急性间质性肾炎肾间质中淋巴细胞亚型分析
作者：袁曙光 刘瑞洪 刘虹 许向青
单位：袁曙光(湖南医科大学 第二附属医院肾内科，中国湖南 长沙 410011)；刘瑞洪(湖南医科大学 第二附属医院肾内科，中国湖南 长沙 410011)；刘虹(湖南医科大学 第二附属医院肾内科，中国湖南 长沙 410011)；许向青(湖南医科大学 第二附属医院肾内科，中国湖南 长沙 410011)
关键词：肾炎，间质性/病理学；肾炎，间质性/免疫学；淋巴细胞
湖南医学000301[摘 要]目的分析急性间质肾炎(AIN)肾间质中浸润的淋巴细胞亚型的意义。方法19例AIN患者根据肾活检前的血清肌酐值(SCr)分为SCr>500 μmol/L组(A组)及SCr<500 μmol/L(B组)；根据病人入院30 d时的血清肌酐分为SCr恢复正常组(Ⅰ组)及SCr未恢复正常组(Ⅱ组)。所有病人行肾穿刺活检，肾间质淋巴细胞亚型的检测采用SABC法。结果病理改变均表现为不同程度的间质炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，淋巴细胞亚型以CD+4和CD+8细胞居多，CD+20细胞较少；A组肾间质中的淋巴细胞明显多于B组(P<0.05)；Ⅱ组间质中CD+4及CD+8细胞明显多于Ⅰ组(P<0.01)。结论间质浸润淋巴细胞越多，肾功能越差，AIN的预后也越差；细胞免疫在AIN发病机制中起着重要作用。
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[中图分类号] R692.3+3，R329.2+4 [文献标识码] A [文章编号] 1001-9421(2000)03-0161-02
Analysis of Lymphocyte Subtypes in Renal Interstitial Tissue in Patients
with Acute Interstitial Nephritis
YUAN Shu-guang
(Dept. of Medicine,The Second Affiliated Hospital,Hunan Medical University,Changsha,410011,China)
LIU Rui-hong
, 百拇医药
(Dept. of Medicine,The Second Affiliated Hospital,Hunan Medical University,Changsha,410011,China)
LIU Hong
(Dept. of Medicine,The Second Affiliated Hospital,Hunan Medical University,Changsha,410011,China)
XU Xiang-qing
(Dept. of Medicine,The Second Affiliated Hospital,Hunan Medical University,Changsha,410011,China)
[Abstract] ObjectiveTo evaluate the significance of subtype of lymphocyte infiltrated into renal interstitium in patients with acute interstitial nephritis(AIN).MethodsNinteen patients with AIN were divided into two groups:Group A[serum creatinine(SCr)levels>500 μmol/L]and Group B(SCr<500 μmol/L) based on the SCr levels before renal biopsy.Patients were also defined as recovery group (Group Ⅰ) and unrecovery group (Group Ⅱ) according to the SCr levels at 30th day after admisson.Renal puncture biopies were performed on all patients.Lymphocyte subtypes in renal interstitium were defined by SABC method.ResultsAll patients displayed different degree of inflammatory cell infiltration in the renal interstitium.CD+4 and CD+8 cells accounted for the majority of lymphocyte subtypes,whereas CD+20 cells were in the minority.The numbers of lymphocytes in renal interstitium of Group A distinctly exceeded those of Group B(P<0.05);while the numbers of CD+4 and CD+8 cells in renal interstitium of Group Ⅱ were obviously more than those of Group Ⅰ(P<0.01).ConclusionsThe more is the lymphocyte infiltration in the renal interstitium,the worse will be the renal function.Cellular immunity plays an important role in the pathogenesis of AIN.
