国产青霉素V钾胶囊剂的药代动力学和生物利用度
作者：任进民 蒋俊康 田彩锁 刘汝俊 王淑梅
单位：任进民 蒋俊康 田彩锁 王淑梅(河北医科大学第二医院药剂科，石家庄，050000)；刘汝俊(河北医科大学，石家庄，050017)
关键词：青霉素V钾；药代动力学；生物利用度
中国临床药理学杂志000215 摘要 本文用青霉素V钾胶囊剂与进口青霉素V钾片剂进行人体药代动力学和生物利用度研究。选择12名健康男性志愿者，采用自身交叉对照试验方法，分别单剂量一次口服青霉素V钾500mg，青霉素V钾血药浓度用微生物法测定，以枯草芽孢杆菌(63501)作为检定菌。青霉素V钾血药浓度--时间数据用3p87程序进行自动拟合并求算药代动力学参数，用NDST程序对AUC、Tmax和Cmax的实测值作生物等效性检验。结果：口服青霉素V钾片剂和胶囊剂两种制剂后青霉素V钾药代动力学参数分别为：T1/2:31.27±11.12min,27.57±6.46min(P>0.05);Cmax:9.14±3.07mg·L-1,9.69±2.66mg·L-1(P>0.05)。青霉素V钾的相对生物利用度为97.99%±13.44%。结论：青霉素V钾的AUC、Tmax和Cmax经配对t检验、双单侧t检验、方差分析表明国产青霉素V钾胶囊剂与进口青霉素V钾片剂为等效制剂。
, http://www.100md.com
Pharmacokinetics and Relative Bioavailability of
Penicillin V Capsule in Healthy Volunteers
REN Jin-Min,JIANG Jun-Kang,TIAN Cai-Suo,WANG SHu-Mei
( Department of pharmacy,The Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang,050000)
LIU Ru-Jun
(Hebei Medical University,Shijiazhuang,050017)
, 百拇医药
Abstract The pharmacokinetics and bioavailability ofpenicillin V were conducted in 12 Chinese healthy volunteers after a single oral dose(500mg)of home made penicillin V cppsule compared with penicillin V tablet imported.In this paper,microbiological assay was used,plasma penicillin V concentration was determined any using Bacillus subtilis(CMCC 63501)as test strain.The concentration time curves of penicillin V were fitted to one compartment model estimated by 3p87 program. Statistical software's NDST were used for the calculation of results.The mean terminal half-lives(T1/2) of the two preparations, tablet and capsule, were 31.27±11.12 and 27.57±6.46 respectively min(P >0.05),and the averages of the peak plasma levels(Cmax) were 9.14±3.07 and 9.69±2.66μg·ml-1respectively (P >0.05).The relative bioavailability of penicillin V capsule compared with tablet was 97.99±13.44%.The results showed that the two preparations were bioequivalent.
