复发性口腔溃疡患者口腔中的幽门螺杆菌
作者：陈发明 孙海花 贾保军 曲淑华 刘民
单位：陈发明(解放军401医院)；贾保军(解放军401医院)；曲淑华(解放军401医院)；刘民(解放军401医院)；孙海花(海军青岛疗养院，山东 青岛 266071)
关键词：复发性口腔溃疡； 口腔幽门螺杆菌； 聚合酶链反应
牙体牙髓牙周病学杂志000207 【摘 要】 目的：初步探讨复发性口腔溃疡(recurren t oral ulcer, ROU)患者的发病与其口腔中的幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)之间 的关系。方法：通过聚合酶链反应(polymer ase chain reaction, PCR)，对每位ROU患者口腔中6个不同牙位龈上、龈下共12份菌斑进行 检测，同时设立健康对照组，比较两组检测结果。结果：共检测ROU 患者72例，对照组94例；Hp阳性率分别为56.94%和28.72%，差异非常显著(P<0.01) ；且轻 型ROU患者Hp阳性率明显低于重型ROU患者(P<0.05)。结论：ROU 的发病与口腔中Hp感染可能有关，其致病机理尚待进一步研究。
, http://www.100md.com
【中图号】 R781.5 【文献标识码】 A
【文章编号】 1005-2593(20 00)02-0073-03
Helicobacter pylori in mouths of patients with recurrent oral ulcer
CHEN Fa-ming, SUN Hai-hua, JIA Bao-jun, et al
(Navy 401 Hospital of PLA, Qingdao, 266071)
【Abstract】 AIM：To investigate the relationship between Helicobacter pylori(Hp) and recurrent oral ulcer(ROU). METHODS: The distribution of Hp on the supragingival and subgingival dental plaque of 72 patients with ROU and 94 healthy persons were studied. 1992 plaques were collected from 6 teeth in each subject for polymerase chain reaction( PCR) assay. RESULTS: 56.94% of ROU patients and 28.72% of the control group were caught up Hp, there was a significantly different between tw o groups(P<0.01); The Hp-positive rate of the major ROU was enhanced obviously to minor-ROU (P<0.05). CONCLUSION: Hp perhaps is one of the pathogen to ROU and it is indicated that the relationship between Hp and ROU is close clinically. But need further studies.
, 百拇医药
【Key words】 recurrent oral ulcer； oral helicobacte r pylori; polymerase chain reaction
复发性口腔溃疡(recurrent oral ulcer, ROU)又名复发性阿弗他口炎(rec urrent aphthou s stomatitis, RAS)、复发性口疮(recurrent phthae)，是口腔粘膜病中最常见的一种。病 因目前尚不十分清楚，国内外学者虽然作了大量研究，提供了许多与该病有关的因素，但均 未得到充分的证实。本文通过对72例ROU患者口腔中不同牙位龈上、龈下菌斑进行Hp-PCR检 测，发现ROU的发病可能与Hp相关。
1 材料和方法
1.1 检测对象
分为ROU组和对照组。ROU组均按全国统编教材《口腔内科学》第三版标准进行诊断，共72例 ，男42例，女30例，年龄9～47岁。对照组为自愿受检者(非ROU患者)，共 94例，男55例，女39例，年龄10～52岁。条件控制：①所有受检者取样 前1周内未服用任何抗生素、铋剂、抗酸剂及H2受体拮抗剂，1月内未服用类固醇类药物 或非类固醇类抗炎药，如阿司匹林等；②所有受检者均不考虑是否为胃炎、胃溃疡等与Hp感 染有关的上消化道疾病患者，但须无严重全身性系统疾病，非Ⅱ度或Ⅱ度以上牙周炎患者； ③两组间年龄、性别、取样牙位和方法、患者牙周条件等可控制因素通过均衡检验，证实无 差异，具有可比性；④ROU患者按轻型ROU、重型ROU和疱疹样ROU分类，然后分别观察其Hp 阳性率检测结果的差别。
