淋巴细胞恶性增殖病患者丙型肝炎病毒感染的研究
作者：王炜琴 朱彪 卢兴国
单位：王炜琴 (浙江大学医学院附属第二医院血液科 杭州，310009)；朱彪 (浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所)；卢兴国 (浙江大学医学院附属第二医院血液科 杭州，310009)
关键词：淋巴细胞恶性增殖病；肝炎病毒；丙型；基因型
临床血液学杂志000305
摘要 目的：研究淋巴细胞恶性增殖性疾病(MPLD)患者丙型肝炎病毒感染情况及病毒基因
型分布。方法：用逆转录PCR(RT-PCR)法对76例MPLD和118例体检人群血清进行HCV-RNA检测，同时用Okamoto HCV基因分型法进行HCV基因分型。结果：76例MPLD中HCV-RNA阳性10例
, 百拇医药
(13.16%), 其中21例非霍奇金淋巴瘤(NHL)中2例阳性(9.52%)，39例多发性骨髓瘤(MM)中7
例阳性(17.95%)，16例急性淋巴细胞白血病(ALL)中1例阳性(6.25%),118例体检人员中1例阳
性(0.85%)。对HCV感染病例HCV分型发现，10例HCV感染患者均感染HCV-Ⅱ型，其中MM中1例混合
感染HCV-Ⅰ型，1例混合感染HCV-Ⅳ型。结论：MPLD患者有较高的HCV感染，以MM的HCV感染最
高，HCV-Ⅱ型是MPLD患者HCV感染主要基因型。
The study on hepatitis C virus infection in malignant
, 百拇医药
lymphocytic proliferation diseases
WANG Wei-qin
(Department of Hematology,2nd Hospital of Zhejiang University,Hangzhou 310009)
ZHU Biao
(Department of lufections Disease, 1st Hospital of Zhejiang University)
LU Xing-guo1
(Department of Hematology,2nd Hospital of Zhejiang University,Hangzhou 310009)
, 百拇医药
Abstract Objective:To stuty the hepatitis C virus (HCV) infection and HCV
genotype in malignant lymphocytic proliferation disease (MLPD).Methods: HCV-RNA and
HCVgenotype were detected in 76 MLPD and 118 normal population by RT-PCR.Results:Ten
of 76 (13.16)% cases with MLPD have HCV-RNA positive.Two of 21 (9.52%) cases with
NHL,seven of 39 (17.95%) case with MM,one of 16 (6.25% )case with ALL and one of
, http://www.100md.com
118(0.85%) normal population have HCV-RNA positive respectively. HCV-Ⅱgenotype is
found in all of 10casesof MLPD. Among 7 MM cases with HCVinfected one patients is
coinfected with HCV-Ⅰgenotype, another is coinfected with HCV-Ⅳ genotype.
Conclusion:MLPD have high HCV prevalence, HCV-Ⅱgenotype may be the mainly type of HCV in MLPD.