, 百拇医药
Key words penicillin V;pharmacokinetics;bioavailability;microbiological assay
青霉素V钾为天然发酵产生的口服青霉素，口服吸收良好，是目前临床治疗轻、中度敏感细菌感染的常用药物之一[1]。国外已有片剂、干糖浆等剂型上市，国内现研制出青霉素V钾胶囊剂。青霉素V钾的含量测定方法国外报道有微生物法和HPLC法[2,3]，本文采用微生物法，以枯草芽孢杆菌作检定菌测定青霉素V钾血药浓度，对国产的青霉素V钾胶囊剂的药代动力学和相对生物利用度进行研究。
材料与方法
1. 材料
1.1 药品与试剂
青霉素V钾片(参比制剂)，美国Biocraft厂生产，批号:960521，每片含青霉素V 250mg。青霉素V钾胶囊剂(被试制剂)张家口市制药总厂研制，批号:981122，每粒含青霉素V 250mg。青霉素V钾标准对照品，中国药品生物制品检定所提供，(含量99.4%)。抗生素Ⅰ号培养基:批号:970516，检定菌:枯草芽孢杆菌(63501)，批号:63501-24，中检所(国家药品监督局，药品、生物制品检定所)提供。
, 百拇医药
1.2 仪器
YZ-875医用净化工作台，303-4B型隔水式培养箱，LDZ5-2普通离心机，水平调节台(河北太行机械厂提供)，玻璃大方盘(华北制药集团研究所提供)。
2. 血浆青霉素V钾的测定方法
用井式琼脂平板法测定青霉素V钾的浓度
将37℃培养10天的枯草芽孢杆菌(镜检符合药典要求)用生理盐水洗下，置65℃水浴箱水浴30min，以灭菌水稀释100倍置冰箱2～8℃冷藏备用。
2.1 青霉素V钾标准曲线制备
青霉素V钾储备液的配制:精取青霉素V钾对照品适量，用生理盐水配制浓度为300mg.L-1的溶液。
, 百拇医药
精取适量青霉素V钾储备液，用正常人空白血浆稀释，配制系列标准溶液，使血药浓度为0.074，0.222，0.667，2.0，6.0mg.L-1。
将配好的灭菌培养基在水浴加热溶解后冷却至50℃左右，加入适量菌液，摇匀，铺板，待凝固后在平板中打孔(孔径6mm)。按随机化原则选择数孔作为标准溶液加样孔，其余孔加待测血浆样品，每孔加50μl。在37℃培养16小时后测量抑菌圈直径D(mm)，以浓度C的对数为纵坐标，直径D为横坐标绘制标准曲线，得直线回归方程:A=-1.851，B=0.09546，r=0.999，由该方程计算待测血浆样品青霉素V钾的浓度
2.2 方法学评价
参标准曲线制备方法项下操作，制备高、中、低3种不同浓度青霉素V钾(3.0，1.0和0.074 mg.L-1)的血浆样品，分别在日内和日间测定，代入标准曲线求得实测浓度，由此计算日内和日间变异系数和方法回收率(结果见表1)。最低检测限为0.06mg.L-1。
, 百拇医药
Table 1.Recovery rate,within-day,between day RSD of penicillin V (n=6)
Concentration
(mg.L-1)
Recovery rate
(100%)
Within day
RSD(%)
Between day
RSD(%)
3.00
, 百拇医药
109.6±3.39
3.1
5.2
1.00
104.0±3.74
3.6
4.6
0.074
107.4±0.21
2.6
6.3
3. 受试者试验
3.1 受试者选择
, 百拇医药
健康志愿者12名(男性，年龄19.2±0.4岁，体重67.5±4.3kg，身高173.6±4.5cm)，试验前经体检证实肝、肾和心脏功能等正常，青霉素钠的皮内过敏试验均为阴性反应。在两周内没有服用过任何其它药物，所有受试者均被告知本项试验目的、试验方法及试验全过程，试验前书面签署知情同意书。
3.2 给药方法与剂量
12名受试者服药前空腹12h，自身对照，随机分组，分别服用受试青霉素V钾胶囊剂及参比药进口的青霉素V钾片，每人单次口服500mg青霉素V钾，用200ml温开水送服，间隔为1周。试验期间禁用其它药物。
3.3 取血时间设计
分别在服药后0，10，20，30，40，50，60，90，120，180，240，360 min各个时刻取上肢静脉血3ml，注入肝素化管中，放置30分钟后离心分离血浆，所得血浆作测定样品，置2～8℃冰箱存放，于当日12小时内检测完毕。
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3.4 数据处理与统计分析
血药浓度—时间数据用3p87程序以口服具有滞后时间的一级吸收一级消除的一房室模型方程进行拟合计算，权重系数取 1，算出药代动力学参数。数据处理方法用逐个受试者的血药浓度—时间数据作曲线拟合，算出各参数后计算平均值。相对生物利用度F=AUCT/AUCR。用孙瑞元等人编制的NDST软件对AUC0～∞、Tmax 及Cmax的实测值及主要药代动力学参数进行配对t检验，双单侧t检验，方差分析和等效界值法计算，评价生物等效性。