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[Key words] nephritis,interstitial/pathol; nephritis,interstitial/immumol; lymphocytes/immumol
急性间质性肾炎(Acute Interstitial Nephritis,AIN)是引起急性肾功能衰竭的常见原因之一[1]，其病理改变主要为间质炎性细胞浸润、肾小管变性或坏死。本文应用免疫组化法分析AIN肾间质中浸润的淋巴细胞亚型，以探讨其在AIN发生、发展中的意义。
1 材料与方法
1.1 一般资料 19例经临床和肾活检确诊为急性间质性肾炎患者，其中男11例，女8例，平均年龄36.9(27～51)岁。其中药物所致者8例，感染所致4例，原因不明者7例。主要临床表现为：发热、皮疹、血尿、少
尿或无尿。患者肾活检前测血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、尿蛋白、尿比重及尿渗透压，并于入院后30 d复查上述指标。根据活检前的SCr值将患者分为SCr>500 μmol/L组(A组)，及SCr<500 μmol/L组(B组)；根据入院后30 d血清肌酐值分为肌酐恢复正常组(Ⅰ组)及肌酐未恢复正常组(Ⅱ组)。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 肾脏病理检查 19例患者均于入院后2 d至2周在B超引导下进行经皮肾穿刺活检术。肾活检组织送光镜检查。
1.2.2 免疫组织化学染色 肾间质淋巴细胞亚型检测采用SABC法。CD+4，CD+8分别识别T辅助细胞/诱导细胞和T抑制/细胞毒细胞，CD+20识别B细胞。CD+4，CD+8和CD+20单克隆抗体及SABC试剂盒均为武汉博士德公司产品。将石蜡包埋的肾组织标本切成4 μm厚切片，其步骤为：①肾组织石蜡切片脱蜡至水；②滴加用蒸馏水新鲜配置的0.3% H2O2，室温下20 min，PBS液洗3次，以消除内源性过氧化酶活性；③0.1%胰蛋白酶消化20 min，37 ℃温箱内进行，PBS液洗3次；④滴加正常血清封闭液，室温下存放20 min；⑤滴加工作浓度的第一抗体，37 ℃孵育30 min，PBS液洗3次；⑥滴加工作浓度的生物化第二抗体，37 ℃孵育20 min，PBS液洗3次；⑦滴加SABC复合物，37 ℃孵育1 h，PBS液洗3次；⑧DAB显色，显微镜下监视呈棕黄色为止；⑨自来水充分洗涤，复染苏木素；⑩脱水、透明、封片。用PBS代替一抗作阴性对照，淋巴瘤为阳性对照标本。
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1.2.3 结果观察 在高倍镜下，细胞浆内棕黄色颗粒样着色为阳性细胞；在装有10 mm×10 mm网格目微尺的400倍显微镜下计数肾间质中阳性细胞数目(观察5个视野)，计算每mm2阳性细胞数。RT值为CD+4/CD+8细胞之比值。
2 结果
19例患者SCr为(552.2±245.6)μmol/L，BUN为(25.3±13.7)mmol/L。患者病理改变均表现为不同程度的间质炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，淋巴细胞亚型以CD+4和CD+8细胞居多，CD+20细胞较少。A组肾间质中的淋巴细胞明显多于B组，详见附表。Ⅱ组间质中CD+4及CD+8细胞明显多于Ⅰ组。Ⅱ组RT值<1，Ⅰ组RT值>1。
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附表 各组肾间质中CD+4，CD+8及CD+20细胞数
比较(
±s,/mm2) 组别
n
CD+4
CD+8
CD+20
A组
, http://www.100md.com 9
139.3±24.5
143.7±29.6
23.1±9.8
B组
10
82.5±31.31)
75.1±20.82)
11.0±7.81)
Ⅰ组
13
79.8±23.63)
, 百拇医药
66.7±19.53)
9.3±5.23)
Ⅱ组
6
153.2±23.3
187.6±28.4
19.5±7.9
与A组比较：1)P<0.05；2)P<0.01；与Ⅱ组比较：3)P<0.01
3 讨论
急性间质性肾炎是由不同病因引起的一系列间质炎症反应。肾间质的病理改变与病人的临床表现及预后密切相关。近年来，对于间质中浸润细胞的种类及其亚型与AIN病情的严重程度及预后的关系逐渐受到人们重视。
, http://www.100md.com
本研究结果显示，活检前肾功能损害较重者(SCr>500 μmol/L)，其肾间质中浸润的淋巴细胞显著多于肾功能损害较轻者(SCr<500 μmol/L)，说明间质浸润淋巴细胞越多，肾功能越差，与文献报道一致[2]。且肾活检30 d后SCr恢复正常组的间质中淋巴细胞比例明显低于SCr未恢复组，表明淋巴细胞浸润的多少与AIN的预后有关。
AIN的发病机理尚未完全明了，本实验发现大量免疫性细胞在肾间质浸润。免疫性疾病可引起AIN，由免疫途径也可建立AIN的动物模型，说明免疫反应在AIN的发病机理中起重要作用[3]。大量动物模型证实细胞免疫是引起AIN的主要机制[4，5]。本实验显示间质浸润的淋巴细胞中，亦以T细胞为主，B细胞较少。其可能机制为：CD+8 T细胞通过识别MHC-Ⅰ类抗原发挥细胞毒作用，肾小管细胞片状脱落、小管基膜及细胞外基质的某些变化，可能与细胞毒作用有关；CD+4细胞通过识别MHC-Ⅱ类抗原介导迟发性变态反应，形成肉芽肿及巨细胞，亦产生对肾间质小管的损伤，而由迟发性变态反应激活的单核细胞释放γ-干扰素，后者可使肾小管上皮细胞对MHC-Ⅱ类抗原的表达增强，放大CD+4细胞对肾间质小管的损害。另外，CD+8细胞分泌转化生长因子-β，后者是成纤维细胞分泌纤维连接蛋白、胶原蛋白和糖蛋白很强的刺激剂；CD+4细胞分泌成纤维细胞刺激因子-1和肿瘤坏死因子-α，促进成纤维细胞的增生和纤粘素以及Ⅰ，Ⅱ型胶原的分泌；这些因素均导致肾间质纤维化的形成及肾小管萎缩，因此间质中浸润的淋巴数量与AIN的预后密切相关。
, 百拇医药
另外，在SCr未恢复正常组中，CD+8细胞的比例较高(RT值<1)，因而CD+4细胞与CD+8细胞的比例也可能与预后有关，其机制有待进一步研究。
肾活检的典型发现是诊断AIN的最佳指标，而肾间质中浸润的细胞的多少及其种类和亚型与病情及预后密切相关[6]，因此，对临床疑诊急性间质小管病变者应尽早行肾活检，以利临床确诊、治疗及预后判断。
[作者简介] 袁曙光(1964-)，女，湖南新邵人，主治医师，医学硕士，主要从事肾小球疾病及肾脏病理方面研究。
[参 考 文 献]
[1] Robert DT.Acute tubulointerstitial nephritis[J].Am J Med Sci,1990,299:392.
, http://www.100md.com
