多动小鼠血清中一氧化氮含量的改变
作者：李之林 王召友
单位：
关键词：
中国行为医学科学000225 多动症是儿童时期最常见的行为障碍之一，伴有不同程度的学习记忆困难，严重影响儿童的健康成长。多动症的儿童感知的速度比较缓慢，记忆保持的时间较为短暂，容易遗忘，记忆的再认不够准确，不够稳定，注意力易分散，无意注意占优势。学习记忆能力差。近年来科学研究发现，一氧化氮(NO)与突触可塑性和学习记忆关系密切，NO作为第三信使物质，在长时程突触增强(LTP)的形成和维持过程中起到一定的作用[1]。本文利用多动症动物模型来观察血清中NO含量的变化。
材料和方法
一、材料：实验选用昆明种雌性小白鼠，体重为25～30克。由徐州医学院动物实验中心提供，仪器：YSD-4型药理生理多用仪及小鼠自发活动计数仪均为蚌埠无线电二厂生产。小鼠跳台购于中国医学科学院药物研究所，721分光光度计购于上海医疗仪器厂。试剂：东莨菪碱注射液(0.3mg/ml)购于上海禾丰制药有限公司，NO测试盒购于北京邦定试剂公司。
, 百拇医药
二、方法：将小白鼠按体重排序，利用随机数字表随机分为10组，每组为8只。测量基础活动次数后，其中5组于给东莨菪碱(3mg/kg)腹腔注射后15分钟、30分钟、45分钟、60分钟、75分钟。再测定活动次数，用小鼠跳台测其相应的学习能力，断头取血。另外5组作为对照组给予相应剂量的生理盐水[2,3]。
取血清0.2ml加入0.6ml硫酸锌混匀，再加入0.1ml的4%氢氧化钠，混匀后，冰上孵育60分钟，12000转离心2分钟，取上清液0.6ml加入0.4ml双蒸水及0.1ml的0.3%磺胺，冰上孵育15分钟，之后再加入0.1ml的6mM萘乙烯二胺盐酸盐，室温放置1小时，545nm比色，读OD值，依同样方法绘制标准曲线，采用t检验统计学处理。
结 果
一、实验小鼠的活动状况＝ ( 给药后的活动次数- 基础活动次数)/ 基础活动次数×100%〔3〕。
, 百拇医药
小鼠在给东莨菪碱后30分钟，45分钟，60分钟活动次数增加，分别为143.7±52.1，187.9±44.1，155.5±63.4，较对照组明显增加(P<0.05)。
二、实验小鼠的学习成绩
将小鼠放在小鼠跳台中适应3min，然后通以36V电流记录小鼠从安全区跳回铜栅的错误次数，以10分为满分，扣除错误次数为学习成绩〔2〕。
表1 多动小鼠的跳台学习成绩(
±s，n=8)
30分钟
45分钟
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60分钟
多动组
6.33±4.53
5.09±2.75*
5.38±4.06*
对照组
8.20±1.72
8.88±1.36
8.63±2.96
*P<0.05
三、实验小鼠血清中NO的含量
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表2 多动小鼠血清中NO的含量(±s，n=5) 时间
15分钟
30分钟
45分钟
60分钟
75分钟
多动组
0.61±0.07
0.37±0.22*
0.24±0.30**
, 百拇医药
0.21±0.11**
0.45±0.26
对照组
0.72±0.10
0.72±0.10
1.12±0.27
0.88±0.27
0.93±0.32
*P<0.05 **P<0.01
讨 论
一、东莨菪碱与乙酰胆碱竞争M受体，与M受体结合后，从而使胆碱能神经突触的传入受阻，大脑皮层高级中枢的清醒状态降低，从而出现精神不集中，对下级中枢神经控制减弱，而出现无意识动作，动作过多等现象，该动物模型与乙酰胆碱皮内试验结果相符，与大多数公认的突触传递障碍，自制力不足机理相符[4]。