结 果
1. 血药浓度测定结果
12名健康受试者口服500mg的青霉素V钾胶囊(片剂)后的青霉素V钾血药浓度分别见图1。0时血样抑菌圈直径与空白血浆相似，6小时时血药浓度接近或低于检测限。
, 百拇医药
Fig 1.Mean plasma-concentration curves of penicillin V in 12 healthy volunteers
2.药代动力学特性
对12名健康受试者的青霉素V钾的药时数据用3p87程序自动拟合计算，符合具有滞后时间的一级吸收一级消除的一房室模型。主要药代动力学参数见表2。两制剂的青霉素V钾的平均药时曲线图见图1。
Table 2.The pharmacokinetic parameters of penicillin V
(mean±SD,n=12)
Parameters
Tablet
, 百拇医药
Capsule
ke(min-1)
0.025±0.009
0.027±0.007
T1/2(ke)(min)
31.27±11.12
27.57±6.46
Tmax(min)
36.67±7.78
35.53±5.15
Cmax(mg.L-1)
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9.14±3.07
9.69±2.66
CL/F(l.min-1)
0.87±0.18
0.90±0.24
V/F(L)
39.48±16.46
36.05±13.32
AUC0～∞
597.02±116.23
586.30±139.85
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(mg.min.L-1)
F(%)
97.99±13.44
3. 相对生物利用度
口服国产的青霉素V钾胶囊剂及参比药青霉素V钾片500mg后，受试胶囊剂与参比制剂青霉素V钾的拟合延滞吸收时间(tlag)分别为9.05±0.69min和7.12±2.75min(P<0.05，配对t检验)，差异有显著意义。其它参数均为P>0.05，表明两制剂差异无显著意义。受试制剂与参比制剂的青霉素V钾实测峰浓度Cmax'分别为9.91±2.92 mg.L-1及8.49±3.15 mg.L-1，受试药及参比药的青霉素V钾实测达峰时间Tmax'分别为35.53±5.15min及36.67±7.78min,。受试药及参比药的青霉素V钾AUC0～∞为586.30±139.85mg.min.L-1及597.02±116.23mg.min.L-1，AUC0～∞、Cmax和Tmax经双单侧t检验，方差分析和等效界值法计算，结果表明两制剂具有生物等效性。受试药和参比药比较，青霉素V钾的相对生物利用度(F)为97.99%±13.44%(84.55～111.43)，符合80%～120%规定范围。
, 百拇医药
讨 论
本文建立的微生物法用于测定青霉素V钾的血药浓度能满足药代动力学和生物利用度研究要求，方法简便易行，与HPLC法相比，可节省大量昂贵的化学试剂。
受试药与参比药青霉素V钾的主要药代动力学参数经配对t检验，tlag值P<0.05，表明两制剂在延滞吸收时间上差异有显著意义，其原因是胶囊剂和片剂在胃肠道的崩解释放速度有差别。其它参数均为P>0.05，表明受试药及及参比药无显著差异。经生物等效性检验，受试药胶囊剂的AUC、Tmax和Cmax均合格，说明二者吸收总量、达峰时间和峰浓度是相当的，受试药青霉素V钾的相对生物利用度为97.99±13.44%。
参考文献:
1.李家泰主编.临床药理学,第二版.北京:人民卫生出版社,1998,601～602.
, 百拇医药
2.Bauer B,Malerczyk V,Roethig HJ. Bioavailability of a new liquid formulation of penicillin V (Isocillin syrup) and the influence of ethanol on bioavailability of penicillin V.Int J Clin Pharmacol Ther Toxicol, 1989; 27: 583～587.
3.Lintz W,Hirsch I,Osterloh G,et al.Bioavailability of penicillin V in aqueous forms.Arzneimittforschung, 1984;34:66～71.
