肺耐药蛋白在大肠癌中的表达及临床意义
作者：刘忠民 寿楠海 姜希宏
单位：刘忠民(山东省泰安市中心医院 泰安 271000)；寿楠海(山东医科大学附属医院普外科)；姜希宏(山东医科大学附属医院普外科)
关键词：结直肠肿瘤；腺癌；肺耐药蛋白
肺耐药蛋白在大肠癌中的表达及临床意义 〔摘要〕 目的 探讨肺耐药蛋白(LRP)在大肠癌中的表达及其临床意义。方法 以免疫组化检测24例大肠癌组织中的LRP表达情况。结果 24例大肠癌中20例LRP阳性，阳性率为83.3%，高、中分化腺癌的LRP阳性率(17/17)明显高于低分化腺癌(0/2)，LRP表达与肿瘤部位、大小、淋巴结转移、浸润深度及Dukes分期无关。结论 LRP在大肠癌原发耐药中具有重要作用，LRP的测定有助于化疗药物的选择。
〔中图分类号〕 R735.3+4 〔文献标识码〕A
, 百拇医药
The expression of lung resistance protein in patients with colorectal carcinoma and its clinical significance
LIU Zhong-min,SHOU Nan-hai,Jiang Xi-hong.
(Department of General Surgery,Taian Central Hospital,Taian 271000)
〔Abstract〕 Objective To detect the expression of lung resistance protein (LRP) in patients with colorectal cancer and its clinical significance.Methods The LRP was measured by SABC immunohistochemical staining in 24 cases of colorectal cancer.Results LRP expressed in 20 out of 24 specimens,the positive rate of LRP is 83.3%.The positive rate of LRP in well and moderate differentiated adenocarcinoma was higher than that in poorly differentiated carcinoma.There was no correlation between the LRP expression and tumor site,size,lymph node involvement,serosal invasion or Dukes′ stages.Conclusions Our findings indicate that LRP plays an important role in intrinsic drug resistance in the colorectal cacner,and the analysis of LRP can help to choose the more effective chemotherapy drugs.
, 百拇医药
〔Key words〕 lung resistance protein;colorectal neoplasms;adenocarcinoma
多药耐药(multidrug resistance,MDR)的产生是大肠癌化疗失败的重要原因。已有研究表明mdr1基因编码的P-gp过度表达是大肠癌MDR的机理之一[1]。最近发现的一个MDR相关蛋白-肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)，是肿瘤耐药研究的一大进展[2]。我们的初步研究显示LRP在胃肠癌组织中过度表达[3]，但目前国内未见其它有关大肠癌LRP表达的报道。本文应用免疫组化方法研究LRP在大肠癌中的表达情况，并进一步探讨了LRP表达与大肠癌临床病理的关系，现报告如下。
材料和方法
一、材料来源 收集1997年9月～1998年8月间的大肠癌切除术后的蜡块标本，其中男15例，女9例。年龄27～81岁，平均54.9岁。大肠癌蜡块行4μm连续切片，贴于经多聚赖氨酸处理的切片上，60℃烘烤2小时。
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二、主要试剂 一抗为鼠抗人LRP单克隆抗体LRP-56(荷兰Free大学Scheper教授惠赠)。SABC试剂盒为博士德公司产品。
三、免疫组化染色 切片常规脱蜡至水，3%过氧
寿楠海(1930-)，男，南京人，博士生导师、教授。
化氢室温30分钟，滴加1∶50正常工作血清封闭液，室温孵育30分钟。甩去多余液体，滴加1∶20一抗10μl，4℃过夜。滴加生物素化山羊抗小鼠IgG10μl,37℃ 30分钟。滴加辣根过氧化物酶标记链霉卵白素10μl，37℃ 30分钟。滴加显色剂30μl，室温显色约20分钟(每步骤间用PBS浸洗)。苏木精复染，脱水，透明，封片。显微镜观察细胞浆呈清晰棕黄色者为阳性。
四、统计学处理 采用四格表直接概率计算法。
结果
, 百拇医药
一、LRP的分布 24例组织中，LRP阳性20例，阳性率为83.3%。在阳性细胞中，LRP呈棕黄色的颗粒分布于细胞浆中。在肿瘤组织中，部分病例的间质细胞等非肿瘤细胞可见LRP表达，但癌细胞的表达强度高于这些细胞。
二、LRP在大肠癌组织中的表达情况 根据肿瘤的部位、大小、组织学类型、淋巴结转移、肿瘤浸润深度和Dukes分期进行分组，分析LRP表达与临床病理的关系，结果见表1。
