HBV-STF对小白鼠T淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶的影响
作者：黄清松 李红枝 林元藻 曾繁涛
单位：黄清松 李红枝 林元藻(广东药学院生物技术研究室，广东广州 510224)；曾繁涛(深圳市福田区人民医院)
关键词：乙型肝炎；病毒；特异性转移因子；T淋巴细胞；酸性α-醋酸萘酯酶
广东药学院学报000213
摘 要 报道在小白鼠腹腔注射HBV-STF，然后检测小白鼠T淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)，结果显示：实验组小白鼠T淋巴细胞ANAE阳性率显著高于对照组，表明HBV-STF能够显著提高小白鼠T淋巴细胞的免疫功能。
中图号 R292-33 文献标识码:A
文章编号:1006-8783(2000)02-0118-02
, http://www.100md.com
正常机体中各T淋巴细胞亚群相互作用，维持着机体正常的免疫功能。当不同T淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时，就可导致免疫功能紊乱，并可发生一系列的病理变化。目前，越来越多的研究表明，T淋巴细胞亚群在各类临床疾病如自身免疫性疾病、免疫缺陷病、再生障碍性贫血、病毒感染、恶性肿瘤等中都有异常改变。因此，T淋巴细胞亚群的数量和功能的检测对控制这些疾病的发生、发展，了解疾病的发生机理及指导临床治疗都有极其重要的意义。
小白鼠T淋巴细胞胞浆内含有酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)，在弱酸性(pH5.8)条件下能使α-醋酸萘酯水解成醋酸和α-萘酚，后者与六偶氮副品红偶联，生成不溶的偶氮副品红萘酚的红色沉淀物，沉积在T淋巴细胞胞浆内酯酶所在的位置，呈现单一的或散在的红色点块或颗粒[1]。在光镜下计数ANAE阳性细胞数。
1 材料和方法
1.1 材料
, http://www.100md.com
乙型肝炎病毒特异性转移因子(HBV-STF)，由本室研制[2]；健康小白鼠，体重15～25g，36只，雌雄各半；试剂：PBS液；ρ=2%副品红液；ρ=4%亚硝酸钠溶液；六偶氮副品红液；φ2%=α-醋酸萘酯液；孵育液；复染液。
1.2 方法
1.2.1 将小白鼠随机分成3组，即HBV-STF实验组，生理盐水对照组，正常对照组。前2组每天分别在小白鼠腹腔注射HBV-STF、灭菌生理盐水各0.5 mL，连续10 d。
1.2.2 淋巴细胞的分离 最后一次注射后4 h从小白鼠心脏取血1 mL，用沉降法分离淋巴细胞[3]。
1.2.3 T淋巴细胞的提取 用尼龙纤维法提取T淋巴细胞[3]。
, http://www.100md.com 1.2.4 涂片和孵育 以T淋巴细胞液涂片，涂片晾干后浸于7 孵育液中孵育3 h，用蒸馏水充分冲洗，冲净玻片上的沉淀物。
1.2.5 复染和镜检 用复染液复染20 min，晾干后镜检200个T淋巴细胞，以胞浆边缘胞浆内含有一个至数个棕红色颗粒或斑块为ANAE阳性淋巴细胞，胞浆内无红色颗粒者为ANAE阴性细胞，计算ANAE阳性细胞百分率。
2 实验结果 见表1。
表1 HBV-STF 对小白鼠T淋巴细胞酸性
α-醋酸萘酯酶的影响(
±s；n=12) 组 别
ANAE阳性细胞数
ANAE阳性率(%)
, http://www.100md.com
实验组
157.83±8.13
78.92±3.89*
生理盐水组
86.00±5.21
42.92±2.65
正常对照组
84.42±5.50
42.21±2.75
*与生理盐水对照组和正常对照组比较P<0.053 讨论
转移因子(TF)是指存在于白细胞中的一种可透析的免疫活性物质，含有磷酸二肽或RNA-复合物，分子量<5000，没有免疫原性，具有安全无毒的优点，长期使用不会引起过敏反应。TF是细胞免疫调节剂，当进入受体后，能很快激活T细胞，使其处于抗原反应状态，一般在18～24 h左右就可发生对相应抗原的反应，其反应性可持续较长时间，达数月至1年以上。TF转移的细胞免疫具有抗原特异性[5,6]，这就为针对某种抗原的特异性转移因子治疗某些慢性感染性疾病打下基础。乙型肝炎病毒特异性转移因子(HBV-STF)能提高人体抗乙肝病毒的特异性细胞免疫功能和增强非特异免疫作用，且其作用时间可达一年之久，通过增强人体免疫功能，清除受感染并有病毒复制的肝细胞，改善肝功能和全身状态，从而达到治愈。因此，对HBV-STF的生化特性、特异活性测定及免疫调节机理的进一步研究就显得很有必要。
, 百拇医药
参考文献
[1]李影林:中华医学检验全书[M].北京:人民卫生出版社，1996.2208.
[2]林元藻，赵爱平，陈耕夫,等. 乙型肝炎病毒特异性转移因子的制备及某些性质的研究[J].广东药学院学报，1995.(11)4：240.
[3]薛彬.免疫毒理学实验技术[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1995.7.
[4]薛彬.免疫毒理学实验技术[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1995.10.
[5]Rummer B，Foster LG.Immune Regulators in Transfer Factor[M].New York:Academic Press，1979.27.
[6]Li Zailian. Research and application of transfer factor and DLE. Edited by Huo Baolai[M].Beijing:Xue Yuan Press，1989.216.