[2] Townsend A,Bodmer H.Antigen recognition by class I-restricted T lymphocytes[J].Ann Rev Immunol,1989,7:601-624.
[3] 尹 广，黎磊石.间质性肾炎的研究进展[J].临床内科杂志，1994，11：15-17.
[4] Hagerty DT,Allen PM.Processing and presentation of self and foreign antigens by the renal proximal tubule[J].J Immunol,1992,148:2324-2330.
[5] Schwartx RH.A cell cuture model for T lymphocyte clonal anergy[J].Science,1990,248:1349-1356.
[6] 刘 虹，刘瑞洪，袁曙光，等.急性间质小管性疾病肾组织中巨噬细胞及淋巴细胞浸润的研究[J].湖南医科大学学报，1997，22(2)：145-148.
[收稿日期] 1999-12-20, http://www.100md.com
单位：袁曙光(湖南医科大学 第二附属医院肾内科，中国湖南 长沙 410011)；刘瑞洪(湖南医科大学 第二附属医院肾内科，中国湖南 长沙 410011)；刘虹(湖南医科大学 第二附属医院肾内科，中国湖南 长沙 410011)；许向青(湖南医科大学 第二附属医院肾内科，中国湖南 长沙 410011)
关键词：肾炎，间质性/病理学；肾炎，间质性/免疫学；淋巴细胞
湖南医学000301[摘 要]目的分析急性间质肾炎(AIN)肾间质中浸润的淋巴细胞亚型的意义。方法19例AIN患者根据肾活检前的血清肌酐值(SCr)分为SCr>500 μmol/L组(A组)及SCr<500 μmol/L(B组)；根据病人入院30 d时的血清肌酐分为SCr恢复正常组(Ⅰ组)及SCr未恢复正常组(Ⅱ组)。所有病人行肾穿刺活检，肾间质淋巴细胞亚型的检测采用SABC法。结果病理改变均表现为不同程度的间质炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，淋巴细胞亚型以CD+4和CD+8细胞居多，CD+20细胞较少；A组肾间质中的淋巴细胞明显多于B组(P<0.05)；Ⅱ组间质中CD+4及CD+8细胞明显多于Ⅰ组(P<0.01)。结论间质浸润淋巴细胞越多，肾功能越差，AIN的预后也越差；细胞免疫在AIN发病机制中起着重要作用。
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[中图分类号] R692.3+3，R329.2+4 [文献标识码] A [文章编号] 1001-9421(2000)03-0161-02
Analysis of Lymphocyte Subtypes in Renal Interstitial Tissue in Patients
with Acute Interstitial Nephritis
YUAN Shu-guang
(Dept. of Medicine,The Second Affiliated Hospital,Hunan Medical University,Changsha,410011,China)
LIU Rui-hong
, 百拇医药
(Dept. of Medicine,The Second Affiliated Hospital,Hunan Medical University,Changsha,410011,China)
LIU Hong
(Dept. of Medicine,The Second Affiliated Hospital,Hunan Medical University,Changsha,410011,China)
XU Xiang-qing
(Dept. of Medicine,The Second Affiliated Hospital,Hunan Medical University,Changsha,410011,China)
[Abstract] ObjectiveTo evaluate the significance of subtype of lymphocyte infiltrated into renal interstitium in patients with acute interstitial nephritis(AIN).MethodsNinteen patients with AIN were divided into two groups:Group A[serum creatinine(SCr)levels>500 μmol/L]and Group B(SCr<500 μmol/L) based on the SCr levels before renal biopsy.Patients were also defined as recovery group (Group Ⅰ) and unrecovery group (Group Ⅱ) according to the SCr levels at 30th day after admisson.Renal puncture biopies were performed on all patients.Lymphocyte subtypes in renal interstitium were defined by SABC method.ResultsAll patients displayed different degree of inflammatory cell infiltration in the renal interstitium.CD+4 and CD+8 cells accounted for the majority of lymphocyte subtypes,whereas CD+20 cells were in the minority.The numbers of lymphocytes in renal interstitium of Group A distinctly exceeded those of Group B(P<0.05);while the numbers of CD+4 and CD+8 cells in renal interstitium of Group Ⅱ were obviously more than those of Group Ⅰ(P<0.01).ConclusionsThe more is the lymphocyte infiltration in the renal interstitium,the worse will be the renal function.Cellular immunity plays an important role in the pathogenesis of AIN.
