小巨核细胞免疫酶标染色对血小板减少症的诊断价值
作者：刘陶文 周润华 刘健 黎金庆
单位：刘陶文(广西区第二人民医院肿瘤血液病研究所 广西桂林市 541002)；周润华 刘健 黎金庆(桂林医学院附属 医院血液科)
关键词：血小板膜糖蛋白Ⅱb-Ⅲa；血小板减少；单克隆 抗体；小巨核细胞；免疫酶标染色
华夏医学000301 摘 要 目的：了解抗CD41单抗免疫酶标法对血小板减少症的 鉴别意义。方法：用抗CD41单抗免疫酶标法检测38例血小板减少症患者骨髓涂片的小(微)巨 核 细胞数与类型分布。结果：小巨核细胞分别见于13/13(100%)例骨髓增生异常综合征(MDS)及 6/10(60%)例特发性血小板减少性紫癜(ITP)；而15例再生障碍性贫血(AA)未见小巨核细 胞。淋巴样小巨核细胞仅见于MDS，且13例均呈阳性。MDS和ITP组的小巨核细胞的中位数(范 围)分别为167.0(13～816)个/涂片及24.0(6～57)个/涂片(P<0.01)。结论：用CD4 1单抗免疫酶标染色法检查骨髓涂片中的小巨核细胞有助于某些血小板减少症的鉴别诊断。
, 百拇医药
中图分类号 R558+.2;R446.63
The Significance of Detecting Micromegakaryocytes with Platelet Membran ce Glucoprotein Ⅱb-Ⅲa(CD41) Monoclonal Antibody Immunoenzyme Staining in Differential Diagnosis of Thrombocytopenias
Liu Taowen1,( Institute of Oncology Hematology,No.2 People's Hospital of Guangxi, Guilin 541002)
Zhou Runhua2,Liu Jian2,Li Jinqing2
, 百拇医药
(Guilin Medical College,Guilin 541004)
Abstract Objective:To study the role of CD41 McAb immunoenzyme staining in differential diagnosis of thrombocytopenias.Method:Using anti-platelet membrance glucoprotein Ⅱb-Ⅲa (CD41) monoclonal antibody (McAb) avidin-biotin comp lex (ABC) immunoenzyme staining to detect micromegakaryocytes in bone marrow sme a rs of 38 patients with thrombocytopenia. Result:A 100%(13/13) positive was obser ed in all of 13 patients with myelodysplastic syndrome (MDS) and 60%(6/10) in id io pathic thrombocytopenia purpura (ITP), but all were negative in all of 15 aplast ic anemias (AA);there were statistically significant differences among these gro ups. Lymphocytoid micromegakaryocytes were only found in MDS. The m edian number of micromegakaryocytes (each slide) was 167 (13～816) in MD S and 24 (6～57) in ITP (P<0.01). Conclusion:It is suggested that detection of micromegakaryocytes with CD41 McAb immunoenzyme staining may be of usefulnes s in dif ferential diagnosis of thrombocytopenia.
, 百拇医药
Key words Glucoprotein Ⅱb-Ⅲa；thrombocytopenia；McAb;microme gakaryocyte;staining Immunoenzyme
