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编号:10239657
急性心肌梗死血清诊断指标比较
http://www.100md.com 《临床心血管病杂志》 2000年第2期
     作者:苏恩本 张寄南 卞智萍 徐晋丹 杨笛 马文珠

    单位:苏恩本(南京医科大学第一附属医院心血管研究所(南京,210029));张寄南(南京医科大学第一附属医院心血管研究所(南京,210029));卞智萍(南京医科大学第一附属医院心血管研究所(南京,210029));徐晋丹(南京医科大学第一附属医院心血管研究所(南京,210029));杨笛(南京医科大学第一附属医院心血管研究所(南京,210029));马文珠(南京医科大学第一附属医院心血管研究所(南京,210029))

    关键词:心肌梗死;肌酸激酶同工酶类;肌钙蛋白

    临床心血管病杂志000206 摘 要:目的:建立血清磷酸肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)与心肌肌钙蛋白I(cTnI)测定的方法,并通过与CK、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)比较阐述其对急性心肌梗死(AMI)的诊断价值。方法:共观察急性心肌梗死(AMI)65例,陈旧性心肌梗死28例,稳定性心绞痛17例,阵发性室上性心动过速49例。建立CK-MB单克隆抗体吸附测定与cTnI ELISA双夹心测定的方法。同时观察血清CK-MB、cTnI、CK、AST、LDH在AMI等疾患中的变化。结果:血清CK-MB单克隆抗体吸附法与cTnI ELISA双夹心法回收率分别为97%~113%、94.6%~105.6%,标准曲线相关系数分别为0.993与0.990,分别与琼脂糖电泳法及国外实验室检测法对比结果基本一致。AMI胸痛发生后12 h内血清CK-MB的敏感性最高,12~24 h的敏感性与CK、cTnI相当,高于AST和LDH,而24 h后血清cTnI的敏感性最高;血清CK-MB与cTnI对AMI诊断的特异性和诊断有效性明显高于CK、AST、LDH。结论:血清CK-MB单克隆抗体吸附法与cTnI ELISA双夹心法的敏感性和特异性高,CK-MB与cTnI两个指标相互补充,对诊断AMI有重大的临床价值。
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    Comparison of serum markers for diagnosis of

    acute myocardial infarction

    SU En-ben ZHANG Ji-nan BIAN Zhi-ping XU Jin-dan YANG Di MA Wen-zhu

    (The First Affiliated Hospital, Nanjing Medical University, Nanjing 210029)

    Abstract:Objective: The methods of measurements of serum CK-MB and cTnI were established. Their value in diagnosis of acute myocardial infarction (AMI) was evaluated comparing to CK, AST and LDH. Method:65 cases of acute myocardine infarction (AMI),28 cases of old myocardial infarction,17 cases of stable angina pectoric and paroxysm supraventricular tachycardia were observed. Assays of CK-MB based on monoclonal antibodies against CK-MB and cTnI with a double monoclonal "sandwich" ELISA were developed. Changes of serum CK-MB, CK, AST, LDH, cTnI were detected. The values of such serum markers in diagnosis were compared each other. Result: The recovery rate of CK-MB measured with monoclonal antibodies againt CK-MB was 97%~113% while that of cTnI measured with double monoclonal "Sandwich" ELISA was 94.6%~105.6%. The correlation coefficient of standard curve was 0.993 and 0.990 respectively. The highest sensitivity of serum CK-MB was within 12 h after the onset of chest pain in AMI patients. The sensitivity of CK matched with that of cTnI during 12~24 h, but was higher than that of AST and of LDH while after 24 h. The sensitivity of serum cTnI was the highest. Conclusion:The methods of measurements of serum CK-MB and cTnI established by monoclonal antibodies had high sensitivity and specificity. Both CK-MB and cTnI in serum would be good markers for diagnosis of AMI.
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    Key words:Myocardial infarction Creatine kinase isoenzymes Troponin T

    磷酸肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)是诊断急性心肌梗死(AMI)和众多心肌损伤的经典指标。血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)能高特异性地检测心肌细胞损伤,在国内也已初步应用并受到重视〔1〕。国内仍在广泛使用的磷酸肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(AST)与乳酸脱氢酶(LDH)是传统的心肌酶谱指标,有不少缺陷。我们同时观察了血清CK-MB、cTnI、CK、AST与LDH在AMI、陈旧性心肌梗死(OMI)、稳定型心绞痛(SAP)及室上性心动过速患者中的动态变化,比较上述指标对AMI的诊断价值。

    1 对象与方法

    1.1 研究对象

    随机收集1996年2月~1998年4月在我院诊治的AMI 65例(Ⅰ组),男53例,女12例,年龄42~89岁;OMI 28例(Ⅱ组),男20例,女8例,年龄45~85岁;SAP 17例(Ⅲ组),男10例,女7例,年龄41~72岁;阵发性室上性心动过速49例(Ⅳ组),男29例,女20例,年龄14~67岁。
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    1.2 测定方法

