维持性血液透析患者庚型肝炎病毒感染状况
作者：李体远 戴勇 周伯平
单位：李体远(广东省深圳市人民医院中心实验室 518020)；戴勇(广东省深圳市人民医院中心实验室 518020)；周伯平(广东省深圳市东湖医院 518020)
关键词：血液透析；庚型肝炎病毒；重叠感染
广东医学000216 【摘要】 目的 探讨庚型肝炎病毒合并其他肝炎病毒在血液透析患者中的感染状况。方法 逆转录-套式聚合酶链反应(RT-nPCR)检测血液透析患者血清HGV RNA， ELISA法检测乙肝两对半及HCV，HDV抗体。结果 80例血透患者中，HGV阳性15例(18.7%)，HCV阳性18例(22.5%)，HBsAg阳性21例(26.2%)，未检出HDV阳性。在15例感染HGV的患者中，7例(46.7%)同时感染其他肝炎病毒，其中与HCV，HBV二重感染者分别为3例和5例，与HCV及HBV三重感染者3例。12例透析工作人员中未检出上述病毒感染。有输血史的33例患者中，HGV，HBV及HCV阳性百分率均显著高于无输血史患者。输血组HGV与HCV的重叠感染率，HGV与HBV，HCV的三重感染率均显著高于非输血组(P<0.05)。各型肝炎病毒的感染率随着透析时间增加均升高，其中HBV各组间比较均差异显著(P<0.05)。HCV透析1～3 a与透析超过5 a相比，差异有显著性(P<0.05)。结论 维持性血液透析患者为HGV高感染人群，HGV及其与HBV和(或)HCV重叠感染的高发生率与输血有关。
, 百拇医药
Infection and co-infection of HGV in maintenance hemodialysis patients
Li Tiyuan, Dai Yong, Zhou Boping
(Shenzhen People′s Hospital, Shenzhen 518020)
【Abstract】 Objective To investigate the infection and Co-infection of HGV with other hepatitis viruses and the influence of transfusion and hemodialysis time on viral infection in maintenance hemodialysis patients.Methods Genome RNA of hepatitis G virus (HGV) was amplified in Sera from 80 hemodialysis patients and 12 nurses of dialysis unit using a nested polymerase chain reaction (PCR) assay with specific primers. HBV, HCV and HDV were detected by ELISA method.Results The number of patients with HGV, HBV, HCV and HDV were 15(18.7%),21(26.2%),18(22.5%) and 0, respectively. Of the 15 HGV positive patients, 7(46.7%) were also infected with other hepatitis viruses, 3 with HCV, 5 with HBV, 3 with HBV and HCV. Hepatitis viruses were not detected in dialysis operators. The prevalence of infection and co-infection of HGV with HBV or/and HCV increased significantly in the transfusions group. Conclusion HGV infection is serious in hemodialysis patients. The HGV infection and co-infection with HBV or/and HCV in hemodialysis patients may be related to transfusion.
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【Key words】 Hemodialysis Hepatitis G virus Co-infection
维持性血液透析患者为肝炎病毒感染的高危人群。庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C,以下简称为HGV)为1995～1996年报道的一种肝炎病毒，可经血液或肠道传播[1，2]。有关HGV的致病性、流行病学特征及传播途径等尚缺乏充分认识。我们研究了深圳地区血液透析患者HGV的感染情况，并对其与HBV，HCV及HDV的重叠感染状况进行了探讨。
1 资料与方法
1.1 观察对象 长期维持性血液透析患者80例，其中男43例，女37例；平均年龄49.2(23～78)岁。原发病为慢性肾炎31例，糖尿病肾病9例，高血压肾病5例，其他为梗阻性肾病、肾移植术后排异、肾结核、多囊肾等共计35例。另12例采自血液透析工作人员，均为女性，平均年龄28岁。80例患者按是否输过血或血液制品分为输血组和非输血组。
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1.2 标本采集 空腹抽静脉血，3?000 r/min离心分离血清，置灭菌、具塞一次性塑料试管，-30℃保存备用。
