MRP及LRP在人恶性黑色素瘤转移性淋巴结组织中的表达及临床意义研究
作者：郑静晨 穆晓峰 彭碧波 李明 陈关信 白羽
单位：郑静晨(武警总医院肿瘤科 北京 100039)；穆晓峰(武警总医院肿瘤科 北京 100039)；彭碧波(武警总医院肿瘤科 北京 100039)；李明(武警总医院肿瘤科 北京 100039)；陈关信(武警总医院肿瘤科 北京 100039)；白羽(武警总医院肿瘤科 北京 100039)
关键词：MRP；LRP；恶性黑色素瘤；转移性淋巴结
MRP及LRP在人恶性黑色素瘤转移性淋巴结组织中的表达及临床意义研究 〔摘要〕 目的 研究多药耐药相关蛋白(MRP)肺耐药蛋白(LRP)在人恶性黑色素瘤转移淋巴结组织中的表达及其与以顺铂、氮唏咪胺为主的联合化疗(PDBV)疗效的关系。方法 免疫组织化学技术对石蜡包埋组织标本进行检测。结果 26例晚期恶性黑色素瘤患者转移性淋巴结组织中MRP、LRP表达阳性检出率为38.5%(10/26)和69.2%(18/26)。MRP表达与PDBV化疗疗效无显著相关(P>0.05)，而LRP阳性表达者化疗有效率明显低于阴性者(P<0.05)。结论 MRP、LRP在人恶性黑色素瘤转移性淋巴结组织中有一定程度表达，检测LRP表达对临床用药的指导可能有意义。
, 百拇医药
〔中图分类号〕 R739.5 〔文献标识码〕B
The expression of MRP and LRP in metastatic lymph node tissues of malignant melanoma
ZHENG Jin-chen,MU Xiao-feng,PENG Bi-bo et al
(Department of Oncology,General Hospital of Chinese People′s Armed Police Forces,Beijing 100039)
〔Abstract〕 Objective To investigate the expression of multidrug resistance-associated protein (MRP) and lung resistance protein (LRP) in metastatic lymph nodes tissues of malignant melanoma and to determine whether it was able to predict the response to chemotherapy with PDBV(DDP+DTIC+BCNU+VCR) regimen.Methods 26 Paraffin embeded metastatic lymph nodes of malignant melanoma were examined by using immunohistochemistry method.Results 10(38.5%) and 18(69.2%) of 26 metastatic lymph nodes examined showed positive immunostaining for MRP and LRP respectively.LRP-Possitive patients had poor response to chemotherapy than LRP-negative patients.No association was found between MRP expression and the response to chemotherapy.Conclusions Positive LRP immunostaining in metastatic lymph nodes of malignant melanoma appears to be an indicator of poor response to chemotherapy with PDBV,it may be helpful to choose anticancer drugs in chemotherapy of malignant melanoma.
