HPLC法比较不同给药方式对Graves病的疗效
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山东医科大学学报 2000年第2期第38卷 论著
作者：孙怀玉 朱晨 崔小平
单位：山东省医学科学院
关键词：甲状腺功能亢进症；氢化可的松；甲琉咪唑；色谱法；高压液相
山东医科大学学报000238摘 要：目的：为了比较不同给药方式对Graves'病的疗效。方法：将20例患有Graves'病的患者按治疗方式分为外敷组、口服组、手术组3组〔前两组术前均以他巴唑(MMI，40mg/d)和氢化可的松(HC，40mg/d)治疗7天以上〕。以HPLC比较了3组患者甲状腺、血清中MMI及HC的含量。结果：外敷组甲状腺中MMI及HC浓度均高于口服组，分别是后者的1.17和2.64倍；外敷组血清中MMI及HC浓度均明显低于口服组。对3组患者的疗效及副作用也同时进行了比较，结果外敷组的疗效明显高于口服组，且副作用较小。结论：外敷法给药是一种理想的治疗Graves'病的方式。
分类号：R581.1；R977.1；Q503 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1000-0496(2000)02-0218-03
COMPARISON OF THE THERAPEUTIC EFFECTS ON PATIENTS WITH GRAVES' DISEASE BETWEEN DIFFERENT MODES OF MEDICATION BY HPLC
SUN Huai-yu,ZHU Chen,CUI Xiao-ping
(Shandong Academy of Medical Sciences)
Abstract：Objective: To compare the therapeutic effects on patients with Graves' disease between differant modes of medication. Methods: 20 patients with Graves' disease were divided into three groups for treatment: top application,oral administration and operation (Both the first and second group were treated with methimazole (MMI 40mg/d) and hydrocortison (HC 40mg/d) for at least 7 days before operation). The concentration of MMI and HC in the serum and thyroid of patients in the three groups was compared by HPLC. Results: The concentration of MMI mhd HC in the thyroid of the first group of patients was 1.17 and 2.64 times higher than that of the second group while the concentration of MMI and HC in the serum of the patients in the first group was obviously lower than that of the second group. The effects and side-effects were also compared. The effect of medication by top application was better, with fewer side effects, than thai of the oral administration of drugs. Conclusion:External application of drugs is an ideal mode of drag administration for Graves' disease.
, 百拇医药
Keywords：Hyperthyroidism;Hydrocortisone;Methimazole;Chromatography;high pressure liquid 他巴唑(MMI)和氢化可的松(HC)是治疗甲状腺机能亢进(Graves')的常用药物。常规的用药方式为每日多次口服[1，2]。近年来，采用颈前涂敷给药的方式也可治疗Graves'病。我们采用HPLC法对Graves'患者术后甲状腺及血清中的药物浓度进行了比较，发现颈前涂敷疗效好于口服组。
1材料与方法
1.1病例选择由山东省立医院提供的Graves'病患者术后甲状腺组织和血清样品共20例，其中男10例，女1例，平均(34.6±11.7)岁，患者肝肾功能均正常，未用影响他巴唑(MMI)和氢化可的松(HC)含量的药物。
1.2给药及取标本方法病例共分为3组。外敷组：采用颈前涂敷抗甲状腺乳膏(ATC，其有效成分为他巴唑和氢化可的松)，每日3次，MMI与HC含量均为12.5mg/次；口服组：口服MMI与HC，MMI早、午各为10mg/次、晚20mg/次，HC早、午各为20mg/次；手术组：只进行手术治疗。前两组均为连续用药7天以上，术前3～5h停药。3组均术中取甲状腺组织和血，用低温冰箱-20℃冷冻储存。