1.3 HGV RNA检测 根据Linnen等[1]报道的HGV/GBV-C基因序列，在5′UTR设计套式PCR引物，序列分别为：P1 5′GGT GGA TGG GTG ATG ACA GGG TTG 3′，P2 5′GGA GCT GGG TGG CCC CAT GCA TTT 3′，P3 5′GGT AGC CAC TAT AGG GTC TTA 3′，P4 5′CAC TGG TCC TTG TCA ACT CGC 3′。其中P1，P2为外引物，P3，P4为内引物，扩增产物长度238 bp。异硫氰酸胍一步法提取血清HGV RNA，以引物P2为逆转录引物将HGV RNA 逆转录为cDNA，分别以P1和P2及P3和P4为外、内引物进行PCR扩增。PCR终产物经10 g/L琼脂糖电泳，溴化乙啶染色，紫外观察，出现238 bp DNA条带者为阳性。
, 百拇医药
1.4 HBV，HCV及HDV检测 酶联免疫(ELISA)法检测HBV两对半及HCV，HDV抗体(华美生物工程公司试剂盒)并计算其阳性率；以HBsAg阳性代表HBV感染。
1.5 统计学处理 使用χ2检验，P<0.05视为差异有显著性。
2 结果
2.1 血透患者HGV感染状况及其与HBV，HCV及HDV的关系 80例长期维持性血液透析患者中，HGV阳性15例(18.7%)，HCV阳性18例(22.5%)，HBsAg阳性21例(26.2%)，未检出HDV阳性。在15例感染HGV的患者中，7例(46.7%)同时感染其他肝炎病毒，其中与HCV，HBV二重感染者分别为3例和5例，与HCV及HBV三重感染者3例。对12例血液透析工作人员同时进行了检测，HGV，HBV，HCV及HDV均阴性。
2.2 输血对HGV与HBV，HCV感染的影响 80例患者，按是否输过血或血液制品分为输血组和非输血组。各型肝炎病毒感染的阳性率见表1。与非输血组相比，除HDV外，输血组HGV，HBV及HCV的感染率明显增加，均P<0.05。输血组除HGV与HBV重叠感染率仅有增高的趋势外(P>0.05)，HGV与HCV及HGV与HBV，HCV的感染率均显著高于非输血组，均P<0.05。
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表1 输血对肝炎病毒感染的影响例(%) 组别
例数
HGV
HBV
HCV
HGV+
HBV
HGV+
HCV
HGV+HBV
+HCV
输血组
33
, 百拇医药
?11(30.3)
?14(42.4)
?12(30.3)
?3(9.1)
3(9.1)
?3(9.1)
非输血组
47
4(10.6)
7(14.9)
6(17.0)
, 百拇医药
2(4.2)
0(0)
0(0)
与非输血组比较P<0.05
2.3 透析时间对病毒感染的影响 见表2。各型肝炎病毒的感染率随着透析时间增加均升高，其中HBV各组间比较均差异有显著性，P<0.05。HCV透析1～3 a与透析超过5 a相比，差异有显著性，P<0.05。表2 透析时间对病毒感染的影响例(%) 组别
例数
HGV
HBV
HCV
HGV+HBV
, 百拇医药
HGV+HCV
HGV+HBV
+HCV
<1 a
8
2(25.0)
6(100)
2(25.0)
2(25.0)
0(0)
0(0)
≥1，<3 a
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53
8(15.1)
7(13.2)
7(13.2)△
2(3.8)
3(5.7)
2(3.8)
≥3，<5 a
12
3(25.0)
5(41.7)
4(33.3)
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1(8.3)
0(0)
1(8.3)
≥5 a
7
2(28.6)
3(14.3)
5(71.4)
0(0)
0(0)
0(0)
各组相互比较，P<0.05；△ 与透析超过5 a相比较，P<0.05
, 百拇医药
3 讨论
HGV与GBV-C的基因序列(86%)及氨基酸序列(96%)均高度同源，国内学者统称其为庚型肝炎病毒。庚肝病毒属黄病毒家族，有一条单股正链RNA分子，不同分离株cDNA长度从9?066～9?395个核苷酸不等。它仅含一个大的开放读框，编码一条蛋白质前体多肽。迄今为止，RT-PCR方法仍然是检测庚肝病毒的“黄金方法”。庚肝病毒可在健康供血者中检出，并可经非肠道传播。维持性血液透析患者均处于终末期尿毒症，存在严重盆血及营养不良状况，免疫功能低下，患者若接受血液制品，重复使用透析器或共用透析机，均易造成肝炎病毒感染。本实验发现，维持性血液透析患者中HGV的感染率高达18.7%，与Sampietro[3]报道的19%HGV/GBV-C感染率相近。12名血液透析工作人员中，则未检出庚肝病毒感染。
以往的研究表明，国内血透患者血清HBV标记物阳性可达68%，HBV-DNA阳性为14%。HCV的感染率则为27%～36%。本实验发现，80例患者中，HBV，HCV的感染率分别为26.2%和22.5%，稍高于HGV。说明，除HDV外，HGV，HBV及HCV均对维持性血液透析患者造成严重危害。
, 百拇医药
许多研究提示，输血是引起维持性血液透析患者感染肝炎病毒的主要途径之一。本实验发现，除HDV外，HGV，HBV及HCV的感染率输血组均显著高于非输血组，HGV与HCV及HGV与HBV，HCV的重叠感染率输血组亦显著高于非输血组，均P<0.05。说明，输血同样是引起HGV及其与其他肝炎病毒重叠感染的主要因素。
透析时间对病毒感染的影响与输血类似。本实验中，HBV的感染率随透析时间的增加明显增加，P<0.05。透析1～3 a与透析5 a以上相比，HCV的感染明显增加，P<0.05。HGV的感染以及HGV与HBV和(或)HCV的重叠感染随透析时间的增加，感染的百分率增高，但无统计学意义。我们认为，该结果支持大多数的研究报告，即与HBV，HCV类似，HGV的感染随着透析时间的增加而增加。其原因除输血外，主要是由于重复使用透析器和(或)共用透析机增加感染的机会。有研究证实，透析器复用组HCV的感染率可达60%，而一次性使用组仅17%[4]。类似的研究证实，如果环境被污染，在其他条件相同时，共用透析机使HCV的感染率显著提高[5]。
, 百拇医药
参考文献