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〔Key words〕 MRP;LRP;metastatic lymph node;malignant melanoma
化学治疗仍是晚期恶性黑色素瘤的主要治疗手段。但恶性黑色素瘤对化疗的有效率为33～50%，且很易复发，先天性及获得性耐药仍是导致其化疗失败的重要原因[1]。由多药耐药基因(MDRI)编码的产物P-糖蛋白，多药耐药相关蛋白(MRP)基因及肺耐药蛋白(LRP)基因编码的相关产物通过将药物排出胞外或减少药物于核/胞质比率，将化疗药物储存于囊泡而导致瘤细胞对化疗药物耐药[2-4]。有作者通过对21例人恶性黑色素瘤组织的研究表明，P-糖蛋白仅有1例阳性，提示其在该瘤耐药的发生中作用不大。而MRP及LRP在其原发灶及转移灶中的表达较高，推测MRP及LRP可能是人恶性黑色素瘤对化疗不敏感的机制之一[5]。但缺乏瘤组织中MRP、LRP表达与其对化疗疗效间相互关系的研究。以顺铂(DDP)及氮唏咪胺(DTIC)为主的联合化疗是临床常用的治疗恶性黑色素瘤的方案，本实验对26例晚期恶性黑色素瘤患者转移性淋巴结组织中的MRP、LRP表达进行了检测，并与化疗疗效作了对比研究，以进一步探讨两蛋白表达与化疗疗效的关系。
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材料和方法
一、一般资料：26例人恶性黑色素瘤转移性淋巴结石蜡组织取自1983年7月～1998年7月医科院肿瘤医院及本院外科手术切除的标本。全部病例均为病理证实。男性19例、女性7例。年龄19～61岁，中位年龄42岁。16例患者接受过化疗或于化疗中取材。TNM分期：Ⅲ期4例，Ⅳ期22例；肿瘤原发部位：下肢15例，上肢7例，头部4例。转移部位：淋巴结26例，肺2例，肝1例，皮下2例。治疗方法及疗效标准：所有病人均用PDBV化疗(顺铂+卡氮芥+长春新碱+氮唏咪胺)，具体为：顺铂(DDP)50mg/日，静滴，第1～3天，卡氮芥(BCNU)125mg，静滴，第1天；长春新碱(VCR)2mg，静注，第1天；氮唏咪胺(DTIC)200mg/日，静滴，第1～5天。三周为一周期，2～4周期为一疗程。按WHO肿瘤化疗效标准进行评价。
二、免疫组织化学分析：单抗MRPr1及LRP-56均由荷兰大学医学院Scheper教授提供，中国医学科学院肿瘤医院彭向红博士赠送。按说明书用北京中山公司的SP试剂盒进行检测，MRP单抗(MRPr1)浓度10ug/ml，工作浓度1∶50，LRP单抗(LRP-56)浓度10ug/ml，工作浓度1∶25，以PBS(磷酸缓冲液)代替一抗作空白对照，以已知阳性的肺癌切片作为阳性对照。DAB染色，苏木素复染，以胞膜或浆染为黄色作为MRP阳性，胞浆染色作为LRP阳性，切片中5%～25%细胞染色定为弱阳性(+)，25%～50%为中度阳性(++)，50%以上者为强阳性(+++)[4]。
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三、统计学处理：结果采用X2检验。
结果
一、26例恶性黑色素瘤转移性淋巴结中，MRP阳性者10例，其中弱阳性者4例，中度阳性者2例，强阳性4例，阳性表达检出率38.5%。LRP阳性者18例，其中弱阳性者3例，中度阳性者8例，强阳性7例，阳性表达检出率69.2%。16例曾接受过PDBV化疗(12例为巩固化疗)的患者中，MRP阳性者7例(43.8%)，而LRP阳性者13例(81.3%)，经化疗者淋巴结转移灶中MRP、LRP表达阳性率高于未化疗者。但统计学处理无显著差异(P>0.05)。见表1。
表1 MRP、LRP表达与既往是否接受化疗的关系
MRP
P值
, 百拇医药 LRP
P值
+
-
+
-
既往曾化疗 (16)
7
9
0.483
13
3
0.093
未接受化疗 (10)
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3
7
5
5
二、26例患者中，MRP阳性者10例中，完全缓解1例，部分缓解3例，而16例阴性者中，1例完全缓解，7例部分缓解，统计学处理无显著差异(P>0.05)。18例LRP阳性者中，有6例获部分缓解，而8例阴性者中有2例完全缓解，4例部分缓解，统计学处理表明，LRP阳性者对PDBV疗效明显低于阴性者。见表2。 表2 MRP、LRP表达与PDBV化疗敏感性关系
病例数
完全缓解
部分缓解
无效
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P
MRP阳性
10
1
3
6
0.619
阴性
16
1
7
8
LRP阳性
18
, http://www.100md.com