Key words Malignant lymphocytic proliferation disease Hepatitis C virus
, 百拇医药
Genotype
淋巴细胞恶性增殖性疾病(MPLD)主要包括淋巴瘤、多发性骨髓瘤(MM)、急性淋巴细胞白血病
(ALL)、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞性白血病等，文献报道〔1，2〕，HCV不但是一种亲肝细胞
病毒，还具有亲淋巴细胞的特点，淋巴细胞恶性增殖性疾病发病可能与HCV感染有关，为进一步
明确HCV感染与淋巴细胞恶性增殖病的关系，我们对淋巴细胞恶性增殖病患者进行了HCV感染的研
究。
1 材料与方法
1.1 研究对象
, 百拇医药 收集1998年6月～1999年10月本院确诊的非霍奇金淋巴瘤(NHL)21例，MM患者39例，ALL16
例，其中男49例、女27例，年龄32～72 (平均47.2)岁,采血前病程中均无输血;体检人员118例。
取静脉血3 ml,分离血清, 血清于-70 ℃冰箱保存备用。
1.2 实验方法
用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测1HCV-RNA。按Gibco BRL公司RNA抽提技术抽提血清RNA，参照Okamoto等〔3〕RT-PCR法进行逆转录
反应，逆转录反应体系为5×缓冲液5 μl,0.1 mol/L苏糖醇2.5 μl,0.2 mmol/L dNTP 5 μl,各
, 百拇医药
加25 pmol外套引物TS、TR,M-MLV逆转录酶100 U，模板10 μl，加双蒸水至最终体积为25 μl，石蜡油封顶，42 ℃水浴1 h ,95 ℃ 10 min。PCR反应体系，一级扩增：10×缓冲液5 μl，25
mmol/L MgCl2 4 μl,Taq酶0.3 μl(1.5 U),逆转录产物10 μl，加蒸水至终体积为50 μl,石蜡
油封顶。扩增程序为，94 ℃ 2 min预变性，94 ℃ 1 min,56 ℃ 1 min,72 ℃ 1 min,30个循
环，72℃延伸10 min。二级扩增：10×缓冲液5 μl，25 mmol/L MgCl2 4 μl，0.2 mmol/L
dNTP 5 μl，Taq酶0.3 μl(1.5 U)，各加HCV-Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ分型引物(T1、T2、T3、T4)25
, 百拇医药
pmol和分型共用引物(T)25 pmol，一级产物2 μl，加双蒸水至终体积50 μl，石蜡油封顶，扩增程序同一级扩增。取二级产物10 μl，20 g/L琼脂糖凝胶(加溴化乙锭)电泳，紫外灯观
察，与分子量标记对照，出现57、144 、174、129 bp条带，分别为HCV-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ阳性条
带。为防止PCR污染，实验严格按照PCR操作规程进行，每次均增设阴性、阳性对照，上述反应所
用引物核苷酸序列如下：TS：CGCGCGACTAGGAAGACTTC，TR：ATGT-
ACCCCATGACCTCGGC，T：AGGAGGATCTCC-
GAGCGGTC，T1：TGCCTTGGGATAGGCTGAC，T2：GAGCCATCCTGCCCACCCCA，T3：CCAAG-
, http://www.100md.com
AGGGACGGGAACCTC，T4：ACCCTCGTTTCC-
GTACAGAG。
1.3 统计方法
采用卡方检验进行统计分析。
2 结果
76例MLPD中HCV-RNA阳性10例，阳性率13.16%，与118例体检人群HCV-RNA检出率
0.85%(1/118)比较，差异有极显著意义(χ2=13.09，P<0.001), 在76例MLPD中21例NHL的
HCV-RNA阳性率为9.52%(2/21),MM的HCV-RNA阳性率为17.95%(7/39), ALL的HCV-RNA阳性率为
, http://www.100md.com
6.25%(1/16),以MM的HCV-RNA阳性率为最高。
10例HCV-RNA阳性者均有HCV-Ⅱ型感染，其中MM中1例混合感染HCV-Ⅰ型、1例混合感染HCV-
Ⅳ型，HCV-Ⅱ型为MLPD中HCV感染的主要基因型 。
3 讨论
意大利DeRosa报道〔1〕，B淋巴细胞恶性增殖病患者中HCV感染率为22.4%,其中B细胞NHL中为
23.1%(91例中21例)，MM中为16.1%(56例中9例),不明原因的单克隆免疫球蛋白增多症(MGUS)中为