4.中国药典(第二部)，1995年版，附录：71～74.
1999-01-20
1999-10-25, 百拇医药
单位：任进民 蒋俊康 田彩锁 王淑梅(河北医科大学第二医院药剂科，石家庄，050000)；刘汝俊(河北医科大学，石家庄，050017)
关键词：青霉素V钾；药代动力学；生物利用度
中国临床药理学杂志000215 摘要 本文用青霉素V钾胶囊剂与进口青霉素V钾片剂进行人体药代动力学和生物利用度研究。选择12名健康男性志愿者，采用自身交叉对照试验方法，分别单剂量一次口服青霉素V钾500mg，青霉素V钾血药浓度用微生物法测定，以枯草芽孢杆菌(63501)作为检定菌。青霉素V钾血药浓度--时间数据用3p87程序进行自动拟合并求算药代动力学参数，用NDST程序对AUC、Tmax和Cmax的实测值作生物等效性检验。结果：口服青霉素V钾片剂和胶囊剂两种制剂后青霉素V钾药代动力学参数分别为：T1/2:31.27±11.12min,27.57±6.46min(P>0.05);Cmax:9.14±3.07mg·L-1,9.69±2.66mg·L-1(P>0.05)。青霉素V钾的相对生物利用度为97.99%±13.44%。结论：青霉素V钾的AUC、Tmax和Cmax经配对t检验、双单侧t检验、方差分析表明国产青霉素V钾胶囊剂与进口青霉素V钾片剂为等效制剂。
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Pharmacokinetics and Relative Bioavailability of
Penicillin V Capsule in Healthy Volunteers
REN Jin-Min,JIANG Jun-Kang,TIAN Cai-Suo,WANG SHu-Mei
( Department of pharmacy,The Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang,050000)
LIU Ru-Jun
(Hebei Medical University,Shijiazhuang,050017)
, 百拇医药
Abstract The pharmacokinetics and bioavailability ofpenicillin V were conducted in 12 Chinese healthy volunteers after a single oral dose(500mg)of home made penicillin V cppsule compared with penicillin V tablet imported.In this paper,microbiological assay was used,plasma penicillin V concentration was determined any using Bacillus subtilis(CMCC 63501)as test strain.The concentration time curves of penicillin V were fitted to one compartment model estimated by 3p87 program. Statistical software's NDST were used for the calculation of results.The mean terminal half-lives(T1/2) of the two preparations, tablet and capsule, were 31.27±11.12 and 27.57±6.46 respectively min(P >0.05),and the averages of the peak plasma levels(Cmax) were 9.14±3.07 and 9.69±2.66μg·ml-1respectively (P >0.05).The relative bioavailability of penicillin V capsule compared with tablet was 97.99±13.44%.The results showed that the two preparations were bioequivalent.
