KLH与SEA皮试法现场诊断日本血吸虫病效果的比较
作者：秦志强 易新元 曾庆仁 曾宪芳 刘志兵 张顺科
单位：秦志强(血吸虫病研究室 长沙 410078)；易新元(血吸虫病研究室 长沙 410078)；曾庆仁(血吸虫病研究室 长沙 410078)；曾宪芳(血吸虫病研究室 长沙 410078)；刘志兵(益阳市刘家湖血防站 益阳 413048)；张顺科(血吸虫病研究室 长沙 410078)
关键词：日本血吸虫病；钥孔血蓝蛋白*；抗原类；蠕虫；皮内试验；诊断应用
New Page 1[摘要] 应用KLH和SEA皮试法(intraderminal test, IDT) 在血吸虫病疫区对加藤法粪检确诊的32例阳性人群和31例阴性人群作平行检测。结果显示： KLH-和SEA-IDT二法与粪检阳性符合率分别为90%和100%，差异无显著性(P>0.05)；KL H-和SEA-IDT与粪检阴性符合率为71.9%和25%，差异有高度显著性(P<0.01)；在31例 粪检阴性人群中，两IDT检出均为阳性者9例，SEA-IDT单一阳性者15例，KLH-IDT无1例为 单一阳性。在双皮试检出阳性者中经粪孵毛蚴法追踪，查出2例阳性，而SEA-IDT单阳者中 无1例阳性；27例治后1年的人群中，KLH-IDT检出6例阳性，阴转率为77.8%，SEA-IDT检 出21例阳性，阴转率为22.2%。提示：KLH作为诊断抗原用于现场皮试不仅具有较高的敏感 性而且有较好的考核疗效价值。
, 百拇医药
[中图分类号] R532.21R383.24 [文献标识码] A [文章编号] 1000-5625(2000)02-0103-03
Comparative study on the efficacy of KLH-IDT and SEA-IDT in
diagnosing schistosomiasis japonica
QIN Zhi-qiang, YI Xin-yuan, ZENG Qing-ren, ZENG Xian-fang, LIU Zhi -bing, ZHANG Shun-ke
Department of Parasitology, Hunan Medical University(Changsha 410078)
, 百拇医药
[Abstract] Thirty-three egg-positive subjects and 32 egg-ne gative subjects were tested synchronously by KLH-IDT and SEA-IDT in endemic ar ea of schistosomiasis. Compared with stool examination, the positive coincidence rate of KLH-IDT and SEA-IDT were 90% and 100%, respectively, which showed no statistical significance(P>0.05), and the negative coincidence rate of KLH- IDT and SEA-IDT were 71.9% and 25%, respectively, which showed statistical sign ificance(P<0.01). Of the 31 egg-negative subjects, 9 subjects showed positi ve by both SEA-IDT and KLH-IDT, and 15 subjects showed positive by SEA-IDT bu t negative by KLH-IDT. Both double positive subjects and single positive subject s were examined further by miracidium hatching test, there were 2 subjects show ing positive among the 9 double positive subjects. In addition, of 27 subjects t hat had been treated one year before, only 6 subjects showed positive by KLH-ID T, the reversion rate was 77.8%; whereas, the reversion rate was 22.2%(6/21 ) by SEA-IDT. The results suggest that KLH-IDT has high value in diagnosing schisto somiasis, particularly shows a potential in assessing therapeutic efficacy of sc histosomiasis.