表1 LRP表达与临床病理的关系(例数)
病理参数
LRP阳性
LRP阴性
肿瘤部位
结肠
, 百拇医药
12
3
直肠
8
1
肿瘤大小
<5cm
12
2
≥5cm
8
2
组织学类型
高分化腺癌
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9
0
中分化腺癌
8
0
低分化腺癌
0
2*
粘液癌
2
1
类癌
1
, http://www.100md.com 1
淋巴结转移
(-)
11
3
(+)
9
1
肿瘤浸润深度
浆膜内
1
0
浆膜及浆膜外
19
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4
Dukes分期
A
1
0
B
9
2
C
8
1
D
2
1
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总例数
20
4
*P<0.05，vs高中分化腺癌
讨论
1993年荷兰学者Scheper等从非小细胞肺癌细胞系SW-1573筛选出其MDR子系2R120，并运用杂交瘤技术制备出一种能特异性地与2R120细胞结合的单克隆抗体，命名为LRP-56。用LRP-56作为一抗行免疫组化染色，发现2R120(无P-gp表达)染色强阳性，其母系SW-1573及另一耐药子系2R160(P-gp表达阳性)弱染色或不染色，进一步研究发现它在乳腺癌、纤维肉瘤、骨髓瘤的一些耐药系中亦高表达，从而提示LRP-56的对应抗原为一种不同于P-gp的能介导耐药的蛋白质。由于它在肺癌中首先发现，因而称为肺耐药蛋白[2]。
, 百拇医药
LRP介导MDR的机制目前还不清楚。LRP过度表达的MDR细胞核内柔红霉素的积聚减少[4]；细胞中药物的核浆分布比率明显低于亲代敏感细胞，并且还有胞吐现象，并从胞吐囊泡中分离到了化疗药物[2]。另外，LRP能够介导对顺铂、卡铂、烷化剂等一些P-gp和多药耐药相关蛋白(MRP)均不能介导的药物耐受，这些药物的共同特点是都以DNA为靶点，这也暗示LRP可能是通过核靶点屏蔽机制引起MDR。
我们的研究显示，肿瘤的间质细胞有LRP的少量表达，这可能与胃肠道具有防御外源性毒物侵害的功能有关。肿瘤细胞的LRP表达量明显增加，说明LRP在大肠癌的原发性耐药(intrinsic drug resistance)中具有重要作用，LRP检测有助于临床化疗药物的选择。
通过研究LRP表达与大肠癌临床病理的关系，我们发现高、中分化腺癌的LRP阳性率(17/17)明显高于低分化腺癌(0/2)，这与分化较好的肿瘤对化疗药物敏感性差的现象相一致。LRP表达与肿瘤部位、大小、淋巴结转移、浸润深度及Dukes分期无关，说明LRP表达与否只代表肿瘤的耐药性差异，与大肠癌的进展、转移和复发无关。
, http://www.100md.com
作者简介：刘忠民(1966-)，男，山东莱芜人，博士，主治医师。从事普外肿瘤专业。
参考文献
1，Mizoguchi T,Yamada K,Furukawa T,et al.Expression of MDR1 gene in human gastric and colorectal carcinomas.J Natl Cancer Inst,1990,82:1679-1683
2，Scheper RJ,Broxterman HL,Scheffer GL,et al.Overexpression of a Mr 110,000 vascular protein in non-P-glycoprotein-mediated multidrug resistance.Cancer Res,1993;53(7):1475-1479
3，刘忠民，寿楠海.肠道肿瘤多药耐药相关蛋白和肺耐药蛋白表达的临床意义.世界华人消化杂志，1999；7(2)：95
4，Schuurhuis GJ,Broxterman HJ,de Lange JHM,et al.Early multidrug resistance,defined by changes in intracellular doxorubicin distribution,independent of P-glycoprotein.Br J Cancer,1991;64(5):857-861
收稿日期：1999-7-14, 百拇医药
单位：刘忠民(山东省泰安市中心医院 泰安 271000)；寿楠海(山东医科大学附属医院普外科)；姜希宏(山东医科大学附属医院普外科)
关键词：结直肠肿瘤；腺癌；肺耐药蛋白
肺耐药蛋白在大肠癌中的表达及临床意义 〔摘要〕 目的 探讨肺耐药蛋白(LRP)在大肠癌中的表达及其临床意义。方法 以免疫组化检测24例大肠癌组织中的LRP表达情况。结果 24例大肠癌中20例LRP阳性，阳性率为83.3%，高、中分化腺癌的LRP阳性率(17/17)明显高于低分化腺癌(0/2)，LRP表达与肿瘤部位、大小、淋巴结转移、浸润深度及Dukes分期无关。结论 LRP在大肠癌原发耐药中具有重要作用，LRP的测定有助于化疗药物的选择。
〔中图分类号〕 R735.3+4 〔文献标识码〕A
, 百拇医药
The expression of lung resistance protein in patients with colorectal carcinoma and its clinical significance
LIU Zhong-min,SHOU Nan-hai,Jiang Xi-hong.