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1.3HPLC法测定MMI含量[3]。
色谱条件：日立公司产635A型高效液相色谱仪，C8柱(大连化物所产，300mm×4.6mm，粒度为5μm)，柱温为室温，流动相为甲醇-0.05%醋酸(1：99，v/v)，检测波长254nm，灵敏度O.02AUFS，流速1.0ml/min，以峰高外标法进行分析，数据由岛津产C-R2AX型数据处理机记录、处理。该方法最低检出限为0.01mmol/L。
1.3.1标准曲线的绘制精确称取MMI标准品(山东省德州制药厂提供)，以蒸馏水配成储备液，并将储备液分别稀释成20.0、40.0、60.0、80，0mg/L的溶液，进相同体积分析，以峰高对浓度作图呈良好的线性关系，相关系数r为0.9999，回归方程为y＝1037.3x+138.07。
1.3.2样品预处理取3.0g甲状腺组织匀浆或2.0ml血清，按1：1(v/v)加入10%高氯酸振荡，沉淀蛋白，3500r/min离心10min，取上清液以流动相定容10.0ml进样分析。
, 百拇医药
1.4HPLC法测定HC含量[4]
1.4.1色谱条件日立公司产635A型高效液相色谱仪，C18柱(天津化学试剂二厂产C18固定相自装，250mm×4.6mm，粒度为10μm)，柱温为室温，流动相为甲醇-醋酸盐缓冲液(pH＝3.0，O.01mol)(64：36，v/v)，检测波长254nm，灵敏度0.02AUFS，流速1.0ml/min，以峰高外标法进行分析，数据由岛津产C-R2AX型数据处理机记录、处理。该方法最低检出限为0.00036mmol/L。
1.4.2标准曲线的绘制精确称取HC标准品(山东省新华制药厂提供)，以蒸馏水配成储备液，并将储备液分别稀释成20.0、40.0、60.0、80.0mg/L的溶液，进相同体积分析，以峰高对浓度作图呈良好的线性关系，相关系数r为0.9990，回归方程为y＝2699.7x+31.95。
l.4.3样品预处理取3.0g甲状腺组织匀浆或2.0ml血清，加入3.0ml乙酸乙酯，振荡提取30s，3000r/min离心10min，取上清液于37℃水浴中以N2吹干，再以流动相定容10.0ml进样分析。
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2结果
2.1色谱图甲状腺组织中的MMI色谱图及血清中HC的色谱图见图1，图2。
图1甲状腺组织中MMI色谱图
Fig.1ThechromatogramofMMIinthyroid
图2血清中HC色谱图
Fig.2ThechromatogramofHCinserum.
2.2MMI和HC含量结果见表1
表1MMI和HC含量平均值(±s)
2.3样品回收率实验取上述实验用甲状腺和血清样品各3份，按实验步骤分别进行测定，得出MMI含量，然后再取上述样品分别加入一定量的标准品，同样按实验步骤进行分析，得出其中MMI的含量，从而取得回收率。表2所示为MMI在甲状腺组织与血清中的回收率。
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表2MMI在甲状腺组织与血清中的回收率
按上述方法对HC同样做了回收率实验，其在甲状腺组织中的平均回收率为87%，在血清中的平均回收率为96%。
2.4不同给药方式的疗效比较以二三碘甲状腺原氨酸总量(TT3)和甲状腺素总量(TT4)同时正常作为甲状腺功能恢复正常的指标，各组患者治疗前病情及治疗结果见表3。
表3各组临床疗效及副作用情况比较
3讨论
3.1长期以来，人们一直认为MMI的血浆半衰期较短，因此往往采取每日至少服3次药的方法以达到维持有效血药浓度的目的。但近年研究表明，MMI在甲状腺内的半衰期较血中长，甲状腺内MMI的浓度可维持26小时以上[5，6]，而MMI的疗效取决于甲状腺内MMI的浓度，所服的MMI最终只有进入甲状腺内才能发挥治疗作用。本结果表明，外敷组甲状腺内的MMI与HC浓度分别是口服组的1.17倍和2.64倍，两组差异显著(P<0.01，P<0.001)。证明经皮给药可提高甲状腺内的药物浓度并维持较长时间以提高疗效。而由表3可以看出，外敷组T3T4降至正常的天数仅为(14.2±9.0)天，而口服组一般则需要(44.6±23.7)天，进一步证明了这一结论。
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3.2MMI的副作用主要表现为白细胞减少、肝损伤等，由表3知外敷组发生白细胞减少及肝损伤的例数均为零，口服组则分别为10.7%与5.4%。我们的结果表明，外敷组血清中MMI的含量低于方法检出限，HC的含量仅与体内的内源性HC的含量相当(与手术组的HC含量相近)，均低于口服组，说明外敷组所敷的MMI及HC极少进入血循环，而是直接扩散吸收进入甲状腺组织以达到直接治疗的目的，这同时也解释了该种治疗方法疗效明显、副作用较小的原因。
基金项目：山东省科委资助课题
参考文献：
[1]Shiroozu A,Okamura K,Ikenoue H,et al.Treatment of hyperthyroidisim with a small single daily dose of methimazole[J].J Clin Endocrinol Metab,1986,63:125