22.9%(48例中11例)；而在非B淋巴细胞恶性增殖病中HCV感染率仅为1.9%,其中霍奇金病(HD)中为
, 百拇医药
2.3%(43例中1例),T细胞NHL中0%(9例中0例)。日本Izumi等〔2〕研究发现，HCV在B细胞NHL中感染
率为16.0%(25例中4例),在MM中的感染率为14.3%(21例中3例)。国内还未见淋巴细胞恶性增殖病
患者中HCV感染的研究报道，我们对浙江省内76例MPLD患者HCV感染的研究表明，76例MPLD的
HCV-RNA阳性率为13.16%, 其中21例NHL中阳性率为9.52%，39例MM中阳性率为17.95%，16例ALL中
阳性率为6.25%,而118例体检人员中1例阳性(0.85%)。MPLD中HCV感染率明显高于体检人群。本文
MM的HCV感染率与国外感染率相似；而NHL的HCV感染率比国外报道偏低，主要原因是我们研究的
, http://www.100md.com
NHL病例中没有区分B细胞性和T细胞性，且临床上的NHL以B细胞NHL为多。对HCV感染病例HCV基因
分型发现，检出的10例HCV感染患者均感染HCV-Ⅱ型，其中MM中1例有HCV-Ⅰ型混合感染，1例有
HCV-Ⅳ型混合感染。这与我国其它人群HCV感染基因型研究结果相一致〔4〕。
国外研究认为，HCV不但有亲肝细胞的特点，可引起肝脏病变和肝细胞癌，HCV又是亲淋巴细
胞性病毒，淋巴细胞性恶性增殖病的发生可能与之有关〔5〕，另外，HCV感染还可促发自身免疫
紊乱，自身免疫紊乱又是引起淋巴细胞性恶性增殖病的重要原因〔6〕，这可能是为什么MPLD中
, http://www.100md.com
HCV感染率明显高于普通人群的原因；令人感兴趣的是，临床上用α-干扰素治疗MM、CLL、HCL等
淋巴细胞恶性增殖病，其治疗反应率较其它肿瘤高，这可能与α-干扰素抗HCV作用有关，当然不
排除α-干扰素对其它过路病毒的作用。但文献报道B细胞性MPLD中HCV感染率比T细胞性的高，原
因不明。有报道，由于MM患者有乙肝病毒(HBV)慢性感染，化疗过程患者可发生暴发性肝炎〔
7〕，对HCV感染的MPLD患者是否会像HBV感染那样在化疗过程产生肝损害或发生暴发性肝炎，还未
见报道。因此，在淋巴细胞恶性增殖病中进行HCV感染的研究对这类疾病的预防和治疗有重要意
, http://www.100md.com 义。
参考文献
1，DeRosa G,Gobbo M L,DeRenzo A,et al. High prevalence of hepatitis C virus
infection in patients with B-cell lymphoproliferative disorders in Italy .Am J
Hematol, 1997,55:77～82
2，Izumi T,Sasaki R,Tsunoda S,et al.B-cell malignancy and hepatitis C virus
infection .Leukemia,1997,13:516～518
, http://www.100md.com
3，Okamoto H,Kobata S,Tokita H,et al. A second-generation method of genotyping HCV
by the polymerase chain reaction with sense and antisense primers deduced from the
core gene . J Virol Methods,1996,57:31～45
4，张复春, 唐小平，蔡晓莉，等.丙型肝炎病毒基因型与血清HCV-RNA含量关系与干扰素应答的
研究.中华微生物和免疫学杂志,1998,2:17～19
5，Paydas S,Kilic B,Sahin B,et al. Prevalence of hepatitis C virus infection in
, 百拇医药
patients with lymphoproliferative disorders in Southern Turkey.Br J
Cancer,1999,80:1303～1305
6，Pivetti S,Novarino A,Merico F,et al.High prevalence of autoimmune phenomena in
hepatitis C virus antibody positive patients with lymphoproliferative and connective