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[Key words] nephritis,interstitial/pathol; nephritis,interstitial/immumol; lymphocytes/immumol
急性间质性肾炎(Acute Interstitial Nephritis,AIN)是引起急性肾功能衰竭的常见原因之一[1]，其病理改变主要为间质炎性细胞浸润、肾小管变性或坏死。本文应用免疫组化法分析AIN肾间质中浸润的淋巴细胞亚型，以探讨其在AIN发生、发展中的意义。
1 材料与方法
1.1 一般资料 19例经临床和肾活检确诊为急性间质性肾炎患者，其中男11例，女8例，平均年龄36.9(27～51)岁。其中药物所致者8例，感染所致4例，原因不明者7例。主要临床表现为：发热、皮疹、血尿、少
尿或无尿。患者肾活检前测血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、尿蛋白、尿比重及尿渗透压，并于入院后30 d复查上述指标。根据活检前的SCr值将患者分为SCr>500 μmol/L组(A组)，及SCr<500 μmol/L组(B组)；根据入院后30 d血清肌酐值分为肌酐恢复正常组(Ⅰ组)及肌酐未恢复正常组(Ⅱ组)。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 肾脏病理检查 19例患者均于入院后2 d至2周在B超引导下进行经皮肾穿刺活检术。肾活检组织送光镜检查。
1.2.2 免疫组织化学染色 肾间质淋巴细胞亚型检测采用SABC法。CD+4，CD+8分别识别T辅助细胞/诱导细胞和T抑制/细胞毒细胞，CD+20识别B细胞。CD+4，CD+8和CD+20单克隆抗体及SABC试剂盒均为武汉博士德公司产品。将石蜡包埋的肾组织标本切成4 μm厚切片，其步骤为：①肾组织石蜡切片脱蜡至水；②滴加用蒸馏水新鲜配置的0.3% H2O2，室温下20 min，PBS液洗3次，以消除内源性过氧化酶活性；③0.1%胰蛋白酶消化20 min，37 ℃温箱内进行，PBS液洗3次；④滴加正常血清封闭液，室温下存放20 min；⑤滴加工作浓度的第一抗体，37 ℃孵育30 min，PBS液洗3次；⑥滴加工作浓度的生物化第二抗体，37 ℃孵育20 min，PBS液洗3次；⑦滴加SABC复合物，37 ℃孵育1 h，PBS液洗3次；⑧DAB显色，显微镜下监视呈棕黄色为止；⑨自来水充分洗涤，复染苏木素；⑩脱水、透明、封片。用PBS代替一抗作阴性对照，淋巴瘤为阳性对照标本。
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1.2.3 结果观察 在高倍镜下，细胞浆内棕黄色颗粒样着色为阳性细胞；在装有10 mm×10 mm网格目微尺的400倍显微镜下计数肾间质中阳性细胞数目(观察5个视野)，计算每mm2阳性细胞数。RT值为CD+4/CD+8细胞之比值。
2 结果
19例患者SCr为(552.2±245.6)μmol/L，BUN为(25.3±13.7)mmol/L。患者病理改变均表现为不同程度的间质炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，淋巴细胞亚型以CD+4和CD+8细胞居多，CD+20细胞较少。A组肾间质中的淋巴细胞明显多于B组，详见附表。Ⅱ组间质中CD+4及CD+8细胞明显多于Ⅰ组。Ⅱ组RT值<1，Ⅰ组RT值>1。
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附表 各组肾间质中CD+4，CD+8及CD+20细胞数
比较(
±s,/mm2) 组别n
CD+4
CD+8
CD+20
A组
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139.3±24.5
143.7±29.6
23.1±9.8
B组
10
82.5±31.31)
75.1±20.82)
11.0±7.81)
Ⅰ组
13
79.8±23.63)
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66.7±19.53)
9.3±5.23)
Ⅱ组
6
153.2±23.3