血小板减少是止血障碍、出血的最常见的直接原因 之 一。不少造血系疾病可以主要表现为血小板减少，有时难以鉴别。小(微)巨核细胞是一类形 态异常的小型巨核细胞，见于多种血液病，是骨髓病态造血的特征之一[1]。因这 类小巨核细胞表现不成熟，在常规Wright(瑞氏)染色光镜下易与淋巴细胞、幼稚红细胞混淆 。本研究报道用抗血小板膜糖蛋白Ⅱb-Ⅲa(CD41)单克隆抗体(单抗)免疫酶标ABC染色 法 检测一组血小板减少症患者骨髓涂片的小巨核细胞，并分析该方法对血小板减少的鉴别意义 。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 观察对象
38例患者均以血小板减少或出血待查收住我院血液科。其中骨髓增生异常综合征(MDS)13例 ，特发性血小板减少性紫殿(ITP)10例，再生障碍性贫血(AA)15例，均按标准确诊[2] 。每例患者重复骨髓穿刺，做多张涂片，排除因骨穿混血而造成假象。
1.2 实验方法
1.2.1 骨髓涂片常规瑞氏染色 每份标本至少2张符合要求。
1.2.2 骨髓涂片免疫酶标ABC染色 单抗(抗GPⅡb-Ⅲa)及有 关试剂由中国医学科学院天津血液学研究所提供。操作参考宋玉华等方法[1]。每 份符合要 求的标本染2张涂片。抗原存在部位呈棕色或棕黑色。原始、幼稚细胞仅于胞膜呈阳性，成 熟者着色也见于胞浆，油镜下计数。
, 百拇医药
1.2.3 统计学分析方法 配对资料用χ2检验，多样本两两比较 的作秩和检验。
2 结果
2.1 小巨核细胞的形态分型 酶标染色下分为4型。Ⅰ型为 淋巴样小巨核细胞，Ⅱ型为单个小圆核小巨核细胞，Ⅲ型为单个大圆核小巨核细胞，Ⅳ型为 多核小巨核细胞[3]。4型小巨核细胞均见于MDS，而ITP则以Ⅲ、Ⅳ型小巨核细胞 为多，淋巴样小巨核细胞仅见于MDS，AA未见小巨核细胞。
2.2 小巨核细胞的阳性率 13例MDS均呈阳性，而10例ITP中6 例呈阳性，15例AA均为阴性。三组阳性率比较有显著差异(P<0.05)。
2.3 小巨核细胞数量 13例MDS、10例ITP的小巨核细胞(个/ 张片)的中位数(范围)分别为167.0(13～816)及24.0(6～57)，两者比较有非常显著差异(P <0.01)。
, 百拇医药
2.4 瑞氏染色和免疫酶标染色比较 瑞氏染色下小巨核细胞 阳性率分别为MDS 7/13(53%)例、ITP 1/10(10%)例，且Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型小巨核细胞难以同淋巴 细胞、幼稚细胞区别。与之相比，CD41单抗免疫酶标染色法更敏感、特异。
3 讨论
骨髓增殖异常是导致血小板减少的主要机制。MDS、ITP和AA均可表现为血小板减少。尤其对 一些非典型MDS，处于某阶段的ITP和AA，可因骨髓穿刺部位、技术等因素导致依据普通的涂 片细胞形态学检查难以区别。资料提示某些血液病伴随有巨核细胞性质和功能的改变[ 1，3]。病态巨核细胞是处于不同分化阶段的异质性群体，其病理基础是DNA合成多倍体 障碍和胞浆分化成熟异常，此受多种因素影响[4]。MDS骨髓巨核细胞病态造血严重 ，其小巨核细胞的阳性率及计数均显著高于ITP，尤其是前者存在大量淋巴样小巨核细胞。 随着病情进展，MDS的淋巴样小巨核细胞增多，标志其巨核细胞病态造血加重[5]。 本研究观察到1例MDS在4个月内由MDS-CMML→M4→M2(按FAB分型)，患者淋巴样小巨核 细胞 从21个→63个→95个/张涂片。AA患者未见小巨核细胞，为骨髓增生低下所致，这是AA与MDS 的显著区别。本实验尚显示CD41单抗免疫酶标染色下不但能证实在瑞氏染色下所见的小巨核 细胞，而且可发现瑞氏染色法难以识别的比淋巴细胞更小的小巨核细胞。表明CD41免疫酶标 ABC法是检测骨髓巨核细胞病态造成的敏感、特异方法，对血小板减少症具有可靠的鉴别诊 断价值。
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作者简介：刘陶文(1964-)，男。1989年安徽皖南医学 院硕士毕业，1991.9～1993.8上海第二医科大学瑞金医院上海血液学研究所血液肿瘤博士生。现任广西区第二人民医院肿瘤血 液病研究所副研究员、副主任医师。
参考文献
1，宋玉华，杨崇礼，林永敏，等.白前期小巨核细胞的形态学、细胞化学和免疫 细胞化学研究.中华血液学杂志，1986，7：539
2，张主南主编.血液病诊断及疗效标准.第2版.北京：科学出版社，1997.31～35 ，258～261，279～280
3，宋玉华，孔祥银，林永敏，等.正常和病理性巨核细胞生成的研究.中华血液 学杂志，1990，11：512
4，Hoffman R.Regulation of megakaryocytopoiesis. Blood,1989,74:1196
5，孔祥银，宋玉华.小巨核细胞免疫酶标染色在骨髓增生异常综合征诊断、分期 和全血细胞减少性疾病鉴别中的意义.中华血液学杂志，1991，12：535
(收稿 1999-12-16), http://www.100md.com
单位：刘陶文(广西区第二人民医院肿瘤血液病研究所 广西桂林市 541002)；周润华 刘健 黎金庆(桂林医学院附属 医院血液科)