0
6
12
阴性
8
2
4
2
0.049
三、26例转移性淋巴结组织中，有MRP或LRP表达者22例(76.9%)，两者共同表达者6例，统计学处理二者表达无显著相关性(P>0.05)。
讨论
MRP基因定位于人染色体16号P13.1，长约7.8～8.2Kb，编码1531个氨基酸，分子量为190KD的蛋白(MRP)，通过改变胞浆及细胞器的PH值使药物到达其作用部位的浓度减少，将药物排出胞外而导致耐药，体外试验表明其介导如阿霉素(ADM)、足叶乙甙(VP-16)、长春新碱(VCR)、长春花碱酰胺(VDS)等的耐药[3]。LRP基因定位于人染色体16号P13.1与11.2间，编码一分子量为110KD的蛋白(LRP)，定位于核孔复合物上，作为该复合物的转运单位，通过调节囊泡和核质的药物转运，将化疗药物储存于囊泡，并减少核/胞质比率而导致耐药。体外试验证实其介导ADM、VDS、VP-16、DDP、CBP、马法兰等耐药，有人证实卵巢癌组织LRP表达与化疗耐药明显相关[4，6]。
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本研究初步表明，MRP及LRP在人恶性黑色素瘤转移性淋巴结组织中有一定的表达，MRP、LRP表达与化疗与否无显著相关。有LRP表达者对PDBV化疗疗效明显低于阴性者，MRP则未见有显著性差异，可能解释是：由于MRP介导如ADM、VCR、VDS、VP-16等的耐药，这些药物并非恶性黑色素瘤患者有效的常用的化疗药，而LRP则介导DDP、ADM、VDS、VCR、BCNU等的耐药。故通过26例经PDBV化疗患者的对比研究表明，LRP与其疗效相关，而MRP则无显著性。但并不能由此推出MRP在恶性黑色素瘤组织中的表达与耐药毫无关系，有待进一步研究。Schadendorf通过对21例人恶性黑色素瘤原发灶及37例转移灶(取自20例患者)的研究表明，MRP在原发灶及转移灶中阳性率分别为42.9%(9/21)，43.3%(16/21)，其表达与化疗与否无关，而LRP在原发灶及转移灶中阳性率分别为76.2%(16/31)，83.7%(31/37)，其中11例强阳性者中有7例曾接受过化疗，其余26例患者中则有11例未行化疗，表明LRP表达与化疗与否明显相关[5]。本实验结果MRP阳性表达率与Schadendorf相似，而LRP阳性表达率69.2%(18/26)低于其阳性率83.7%(31/37)，由于Schadendorf取材的37例转移性淋巴结来自于20例患者，有数例转移灶取自于同一患者。不能除外由于标本的重复而导致其阳性率偏高，且其未对MRP及LRP表达与临床化疗相关性对比研究，故难有更大说服力。
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本研究初步表明，MRP和LRP在人恶性黑色素瘤转移性淋巴结中有一定程度的表达，有LRP表达者对PDBV疗效较差。检测LRP有助于临床用药选择。
作者简介：郑静晨(1959-)，男，西安人，硕士，副主任医师。从事肿瘤内科专业。
参考文献
1，Murren JR,Derosa W,Durivage HJ,et al.High-doses cisplatin plus dacarbazine in the treatment of metastatic melanoma.Cancer,1996;67:1514-1517
2，Nooter K,Herweijer H.Multidrug resistance(mdr)genes in human cancer.Br J Cancer,1991;63:663-669
, 百拇医药
3，Zaman GJR,Lankelma JL,Tellingen OV,et al.Role of glutathione in the export of compounds from cells by the multidrug resistance-associated protein.Proc Natl Acad Sci USA,1995;95:7690-7694
4，Izquierdo MA,Vanderzee AGJ,Vermorden JB,et al.Drug resistance associated marker LRP for prediction of response to chemotherapy and prognosis in advanced ovarian carcinoma.J Natl Cancer Inst,1995;87:1230-1237