    AMI患者采样方法为12 h内每3 h抽血1次,然后于24、36、48、72、96、120、168 h各抽血1次,其余患者采样1~3次,血样本3 d内同时测定血清CK-MB、cTnI、CK、AST与LDH。

    1.2.1 血清CK-MB活性测定:用CK-MB单克隆抗体(美国圣路易华盛顿大学Ladenson教授赠送)包被乳胶小球(D=0.64 cm),5 μg/只,1%牛血清白蛋白阻断后加0.02%叠氮钠,4℃保存备用。取待测血清100 μl,放置包被的乳胶小球1只,37℃下反应30 min,特异地吸附血清中的CK-MB。取出乳胶小球清洗后与CK基质反应,37℃下轻摇30 min,通过测定反应生成的还原型辅酶Ⅱ (NADPH)在波长340 nm的吸光度,以标准CK-MB(本室按Grase方法提纯获得)为对照计算待测血清中的CK-MB活性值。本院献血员、部分学生72例,男30例,女42例,平均年龄26.6岁,95%可信限及偏值分析获参照值范围为血清CK-MB<10 u/L,血清CK-MB>10 u/L为阳性。
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    1.2.2 血清cTnI定量测定:改良Boder等夹心ELISA法〔2〕,用抗人心肌cTnI单克隆抗体2B 1.9为第一抗体包被96孔酶联板,加待测血清后再用生物素标记的2F 6.6为第二抗体,形成双夹心,用碱性磷酸酶系统显色,波长405 nm阅读,每次检测均置标准抗原人cTnI 0~100 ng/ml不同浓度作定量参照,阳性和阴性标准进行质控。抗人心肌cTnI单克隆抗体(Ladenson教授赠送)专用于研究,与CK-MB一样获参照值范围为<7 μg/L,血清cTnI>7 μg/L为阳性。

    1.2.3 CK、AST、LDH测定:本院检验科自动生化仪Olympus AU 800型测定。参照值范围为CK<110 u/L,AST<45 u/L,LDH<240 u/L。

    1.3 统计学处理

    数据以±s表示,两组间比较采用配对t检验。
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    2 结果

    2.1 CK-MB单克隆抗体吸附法有关参数

    加入CK-MB标准品5、25、50、75、100、125 u/L得标准曲线相关系数(r)=0.993。在1份CK-MB为21 u/L的血清标本中,分别加入12.5 u/L和50 u/L的CK-MB标准,测得CK-MB的回收率分别为97%与113%。加入CK-MM 6 700 u/L、CK-BB 7 500 u/L按上述方法测定,测得OD 340 nm读数与空白对照无显著性差异(P>0.05),表明CK-MB单克隆抗体与CK-MM、CK-BB无交叉反应。组内(n=10)CV为1.2%~5.3%,组间CV为13.2%~18.7%。与琼脂糖电泳法对比,60例阳性血清标本经琼脂糖电泳,均有CK-MB特异条带。稳定性:同一批包被的乳胶小球置于含0.02%叠氮钠的TBS(pH=7.2)缓冲液保存,相隔8个月的测定结果,经统计学分析无显著性差异(P>0.05)。
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    2.2 cTnI ELISA测定有关参数

    加入cTnI抗原标准品6.25、12.5、25、50、100 ng/ml得标准曲线r=0.990。添加和回收率为94.6%~105.6%。重复试验差值小于8.7%,血清储存在-20℃状态下1个月cTnI浓度不变。用横纹肌匀浆上清代替血清反应,其cTnI为0,心肌匀浆上清(蛋白含量为17.2 g/L)稀释1万倍后其测定值为42.0 μg/L。10份标本送美国Landenson实验室用Stratus自动分析仪检测,Stratus结果比本室高,阳性与阴性两者相符。

    2.3 CK-MB、cTnI、CK、AST与LDH对AMI的诊断价值

    65例AMI患者血清CK-MB、CK、AST、LDH和cTnI胸痛后不同时间段的敏感性比较见表1。

    表1 65例AMI患者血清CK-MB、CK、AST、LDH和cTnI胸痛后不同时间段的敏感性比较 %(例/例)
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    胸痛后不同时间段(h)

    3~6

    6~9

    9~12

    12~24

    24~48

    48~96

    96~120

    120~168

    CK-MB

    58.81)

    (10/17)
, 百拇医药
    81.32)

    (13/16)

    94.32)

    (33/35)

    94.02)

    (47/50)

    77.23)

    (44/57)

    39.14)

    (9/23)

    12.54)
, 百拇医药
    (2/16)

    05)

    (0/14)

    CK

    40.0

    (6/15)

    68.7

    (11/16)

    90.3

    (28/31)