关键词：血小板膜糖蛋白Ⅱb-Ⅲa；血小板减少；单克隆 抗体；小巨核细胞；免疫酶标染色
华夏医学000301 摘 要 目的：了解抗CD41单抗免疫酶标法对血小板减少症的 鉴别意义。方法：用抗CD41单抗免疫酶标法检测38例血小板减少症患者骨髓涂片的小(微)巨 核 细胞数与类型分布。结果：小巨核细胞分别见于13/13(100%)例骨髓增生异常综合征(MDS)及 6/10(60%)例特发性血小板减少性紫癜(ITP)；而15例再生障碍性贫血(AA)未见小巨核细 胞。淋巴样小巨核细胞仅见于MDS，且13例均呈阳性。MDS和ITP组的小巨核细胞的中位数(范 围)分别为167.0(13～816)个/涂片及24.0(6～57)个/涂片(P<0.01)。结论：用CD4 1单抗免疫酶标染色法检查骨髓涂片中的小巨核细胞有助于某些血小板减少症的鉴别诊断。
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中图分类号 R558+.2;R446.63
The Significance of Detecting Micromegakaryocytes with Platelet Membran ce Glucoprotein Ⅱb-Ⅲa(CD41) Monoclonal Antibody Immunoenzyme Staining in Differential Diagnosis of Thrombocytopenias
Liu Taowen1,( Institute of Oncology Hematology,No.2 People's Hospital of Guangxi, Guilin 541002)
Zhou Runhua2,Liu Jian2,Li Jinqing2
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(Guilin Medical College,Guilin 541004)
Abstract Objective:To study the role of CD41 McAb immunoenzyme staining in differential diagnosis of thrombocytopenias.Method:Using anti-platelet membrance glucoprotein Ⅱb-Ⅲa (CD41) monoclonal antibody (McAb) avidin-biotin comp lex (ABC) immunoenzyme staining to detect micromegakaryocytes in bone marrow sme a rs of 38 patients with thrombocytopenia. Result:A 100%(13/13) positive was obser ed in all of 13 patients with myelodysplastic syndrome (MDS) and 60%(6/10) in id io pathic thrombocytopenia purpura (ITP), but all were negative in all of 15 aplast ic anemias (AA);there were statistically significant differences among these gro ups. Lymphocytoid micromegakaryocytes were only found in MDS. The m edian number of micromegakaryocytes (each slide) was 167 (13～816) in MD S and 24 (6～57) in ITP (P<0.01). Conclusion:It is suggested that detection of micromegakaryocytes with CD41 McAb immunoenzyme staining may be of usefulnes s in dif ferential diagnosis of thrombocytopenia.
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Key words Glucoprotein Ⅱb-Ⅲa；thrombocytopenia；McAb;microme gakaryocyte;staining Immunoenzyme