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1.2 实验方法
所有受检者检测早晨均按指导刷牙，取样前用无菌生理盐水轻轻将口腔漱干净，然后刮取每 位受检者前牙、前磨牙、磨牙上、下颌各1个牙位，尽量取牙周情况较好的牙齿的龈上、龈 下共12份菌斑，置于无菌生理盐水的尖嘴离心管，-40℃保存备检。
将备检菌斑放入400μl无菌生理盐水溶液中离心12 000r/min×5min，弃上 清 ，加DNA裂解液50μl，蛋白酶K 2μl， 55℃孵育1h，100℃水浴10min，同时设置阳性模板 和阴性对照(Pacific Econ-Tech Co. USA PCR试剂盒)；15 000r/min×5min离心后，取5μ l进行PCR检测。取PCR扩增产物15μl，用15g/L琼脂糖凝胶 (含0.5g/L溴化乙锭)经TAE电泳缓冲液，电泳30min(电压5v/cm)后在紫外透射反射仪300nm下 观察结果，如果在200bp处出现橙黄色条带，则诊断为Hp阳性(+)；每一位受检者12份牙菌斑 中只要有1份Hp阳性，则该受检者口腔Hp检测结果统计为阳性。
, 百拇医药
2 结果
2.1 两组共166例1992份菌斑，检测结果见表1。由表可见，ROU组Hp感染阳性率明显高于对 照组(P<0.01)。
表1 两组Hp-PCR检测结果 组别
菌斑检测结果
总检测结果
菌斑数
菌斑Hp阳性数
%
受检人数
菌斑Hp阳性数
%
, 百拇医药
ROU组
864
321
37.13
72
41
56.94
对照组
1128
93
8.24
94
27
, http://www.100md.com
28.72
合计
1992
414
20.78
166
68
40.96
2.2 各型ROU患者Hp检测结果见表2。由表可见，重型ROU患者与轻型ROU患者 Hp检测 结果亦有较为显著的差异(P<0.05)；Hp阳性率随着溃疡程度加重而升高。表2 不同类型ROU患者Hp检测结果
受检人数
Hp-PCR阳性人数
, 百拇医药
Hp阳性率(%)
轻型ROU
43
23
53.49
疱疹样ROU
23
13
56.52
重型ROU
6
5
83.33
, http://www.100md.com
合计
72
41
56.94
3 讨论 Hp是公认的慢性活动性胃炎的致病菌，是消化性溃疡重要的致病因子，并与胃癌及胃粘膜相 关的恶性淋巴瘤密切相关[1]。随着Hp在牙菌斑上不断发现[2，3]，它对 口 腔粘膜病、牙周炎、干槽症等一些病因尚不清楚的口腔疾病的作用一直是热门课题。早在80 年代末期，许多人就进行了RAS与上消化道疾病关系的研究，认为它们之间关系密切。但199 7年Porter等通过RAS及其它口腔疾病Hp血清IgG抗体水平比较，认为Hp在RAS及其它口 腔疾病中作用不大，但他们仅通过Hp血清IgG抗体的定性研究，未对其进行定量测定，因此 不能否定Hp与RAS等口腔疾病的关系。许国琪、张水龙、唐国瑶等通过一系列研究发现，口 腔 粘膜扁平苔癣(OLP)的发病与Hp密切相关[4]，提出抗幽门螺杆菌治疗是治疗OLP的 一种有效方法[5]，并对其疗效进行了分析，认为Hp是引发OLP的一个重要而又直 接的原因[6]。这表明Hp与OLP有着密不可分的联系。
, 百拇医药
ROU与OLP都是口腔粘膜疾病，二者在发病上有许多共同之处；而口腔粘膜与胃壁粘 膜同属消化系统，均来自于外胚层，考虑彼此间可能有共同的抗原成分，当来自于口腔粘膜 和 (或)胃壁粘膜的自身抗原刺激机体，从而引发下面的免疫学变化：粘膜自身抗原→致敏淋巴 细胞抗体→致敏淋巴细胞诱发初期粘膜损害→释放与抗体结合的抗原→免疫复合物(IC)→局 部激活补体C3a、C5a、C56789→细胞溶解→多形核细胞浸润→灶状粘膜损害。引发口腔粘膜 损害的抗口腔粘膜抗体(AOMA)与引发胃壁粘膜损害的抗胃壁粘膜抗体(ASMA)是相互作用并且 部分交叉免疫，这就决定了口腔粘膜病与胃壁粘膜病在发病学上有许多共同之处。
当然，并不是口腔粘膜损害一定合并胃粘膜损害，Desai等[7]1991年就发现胃Hp- PCR阴性者口腔Hp-PCR可能为阳性，表明Hp对口腔粘膜的作用并不依赖胃肠Hp的影响。本研 究 不考虑受检者是否为上消化道疾病患者，但72例ROU患者中64例有不同程度的 上消化道症状，占88.9%；而对照组仅16例(17.2%)，提示ROU、Hp、上消化道疾病之间有某 种必然联系。ROU患者口腔中Hp阳性率明显高于对照组，且随着溃疡程度的加重，Hp阳性 率逐渐上升，也说明这一点。然而，目前口腔中Hp的培养还未获得成功，再加上口腔菌群十 分复杂，Hp对ROU的作用机制尚须进一步研究。
, 百拇医药
【参考文献】
[1] 胡伏莲，周殿员，贾博奇，等. 幽门螺杆菌感染的基础与临床. 北京：中 国科学技术出版社，1997.46