tissue disorders.Br J Haematol,1996,95:204～209
7，Zuckerman E,Zuckerman T,Douer D,et al.Liver dysfunction in patients infected with
hepatitis C virus undergoing chemotherapy for hematologocal
malignancies.Cancer,1998,86:1224～1230
收稿：1999-07-02
修回：2000-01-04, http://www.100md.com
单位：王炜琴 (浙江大学医学院附属第二医院血液科 杭州，310009)；朱彪 (浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所)；卢兴国 (浙江大学医学院附属第二医院血液科 杭州，310009)
关键词：淋巴细胞恶性增殖病；肝炎病毒；丙型；基因型
临床血液学杂志000305
摘要 目的：研究淋巴细胞恶性增殖性疾病(MPLD)患者丙型肝炎病毒感染情况及病毒基因
型分布。方法：用逆转录PCR(RT-PCR)法对76例MPLD和118例体检人群血清进行HCV-RNA检测，同时用Okamoto HCV基因分型法进行HCV基因分型。结果：76例MPLD中HCV-RNA阳性10例
, 百拇医药
(13.16%), 其中21例非霍奇金淋巴瘤(NHL)中2例阳性(9.52%)，39例多发性骨髓瘤(MM)中7
例阳性(17.95%)，16例急性淋巴细胞白血病(ALL)中1例阳性(6.25%),118例体检人员中1例阳
性(0.85%)。对HCV感染病例HCV分型发现，10例HCV感染患者均感染HCV-Ⅱ型，其中MM中1例混合
感染HCV-Ⅰ型，1例混合感染HCV-Ⅳ型。结论：MPLD患者有较高的HCV感染，以MM的HCV感染最
高，HCV-Ⅱ型是MPLD患者HCV感染主要基因型。
The study on hepatitis C virus infection in malignant
, 百拇医药
lymphocytic proliferation diseases
WANG Wei-qin
(Department of Hematology,2nd Hospital of Zhejiang University,Hangzhou 310009)
ZHU Biao
(Department of lufections Disease, 1st Hospital of Zhejiang University)
LU Xing-guo1
(Department of Hematology,2nd Hospital of Zhejiang University,Hangzhou 310009)
, 百拇医药
Abstract Objective:To stuty the hepatitis C virus (HCV) infection and HCV
genotype in malignant lymphocytic proliferation disease (MLPD).Methods: HCV-RNA and
HCVgenotype were detected in 76 MLPD and 118 normal population by RT-PCR.Results:Ten
of 76 (13.16)% cases with MLPD have HCV-RNA positive.Two of 21 (9.52%) cases with
NHL,seven of 39 (17.95%) case with MM,one of 16 (6.25% )case with ALL and one of
, http://www.100md.com
118(0.85%) normal population have HCV-RNA positive respectively. HCV-Ⅱgenotype is
found in all of 10casesof MLPD. Among 7 MM cases with HCVinfected one patients is
coinfected with HCV-Ⅰgenotype, another is coinfected with HCV-Ⅳ genotype.
Conclusion:MLPD have high HCV prevalence, HCV-Ⅱgenotype may be the mainly type of HCV in MLPD.