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[Key words] schistosomiasis japonica; keyhole limpet haemocyanin*; antigens,helminth; intradermal tests; diagnostic use; comparative studies
钥孔
血蓝蛋白(keyho le limhet haemdcyanin, KLH)系一已商品化的大分子糖蛋白免疫试剂，一般用作多肽免疫 的载体。自1991年以来本室等的研究证明[1～3]：KLH与日本血吸虫各阶段间存 在共同抗原，特别是尾蚴和毛蚴间的交叉明显；用KLH-ELISA和KLH-IHA对不同期血吸虫病 人、肺吸虫病人、肝吸虫病人、囊虫病人和非疫区正常人的血清检测显示出非常高的敏感性 和特异性；检测治前和治后不同时间的血吸虫病人患者血清中抗KLH IgG4抗体显示出较好的 疗效考核价值。为进一步评价KLH的实用价值，笔者将KLH用作皮试抗原和同源的SEA皮试抗 原作了现场皮试对比研究，结果如下。
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1 材料与方法
1.1 试剂和器材 ①KLH为Sigma公司产品，批号128F957，使用浓度为2 μg.ml-1。②SEA皮试注射液，按常规法配制，使用浓度为1μg.ml-1。上 二皮试抗原于使用前均经无菌过滤器除菌。③无菌卡介苗注射器和25号针头。④标准加藤定 量器、铜筛和尼龙筛。⑤血吸虫毛蚴孵化箱与孵化瓶。
1.2 检测对象 益阳市刘家湖农场一自然村内，经改良加藤氏法粪检确定的33例阳性人群和32例阴性人群作为测试对象。32例粪检阴性人群中，有27例于1年前粪检 出血吸虫虫卵并曾进行治疗。
1.3 检测方法
1.3.1 皮内试验(IDT) 包括SEA-IDT和KLH-IDT。按常规皮试技术进行[4 ] ，即在受试者左、右手前臂分别作KLH-IDT和SEA-IDT，并同时用生理盐水作阴性对照。15 min后观察结果。阳性判断标准：皮 丘增大或有红晕、水肿，或呈伪足样扩展， 最长径≥1cm， 而生理盐水对照为阴性者，则定为皮试阳性记录。
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1.3.2 改良加藤厚涂片法 按常规法一粪三片定量检查粪中虫卵。
1.3.3 毛蚴孵化法 按常规法操作，用于追踪定性检查加藤法粪检阴性中 具有两种皮试双阳性者(9例)和SEA皮试单阳性者(从15例中随机取9例)。
1.4 统计学处理 比较KLH-IDT与SEA-IDT所 检测粪阳和粪阴病 人的阳、阴性符合率，采用卡方检验。
2 结 果
2.1 两种皮试法与粪检结果的阴、阳性符合率的比较 表1示，KLH-IDT检 测33例粪检阳性者，有30例为阳性，阳性符合率为90.9%，检测32例粪检阴性者，有9例为 阳性，阴性符合率为71.88%(23/32)；SEA-IDT检测33例粪检阳性者，阳性符合率为100%,检测32例粪检阴性者，有24例阳性，阴性符合率为25%(8/32)。经卡方检验，比较两种皮试 与粪检阳性符合率，差异无显著性(χ2=3.14,P>0.05)；同样比较两种方法 与粪检阴性符合率，差异有高度显性(χ2=14.08,P<0.01)。
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表1 SEA-IDT和KLH-IDT检测两组粪检人群 的结果
粪检
(加 藤 法)
SEA-IDT
KLH-IDT
χ2
P
检测数
阳性数 (%)
检测数
阳 性数(%)
阳性
, 百拇医药
33
33(100)
33
30(90.9)
3.14
>0.05
阴性
32
24(75.0)
32
9(28.1)
14.08
<0.01
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2.2 毛蚴孵化法追踪检查结果 在加藤法粪检阴性的人群中，两皮试法均 为阳性者9例，用毛蚴孵化追踪查出2例阳性；而追踪观察的9例SEA-IDT单阳者，其孵化结 果全为阴性。
2.3 经治疗的血吸虫病人皮试结果比较 表2示，27例治后1年的血吸虫病 人用SEA-IDT检出21例阳性，阴转率为22.2%，而KLH-IDT检出6例阳性，阴转率为77.8% 。表2 治后1年的血吸虫病人皮试结果
阳性数(%)
阴性数(%)
χ2
P
KLH-IDT
SEA-IDT
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6(22.2)
21(77.8)
21(77.8)
6(22.2)
16.67
<0.01
3 讨 论
皮内试验多属于Ⅰ型变态反应。寄生虫变应原刺激宿主后，机体产生亲细胞性IgE抗体 和IgG4抗体，当同样抗原与抗体结合后，导致肥大细胞和嗜酸性粒细胞脱颗粒，释放出生 物活性介质，引起注射抗原的局部出现红肿[4]。常用于血吸虫病检查的皮试抗原 有肝卵抗原和成虫抗原。肝卵抗原从动物肝脏中分离出虫卵后制备，可因纯度不高而影响检 测结果。成虫抗原在制备成皮试液时须加硫柳汞防腐。据报道，用硫柳汞生理盐水作皮内对 照试验，显示52.5%(299/568)的假阳性率，特别是低年龄组更高，为87%(20/23)[5 ]。表明成虫抗原皮试液中硫柳汞影响其诊断的特异性。已有大量研究证明，KLH是一种 已商品化的高纯度的大分子抗原，它不仅对急、慢性血吸虫病患者检测具有敏感性高和特异 性好的特点，而且具有早期诊断意义和较好的疗效考核诊断价值[6]。故用其作皮 试抗原可克服用血吸虫卵或成虫皮试抗原存在的不足。
, 百拇医药
本研究首次采用KLH作现场皮试并与SEA-IDT平行检测，表明：KLH-IDT和SEA-IDT检测血 吸虫病人的结果与粪检阳性符合率分别为90%和100%，经统计学分析，其差异无显著性；二 法检测治后1年的血吸虫病人，其阴转率以KLH-IDT者为高(77.8%)，与SEA-IDT(22.2%) 比较，差异有高度显著性。此结果与张顺科等(1999)[7]报道的KLH-ELISA结果( 阴转率达83.3%)相一致。据此进一步说明KLH对血吸虫病诊断和疗效考核是一种较理想的抗 原。本文旨在比较KLH与SEA皮试法用于现场检测的效果，而对正常人和其它寄生虫病人检测 特异性和交叉性则有待进一步研究。
综上所述，用KLH作皮试具有较高的敏感性和较好的疗效考核价值。鉴于KLH已商品化，纯度 高，且价廉(估算每人次皮试抗原费用约为0.01元)，故认为，用KLH皮试可代替常规皮试而 应用于现场评价血吸虫病的防治效果。
参考文献：
, http://www.100md.com
[1] 易新元，曾宪芳，汪世平，等.KLH诊断早期及急性日本血吸虫 感染的研究[J].湖南医科大学学报，1993，18(2)：123-125.