1，Linnen J, Wages J, Zhang-Keck ZY, et al. Molecular cloning and diseases association of hepatitis G virus: a transfusion transmissible agent. Science, 1996, 271:505
2，Simons JN, Leary TP, Dawson GJ, et al. Isolation of novel virus-like sequences associated with human hepatitis. Nat Med, 1995, 1:564
3，Maurizio S, Salvatore B, Giorgio G, et al. Hepatitis G virus infection in hemodialysis patients. Kidney Int, 1997, 51:348
, 百拇医药
4，Kumar H, Naqvi SA, Ahmed A, et al. Hepatitis C virus antibodies in hemodialyzed vs dialyzed patients. JPMA J Pak Med Assoc, 1994, 44:28
5，Pru C, Cuervo C, Ardila M, et al. Hepatitis C transmission unrelated to blood transfusion in hemodialysis patients. J Hepatol, 1994,20:557
(收稿日期：1999-04-26), http://www.100md.com
单位：李体远(广东省深圳市人民医院中心实验室 518020)；戴勇(广东省深圳市人民医院中心实验室 518020)；周伯平(广东省深圳市东湖医院 518020)
关键词：血液透析；庚型肝炎病毒；重叠感染
广东医学000216 【摘要】 目的 探讨庚型肝炎病毒合并其他肝炎病毒在血液透析患者中的感染状况。方法 逆转录-套式聚合酶链反应(RT-nPCR)检测血液透析患者血清HGV RNA， ELISA法检测乙肝两对半及HCV，HDV抗体。结果 80例血透患者中，HGV阳性15例(18.7%)，HCV阳性18例(22.5%)，HBsAg阳性21例(26.2%)，未检出HDV阳性。在15例感染HGV的患者中，7例(46.7%)同时感染其他肝炎病毒，其中与HCV，HBV二重感染者分别为3例和5例，与HCV及HBV三重感染者3例。12例透析工作人员中未检出上述病毒感染。有输血史的33例患者中，HGV，HBV及HCV阳性百分率均显著高于无输血史患者。输血组HGV与HCV的重叠感染率，HGV与HBV，HCV的三重感染率均显著高于非输血组(P<0.05)。各型肝炎病毒的感染率随着透析时间增加均升高，其中HBV各组间比较均差异显著(P<0.05)。HCV透析1～3 a与透析超过5 a相比，差异有显著性(P<0.05)。结论 维持性血液透析患者为HGV高感染人群，HGV及其与HBV和(或)HCV重叠感染的高发生率与输血有关。
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Infection and co-infection of HGV in maintenance hemodialysis patients
Li Tiyuan, Dai Yong, Zhou Boping
(Shenzhen People′s Hospital, Shenzhen 518020)
【Abstract】 Objective To investigate the infection and Co-infection of HGV with other hepatitis viruses and the influence of transfusion and hemodialysis time on viral infection in maintenance hemodialysis patients.Methods Genome RNA of hepatitis G virus (HGV) was amplified in Sera from 80 hemodialysis patients and 12 nurses of dialysis unit using a nested polymerase chain reaction (PCR) assay with specific primers. HBV, HCV and HDV were detected by ELISA method.Results The number of patients with HGV, HBV, HCV and HDV were 15(18.7%),21(26.2%),18(22.5%) and 0, respectively. Of the 15 HGV positive patients, 7(46.7%) were also infected with other hepatitis viruses, 3 with HCV, 5 with HBV, 3 with HBV and HCV. Hepatitis viruses were not detected in dialysis operators. The prevalence of infection and co-infection of HGV with HBV or/and HCV increased significantly in the transfusions group. Conclusion HGV infection is serious in hemodialysis patients. The HGV infection and co-infection with HBV or/and HCV in hemodialysis patients may be related to transfusion.