187.6±28.4
19.5±7.9
与A组比较：1)P<0.05；2)P<0.01；与Ⅱ组比较：3)P<0.01
3 讨论
急性间质性肾炎是由不同病因引起的一系列间质炎症反应。肾间质的病理改变与病人的临床表现及预后密切相关。近年来，对于间质中浸润细胞的种类及其亚型与AIN病情的严重程度及预后的关系逐渐受到人们重视。
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本研究结果显示，活检前肾功能损害较重者(SCr>500 μmol/L)，其肾间质中浸润的淋巴细胞显著多于肾功能损害较轻者(SCr<500 μmol/L)，说明间质浸润淋巴细胞越多，肾功能越差，与文献报道一致[2]。且肾活检30 d后SCr恢复正常组的间质中淋巴细胞比例明显低于SCr未恢复组，表明淋巴细胞浸润的多少与AIN的预后有关。
AIN的发病机理尚未完全明了，本实验发现大量免疫性细胞在肾间质浸润。免疫性疾病可引起AIN，由免疫途径也可建立AIN的动物模型，说明免疫反应在AIN的发病机理中起重要作用[3]。大量动物模型证实细胞免疫是引起AIN的主要机制[4，5]。本实验显示间质浸润的淋巴细胞中，亦以T细胞为主，B细胞较少。其可能机制为：CD+8 T细胞通过识别MHC-Ⅰ类抗原发挥细胞毒作用，肾小管细胞片状脱落、小管基膜及细胞外基质的某些变化，可能与细胞毒作用有关；CD+4细胞通过识别MHC-Ⅱ类抗原介导迟发性变态反应，形成肉芽肿及巨细胞，亦产生对肾间质小管的损伤，而由迟发性变态反应激活的单核细胞释放γ-干扰素，后者可使肾小管上皮细胞对MHC-Ⅱ类抗原的表达增强，放大CD+4细胞对肾间质小管的损害。另外，CD+8细胞分泌转化生长因子-β，后者是成纤维细胞分泌纤维连接蛋白、胶原蛋白和糖蛋白很强的刺激剂；CD+4细胞分泌成纤维细胞刺激因子-1和肿瘤坏死因子-α，促进成纤维细胞的增生和纤粘素以及Ⅰ，Ⅱ型胶原的分泌；这些因素均导致肾间质纤维化的形成及肾小管萎缩，因此间质中浸润的淋巴数量与AIN的预后密切相关。
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另外，在SCr未恢复正常组中，CD+8细胞的比例较高(RT值<1)，因而CD+4细胞与CD+8细胞的比例也可能与预后有关，其机制有待进一步研究。
肾活检的典型发现是诊断AIN的最佳指标，而肾间质中浸润的细胞的多少及其种类和亚型与病情及预后密切相关[6]，因此，对临床疑诊急性间质小管病变者应尽早行肾活检，以利临床确诊、治疗及预后判断。
[作者简介] 袁曙光(1964-)，女，湖南新邵人，主治医师，医学硕士，主要从事肾小球疾病及肾脏病理方面研究。
[参 考 文 献]
[1] Robert DT.Acute tubulointerstitial nephritis[J].Am J Med Sci,1990,299:392.
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[2] Townsend A,Bodmer H.Antigen recognition by class I-restricted T lymphocytes[J].Ann Rev Immunol,1989,7:601-624.
[3] 尹 广，黎磊石.间质性肾炎的研究进展[J].临床内科杂志，1994，11：15-17.
[4] Hagerty DT,Allen PM.Processing and presentation of self and foreign antigens by the renal proximal tubule[J].J Immunol,1992,148:2324-2330.
[5] Schwartx RH.A cell cuture model for T lymphocyte clonal anergy[J].Science,1990,248:1349-1356.
[6] 刘 虹，刘瑞洪，袁曙光，等.急性间质小管性疾病肾组织中巨噬细胞及淋巴细胞浸润的研究[J].湖南医科大学学报，1997，22(2)：145-148.
[收稿日期] 1999-12-20, http://www.100md.com
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