(Department of General Surgery,Taian Central Hospital,Taian 271000)
〔Abstract〕 Objective To detect the expression of lung resistance protein (LRP) in patients with colorectal cancer and its clinical significance.Methods The LRP was measured by SABC immunohistochemical staining in 24 cases of colorectal cancer.Results LRP expressed in 20 out of 24 specimens,the positive rate of LRP is 83.3%.The positive rate of LRP in well and moderate differentiated adenocarcinoma was higher than that in poorly differentiated carcinoma.There was no correlation between the LRP expression and tumor site,size,lymph node involvement,serosal invasion or Dukes′ stages.Conclusions Our findings indicate that LRP plays an important role in intrinsic drug resistance in the colorectal cacner,and the analysis of LRP can help to choose the more effective chemotherapy drugs.
, 百拇医药
〔Key words〕 lung resistance protein;colorectal neoplasms;adenocarcinoma
多药耐药(multidrug resistance,MDR)的产生是大肠癌化疗失败的重要原因。已有研究表明mdr1基因编码的P-gp过度表达是大肠癌MDR的机理之一[1]。最近发现的一个MDR相关蛋白-肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)，是肿瘤耐药研究的一大进展[2]。我们的初步研究显示LRP在胃肠癌组织中过度表达[3]，但目前国内未见其它有关大肠癌LRP表达的报道。本文应用免疫组化方法研究LRP在大肠癌中的表达情况，并进一步探讨了LRP表达与大肠癌临床病理的关系，现报告如下。
材料和方法
一、材料来源 收集1997年9月～1998年8月间的大肠癌切除术后的蜡块标本，其中男15例，女9例。年龄27～81岁，平均54.9岁。大肠癌蜡块行4μm连续切片，贴于经多聚赖氨酸处理的切片上，60℃烘烤2小时。
, http://www.100md.com
二、主要试剂 一抗为鼠抗人LRP单克隆抗体LRP-56(荷兰Free大学Scheper教授惠赠)。SABC试剂盒为博士德公司产品。
三、免疫组化染色 切片常规脱蜡至水，3%过氧
寿楠海(1930-)，男，南京人，博士生导师、教授。
化氢室温30分钟，滴加1∶50正常工作血清封闭液，室温孵育30分钟。甩去多余液体，滴加1∶20一抗10μl，4℃过夜。滴加生物素化山羊抗小鼠IgG10μl,37℃ 30分钟。滴加辣根过氧化物酶标记链霉卵白素10μl，37℃ 30分钟。滴加显色剂30μl，室温显色约20分钟(每步骤间用PBS浸洗)。苏木精复染，脱水，透明，封片。显微镜观察细胞浆呈清晰棕黄色者为阳性。
四、统计学处理 采用四格表直接概率计算法。
结果
, 百拇医药
一、LRP的分布 24例组织中，LRP阳性20例，阳性率为83.3%。在阳性细胞中，LRP呈棕黄色的颗粒分布于细胞浆中。在肿瘤组织中，部分病例的间质细胞等非肿瘤细胞可见LRP表达，但癌细胞的表达强度高于这些细胞。
二、LRP在大肠癌组织中的表达情况 根据肿瘤的部位、大小、组织学类型、淋巴结转移、肿瘤浸润深度和Dukes分期进行分组，分析LRP表达与临床病理的关系，结果见表1。
表1 LRP表达与临床病理的关系(例数)
病理参数
LRP阳性
LRP阴性
肿瘤部位
结肠