[2] 曾庆仁，周金春，易新元，等.日本血吸虫不同发育阶段蛋白抗原与抗KLH兔血清的 交叉反应[J].中国现代医学杂志，1994，增刊：10-12.
[3] 易新元，曾宪芳，舒衡平，等.KLH与日本血吸虫抗原交叉性的研究[J].中国血吸 虫病防治杂志，1991，3(4)：203-205.
[4] 沈继龙.皮内试验，见：曾宪芳主编.寄生虫学和寄生虫学检验[M].北京：人民 卫生出版社，1997：222-223.
[5] 申连云.血吸虫成虫抗原皮试阳性对照试验结果[J].中华预防医学杂志，1995，2 9(6)：381-382.
[6] 曾宪芳，汪世平，赖为中，等.应用KLH-ELISA与KLH-IHA诊断血吸虫病研究[J] .中国血吸虫病防治杂志，1992，4(1)：57-58.
[7] 张顺科，易新元，舒新华，等.KLH检测日本血吸虫病人血清中特异性IgG和IgG4 考核疗效的研究[J].湖南医科大学学报，1999，24(3)：219-221., 百拇医药
单位：秦志强(血吸虫病研究室 长沙 410078)；易新元(血吸虫病研究室 长沙 410078)；曾庆仁(血吸虫病研究室 长沙 410078)；曾宪芳(血吸虫病研究室 长沙 410078)；刘志兵(益阳市刘家湖血防站 益阳 413048)；张顺科(血吸虫病研究室 长沙 410078)
关键词：日本血吸虫病；钥孔血蓝蛋白*；抗原类；蠕虫；皮内试验；诊断应用
New Page 1[摘要] 应用KLH和SEA皮试法(intraderminal test, IDT) 在血吸虫病疫区对加藤法粪检确诊的32例阳性人群和31例阴性人群作平行检测。结果显示： KLH-和SEA-IDT二法与粪检阳性符合率分别为90%和100%，差异无显著性(P>0.05)；KL H-和SEA-IDT与粪检阴性符合率为71.9%和25%，差异有高度显著性(P<0.01)；在31例 粪检阴性人群中，两IDT检出均为阳性者9例，SEA-IDT单一阳性者15例，KLH-IDT无1例为 单一阳性。在双皮试检出阳性者中经粪孵毛蚴法追踪，查出2例阳性，而SEA-IDT单阳者中 无1例阳性；27例治后1年的人群中，KLH-IDT检出6例阳性，阴转率为77.8%，SEA-IDT检 出21例阳性，阴转率为22.2%。提示：KLH作为诊断抗原用于现场皮试不仅具有较高的敏感 性而且有较好的考核疗效价值。
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[中图分类号] R532.21R383.24 [文献标识码] A [文章编号] 1000-5625(2000)02-0103-03
Comparative study on the efficacy of KLH-IDT and SEA-IDT in
diagnosing schistosomiasis japonica
QIN Zhi-qiang, YI Xin-yuan, ZENG Qing-ren, ZENG Xian-fang, LIU Zhi -bing, ZHANG Shun-ke
Department of Parasitology, Hunan Medical University(Changsha 410078)
, 百拇医药
[Abstract] Thirty-three egg-positive subjects and 32 egg-ne gative subjects were tested synchronously by KLH-IDT and SEA-IDT in endemic ar ea of schistosomiasis. Compared with stool examination, the positive coincidence rate of KLH-IDT and SEA-IDT were 90% and 100%, respectively, which showed no statistical significance(P>0.05), and the negative coincidence rate of KLH- IDT and SEA-IDT were 71.9% and 25%, respectively, which showed statistical sign ificance(P<0.01). Of the 31 egg-negative subjects, 9 subjects showed positi ve by both SEA-IDT and KLH-IDT, and 15 subjects showed positive by SEA-IDT bu t negative by KLH-IDT. Both double positive subjects and single positive subject s were examined further by miracidium hatching test, there were 2 subjects show ing positive among the 9 double positive subjects. In addition, of 27 subjects t hat had been treated one year before, only 6 subjects showed positive by KLH-ID T, the reversion rate was 77.8%; whereas, the reversion rate was 22.2%(6/21 ) by SEA-IDT. The results suggest that KLH-IDT has high value in diagnosing schisto somiasis, particularly shows a potential in assessing therapeutic efficacy of sc histosomiasis.