5，Schadendorf D,Makki A,Stahr C et al.Membrane transport proteins associated with drug resistance expressed in human melanoma.Am J Pathol,1995;147:1545-1552
6，Izquierdo MA,Shoemaker RH,Flens MJ et al.Overlapping phenotypes of multidrug resistance among panels of human cancer cell lines.In J Cancer,1996;65:230-237
收稿日期：1999-7-1, 百拇医药
单位：郑静晨(武警总医院肿瘤科 北京 100039)；穆晓峰(武警总医院肿瘤科 北京 100039)；彭碧波(武警总医院肿瘤科 北京 100039)；李明(武警总医院肿瘤科 北京 100039)；陈关信(武警总医院肿瘤科 北京 100039)；白羽(武警总医院肿瘤科 北京 100039)
关键词：MRP；LRP；恶性黑色素瘤；转移性淋巴结
MRP及LRP在人恶性黑色素瘤转移性淋巴结组织中的表达及临床意义研究 〔摘要〕 目的 研究多药耐药相关蛋白(MRP)肺耐药蛋白(LRP)在人恶性黑色素瘤转移淋巴结组织中的表达及其与以顺铂、氮唏咪胺为主的联合化疗(PDBV)疗效的关系。方法 免疫组织化学技术对石蜡包埋组织标本进行检测。结果 26例晚期恶性黑色素瘤患者转移性淋巴结组织中MRP、LRP表达阳性检出率为38.5%(10/26)和69.2%(18/26)。MRP表达与PDBV化疗疗效无显著相关(P>0.05)，而LRP阳性表达者化疗有效率明显低于阴性者(P<0.05)。结论 MRP、LRP在人恶性黑色素瘤转移性淋巴结组织中有一定程度表达，检测LRP表达对临床用药的指导可能有意义。
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〔中图分类号〕 R739.5 〔文献标识码〕B
The expression of MRP and LRP in metastatic lymph node tissues of malignant melanoma
ZHENG Jin-chen,MU Xiao-feng,PENG Bi-bo et al
(Department of Oncology,General Hospital of Chinese People′s Armed Police Forces,Beijing 100039)
〔Abstract〕 Objective To investigate the expression of multidrug resistance-associated protein (MRP) and lung resistance protein (LRP) in metastatic lymph nodes tissues of malignant melanoma and to determine whether it was able to predict the response to chemotherapy with PDBV(DDP+DTIC+BCNU+VCR) regimen.Methods 26 Paraffin embeded metastatic lymph nodes of malignant melanoma were examined by using immunohistochemistry method.Results 10(38.5%) and 18(69.2%) of 26 metastatic lymph nodes examined showed positive immunostaining for MRP and LRP respectively.LRP-Possitive patients had poor response to chemotherapy than LRP-negative patients.No association was found between MRP expression and the response to chemotherapy.Conclusions Positive LRP immunostaining in metastatic lymph nodes of malignant melanoma appears to be an indicator of poor response to chemotherapy with PDBV,it may be helpful to choose anticancer drugs in chemotherapy of malignant melanoma.