[2] Mapstone NP, Lynch DAF, Axon ATR, et al. The detection of Hel ic obacter pylori in faces by polymerase chain reaction. Ir J Med Sci, 1992,161:S29
[3] Shames B, Krajden S, Fuksa M, et al. Evidence for the occurre nce of the same strain of compylobacter pylori in the stomach and dental plaque. J Clin Microbiol, 1989,27:2849
, 百拇医药
[4] 唐国瑶，许国琪，马菊珍. 口腔扁平苔癣与慢性胃炎关系的临床研究. 临 床口腔医学杂志，1998，14(4)：226
[5] 许国琪，张水龙，马菊珍，等. 杀灭幽门螺杆菌是治疗口腔扁平苔癣的 一种有效方法. 临床口腔医学杂志，1998，14(3)：157
[6] 张水龙，许国琪，曹宏康，等. 抗幽门螺杆菌治疗口腔扁平苔癣的疗效分 析. 临床口腔医学杂志，1999，15(1)：34
[7] Desai HG, Gill HH, Shankaran K, et al. Dental plaque: a perma nent reservior of Helicobacter pylori? Scan J Gastroentero, 1991,26:1205
收稿日期：1999-07-16; 修回日期：1999-12-10, http://www.100md.com
单位：陈发明(解放军401医院)；贾保军(解放军401医院)；曲淑华(解放军401医院)；刘民(解放军401医院)；孙海花(海军青岛疗养院，山东 青岛 266071)
关键词：复发性口腔溃疡； 口腔幽门螺杆菌； 聚合酶链反应
牙体牙髓牙周病学杂志000207 【摘 要】 目的：初步探讨复发性口腔溃疡(recurren t oral ulcer, ROU)患者的发病与其口腔中的幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)之间 的关系。方法：通过聚合酶链反应(polymer ase chain reaction, PCR)，对每位ROU患者口腔中6个不同牙位龈上、龈下共12份菌斑进行 检测，同时设立健康对照组，比较两组检测结果。结果：共检测ROU 患者72例，对照组94例；Hp阳性率分别为56.94%和28.72%，差异非常显著(P<0.01) ；且轻 型ROU患者Hp阳性率明显低于重型ROU患者(P<0.05)。结论：ROU 的发病与口腔中Hp感染可能有关，其致病机理尚待进一步研究。
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【中图号】 R781.5 【文献标识码】 A
【文章编号】 1005-2593(20 00)02-0073-03
Helicobacter pylori in mouths of patients with recurrent oral ulcer
CHEN Fa-ming, SUN Hai-hua, JIA Bao-jun, et al
(Navy 401 Hospital of PLA, Qingdao, 266071)
【Abstract】 AIM：To investigate the relationship between Helicobacter pylori(Hp) and recurrent oral ulcer(ROU). METHODS: The distribution of Hp on the supragingival and subgingival dental plaque of 72 patients with ROU and 94 healthy persons were studied. 1992 plaques were collected from 6 teeth in each subject for polymerase chain reaction( PCR) assay. RESULTS: 56.94% of ROU patients and 28.72% of the control group were caught up Hp, there was a significantly different between tw o groups(P<0.01); The Hp-positive rate of the major ROU was enhanced obviously to minor-ROU (P<0.05). CONCLUSION: Hp perhaps is one of the pathogen to ROU and it is indicated that the relationship between Hp and ROU is close clinically. But need further studies.