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[Key words] schistosomiasis japonica; keyhole limpet haemocyanin*; antigens,helminth; intradermal tests; diagnostic use; comparative studies
钥孔
血蓝蛋白(keyho le limhet haemdcyanin, KLH)系一已商品化的大分子糖蛋白免疫试剂，一般用作多肽免疫 的载体。自1991年以来本室等的研究证明[1～3]：KLH与日本血吸虫各阶段间存 在共同抗原，特别是尾蚴和毛蚴间的交叉明显；用KLH-ELISA和KLH-IHA对不同期血吸虫病 人、肺吸虫病人、肝吸虫病人、囊虫病人和非疫区正常人的血清检测显示出非常高的敏感性 和特异性；检测治前和治后不同时间的血吸虫病人患者血清中抗KLH IgG4抗体显示出较好的 疗效考核价值。为进一步评价KLH的实用价值，笔者将KLH用作皮试抗原和同源的SEA皮试抗 原作了现场皮试对比研究，结果如下。, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 试剂和器材 ①KLH为Sigma公司产品，批号128F957，使用浓度为2 μg.ml-1。②SEA皮试注射液，按常规法配制，使用浓度为1μg.ml-1。上 二皮试抗原于使用前均经无菌过滤器除菌。③无菌卡介苗注射器和25号针头。④标准加藤定 量器、铜筛和尼龙筛。⑤血吸虫毛蚴孵化箱与孵化瓶。
1.2 检测对象 益阳市刘家湖农场一自然村内，经改良加藤氏法粪检确定的33例阳性人群和32例阴性人群作为测试对象。32例粪检阴性人群中，有27例于1年前粪检 出血吸虫虫卵并曾进行治疗。
1.3 检测方法
1.3.1 皮内试验(IDT) 包括SEA-IDT和KLH-IDT。按常规皮试技术进行[4 ] ，即在受试者左、右手前臂分别作KLH-IDT和SEA-IDT，并同时用生理盐水作阴性对照。15 min后观察结果。阳性判断标准：皮 丘增大或有红晕、水肿，或呈伪足样扩展， 最长径≥1cm， 而生理盐水对照为阴性者，则定为皮试阳性记录。
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1.3.2 改良加藤厚涂片法 按常规法一粪三片定量检查粪中虫卵。
1.3.3 毛蚴孵化法 按常规法操作，用于追踪定性检查加藤法粪检阴性中 具有两种皮试双阳性者(9例)和SEA皮试单阳性者(从15例中随机取9例)。
1.4 统计学处理 比较KLH-IDT与SEA-IDT所 检测粪阳和粪阴病 人的阳、阴性符合率，采用卡方检验。
2 结 果
2.1 两种皮试法与粪检结果的阴、阳性符合率的比较 表1示，KLH-IDT检 测33例粪检阳性者，有30例为阳性，阳性符合率为90.9%，检测32例粪检阴性者，有9例为 阳性，阴性符合率为71.88%(23/32)；SEA-IDT检测33例粪检阳性者，阳性符合率为100%,检测32例粪检阴性者，有24例阳性，阴性符合率为25%(8/32)。经卡方检验，比较两种皮试 与粪检阳性符合率，差异无显著性(χ2=3.14,P>0.05)；同样比较两种方法 与粪检阴性符合率，差异有高度显性(χ2=14.08,P<0.01)。
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表1 SEA-IDT和KLH-IDT检测两组粪检人群 的结果
粪检
(加 藤 法)
SEA-IDT
KLH-IDT
χ2
P
检测数
阳性数 (%)
检测数
阳 性数(%)
阳性
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33
33(100)
33
30(90.9)
3.14
>0.05
阴性
32
24(75.0)
32
9(28.1)
14.08
<0.01