血小板减少是止血障碍、出血的最常见的直接原因 之 一。不少造血系疾病可以主要表现为血小板减少，有时难以鉴别。小(微)巨核细胞是一类形 态异常的小型巨核细胞，见于多种血液病，是骨髓病态造血的特征之一[1]。因这 类小巨核细胞表现不成熟，在常规Wright(瑞氏)染色光镜下易与淋巴细胞、幼稚红细胞混淆 。本研究报道用抗血小板膜糖蛋白Ⅱb-Ⅲa(CD41)单克隆抗体(单抗)免疫酶标ABC染色 法 检测一组血小板减少症患者骨髓涂片的小巨核细胞，并分析该方法对血小板减少的鉴别意义 。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 观察对象
38例患者均以血小板减少或出血待查收住我院血液科。其中骨髓增生异常综合征(MDS)13例 ，特发性血小板减少性紫殿(ITP)10例，再生障碍性贫血(AA)15例，均按标准确诊[2] 。每例患者重复骨髓穿刺，做多张涂片，排除因骨穿混血而造成假象。
1.2 实验方法
1.2.1 骨髓涂片常规瑞氏染色 每份标本至少2张符合要求。
1.2.2 骨髓涂片免疫酶标ABC染色 单抗(抗GPⅡb-Ⅲa)及有 关试剂由中国医学科学院天津血液学研究所提供。操作参考宋玉华等方法[1]。每 份符合要 求的标本染2张涂片。抗原存在部位呈棕色或棕黑色。原始、幼稚细胞仅于胞膜呈阳性，成 熟者着色也见于胞浆，油镜下计数。
, 百拇医药
1.2.3 统计学分析方法 配对资料用χ2检验，多样本两两比较 的作秩和检验。
2 结果
2.1 小巨核细胞的形态分型 酶标染色下分为4型。Ⅰ型为 淋巴样小巨核细胞，Ⅱ型为单个小圆核小巨核细胞，Ⅲ型为单个大圆核小巨核细胞，Ⅳ型为 多核小巨核细胞[3]。4型小巨核细胞均见于MDS，而ITP则以Ⅲ、Ⅳ型小巨核细胞 为多，淋巴样小巨核细胞仅见于MDS，AA未见小巨核细胞。
2.2 小巨核细胞的阳性率 13例MDS均呈阳性，而10例ITP中6 例呈阳性，15例AA均为阴性。三组阳性率比较有显著差异(P<0.05)。
2.3 小巨核细胞数量 13例MDS、10例ITP的小巨核细胞(个/ 张片)的中位数(范围)分别为167.0(13～816)及24.0(6～57)，两者比较有非常显著差异(P <0.01)。
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2.4 瑞氏染色和免疫酶标染色比较 瑞氏染色下小巨核细胞 阳性率分别为MDS 7/13(53%)例、ITP 1/10(10%)例，且Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型小巨核细胞难以同淋巴 细胞、幼稚细胞区别。与之相比，CD41单抗免疫酶标染色法更敏感、特异。
3 讨论
骨髓增殖异常是导致血小板减少的主要机制。MDS、ITP和AA均可表现为血小板减少。尤其对 一些非典型MDS，处于某阶段的ITP和AA，可因骨髓穿刺部位、技术等因素导致依据普通的涂 片细胞形态学检查难以区别。资料提示某些血液病伴随有巨核细胞性质和功能的改变[ 1，3]。病态巨核细胞是处于不同分化阶段的异质性群体，其病理基础是DNA合成多倍体 障碍和胞浆分化成熟异常，此受多种因素影响[4]。MDS骨髓巨核细胞病态造血严重 ，其小巨核细胞的阳性率及计数均显著高于ITP，尤其是前者存在大量淋巴样小巨核细胞。 随着病情进展，MDS的淋巴样小巨核细胞增多，标志其巨核细胞病态造血加重[5]。 本研究观察到1例MDS在4个月内由MDS-CMML→M4→M2(按FAB分型)，患者淋巴样小巨核 细胞 从21个→63个→95个/张涂片。AA患者未见小巨核细胞，为骨髓增生低下所致，这是AA与MDS 的显著区别。本实验尚显示CD41单抗免疫酶标染色下不但能证实在瑞氏染色下所见的小巨核 细胞，而且可发现瑞氏染色法难以识别的比淋巴细胞更小的小巨核细胞。表明CD41免疫酶标 ABC法是检测骨髓巨核细胞病态造成的敏感、特异方法，对血小板减少症具有可靠的鉴别诊 断价值。
, 百拇医药
作者简介：刘陶文(1964-)，男。1989年安徽皖南医学 院硕士毕业，1991.9～1993.8上海第二医科大学瑞金医院上海血液学研究所血液肿瘤博士生。现任广西区第二人民医院肿瘤血 液病研究所副研究员、副主任医师。
参考文献
1，宋玉华，杨崇礼，林永敏，等.白前期小巨核细胞的形态学、细胞化学和免疫 细胞化学研究.中华血液学杂志，1986，7：539
2，张主南主编.血液病诊断及疗效标准.第2版.北京：科学出版社，1997.31～35 ，258～261，279～280
3，宋玉华，孔祥银，林永敏，等.正常和病理性巨核细胞生成的研究.中华血液 学杂志，1990，11：512
4，Hoffman R.Regulation of megakaryocytopoiesis. Blood,1989,74:1196
5，孔祥银，宋玉华.小巨核细胞免疫酶标染色在骨髓增生异常综合征诊断、分期 和全血细胞减少性疾病鉴别中的意义.中华血液学杂志，1991，12：535
(收稿 1999-12-16), http://www.100md.com