Key words Malignant lymphocytic proliferation disease Hepatitis C virus
, 百拇医药
Genotype
淋巴细胞恶性增殖性疾病(MPLD)主要包括淋巴瘤、多发性骨髓瘤(MM)、急性淋巴细胞白血病
(ALL)、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞性白血病等，文献报道〔1，2〕，HCV不但是一种亲肝细胞
病毒，还具有亲淋巴细胞的特点，淋巴细胞恶性增殖性疾病发病可能与HCV感染有关，为进一步
明确HCV感染与淋巴细胞恶性增殖病的关系，我们对淋巴细胞恶性增殖病患者进行了HCV感染的研
究。
1 材料与方法
1.1 研究对象
, 百拇医药 收集1998年6月～1999年10月本院确诊的非霍奇金淋巴瘤(NHL)21例，MM患者39例，ALL16
例，其中男49例、女27例，年龄32～72 (平均47.2)岁,采血前病程中均无输血;体检人员118例。
取静脉血3 ml,分离血清, 血清于-70 ℃冰箱保存备用。
1.2 实验方法
用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测1HCV-RNA。按Gibco BRL公司RNA抽提技术抽提血清RNA，参照Okamoto等〔3〕RT-PCR法进行逆转录
反应，逆转录反应体系为5×缓冲液5 μl,0.1 mol/L苏糖醇2.5 μl,0.2 mmol/L dNTP 5 μl,各
, 百拇医药
加25 pmol外套引物TS、TR,M-MLV逆转录酶100 U，模板10 μl，加双蒸水至最终体积为25 μl，石蜡油封顶，42 ℃水浴1 h ,95 ℃ 10 min。PCR反应体系，一级扩增：10×缓冲液5 μl，25
mmol/L MgCl2 4 μl,Taq酶0.3 μl(1.5 U),逆转录产物10 μl，加蒸水至终体积为50 μl,石蜡
油封顶。扩增程序为，94 ℃ 2 min预变性，94 ℃ 1 min,56 ℃ 1 min,72 ℃ 1 min,30个循
环，72℃延伸10 min。二级扩增：10×缓冲液5 μl，25 mmol/L MgCl2 4 μl，0.2 mmol/L
dNTP 5 μl，Taq酶0.3 μl(1.5 U)，各加HCV-Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ分型引物(T1、T2、T3、T4)25
, 百拇医药
pmol和分型共用引物(T)25 pmol，一级产物2 μl，加双蒸水至终体积50 μl，石蜡油封顶，扩增程序同一级扩增。取二级产物10 μl，20 g/L琼脂糖凝胶(加溴化乙锭)电泳，紫外灯观
察，与分子量标记对照，出现57、144 、174、129 bp条带，分别为HCV-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ阳性条
带。为防止PCR污染，实验严格按照PCR操作规程进行，每次均增设阴性、阳性对照，上述反应所
用引物核苷酸序列如下：TS：CGCGCGACTAGGAAGACTTC，TR：ATGT-
ACCCCATGACCTCGGC，T：AGGAGGATCTCC-
GAGCGGTC，T1：TGCCTTGGGATAGGCTGAC，T2：GAGCCATCCTGCCCACCCCA，T3：CCAAG-
, http://www.100md.com
AGGGACGGGAACCTC，T4：ACCCTCGTTTCC-
GTACAGAG。
1.3 统计方法
采用卡方检验进行统计分析。
2 结果
76例MLPD中HCV-RNA阳性10例，阳性率13.16%，与118例体检人群HCV-RNA检出率
0.85%(1/118)比较，差异有极显著意义(χ2=13.09，P<0.001), 在76例MLPD中21例NHL的
HCV-RNA阳性率为9.52%(2/21),MM的HCV-RNA阳性率为17.95%(7/39), ALL的HCV-RNA阳性率为
, http://www.100md.com
6.25%(1/16),以MM的HCV-RNA阳性率为最高。
10例HCV-RNA阳性者均有HCV-Ⅱ型感染，其中MM中1例混合感染HCV-Ⅰ型、1例混合感染HCV-
Ⅳ型，HCV-Ⅱ型为MLPD中HCV感染的主要基因型 。
3 讨论
意大利DeRosa报道〔1〕，B淋巴细胞恶性增殖病患者中HCV感染率为22.4%,其中B细胞NHL中为
23.1%(91例中21例)，MM中为16.1%(56例中9例),不明原因的单克隆免疫球蛋白增多症(MGUS)中为
22.9%(48例中11例)；而在非B淋巴细胞恶性增殖病中HCV感染率仅为1.9%,其中霍奇金病(HD)中为
, 百拇医药
2.3%(43例中1例),T细胞NHL中0%(9例中0例)。日本Izumi等〔2〕研究发现，HCV在B细胞NHL中感染