, 百拇医药
[2]Mashio Y.Treatment of hyperthyroidisim with a small single daily dose of methimazole[J].Acta Endocrinol,1988,119:139
[3]稽扬，李国秀，祝汇江，等.应用高效液相色谱法分析血清中甲琉咪唑浓度[J].药物分析杂志，1990，10(1)：48
[4]秦永平，梁德荣，曾经泽，等.反相HPLC法测定血浆中的氢化可的松和甲基强的松[J].华西医科大学学报，1991，22(3)：270
[5]Jansson R,Danleberg P A,Johansson H,et al.Intrathyroidal concentrations of methimazole in patients with Graves' disease[J].J Clin Endocrinol Metab,1983,57:129
[6]Okuno A,Lindstrom B.Pharmacokinetics of methimazole in children and intrathyroidal concentrations[J].Acta Endocrinol,1987,115:112
收稿日期：1998-11-16, 百拇医药
单位：山东省医学科学院
关键词：甲状腺功能亢进症；氢化可的松；甲琉咪唑；色谱法；高压液相
山东医科大学学报000238摘 要：目的：为了比较不同给药方式对Graves'病的疗效。方法：将20例患有Graves'病的患者按治疗方式分为外敷组、口服组、手术组3组〔前两组术前均以他巴唑(MMI，40mg/d)和氢化可的松(HC，40mg/d)治疗7天以上〕。以HPLC比较了3组患者甲状腺、血清中MMI及HC的含量。结果：外敷组甲状腺中MMI及HC浓度均高于口服组，分别是后者的1.17和2.64倍；外敷组血清中MMI及HC浓度均明显低于口服组。对3组患者的疗效及副作用也同时进行了比较，结果外敷组的疗效明显高于口服组，且副作用较小。结论：外敷法给药是一种理想的治疗Graves'病的方式。
分类号：R581.1；R977.1；Q503 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1000-0496(2000)02-0218-03
COMPARISON OF THE THERAPEUTIC EFFECTS ON PATIENTS WITH GRAVES' DISEASE BETWEEN DIFFERENT MODES OF MEDICATION BY HPLC
SUN Huai-yu,ZHU Chen,CUI Xiao-ping
(Shandong Academy of Medical Sciences)
Abstract：Objective: To compare the therapeutic effects on patients with Graves' disease between differant modes of medication. Methods: 20 patients with Graves' disease were divided into three groups for treatment: top application,oral administration and operation (Both the first and second group were treated with methimazole (MMI 40mg/d) and hydrocortison (HC 40mg/d) for at least 7 days before operation). The concentration of MMI and HC in the serum and thyroid of patients in the three groups was compared by HPLC. Results: The concentration of MMI mhd HC in the thyroid of the first group of patients was 1.17 and 2.64 times higher than that of the second group while the concentration of MMI and HC in the serum of the patients in the first group was obviously lower than that of the second group. The effects and side-effects were also compared. The effect of medication by top application was better, with fewer side effects, than thai of the oral administration of drugs. Conclusion:External application of drugs is an ideal mode of drag administration for Graves' disease.
