0.4
中剂量组
4.7±1.3*
, 百拇医药
2.2±0.4*
3.3±0.8
2.9±0.3
6.1±0.4
高剂量组
4.9±1.2
1.7±0.4
3.1±0.3
3.2±0.5
6.2±0.5
对照组
3.5±0.3
, http://www.100md.com
1.5±0.3
3.0±0.4
2.8±0.2
5.8±0.5
与对照组比较，*P<0.05，与中剂量组比较，ΔP<0.052.5 大鼠肺干重、湿重测定值 结果未发现统计学意义。2.6 大体解剖 3个剂量组大鼠可见炎症或粘连等炎症渗出后改变，少数大鼠肺叶上有大小不等的脓肿，有的有肺实变，未触及结节。其他肺器未见异常。各组间差异不明显。对照组未见上述异常。
2.7 病理学检查 镜下3个剂量组可见肺泡腔内有中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞，偶见嗜酸粒细胞；某些支气管腔中有炎性渗出物和脱落的纤毛上皮细胞；肺泡隔增厚，肺泡壁毛细血管扩张充血，一些血管周围局部有散在细胞小结节。各组肺部病理变化主要是急慢性炎症——以血管反应为中心的渗出性病变，而炎症的变质与增生并不明显。镜下未见大鼠有肺纤维化改变的明显证据。各组大鼠肝、脾、心、肾、肾上腺均未见有病理意义的改变。对照组未见上述异常。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 国外文献报道，经口或灌胃多次给药，BHT使体温下降，氧化酶受抑制，胆碱能神经兴奋[1]。但本研究经支气管染毒后各时期，大鼠肛温均在正常范围内，胆碱酯酶、SOD活性及MDA含量无明显变化，也未见胆碱能神经兴奋的表现。支气管染毒方式决定给药剂量不可能太大；且BHT不易溶于水，易溶于有机溶剂，进入肺内不易吸收入血循环，且本品慢性毒作用带较宽，蓄积毒性较低。故在染毒后12周内得到的结果与文献报道不一致。
3.2 高剂量组在染毒后第12周肝细胞色素P450含量明显高于染毒后第4周，提示BHT有诱导肝微粒体酶活性的作用。由于BHT可作为抗氧化剂加入食品中，因此此诱导作用对其他食品添加剂毒性的影响还有待于进一步研究[4]。
3.3 3个剂量组肺重与对照组无明显差异；病理组织学检查肺脏以炎症反应为主，未见明显的肺组织成纤维化改变。考虑BHT的化学作用特性——抗氧化作用，保护了细胞膜，减弱了过氧基损伤细胞膜的作用所致。本研究显示BHT不引起肺纤维化改变。
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参考文献
[1] 拉扎列夫.工业生产中的有害物质手册.第1卷.修订第7版.北京：化学工业出版社，1987.687-689.
[2] 刘毓谷.卫生毒理学基础.第2版.北京：人民卫生出版社，1994.209-210.
[3] 黄幸纾.环境化学致突变致畸致癌实验方法.杭州：浙江科学技术出版社，1985.51-52.
[4] 夏伟.细胞色素P-450的进展.国外医学卫生学分册，2000，27：41-45.
(收稿日期：1999-05-14), 百拇医药