率为16.0%(25例中4例),在MM中的感染率为14.3%(21例中3例)。国内还未见淋巴细胞恶性增殖病
患者中HCV感染的研究报道，我们对浙江省内76例MPLD患者HCV感染的研究表明，76例MPLD的
HCV-RNA阳性率为13.16%, 其中21例NHL中阳性率为9.52%，39例MM中阳性率为17.95%，16例ALL中
阳性率为6.25%,而118例体检人员中1例阳性(0.85%)。MPLD中HCV感染率明显高于体检人群。本文
MM的HCV感染率与国外感染率相似；而NHL的HCV感染率比国外报道偏低，主要原因是我们研究的
, http://www.100md.com
NHL病例中没有区分B细胞性和T细胞性，且临床上的NHL以B细胞NHL为多。对HCV感染病例HCV基因
分型发现，检出的10例HCV感染患者均感染HCV-Ⅱ型，其中MM中1例有HCV-Ⅰ型混合感染，1例有
HCV-Ⅳ型混合感染。这与我国其它人群HCV感染基因型研究结果相一致〔4〕。
国外研究认为，HCV不但有亲肝细胞的特点，可引起肝脏病变和肝细胞癌，HCV又是亲淋巴细
胞性病毒，淋巴细胞性恶性增殖病的发生可能与之有关〔5〕，另外，HCV感染还可促发自身免疫
紊乱，自身免疫紊乱又是引起淋巴细胞性恶性增殖病的重要原因〔6〕，这可能是为什么MPLD中
, http://www.100md.com
HCV感染率明显高于普通人群的原因；令人感兴趣的是，临床上用α-干扰素治疗MM、CLL、HCL等
淋巴细胞恶性增殖病，其治疗反应率较其它肿瘤高，这可能与α-干扰素抗HCV作用有关，当然不
排除α-干扰素对其它过路病毒的作用。但文献报道B细胞性MPLD中HCV感染率比T细胞性的高，原
因不明。有报道，由于MM患者有乙肝病毒(HBV)慢性感染，化疗过程患者可发生暴发性肝炎〔
7〕，对HCV感染的MPLD患者是否会像HBV感染那样在化疗过程产生肝损害或发生暴发性肝炎，还未
见报道。因此，在淋巴细胞恶性增殖病中进行HCV感染的研究对这类疾病的预防和治疗有重要意
, http://www.100md.com 义。
参考文献
1，DeRosa G,Gobbo M L,DeRenzo A,et al. High prevalence of hepatitis C virus
infection in patients with B-cell lymphoproliferative disorders in Italy .Am J
Hematol, 1997,55:77～82
2，Izumi T,Sasaki R,Tsunoda S,et al.B-cell malignancy and hepatitis C virus
infection .Leukemia,1997,13:516～518
, http://www.100md.com
3，Okamoto H,Kobata S,Tokita H,et al. A second-generation method of genotyping HCV
by the polymerase chain reaction with sense and antisense primers deduced from the
core gene . J Virol Methods,1996,57:31～45
4，张复春, 唐小平，蔡晓莉，等.丙型肝炎病毒基因型与血清HCV-RNA含量关系与干扰素应答的
研究.中华微生物和免疫学杂志,1998,2:17～19
5，Paydas S,Kilic B,Sahin B,et al. Prevalence of hepatitis C virus infection in
, 百拇医药
patients with lymphoproliferative disorders in Southern Turkey.Br J
Cancer,1999,80:1303～1305
6，Pivetti S,Novarino A,Merico F,et al.High prevalence of autoimmune phenomena in
hepatitis C virus antibody positive patients with lymphoproliferative and connective
tissue disorders.Br J Haematol,1996,95:204～209
7，Zuckerman E,Zuckerman T,Douer D,et al.Liver dysfunction in patients infected with
hepatitis C virus undergoing chemotherapy for hematologocal
malignancies.Cancer,1998,86:1224～1230
收稿：1999-07-02
修回：2000-01-04, http://www.100md.com