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2.2 毛蚴孵化法追踪检查结果 在加藤法粪检阴性的人群中，两皮试法均 为阳性者9例，用毛蚴孵化追踪查出2例阳性；而追踪观察的9例SEA-IDT单阳者，其孵化结 果全为阴性。
2.3 经治疗的血吸虫病人皮试结果比较 表2示，27例治后1年的血吸虫病 人用SEA-IDT检出21例阳性，阴转率为22.2%，而KLH-IDT检出6例阳性，阴转率为77.8% 。表2 治后1年的血吸虫病人皮试结果
阳性数(%)
阴性数(%)
χ2
P
KLH-IDT
SEA-IDT
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6(22.2)
21(77.8)
21(77.8)
6(22.2)
16.67
<0.01
3 讨 论
皮内试验多属于Ⅰ型变态反应。寄生虫变应原刺激宿主后，机体产生亲细胞性IgE抗体 和IgG4抗体，当同样抗原与抗体结合后，导致肥大细胞和嗜酸性粒细胞脱颗粒，释放出生 物活性介质，引起注射抗原的局部出现红肿[4]。常用于血吸虫病检查的皮试抗原 有肝卵抗原和成虫抗原。肝卵抗原从动物肝脏中分离出虫卵后制备，可因纯度不高而影响检 测结果。成虫抗原在制备成皮试液时须加硫柳汞防腐。据报道，用硫柳汞生理盐水作皮内对 照试验，显示52.5%(299/568)的假阳性率，特别是低年龄组更高，为87%(20/23)[5 ]。表明成虫抗原皮试液中硫柳汞影响其诊断的特异性。已有大量研究证明，KLH是一种 已商品化的高纯度的大分子抗原，它不仅对急、慢性血吸虫病患者检测具有敏感性高和特异 性好的特点，而且具有早期诊断意义和较好的疗效考核诊断价值[6]。故用其作皮 试抗原可克服用血吸虫卵或成虫皮试抗原存在的不足。
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本研究首次采用KLH作现场皮试并与SEA-IDT平行检测，表明：KLH-IDT和SEA-IDT检测血 吸虫病人的结果与粪检阳性符合率分别为90%和100%，经统计学分析，其差异无显著性；二 法检测治后1年的血吸虫病人，其阴转率以KLH-IDT者为高(77.8%)，与SEA-IDT(22.2%) 比较，差异有高度显著性。此结果与张顺科等(1999)[7]报道的KLH-ELISA结果( 阴转率达83.3%)相一致。据此进一步说明KLH对血吸虫病诊断和疗效考核是一种较理想的抗 原。本文旨在比较KLH与SEA皮试法用于现场检测的效果，而对正常人和其它寄生虫病人检测 特异性和交叉性则有待进一步研究。
综上所述，用KLH作皮试具有较高的敏感性和较好的疗效考核价值。鉴于KLH已商品化，纯度 高，且价廉(估算每人次皮试抗原费用约为0.01元)，故认为，用KLH皮试可代替常规皮试而 应用于现场评价血吸虫病的防治效果。
参考文献：
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[1] 易新元，曾宪芳，汪世平，等.KLH诊断早期及急性日本血吸虫 感染的研究[J].湖南医科大学学报，1993，18(2)：123-125.
[2] 曾庆仁，周金春，易新元，等.日本血吸虫不同发育阶段蛋白抗原与抗KLH兔血清的 交叉反应[J].中国现代医学杂志，1994，增刊：10-12.
[3] 易新元，曾宪芳，舒衡平，等.KLH与日本血吸虫抗原交叉性的研究[J].中国血吸 虫病防治杂志，1991，3(4)：203-205.
[4] 沈继龙.皮内试验，见：曾宪芳主编.寄生虫学和寄生虫学检验[M].北京：人民 卫生出版社，1997：222-223.
[5] 申连云.血吸虫成虫抗原皮试阳性对照试验结果[J].中华预防医学杂志，1995，2 9(6)：381-382.
[6] 曾宪芳，汪世平，赖为中，等.应用KLH-ELISA与KLH-IHA诊断血吸虫病研究[J] .中国血吸虫病防治杂志，1992，4(1)：57-58.
[7] 张顺科，易新元，舒新华，等.KLH检测日本血吸虫病人血清中特异性IgG和IgG4 考核疗效的研究[J].湖南医科大学学报，1999，24(3)：219-221., 百拇医药