(收稿日期 2000-03-02), 百拇医药
单位：黄清松 李红枝 林元藻(广东药学院生物技术研究室，广东广州 510224)；曾繁涛(深圳市福田区人民医院)
关键词：乙型肝炎；病毒；特异性转移因子；T淋巴细胞；酸性α-醋酸萘酯酶
广东药学院学报000213
摘 要 报道在小白鼠腹腔注射HBV-STF，然后检测小白鼠T淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)，结果显示：实验组小白鼠T淋巴细胞ANAE阳性率显著高于对照组，表明HBV-STF能够显著提高小白鼠T淋巴细胞的免疫功能。
中图号 R292-33 文献标识码:A
文章编号:1006-8783(2000)02-0118-02
, http://www.100md.com
正常机体中各T淋巴细胞亚群相互作用，维持着机体正常的免疫功能。当不同T淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时，就可导致免疫功能紊乱，并可发生一系列的病理变化。目前，越来越多的研究表明，T淋巴细胞亚群在各类临床疾病如自身免疫性疾病、免疫缺陷病、再生障碍性贫血、病毒感染、恶性肿瘤等中都有异常改变。因此，T淋巴细胞亚群的数量和功能的检测对控制这些疾病的发生、发展，了解疾病的发生机理及指导临床治疗都有极其重要的意义。
小白鼠T淋巴细胞胞浆内含有酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)，在弱酸性(pH5.8)条件下能使α-醋酸萘酯水解成醋酸和α-萘酚，后者与六偶氮副品红偶联，生成不溶的偶氮副品红萘酚的红色沉淀物，沉积在T淋巴细胞胞浆内酯酶所在的位置，呈现单一的或散在的红色点块或颗粒[1]。在光镜下计数ANAE阳性细胞数。
1 材料和方法
1.1 材料
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乙型肝炎病毒特异性转移因子(HBV-STF)，由本室研制[2]；健康小白鼠，体重15～25g，36只，雌雄各半；试剂：PBS液；ρ=2%副品红液；ρ=4%亚硝酸钠溶液；六偶氮副品红液；φ2%=α-醋酸萘酯液；孵育液；复染液。
1.2 方法
1.2.1 将小白鼠随机分成3组，即HBV-STF实验组，生理盐水对照组，正常对照组。前2组每天分别在小白鼠腹腔注射HBV-STF、灭菌生理盐水各0.5 mL，连续10 d。
1.2.2 淋巴细胞的分离 最后一次注射后4 h从小白鼠心脏取血1 mL，用沉降法分离淋巴细胞[3]。
1.2.3 T淋巴细胞的提取 用尼龙纤维法提取T淋巴细胞[3]。
, http://www.100md.com 1.2.4 涂片和孵育 以T淋巴细胞液涂片，涂片晾干后浸于7 孵育液中孵育3 h，用蒸馏水充分冲洗，冲净玻片上的沉淀物。
1.2.5 复染和镜检 用复染液复染20 min，晾干后镜检200个T淋巴细胞，以胞浆边缘胞浆内含有一个至数个棕红色颗粒或斑块为ANAE阳性淋巴细胞，胞浆内无红色颗粒者为ANAE阴性细胞，计算ANAE阳性细胞百分率。
2 实验结果 见表1。
表1 HBV-STF 对小白鼠T淋巴细胞酸性
α-醋酸萘酯酶的影响(
±s；n=12) 组 别ANAE阳性细胞数
ANAE阳性率(%)
, http://www.100md.com
实验组
157.83±8.13
78.92±3.89*
生理盐水组
86.00±5.21
42.92±2.65
正常对照组
84.42±5.50
42.21±2.75
*与生理盐水对照组和正常对照组比较P<0.053 讨论
转移因子(TF)是指存在于白细胞中的一种可透析的免疫活性物质，含有磷酸二肽或RNA-复合物，分子量<5000，没有免疫原性，具有安全无毒的优点，长期使用不会引起过敏反应。TF是细胞免疫调节剂，当进入受体后，能很快激活T细胞，使其处于抗原反应状态，一般在18～24 h左右就可发生对相应抗原的反应，其反应性可持续较长时间，达数月至1年以上。TF转移的细胞免疫具有抗原特异性[5,6]，这就为针对某种抗原的特异性转移因子治疗某些慢性感染性疾病打下基础。乙型肝炎病毒特异性转移因子(HBV-STF)能提高人体抗乙肝病毒的特异性细胞免疫功能和增强非特异免疫作用，且其作用时间可达一年之久，通过增强人体免疫功能，清除受感染并有病毒复制的肝细胞，改善肝功能和全身状态，从而达到治愈。因此，对HBV-STF的生化特性、特异活性测定及免疫调节机理的进一步研究就显得很有必要。
, 百拇医药
参考文献
[1]李影林:中华医学检验全书[M].北京:人民卫生出版社，1996.2208.
[2]林元藻，赵爱平，陈耕夫,等. 乙型肝炎病毒特异性转移因子的制备及某些性质的研究[J].广东药学院学报，1995.(11)4：240.
[3]薛彬.免疫毒理学实验技术[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1995.7.
[4]薛彬.免疫毒理学实验技术[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1995.10.
[5]Rummer B，Foster LG.Immune Regulators in Transfer Factor[M].New York:Academic Press，1979.27.
[6]Li Zailian. Research and application of transfer factor and DLE. Edited by Huo Baolai[M].Beijing:Xue Yuan Press，1989.216.
(收稿日期 2000-03-02), 百拇医药