, 百拇医药
Key words penicillin V;pharmacokinetics;bioavailability;microbiological assay
青霉素V钾为天然发酵产生的口服青霉素，口服吸收良好，是目前临床治疗轻、中度敏感细菌感染的常用药物之一[1]。国外已有片剂、干糖浆等剂型上市，国内现研制出青霉素V钾胶囊剂。青霉素V钾的含量测定方法国外报道有微生物法和HPLC法[2,3]，本文采用微生物法，以枯草芽孢杆菌作检定菌测定青霉素V钾血药浓度，对国产的青霉素V钾胶囊剂的药代动力学和相对生物利用度进行研究。
材料与方法
1. 材料
1.1 药品与试剂
青霉素V钾片(参比制剂)，美国Biocraft厂生产，批号:960521，每片含青霉素V 250mg。青霉素V钾胶囊剂(被试制剂)张家口市制药总厂研制，批号:981122，每粒含青霉素V 250mg。青霉素V钾标准对照品，中国药品生物制品检定所提供，(含量99.4%)。抗生素Ⅰ号培养基:批号:970516，检定菌:枯草芽孢杆菌(63501)，批号:63501-24，中检所(国家药品监督局，药品、生物制品检定所)提供。
, 百拇医药
1.2 仪器
YZ-875医用净化工作台，303-4B型隔水式培养箱，LDZ5-2普通离心机，水平调节台(河北太行机械厂提供)，玻璃大方盘(华北制药集团研究所提供)。
2. 血浆青霉素V钾的测定方法
用井式琼脂平板法测定青霉素V钾的浓度
将37℃培养10天的枯草芽孢杆菌(镜检符合药典要求)用生理盐水洗下，置65℃水浴箱水浴30min，以灭菌水稀释100倍置冰箱2～8℃冷藏备用。
2.1 青霉素V钾标准曲线制备
青霉素V钾储备液的配制:精取青霉素V钾对照品适量，用生理盐水配制浓度为300mg.L-1的溶液。
, 百拇医药
精取适量青霉素V钾储备液，用正常人空白血浆稀释，配制系列标准溶液，使血药浓度为0.074，0.222，0.667，2.0，6.0mg.L-1。
将配好的灭菌培养基在水浴加热溶解后冷却至50℃左右，加入适量菌液，摇匀，铺板，待凝固后在平板中打孔(孔径6mm)。按随机化原则选择数孔作为标准溶液加样孔，其余孔加待测血浆样品，每孔加50μl。在37℃培养16小时后测量抑菌圈直径D(mm)，以浓度C的对数为纵坐标，直径D为横坐标绘制标准曲线，得直线回归方程:A=-1.851，B=0.09546，r=0.999，由该方程计算待测血浆样品青霉素V钾的浓度
2.2 方法学评价
参标准曲线制备方法项下操作，制备高、中、低3种不同浓度青霉素V钾(3.0，1.0和0.074 mg.L-1)的血浆样品，分别在日内和日间测定，代入标准曲线求得实测浓度，由此计算日内和日间变异系数和方法回收率(结果见表1)。最低检测限为0.06mg.L-1。
, 百拇医药
Table 1.Recovery rate,within-day,between day RSD of penicillin V (n=6)
Concentration
(mg.L-1)
Recovery rate
(100%)
Within day
RSD(%)
Between day
RSD(%)
3.00
, 百拇医药
109.6±3.39
3.1
5.2
1.00
104.0±3.74
3.6
4.6
0.074
107.4±0.21
2.6
6.3
3. 受试者试验
3.1 受试者选择
, 百拇医药
健康志愿者12名(男性，年龄19.2±0.4岁，体重67.5±4.3kg，身高173.6±4.5cm)，试验前经体检证实肝、肾和心脏功能等正常，青霉素钠的皮内过敏试验均为阴性反应。在两周内没有服用过任何其它药物，所有受试者均被告知本项试验目的、试验方法及试验全过程，试验前书面签署知情同意书。
3.2 给药方法与剂量
12名受试者服药前空腹12h，自身对照，随机分组，分别服用受试青霉素V钾胶囊剂及参比药进口的青霉素V钾片，每人单次口服500mg青霉素V钾，用200ml温开水送服，间隔为1周。试验期间禁用其它药物。
3.3 取血时间设计
分别在服药后0，10，20，30，40，50，60，90，120，180，240，360 min各个时刻取上肢静脉血3ml，注入肝素化管中，放置30分钟后离心分离血浆，所得血浆作测定样品，置2～8℃冰箱存放，于当日12小时内检测完毕。
, http://www.100md.com
3.4 数据处理与统计分析
血药浓度—时间数据用3p87程序以口服具有滞后时间的一级吸收一级消除的一房室模型方程进行拟合计算，权重系数取 1，算出药代动力学参数。数据处理方法用逐个受试者的血药浓度—时间数据作曲线拟合，算出各参数后计算平均值。相对生物利用度F=AUCT/AUCR。用孙瑞元等人编制的NDST软件对AUC0～∞、Tmax 及Cmax的实测值及主要药代动力学参数进行配对t检验，双单侧t检验，方差分析和等效界值法计算，评价生物等效性。