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【Key words】 recurrent oral ulcer； oral helicobacte r pylori; polymerase chain reaction
复发性口腔溃疡(recurrent oral ulcer, ROU)又名复发性阿弗他口炎(rec urrent aphthou s stomatitis, RAS)、复发性口疮(recurrent phthae)，是口腔粘膜病中最常见的一种。病 因目前尚不十分清楚，国内外学者虽然作了大量研究，提供了许多与该病有关的因素，但均 未得到充分的证实。本文通过对72例ROU患者口腔中不同牙位龈上、龈下菌斑进行Hp-PCR检 测，发现ROU的发病可能与Hp相关。
1 材料和方法
1.1 检测对象
分为ROU组和对照组。ROU组均按全国统编教材《口腔内科学》第三版标准进行诊断，共72例 ，男42例，女30例，年龄9～47岁。对照组为自愿受检者(非ROU患者)，共 94例，男55例，女39例，年龄10～52岁。条件控制：①所有受检者取样 前1周内未服用任何抗生素、铋剂、抗酸剂及H2受体拮抗剂，1月内未服用类固醇类药物 或非类固醇类抗炎药，如阿司匹林等；②所有受检者均不考虑是否为胃炎、胃溃疡等与Hp感 染有关的上消化道疾病患者，但须无严重全身性系统疾病，非Ⅱ度或Ⅱ度以上牙周炎患者； ③两组间年龄、性别、取样牙位和方法、患者牙周条件等可控制因素通过均衡检验，证实无 差异，具有可比性；④ROU患者按轻型ROU、重型ROU和疱疹样ROU分类，然后分别观察其Hp 阳性率检测结果的差别。
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1.2 实验方法
所有受检者检测早晨均按指导刷牙，取样前用无菌生理盐水轻轻将口腔漱干净，然后刮取每 位受检者前牙、前磨牙、磨牙上、下颌各1个牙位，尽量取牙周情况较好的牙齿的龈上、龈 下共12份菌斑，置于无菌生理盐水的尖嘴离心管，-40℃保存备检。
将备检菌斑放入400μl无菌生理盐水溶液中离心12 000r/min×5min，弃上 清 ，加DNA裂解液50μl，蛋白酶K 2μl， 55℃孵育1h，100℃水浴10min，同时设置阳性模板 和阴性对照(Pacific Econ-Tech Co. USA PCR试剂盒)；15 000r/min×5min离心后，取5μ l进行PCR检测。取PCR扩增产物15μl，用15g/L琼脂糖凝胶 (含0.5g/L溴化乙锭)经TAE电泳缓冲液，电泳30min(电压5v/cm)后在紫外透射反射仪300nm下 观察结果，如果在200bp处出现橙黄色条带，则诊断为Hp阳性(+)；每一位受检者12份牙菌斑 中只要有1份Hp阳性，则该受检者口腔Hp检测结果统计为阳性。
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2 结果
2.1 两组共166例1992份菌斑，检测结果见表1。由表可见，ROU组Hp感染阳性率明显高于对 照组(P<0.01)。
表1 两组Hp-PCR检测结果 组别
菌斑检测结果
总检测结果
菌斑数
菌斑Hp阳性数
%
受检人数
菌斑Hp阳性数
%
, 百拇医药
ROU组
864
321
37.13
72
41
56.94
对照组
1128
93
8.24
94
27
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28.72
合计
1992
414
20.78
166
68
40.96
2.2 各型ROU患者Hp检测结果见表2。由表可见，重型ROU患者与轻型ROU患者 Hp检测 结果亦有较为显著的差异(P<0.05)；Hp阳性率随着溃疡程度加重而升高。表2 不同类型ROU患者Hp检测结果
受检人数
Hp-PCR阳性人数
, 百拇医药
Hp阳性率(%)
轻型ROU
43
23
53.49
疱疹样ROU
23
13
56.52
重型ROU
6
5
83.33
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合计
72
41
56.94