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Keywords：Hyperthyroidism;Hydrocortisone;Methimazole;Chromatography;high pressure liquid 他巴唑(MMI)和氢化可的松(HC)是治疗甲状腺机能亢进(Graves')的常用药物。常规的用药方式为每日多次口服[1，2]。近年来，采用颈前涂敷给药的方式也可治疗Graves'病。我们采用HPLC法对Graves'患者术后甲状腺及血清中的药物浓度进行了比较，发现颈前涂敷疗效好于口服组。
1材料与方法
1.1病例选择由山东省立医院提供的Graves'病患者术后甲状腺组织和血清样品共20例，其中男10例，女1例，平均(34.6±11.7)岁，患者肝肾功能均正常，未用影响他巴唑(MMI)和氢化可的松(HC)含量的药物。
1.2给药及取标本方法病例共分为3组。外敷组：采用颈前涂敷抗甲状腺乳膏(ATC，其有效成分为他巴唑和氢化可的松)，每日3次，MMI与HC含量均为12.5mg/次；口服组：口服MMI与HC，MMI早、午各为10mg/次、晚20mg/次，HC早、午各为20mg/次；手术组：只进行手术治疗。前两组均为连续用药7天以上，术前3～5h停药。3组均术中取甲状腺组织和血，用低温冰箱-20℃冷冻储存。
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1.3HPLC法测定MMI含量[3]。
色谱条件：日立公司产635A型高效液相色谱仪，C8柱(大连化物所产，300mm×4.6mm，粒度为5μm)，柱温为室温，流动相为甲醇-0.05%醋酸(1：99，v/v)，检测波长254nm，灵敏度O.02AUFS，流速1.0ml/min，以峰高外标法进行分析，数据由岛津产C-R2AX型数据处理机记录、处理。该方法最低检出限为0.01mmol/L。
1.3.1标准曲线的绘制精确称取MMI标准品(山东省德州制药厂提供)，以蒸馏水配成储备液，并将储备液分别稀释成20.0、40.0、60.0、80，0mg/L的溶液，进相同体积分析，以峰高对浓度作图呈良好的线性关系，相关系数r为0.9999，回归方程为y＝1037.3x+138.07。
1.3.2样品预处理取3.0g甲状腺组织匀浆或2.0ml血清，按1：1(v/v)加入10%高氯酸振荡，沉淀蛋白，3500r/min离心10min，取上清液以流动相定容10.0ml进样分析。
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1.4HPLC法测定HC含量[4]
1.4.1色谱条件日立公司产635A型高效液相色谱仪，C18柱(天津化学试剂二厂产C18固定相自装，250mm×4.6mm，粒度为10μm)，柱温为室温，流动相为甲醇-醋酸盐缓冲液(pH＝3.0，O.01mol)(64：36，v/v)，检测波长254nm，灵敏度0.02AUFS，流速1.0ml/min，以峰高外标法进行分析，数据由岛津产C-R2AX型数据处理机记录、处理。该方法最低检出限为0.00036mmol/L。
1.4.2标准曲线的绘制精确称取HC标准品(山东省新华制药厂提供)，以蒸馏水配成储备液，并将储备液分别稀释成20.0、40.0、60.0、80.0mg/L的溶液，进相同体积分析，以峰高对浓度作图呈良好的线性关系，相关系数r为0.9990，回归方程为y＝2699.7x+31.95。
l.4.3样品预处理取3.0g甲状腺组织匀浆或2.0ml血清，加入3.0ml乙酸乙酯，振荡提取30s，3000r/min离心10min，取上清液于37℃水浴中以N2吹干，再以流动相定容10.0ml进样分析。
, 百拇医药
2结果
2.1色谱图甲状腺组织中的MMI色谱图及血清中HC的色谱图见图1，图2。
图1甲状腺组织中MMI色谱图
Fig.1ThechromatogramofMMIinthyroid
图2血清中HC色谱图
Fig.2ThechromatogramofHCinserum.