结 果
1. 血药浓度测定结果
12名健康受试者口服500mg的青霉素V钾胶囊(片剂)后的青霉素V钾血药浓度分别见图1。0时血样抑菌圈直径与空白血浆相似，6小时时血药浓度接近或低于检测限。
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Fig 1.Mean plasma-concentration curves of penicillin V in 12 healthy volunteers
2.药代动力学特性
对12名健康受试者的青霉素V钾的药时数据用3p87程序自动拟合计算，符合具有滞后时间的一级吸收一级消除的一房室模型。主要药代动力学参数见表2。两制剂的青霉素V钾的平均药时曲线图见图1。
Table 2.The pharmacokinetic parameters of penicillin V
(mean±SD,n=12)
Parameters
Tablet
, 百拇医药
Capsule
ke(min-1)
0.025±0.009
0.027±0.007
T1/2(ke)(min)
31.27±11.12
27.57±6.46
Tmax(min)
36.67±7.78
35.53±5.15
Cmax(mg.L-1)
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9.14±3.07
9.69±2.66
CL/F(l.min-1)
0.87±0.18
0.90±0.24
V/F(L)
39.48±16.46
36.05±13.32
AUC0～∞
597.02±116.23
586.30±139.85
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(mg.min.L-1)
F(%)
97.99±13.44
3. 相对生物利用度
口服国产的青霉素V钾胶囊剂及参比药青霉素V钾片500mg后，受试胶囊剂与参比制剂青霉素V钾的拟合延滞吸收时间(tlag)分别为9.05±0.69min和7.12±2.75min(P<0.05，配对t检验)，差异有显著意义。其它参数均为P>0.05，表明两制剂差异无显著意义。受试制剂与参比制剂的青霉素V钾实测峰浓度Cmax'分别为9.91±2.92 mg.L-1及8.49±3.15 mg.L-1，受试药及参比药的青霉素V钾实测达峰时间Tmax'分别为35.53±5.15min及36.67±7.78min,。受试药及参比药的青霉素V钾AUC0～∞为586.30±139.85mg.min.L-1及597.02±116.23mg.min.L-1，AUC0～∞、Cmax和Tmax经双单侧t检验，方差分析和等效界值法计算，结果表明两制剂具有生物等效性。受试药和参比药比较，青霉素V钾的相对生物利用度(F)为97.99%±13.44%(84.55～111.43)，符合80%～120%规定范围。
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讨 论
本文建立的微生物法用于测定青霉素V钾的血药浓度能满足药代动力学和生物利用度研究要求，方法简便易行，与HPLC法相比，可节省大量昂贵的化学试剂。
受试药与参比药青霉素V钾的主要药代动力学参数经配对t检验，tlag值P<0.05，表明两制剂在延滞吸收时间上差异有显著意义，其原因是胶囊剂和片剂在胃肠道的崩解释放速度有差别。其它参数均为P>0.05，表明受试药及及参比药无显著差异。经生物等效性检验，受试药胶囊剂的AUC、Tmax和Cmax均合格，说明二者吸收总量、达峰时间和峰浓度是相当的，受试药青霉素V钾的相对生物利用度为97.99±13.44%。
参考文献:
1.李家泰主编.临床药理学,第二版.北京:人民卫生出版社,1998,601～602.
, 百拇医药
2.Bauer B,Malerczyk V,Roethig HJ. Bioavailability of a new liquid formulation of penicillin V (Isocillin syrup) and the influence of ethanol on bioavailability of penicillin V.Int J Clin Pharmacol Ther Toxicol, 1989; 27: 583～587.
3.Lintz W,Hirsch I,Osterloh G,et al.Bioavailability of penicillin V in aqueous forms.Arzneimittforschung, 1984;34:66～71.
4.中国药典(第二部)，1995年版，附录：71～74.
1999-01-20
1999-10-25, 百拇医药