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12
3
直肠
8
1
肿瘤大小
<5cm
12
2
≥5cm
8
2
组织学类型
高分化腺癌
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9
0
中分化腺癌
8
0
低分化腺癌
0
2*
粘液癌
2
1
类癌
1
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淋巴结转移
(-)
11
3
(+)
9
1
肿瘤浸润深度
浆膜内
1
0
浆膜及浆膜外
19
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4
Dukes分期
A
1
0
B
9
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C
8
1
D
2
1
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总例数
20
4
*P<0.05，vs高中分化腺癌
讨论
1993年荷兰学者Scheper等从非小细胞肺癌细胞系SW-1573筛选出其MDR子系2R120，并运用杂交瘤技术制备出一种能特异性地与2R120细胞结合的单克隆抗体，命名为LRP-56。用LRP-56作为一抗行免疫组化染色，发现2R120(无P-gp表达)染色强阳性，其母系SW-1573及另一耐药子系2R160(P-gp表达阳性)弱染色或不染色，进一步研究发现它在乳腺癌、纤维肉瘤、骨髓瘤的一些耐药系中亦高表达，从而提示LRP-56的对应抗原为一种不同于P-gp的能介导耐药的蛋白质。由于它在肺癌中首先发现，因而称为肺耐药蛋白[2]。
, 百拇医药
LRP介导MDR的机制目前还不清楚。LRP过度表达的MDR细胞核内柔红霉素的积聚减少[4]；细胞中药物的核浆分布比率明显低于亲代敏感细胞，并且还有胞吐现象，并从胞吐囊泡中分离到了化疗药物[2]。另外，LRP能够介导对顺铂、卡铂、烷化剂等一些P-gp和多药耐药相关蛋白(MRP)均不能介导的药物耐受，这些药物的共同特点是都以DNA为靶点，这也暗示LRP可能是通过核靶点屏蔽机制引起MDR。
我们的研究显示，肿瘤的间质细胞有LRP的少量表达，这可能与胃肠道具有防御外源性毒物侵害的功能有关。肿瘤细胞的LRP表达量明显增加，说明LRP在大肠癌的原发性耐药(intrinsic drug resistance)中具有重要作用，LRP检测有助于临床化疗药物的选择。
通过研究LRP表达与大肠癌临床病理的关系，我们发现高、中分化腺癌的LRP阳性率(17/17)明显高于低分化腺癌(0/2)，这与分化较好的肿瘤对化疗药物敏感性差的现象相一致。LRP表达与肿瘤部位、大小、淋巴结转移、浸润深度及Dukes分期无关，说明LRP表达与否只代表肿瘤的耐药性差异，与大肠癌的进展、转移和复发无关。
, http://www.100md.com
作者简介：刘忠民(1966-)，男，山东莱芜人，博士，主治医师。从事普外肿瘤专业。
参考文献
1，Mizoguchi T,Yamada K,Furukawa T,et al.Expression of MDR1 gene in human gastric and colorectal carcinomas.J Natl Cancer Inst,1990,82:1679-1683
2，Scheper RJ,Broxterman HL,Scheffer GL,et al.Overexpression of a Mr 110,000 vascular protein in non-P-glycoprotein-mediated multidrug resistance.Cancer Res,1993;53(7):1475-1479
3，刘忠民，寿楠海.肠道肿瘤多药耐药相关蛋白和肺耐药蛋白表达的临床意义.世界华人消化杂志，1999；7(2)：95
4，Schuurhuis GJ,Broxterman HJ,de Lange JHM,et al.Early multidrug resistance,defined by changes in intracellular doxorubicin distribution,independent of P-glycoprotein.Br J Cancer,1991;64(5):857-861
收稿日期：1999-7-14, 百拇医药