    93.0

    (40/43)

, 百拇医药     79.5

    (35/44)

    40.0

    (8/20)

    14.3

    (2/14)

    0

    AST

    13.3

    (2/15)

    31.3

    (5/16)

    77.4
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    (24/31)

    86.0

    (37/43)

    63.6

    (28/44)

    35.0

    (7/20)

    7.1

    (1/14)

    0

    LDH

    0

    12.5
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    (2/16)

    29.0

    (9/31)

    48.8

    (21/43)

    75.0

    (33/44)

    90.0

    (18/20)

    57.1

    (8/14)

    15.4

    (2/13)
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    cTnI

    35.3

    (6/17)

    75.0

    (12/16)

    85.7

    (30/35)

    96.02)

    (48/50)

    94.7

    (54/57)

    91.3
, 百拇医药
    (21/23)

    81.3

    (13/16)

    7.1

    (1/14)

    ()内为相应时间段内阳性例数/检测例数,在同一时间段内,1)与CK、AST、LDH、cTnI比,2)与AST、LDH比,3)与cTnI比,4)与LDH、cTnI比,5)与LDH比均P<0.05

    通过血清CK-MB、CK、AST、LDH和cTnI在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组患者中的阳性与阴性例数,分别计算它们诊断AMI的特异性、阳性预测值、阴性预测值和有效性,结果见表2。
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    表2 血清CK-MB、CK、AST、LDH和cTnI诊断AMI的特异性和预测值 %

    CK-MB

    CK

    AST

    LDH

    cTnI

    特异性

    97.8

    74

    88

    81

    98.9
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    阳性预测值

    97

    91

    95

    94

    98.7

    阴性预测值

    99

    77

    42

    35

    100

    诊断有效性
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    98.1

    88

    60

    60

    99.4

    特异性=Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ组中阴性例数/Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ组中总例数×100%。Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ组中:阳性(或阴性)预测值=肯定阳性(阴性)例数/〔(肯定阳性(阴性)例数+假阳性(阴性)例数〕×100%,诊断有效性=(肯定阳性例数+肯定阴性例数)/(全部阳性例数+全部阴性例数)×100%

    3 讨论

    CK-MB测定的方法多种多样,新的CK-MB单克隆抗体吸附法测定CK-MB比常规CK-MB活性测定能早1~2 h诊断AMI〔3〕,特别对胸痛发生后4~6 h的患者尤为重要,对AMI的早期准确诊断与尽早获得溶栓治疗有重要意义。
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    cTnI是近几年来出现的反映心肌损伤的高特异性指标,肌钙蛋白Ⅰ(TnI)分布在心肌与骨骼肌内,cTnI仅存在于心肌内,制备高特异性cTnI单克隆抗体测定cTnI能精确地反映心肌细胞损伤的程度。文献中报道cTnI在AMI胸痛发生后4~6 h开始升高,16 h达到高峰,受损心肌细胞内的cTnI有一较长的释放时间,在AMI发生5~7 d时仍能通过对血清cTnI的测定进一步明确诊断〔1〕

    本文观察65例AMI患者胸痛后血清CK-MB开始升高时间比CK、AST、LDH、cTnI早,且12 h内的敏感性超过上述其他指标;12~24 h内血清cTnI的敏感性与CK-MB、CK相当,高于AST、LDH;24 h后血清cTnI的敏感性明显比CK-MB、CK、AST高,也稍高于LDH。血清CK-MB与cTnI对诊断AMI的特异性、阴性预测值和诊断有效性均明显高于CK、AST与LDH(均P<0.01)。

    综上所述,单克隆抗体吸附法测定血清CK-MB与ELISA双夹心法测定cTnI有很高的敏感性和特异性,且操作简便,不需特殊设备。CK-MB
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    和cTnI两个指标能互相补充,明显优于传统的心肌酶谱指标,目前被认为是诊断AMI实验室指标中的最佳组合〔4〕,适于国内进一步推广应用。

    参考文献:

    1 Geza S B,Sharon P,Yvonne L,et al.Development of monoclonal antibodies for an assay of cardiac troponin-Ⅰ and preliminary results in suspected cases of myocardial infarction.Clin Chem,1992,38:2203~2214

    2 张寄南,杨国平,苏恩本,等.血清肌钙蛋白Ⅰ诊断急性心肌梗塞的研究.中华心血管病杂志,1997,25:379~382

    3 Trimmis A D.Will serum enzymes and other proteins find a clinical application in the early diagnosis of myocardial infarction?Br Heart J,1994,4:309~310

    4 Adams J E,Schechtman K B,Landt Y,et al.Comparable detection of acute myocardial infarction by creatine kinase MB isoenzyme and cardiac troponin I.Clin Chem,1994,40:1291~1295

    收稿日期:1999-01-06

    修稿日期:1999-07-28, 百拇医药