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〔Key words〕 MRP;LRP;metastatic lymph node;malignant melanoma
化学治疗仍是晚期恶性黑色素瘤的主要治疗手段。但恶性黑色素瘤对化疗的有效率为33～50%，且很易复发，先天性及获得性耐药仍是导致其化疗失败的重要原因[1]。由多药耐药基因(MDRI)编码的产物P-糖蛋白，多药耐药相关蛋白(MRP)基因及肺耐药蛋白(LRP)基因编码的相关产物通过将药物排出胞外或减少药物于核/胞质比率，将化疗药物储存于囊泡而导致瘤细胞对化疗药物耐药[2-4]。有作者通过对21例人恶性黑色素瘤组织的研究表明，P-糖蛋白仅有1例阳性，提示其在该瘤耐药的发生中作用不大。而MRP及LRP在其原发灶及转移灶中的表达较高，推测MRP及LRP可能是人恶性黑色素瘤对化疗不敏感的机制之一[5]。但缺乏瘤组织中MRP、LRP表达与其对化疗疗效间相互关系的研究。以顺铂(DDP)及氮唏咪胺(DTIC)为主的联合化疗是临床常用的治疗恶性黑色素瘤的方案，本实验对26例晚期恶性黑色素瘤患者转移性淋巴结组织中的MRP、LRP表达进行了检测，并与化疗疗效作了对比研究，以进一步探讨两蛋白表达与化疗疗效的关系。
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材料和方法
一、一般资料：26例人恶性黑色素瘤转移性淋巴结石蜡组织取自1983年7月～1998年7月医科院肿瘤医院及本院外科手术切除的标本。全部病例均为病理证实。男性19例、女性7例。年龄19～61岁，中位年龄42岁。16例患者接受过化疗或于化疗中取材。TNM分期：Ⅲ期4例，Ⅳ期22例；肿瘤原发部位：下肢15例，上肢7例，头部4例。转移部位：淋巴结26例，肺2例，肝1例，皮下2例。治疗方法及疗效标准：所有病人均用PDBV化疗(顺铂+卡氮芥+长春新碱+氮唏咪胺)，具体为：顺铂(DDP)50mg/日，静滴，第1～3天，卡氮芥(BCNU)125mg，静滴，第1天；长春新碱(VCR)2mg，静注，第1天；氮唏咪胺(DTIC)200mg/日，静滴，第1～5天。三周为一周期，2～4周期为一疗程。按WHO肿瘤化疗效标准进行评价。
二、免疫组织化学分析：单抗MRPr1及LRP-56均由荷兰大学医学院Scheper教授提供，中国医学科学院肿瘤医院彭向红博士赠送。按说明书用北京中山公司的SP试剂盒进行检测，MRP单抗(MRPr1)浓度10ug/ml，工作浓度1∶50，LRP单抗(LRP-56)浓度10ug/ml，工作浓度1∶25，以PBS(磷酸缓冲液)代替一抗作空白对照，以已知阳性的肺癌切片作为阳性对照。DAB染色，苏木素复染，以胞膜或浆染为黄色作为MRP阳性，胞浆染色作为LRP阳性，切片中5%～25%细胞染色定为弱阳性(+)，25%～50%为中度阳性(++)，50%以上者为强阳性(+++)[4]。
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三、统计学处理：结果采用X2检验。
结果
一、26例恶性黑色素瘤转移性淋巴结中，MRP阳性者10例，其中弱阳性者4例，中度阳性者2例，强阳性4例，阳性表达检出率38.5%。LRP阳性者18例，其中弱阳性者3例，中度阳性者8例，强阳性7例，阳性表达检出率69.2%。16例曾接受过PDBV化疗(12例为巩固化疗)的患者中，MRP阳性者7例(43.8%)，而LRP阳性者13例(81.3%)，经化疗者淋巴结转移灶中MRP、LRP表达阳性率高于未化疗者。但统计学处理无显著差异(P>0.05)。见表1。
表1 MRP、LRP表达与既往是否接受化疗的关系
MRP
P值
, 百拇医药 LRP
P值
+
-
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既往曾化疗 (16)
7
9
0.483
13
3
0.093
未接受化疗 (10)
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3
7
5
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二、26例患者中，MRP阳性者10例中，完全缓解1例，部分缓解3例，而16例阴性者中，1例完全缓解，7例部分缓解，统计学处理无显著差异(P>0.05)。18例LRP阳性者中，有6例获部分缓解，而8例阴性者中有2例完全缓解，4例部分缓解，统计学处理表明，LRP阳性者对PDBV疗效明显低于阴性者。见表2。 表2 MRP、LRP表达与PDBV化疗敏感性关系
病例数
完全缓解
部分缓解
无效
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P
MRP阳性
10
1
3
6
0.619
阴性
16
1
7
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LRP阳性
18
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0
6
12
阴性
8
2
4
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0.049