2.2MMI和HC含量结果见表1
表1MMI和HC含量平均值(±s)
2.3样品回收率实验取上述实验用甲状腺和血清样品各3份，按实验步骤分别进行测定，得出MMI含量，然后再取上述样品分别加入一定量的标准品，同样按实验步骤进行分析，得出其中MMI的含量，从而取得回收率。表2所示为MMI在甲状腺组织与血清中的回收率。
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表2MMI在甲状腺组织与血清中的回收率
按上述方法对HC同样做了回收率实验，其在甲状腺组织中的平均回收率为87%，在血清中的平均回收率为96%。
2.4不同给药方式的疗效比较以二三碘甲状腺原氨酸总量(TT3)和甲状腺素总量(TT4)同时正常作为甲状腺功能恢复正常的指标，各组患者治疗前病情及治疗结果见表3。
表3各组临床疗效及副作用情况比较
3讨论
3.1长期以来，人们一直认为MMI的血浆半衰期较短，因此往往采取每日至少服3次药的方法以达到维持有效血药浓度的目的。但近年研究表明，MMI在甲状腺内的半衰期较血中长，甲状腺内MMI的浓度可维持26小时以上[5，6]，而MMI的疗效取决于甲状腺内MMI的浓度，所服的MMI最终只有进入甲状腺内才能发挥治疗作用。本结果表明，外敷组甲状腺内的MMI与HC浓度分别是口服组的1.17倍和2.64倍，两组差异显著(P<0.01，P<0.001)。证明经皮给药可提高甲状腺内的药物浓度并维持较长时间以提高疗效。而由表3可以看出，外敷组T3T4降至正常的天数仅为(14.2±9.0)天，而口服组一般则需要(44.6±23.7)天，进一步证明了这一结论。
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3.2MMI的副作用主要表现为白细胞减少、肝损伤等，由表3知外敷组发生白细胞减少及肝损伤的例数均为零，口服组则分别为10.7%与5.4%。我们的结果表明，外敷组血清中MMI的含量低于方法检出限，HC的含量仅与体内的内源性HC的含量相当(与手术组的HC含量相近)，均低于口服组，说明外敷组所敷的MMI及HC极少进入血循环，而是直接扩散吸收进入甲状腺组织以达到直接治疗的目的，这同时也解释了该种治疗方法疗效明显、副作用较小的原因。
基金项目：山东省科委资助课题
参考文献：
[1]Shiroozu A,Okamura K,Ikenoue H,et al.Treatment of hyperthyroidisim with a small single daily dose of methimazole[J].J Clin Endocrinol Metab,1986,63:125
, 百拇医药
[2]Mashio Y.Treatment of hyperthyroidisim with a small single daily dose of methimazole[J].Acta Endocrinol,1988,119:139
[3]稽扬，李国秀，祝汇江，等.应用高效液相色谱法分析血清中甲琉咪唑浓度[J].药物分析杂志，1990，10(1)：48
[4]秦永平，梁德荣，曾经泽，等.反相HPLC法测定血浆中的氢化可的松和甲基强的松[J].华西医科大学学报，1991，22(3)：270
[5]Jansson R,Danleberg P A,Johansson H,et al.Intrathyroidal concentrations of methimazole in patients with Graves' disease[J].J Clin Endocrinol Metab,1983,57:129
[6]Okuno A,Lindstrom B.Pharmacokinetics of methimazole in children and intrathyroidal concentrations[J].Acta Endocrinol,1987,115:112
收稿日期：1998-11-16, 百拇医药