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二、多动症具有注意力不集中，行为障碍，冲动任性，活动过多，学习记忆困难等多种临床表现，最为突出的问题是学习成绩下降。多动症的儿童感知的分辩能力较弱，缺乏主动性和积极性，记忆保持的时间较为短暂，且容易遗忘，记忆的再认不够准确，不够稳定，注意力易分散，无意注意占优势，学习记忆困难，学习记忆过程可分为：获得(感知)；短时记忆；长时记忆和再现。NO是神经系统中一种新的重要的信息传递物质，NO作为第三信使物质，由突出后膜释放，作用于突出前膜，起逆行性信使作用[1]，在长时程突触增强(LTP)的形成和维持中起到重要作用，而LTP是一种神经元学习和记忆机制的模式[5]。在腹腔注射东莨菪碱后30min，45min，60min，小白鼠的活动次数较对照组明显增多，多动症动物模型血清中NO的含量较对照组显著降低，(如表2所示)。在45分钟和60分钟时学习成绩显著下降(如表1)。表明多动症小鼠血清中NO的含量低，使得信息传递产生一定的障碍，长时程突触增强形成慢或维持时间短，导致学习成绩显著下降。提示NO在多动症发病机制中起到一定作用。
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参考文献
1，Zhuo M,Scot A,Small ER, et al.Nityic Oxidand carbon monoxid pyduce activity dependent longtermsynaptic enhancement inhippocampus.Science， 1993，260(25):1946～1950.
2，徐淑云，卞如濂，陈修蹈.药理实验方法学.北京：人民卫生出版社，1991：659.
3，戴体俊.关于小鼠自主活动统计方法的商榷.中国药理学通报 1994，10(1)：77～78.
4，冷方南，王远任，凌耀星，等.儿童多动症临床治疗学. 中国医药科技出版社，1990：119.
5，Berger T.Long-term potentiation of hippocampal synaptie transmiXsion affects rats of behavioral Learning.Science，1984,224(4649):627～630.
(收稿日期：1999-10-12), http://www.100md.com
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关键词：
中国行为医学科学000225 多动症是儿童时期最常见的行为障碍之一，伴有不同程度的学习记忆困难，严重影响儿童的健康成长。多动症的儿童感知的速度比较缓慢，记忆保持的时间较为短暂，容易遗忘，记忆的再认不够准确，不够稳定，注意力易分散，无意注意占优势。学习记忆能力差。近年来科学研究发现，一氧化氮(NO)与突触可塑性和学习记忆关系密切，NO作为第三信使物质，在长时程突触增强(LTP)的形成和维持过程中起到一定的作用[1]。本文利用多动症动物模型来观察血清中NO含量的变化。
材料和方法
一、材料：实验选用昆明种雌性小白鼠，体重为25～30克。由徐州医学院动物实验中心提供，仪器：YSD-4型药理生理多用仪及小鼠自发活动计数仪均为蚌埠无线电二厂生产。小鼠跳台购于中国医学科学院药物研究所，721分光光度计购于上海医疗仪器厂。试剂：东莨菪碱注射液(0.3mg/ml)购于上海禾丰制药有限公司，NO测试盒购于北京邦定试剂公司。
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二、方法：将小白鼠按体重排序，利用随机数字表随机分为10组，每组为8只。测量基础活动次数后，其中5组于给东莨菪碱(3mg/kg)腹腔注射后15分钟、30分钟、45分钟、60分钟、75分钟。再测定活动次数，用小鼠跳台测其相应的学习能力，断头取血。另外5组作为对照组给予相应剂量的生理盐水[2,3]。
取血清0.2ml加入0.6ml硫酸锌混匀，再加入0.1ml的4%氢氧化钠，混匀后，冰上孵育60分钟，12000转离心2分钟，取上清液0.6ml加入0.4ml双蒸水及0.1ml的0.3%磺胺，冰上孵育15分钟，之后再加入0.1ml的6mM萘乙烯二胺盐酸盐，室温放置1小时，545nm比色，读OD值，依同样方法绘制标准曲线，采用t检验统计学处理。
结 果
一、实验小鼠的活动状况＝ ( 给药后的活动次数- 基础活动次数)/ 基础活动次数×100%〔3〕。