三、26例转移性淋巴结组织中，有MRP或LRP表达者22例(76.9%)，两者共同表达者6例，统计学处理二者表达无显著相关性(P>0.05)。
讨论
MRP基因定位于人染色体16号P13.1，长约7.8～8.2Kb，编码1531个氨基酸，分子量为190KD的蛋白(MRP)，通过改变胞浆及细胞器的PH值使药物到达其作用部位的浓度减少，将药物排出胞外而导致耐药，体外试验表明其介导如阿霉素(ADM)、足叶乙甙(VP-16)、长春新碱(VCR)、长春花碱酰胺(VDS)等的耐药[3]。LRP基因定位于人染色体16号P13.1与11.2间，编码一分子量为110KD的蛋白(LRP)，定位于核孔复合物上，作为该复合物的转运单位，通过调节囊泡和核质的药物转运，将化疗药物储存于囊泡，并减少核/胞质比率而导致耐药。体外试验证实其介导ADM、VDS、VP-16、DDP、CBP、马法兰等耐药，有人证实卵巢癌组织LRP表达与化疗耐药明显相关[4，6]。
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本研究初步表明，MRP及LRP在人恶性黑色素瘤转移性淋巴结组织中有一定的表达，MRP、LRP表达与化疗与否无显著相关。有LRP表达者对PDBV化疗疗效明显低于阴性者，MRP则未见有显著性差异，可能解释是：由于MRP介导如ADM、VCR、VDS、VP-16等的耐药，这些药物并非恶性黑色素瘤患者有效的常用的化疗药，而LRP则介导DDP、ADM、VDS、VCR、BCNU等的耐药。故通过26例经PDBV化疗患者的对比研究表明，LRP与其疗效相关，而MRP则无显著性。但并不能由此推出MRP在恶性黑色素瘤组织中的表达与耐药毫无关系，有待进一步研究。Schadendorf通过对21例人恶性黑色素瘤原发灶及37例转移灶(取自20例患者)的研究表明，MRP在原发灶及转移灶中阳性率分别为42.9%(9/21)，43.3%(16/21)，其表达与化疗与否无关，而LRP在原发灶及转移灶中阳性率分别为76.2%(16/31)，83.7%(31/37)，其中11例强阳性者中有7例曾接受过化疗，其余26例患者中则有11例未行化疗，表明LRP表达与化疗与否明显相关[5]。本实验结果MRP阳性表达率与Schadendorf相似，而LRP阳性表达率69.2%(18/26)低于其阳性率83.7%(31/37)，由于Schadendorf取材的37例转移性淋巴结来自于20例患者，有数例转移灶取自于同一患者。不能除外由于标本的重复而导致其阳性率偏高，且其未对MRP及LRP表达与临床化疗相关性对比研究，故难有更大说服力。
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本研究初步表明，MRP和LRP在人恶性黑色素瘤转移性淋巴结中有一定程度的表达，有LRP表达者对PDBV疗效较差。检测LRP有助于临床用药选择。
作者简介：郑静晨(1959-)，男，西安人，硕士，副主任医师。从事肿瘤内科专业。
参考文献
1，Murren JR,Derosa W,Durivage HJ,et al.High-doses cisplatin plus dacarbazine in the treatment of metastatic melanoma.Cancer,1996;67:1514-1517
2，Nooter K,Herweijer H.Multidrug resistance(mdr)genes in human cancer.Br J Cancer,1991;63:663-669
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3，Zaman GJR,Lankelma JL,Tellingen OV,et al.Role of glutathione in the export of compounds from cells by the multidrug resistance-associated protein.Proc Natl Acad Sci USA,1995;95:7690-7694
4，Izquierdo MA,Vanderzee AGJ,Vermorden JB,et al.Drug resistance associated marker LRP for prediction of response to chemotherapy and prognosis in advanced ovarian carcinoma.J Natl Cancer Inst,1995;87:1230-1237
5，Schadendorf D,Makki A,Stahr C et al.Membrane transport proteins associated with drug resistance expressed in human melanoma.Am J Pathol,1995;147:1545-1552
6，Izquierdo MA,Shoemaker RH,Flens MJ et al.Overlapping phenotypes of multidrug resistance among panels of human cancer cell lines.In J Cancer,1996;65:230-237
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