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【Key words】 Hemodialysis Hepatitis G virus Co-infection
维持性血液透析患者为肝炎病毒感染的高危人群。庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C,以下简称为HGV)为1995～1996年报道的一种肝炎病毒，可经血液或肠道传播[1，2]。有关HGV的致病性、流行病学特征及传播途径等尚缺乏充分认识。我们研究了深圳地区血液透析患者HGV的感染情况，并对其与HBV，HCV及HDV的重叠感染状况进行了探讨。
1 资料与方法
1.1 观察对象 长期维持性血液透析患者80例，其中男43例，女37例；平均年龄49.2(23～78)岁。原发病为慢性肾炎31例，糖尿病肾病9例，高血压肾病5例，其他为梗阻性肾病、肾移植术后排异、肾结核、多囊肾等共计35例。另12例采自血液透析工作人员，均为女性，平均年龄28岁。80例患者按是否输过血或血液制品分为输血组和非输血组。
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1.2 标本采集 空腹抽静脉血，3?000 r/min离心分离血清，置灭菌、具塞一次性塑料试管，-30℃保存备用。
1.3 HGV RNA检测 根据Linnen等[1]报道的HGV/GBV-C基因序列，在5′UTR设计套式PCR引物，序列分别为：P1 5′GGT GGA TGG GTG ATG ACA GGG TTG 3′，P2 5′GGA GCT GGG TGG CCC CAT GCA TTT 3′，P3 5′GGT AGC CAC TAT AGG GTC TTA 3′，P4 5′CAC TGG TCC TTG TCA ACT CGC 3′。其中P1，P2为外引物，P3，P4为内引物，扩增产物长度238 bp。异硫氰酸胍一步法提取血清HGV RNA，以引物P2为逆转录引物将HGV RNA 逆转录为cDNA，分别以P1和P2及P3和P4为外、内引物进行PCR扩增。PCR终产物经10 g/L琼脂糖电泳，溴化乙啶染色，紫外观察，出现238 bp DNA条带者为阳性。
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1.4 HBV，HCV及HDV检测 酶联免疫(ELISA)法检测HBV两对半及HCV，HDV抗体(华美生物工程公司试剂盒)并计算其阳性率；以HBsAg阳性代表HBV感染。
1.5 统计学处理 使用χ2检验，P<0.05视为差异有显著性。
2 结果
2.1 血透患者HGV感染状况及其与HBV，HCV及HDV的关系 80例长期维持性血液透析患者中，HGV阳性15例(18.7%)，HCV阳性18例(22.5%)，HBsAg阳性21例(26.2%)，未检出HDV阳性。在15例感染HGV的患者中，7例(46.7%)同时感染其他肝炎病毒，其中与HCV，HBV二重感染者分别为3例和5例，与HCV及HBV三重感染者3例。对12例血液透析工作人员同时进行了检测，HGV，HBV，HCV及HDV均阴性。
2.2 输血对HGV与HBV，HCV感染的影响 80例患者，按是否输过血或血液制品分为输血组和非输血组。各型肝炎病毒感染的阳性率见表1。与非输血组相比，除HDV外，输血组HGV，HBV及HCV的感染率明显增加，均P<0.05。输血组除HGV与HBV重叠感染率仅有增高的趋势外(P>0.05)，HGV与HCV及HGV与HBV，HCV的感染率均显著高于非输血组，均P<0.05。
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表1 输血对肝炎病毒感染的影响例(%) 组别
例数
HGV
HBV
HCV
HGV+
HBV
HGV+
HCV
HGV+HBV
+HCV
输血组
33
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?11(30.3)
?14(42.4)
?12(30.3)
?3(9.1)
3(9.1)
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非输血组
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4(10.6)
7(14.9)
6(17.0)
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2(4.2)
0(0)
0(0)
与非输血组比较P<0.05
2.3 透析时间对病毒感染的影响 见表2。各型肝炎病毒的感染率随着透析时间增加均升高，其中HBV各组间比较均差异有显著性，P<0.05。HCV透析1～3 a与透析超过5 a相比，差异有显著性，P<0.05。表2 透析时间对病毒感染的影响例(%) 组别
例数
HGV
HBV
HCV
HGV+HBV
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HGV+HCV
HGV+HBV
+HCV
<1 a
8
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6(100)
2(25.0)
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≥1，<3 a