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小鼠在给东莨菪碱后30分钟，45分钟，60分钟活动次数增加，分别为143.7±52.1，187.9±44.1，155.5±63.4，较对照组明显增加(P<0.05)。
二、实验小鼠的学习成绩
将小鼠放在小鼠跳台中适应3min，然后通以36V电流记录小鼠从安全区跳回铜栅的错误次数，以10分为满分，扣除错误次数为学习成绩〔2〕。
表1 多动小鼠的跳台学习成绩(
±s，n=8)30分钟
45分钟
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60分钟
多动组
6.33±4.53
5.09±2.75*
5.38±4.06*
对照组
8.20±1.72
8.88±1.36
8.63±2.96
*P<0.05
三、实验小鼠血清中NO的含量
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表2 多动小鼠血清中NO的含量(
±s，n=5) 时间15分钟
30分钟
45分钟
60分钟
75分钟
多动组
0.61±0.07
0.37±0.22*
0.24±0.30**
, 百拇医药
0.21±0.11**
0.45±0.26
对照组
0.72±0.10
0.72±0.10
1.12±0.27
0.88±0.27
0.93±0.32
*P<0.05 **P<0.01
讨 论
一、东莨菪碱与乙酰胆碱竞争M受体，与M受体结合后，从而使胆碱能神经突触的传入受阻，大脑皮层高级中枢的清醒状态降低，从而出现精神不集中，对下级中枢神经控制减弱，而出现无意识动作，动作过多等现象，该动物模型与乙酰胆碱皮内试验结果相符，与大多数公认的突触传递障碍，自制力不足机理相符[4]。
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二、多动症具有注意力不集中，行为障碍，冲动任性，活动过多，学习记忆困难等多种临床表现，最为突出的问题是学习成绩下降。多动症的儿童感知的分辩能力较弱，缺乏主动性和积极性，记忆保持的时间较为短暂，且容易遗忘，记忆的再认不够准确，不够稳定，注意力易分散，无意注意占优势，学习记忆困难，学习记忆过程可分为：获得(感知)；短时记忆；长时记忆和再现。NO是神经系统中一种新的重要的信息传递物质，NO作为第三信使物质，由突出后膜释放，作用于突出前膜，起逆行性信使作用[1]，在长时程突触增强(LTP)的形成和维持中起到重要作用，而LTP是一种神经元学习和记忆机制的模式[5]。在腹腔注射东莨菪碱后30min，45min，60min，小白鼠的活动次数较对照组明显增多，多动症动物模型血清中NO的含量较对照组显著降低，(如表2所示)。在45分钟和60分钟时学习成绩显著下降(如表1)。表明多动症小鼠血清中NO的含量低，使得信息传递产生一定的障碍，长时程突触增强形成慢或维持时间短，导致学习成绩显著下降。提示NO在多动症发病机制中起到一定作用。
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参考文献
1，Zhuo M,Scot A,Small ER, et al.Nityic Oxidand carbon monoxid pyduce activity dependent longtermsynaptic enhancement inhippocampus.Science， 1993，260(25):1946～1950.
2，徐淑云，卞如濂，陈修蹈.药理实验方法学.北京：人民卫生出版社，1991：659.
3，戴体俊.关于小鼠自主活动统计方法的商榷.中国药理学通报 1994，10(1)：77～78.
4，冷方南，王远任，凌耀星，等.儿童多动症临床治疗学. 中国医药科技出版社，1990：119.
5，Berger T.Long-term potentiation of hippocampal synaptie transmiXsion affects rats of behavioral Learning.Science，1984,224(4649):627～630.
(收稿日期：1999-10-12), http://www.100md.com