3 讨论 Hp是公认的慢性活动性胃炎的致病菌，是消化性溃疡重要的致病因子，并与胃癌及胃粘膜相 关的恶性淋巴瘤密切相关[1]。随着Hp在牙菌斑上不断发现[2，3]，它对 口 腔粘膜病、牙周炎、干槽症等一些病因尚不清楚的口腔疾病的作用一直是热门课题。早在80 年代末期，许多人就进行了RAS与上消化道疾病关系的研究，认为它们之间关系密切。但199 7年Porter等通过RAS及其它口腔疾病Hp血清IgG抗体水平比较，认为Hp在RAS及其它口 腔疾病中作用不大，但他们仅通过Hp血清IgG抗体的定性研究，未对其进行定量测定，因此 不能否定Hp与RAS等口腔疾病的关系。许国琪、张水龙、唐国瑶等通过一系列研究发现，口 腔 粘膜扁平苔癣(OLP)的发病与Hp密切相关[4]，提出抗幽门螺杆菌治疗是治疗OLP的 一种有效方法[5]，并对其疗效进行了分析，认为Hp是引发OLP的一个重要而又直 接的原因[6]。这表明Hp与OLP有着密不可分的联系。
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ROU与OLP都是口腔粘膜疾病，二者在发病上有许多共同之处；而口腔粘膜与胃壁粘 膜同属消化系统，均来自于外胚层，考虑彼此间可能有共同的抗原成分，当来自于口腔粘膜 和 (或)胃壁粘膜的自身抗原刺激机体，从而引发下面的免疫学变化：粘膜自身抗原→致敏淋巴 细胞抗体→致敏淋巴细胞诱发初期粘膜损害→释放与抗体结合的抗原→免疫复合物(IC)→局 部激活补体C3a、C5a、C56789→细胞溶解→多形核细胞浸润→灶状粘膜损害。引发口腔粘膜 损害的抗口腔粘膜抗体(AOMA)与引发胃壁粘膜损害的抗胃壁粘膜抗体(ASMA)是相互作用并且 部分交叉免疫，这就决定了口腔粘膜病与胃壁粘膜病在发病学上有许多共同之处。
当然，并不是口腔粘膜损害一定合并胃粘膜损害，Desai等[7]1991年就发现胃Hp- PCR阴性者口腔Hp-PCR可能为阳性，表明Hp对口腔粘膜的作用并不依赖胃肠Hp的影响。本研 究 不考虑受检者是否为上消化道疾病患者，但72例ROU患者中64例有不同程度的 上消化道症状，占88.9%；而对照组仅16例(17.2%)，提示ROU、Hp、上消化道疾病之间有某 种必然联系。ROU患者口腔中Hp阳性率明显高于对照组，且随着溃疡程度的加重，Hp阳性 率逐渐上升，也说明这一点。然而，目前口腔中Hp的培养还未获得成功，再加上口腔菌群十 分复杂，Hp对ROU的作用机制尚须进一步研究。
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【参考文献】
[1] 胡伏莲，周殿员，贾博奇，等. 幽门螺杆菌感染的基础与临床. 北京：中 国科学技术出版社，1997.46
[2] Mapstone NP, Lynch DAF, Axon ATR, et al. The detection of Hel ic obacter pylori in faces by polymerase chain reaction. Ir J Med Sci, 1992,161:S29
[3] Shames B, Krajden S, Fuksa M, et al. Evidence for the occurre nce of the same strain of compylobacter pylori in the stomach and dental plaque. J Clin Microbiol, 1989,27:2849
, 百拇医药
[4] 唐国瑶，许国琪，马菊珍. 口腔扁平苔癣与慢性胃炎关系的临床研究. 临 床口腔医学杂志，1998，14(4)：226
[5] 许国琪，张水龙，马菊珍，等. 杀灭幽门螺杆菌是治疗口腔扁平苔癣的 一种有效方法. 临床口腔医学杂志，1998，14(3)：157
[6] 张水龙，许国琪，曹宏康，等. 抗幽门螺杆菌治疗口腔扁平苔癣的疗效分 析. 临床口腔医学杂志，1999，15(1)：34
[7] Desai HG, Gill HH, Shankaran K, et al. Dental plaque: a perma nent reservior of Helicobacter pylori? Scan J Gastroentero, 1991,26:1205
收稿日期：1999-07-16; 修回日期：1999-12-10, http://www.100md.com