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7(13.2)
7(13.2)△
2(3.8)
3(5.7)
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≥3，<5 a
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3(25.0)
5(41.7)
4(33.3)
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1(8.3)
0(0)
1(8.3)
≥5 a
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2(28.6)
3(14.3)
5(71.4)
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各组相互比较，P<0.05；△ 与透析超过5 a相比较，P<0.05
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HGV与GBV-C的基因序列(86%)及氨基酸序列(96%)均高度同源，国内学者统称其为庚型肝炎病毒。庚肝病毒属黄病毒家族，有一条单股正链RNA分子，不同分离株cDNA长度从9?066～9?395个核苷酸不等。它仅含一个大的开放读框，编码一条蛋白质前体多肽。迄今为止，RT-PCR方法仍然是检测庚肝病毒的“黄金方法”。庚肝病毒可在健康供血者中检出，并可经非肠道传播。维持性血液透析患者均处于终末期尿毒症，存在严重盆血及营养不良状况，免疫功能低下，患者若接受血液制品，重复使用透析器或共用透析机，均易造成肝炎病毒感染。本实验发现，维持性血液透析患者中HGV的感染率高达18.7%，与Sampietro[3]报道的19%HGV/GBV-C感染率相近。12名血液透析工作人员中，则未检出庚肝病毒感染。
以往的研究表明，国内血透患者血清HBV标记物阳性可达68%，HBV-DNA阳性为14%。HCV的感染率则为27%～36%。本实验发现，80例患者中，HBV，HCV的感染率分别为26.2%和22.5%，稍高于HGV。说明，除HDV外，HGV，HBV及HCV均对维持性血液透析患者造成严重危害。
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许多研究提示，输血是引起维持性血液透析患者感染肝炎病毒的主要途径之一。本实验发现，除HDV外，HGV，HBV及HCV的感染率输血组均显著高于非输血组，HGV与HCV及HGV与HBV，HCV的重叠感染率输血组亦显著高于非输血组，均P<0.05。说明，输血同样是引起HGV及其与其他肝炎病毒重叠感染的主要因素。
透析时间对病毒感染的影响与输血类似。本实验中，HBV的感染率随透析时间的增加明显增加，P<0.05。透析1～3 a与透析5 a以上相比，HCV的感染明显增加，P<0.05。HGV的感染以及HGV与HBV和(或)HCV的重叠感染随透析时间的增加，感染的百分率增高，但无统计学意义。我们认为，该结果支持大多数的研究报告，即与HBV，HCV类似，HGV的感染随着透析时间的增加而增加。其原因除输血外，主要是由于重复使用透析器和(或)共用透析机增加感染的机会。有研究证实，透析器复用组HCV的感染率可达60%，而一次性使用组仅17%[4]。类似的研究证实，如果环境被污染，在其他条件相同时，共用透析机使HCV的感染率显著提高[5]。
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参考文献
1，Linnen J, Wages J, Zhang-Keck ZY, et al. Molecular cloning and diseases association of hepatitis G virus: a transfusion transmissible agent. Science, 1996, 271:505
2，Simons JN, Leary TP, Dawson GJ, et al. Isolation of novel virus-like sequences associated with human hepatitis. Nat Med, 1995, 1:564
3，Maurizio S, Salvatore B, Giorgio G, et al. Hepatitis G virus infection in hemodialysis patients. Kidney Int, 1997, 51:348
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4，Kumar H, Naqvi SA, Ahmed A, et al. Hepatitis C virus antibodies in hemodialyzed vs dialyzed patients. JPMA J Pak Med Assoc, 1994, 44:28
5，Pru C, Cuervo C, Ardila M, et al. Hepatitis C transmission unrelated to blood transfusion in hemodialysis patients. J Hepatol, 1994,20:557
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