肝动脉化疗栓塞加门静脉灌输CD3AK细胞治疗转移性肝癌的研究
作者：李佩英 侯冰宗 李绵 钟能锭 解立桦 何天昌
单位：李佩英(桂林医学院)；侯冰宗 李绵 钟能锭 解立桦 何天昌(暨南大学医学院第三附属医院肿瘤外科 珠海市 519000)
关键词：化疗栓塞；门静脉灌输；CD3AK细胞；转移性肝癌；免疫
华夏医学000307 摘要 目的：观察肝动脉化疗栓塞+门静脉插管化疗、灌输CD3AK细胞治疗转 移性肝癌的临床疗效及对机体免疫功能的影响。方法：将25例大肠癌肝转移患者随机分为A ，B两组，A组行肝动脉化疗栓塞+门静脉插管化疗、灌输CD3AK细胞治疗，B组行肝动脉化 疗栓塞+门静脉插管化疗治疗。结果：A组患者的细胞免疫指标在术后迅速恢复且维持在高水 平状态，避免了机体由于手术打击而导致术后免疫力普遍降低的现象。而B组术后细胞免疫 功能较术前明显降低(P<0.05)，且恢复缓慢。A、B两组术后同期各指标相比较有显著性 差异(P<0.05)。C组外周血单个核细胞的分布及体液免疫功能指标在术前、术后相比较 无明显差异(P>0.05)，但均比A、B组高。A组临床有效率为80%，B组为60%。结论：肝动 脉化疗栓塞+门静脉插管化疗、灌输CD3AK细胞治疗转移性肝癌能提高临床疗效，提高肿瘤 的Ⅱ期切除率及迅速恢复、提高机体的细胞免疫功能。
, 百拇医药
中图分类号 R735.7；R730.5
Study of Combine Effect of Hepatic Arterial Chemoembolization and Portal Venous Infusion with CD3AK cells on Patient with Metastatic Hepatic Carcinoma
Hou Bin g zong,Li Peiying,Li Mian,et al.
The third affiliated hospital of Jinan Universit y，Zhuhai 519000
Abstract Objective:To observe the clinical therapeutic value and ef fect on hostal immunol functional change for patient with secondary hepatic veno us infusion with CD3AK cells treatment.Methods:25 cases of patient with metast atic hepatic carcinoma of primary colon origin are divided randomly into group A a nd group B.group A,employed the combined hepatic arterial chemoembolization and portal venous infusion with CD3AK cells procedure,while group B used the combi ned hepatic arterial chemoembolization only.Results:In group A,avoiding the gene ral low immunity leave as a result of the cellular immunol index restore swifty and maintain at relatively high level post-operatively,while in group B,the cel l ular immunol function is obviously low and the restoration is slow.Both group A and group B index show apparent difference in same period of time(P<0.05).Ef fectiveness for group A is 80% while 60% for group B.Conclusion:Combined hepatic arterial chemombolization and portal venous infusion carcinoma with CD3AK cel ls procedure has marked clinical therapeutic value and swift restoration.It is a lso effective to enhance hostal immune function.
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Key words chemoembolization; portal venous infusion;CD3AK cells;m etastatic hepatic carcinoma;immune
随着对肝癌血供研究的不断深入，近年来出现了一种较新的治疗肝癌的方法，即肝动脉 、门静脉同时栓塞化疗以求达到彻底阻断肿瘤供血，提高治疗效果。然而该治疗方法在起治疗作用的同时 亦对机体免疫功能造成损害。本研究采用肝动脉化疗栓塞+门静脉插管化疗，术后从门静脉灌输CD3AK细胞/I L-2(CD3monoclonal antibody Activated Killer cell,CD3AK细胞：白细胞介素-II，IL-2)治疗15例结肠癌 、直肠癌肝转移的患者，探索该综合疗法的临床疗效及对机体免疫功能的影响。
1 对象与方法
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1.1 对象 25例不能行Ⅰ期切除的转移性肝癌(原发灶已切除 ，病理证实)，年龄(49±10 .4)岁，直肠癌肝转移11例，结肠癌转移14例。一般情况良好，无黄疸、腹水，B超、CT等检 查未发现其他 器官转移灶。单病灶6例，两个或以上病灶19例。随机分为A、B两组，A组15例，行肝动脉化疗栓塞+门静脉 灌输化疗及CD3AK细胞治疗， B组10例，行肝动脉化疗栓塞+门静脉灌输化疗。另设C组肝良性肿瘤患者(单 纯肿物切除)作为对照组。
1.2 材料 IL-2：上海生物制品二厂产品； CD3单克隆抗体： 军事医学科学院产品。
1.3 CD3AK细胞的制作及活性测定 (由肿瘤生物治疗中心提供 )。取正常献血员外周血 经密度梯度离心所得富含淋巴细胞成分液，置于RPMl1640细胞培养液，细胞浓度为1×106 /ml(细胞培养液含CD3单克隆抗体30ng/ml及IL-2 100u/ml,PHA 10μg/ml,5%AB 型人血清)，置于5%的CO2孵箱37℃温育8～12d，收集不同时间的CD3AK细胞制成细胞悬液200ml/瓶即用(内含CD3AK细胞2×108/200ml)。同 时取样留检。
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1.4 CD3AK细胞抗瘤活性测定 靶细胞为Hela-3、K562 细胞株，采用MTT法，效靶比例为50∶1。另按常规方法诱导LAK细胞(培养体系IL-2 100u/m1，PHA 10ug/ml，5%AS型人血清)作为对照。
1.5 肝动脉化疗栓塞及门静脉插管化疗 常规剖腹行肝动脉插管 ，经十二指肠动脉或肝总动脉导管直达靶肝叶的肝动脉分支内，固定导管。门静脉插管：经胃网膜右静脉或回结肠系膜静脉或结肠中 静脉分支插入导管，插管完成后，经导管注入美蓝进一步证实插管部位。肝动脉插管注入由表阿霉素30mg，丝 裂霉素10mg，碘化油10～15ml制成的混悬液。门静脉插管注入表阿霉素30～50mg，丝裂霉 素8～10mg。术中肝动脉插管拔后行肝动脉结扎，门静脉插管则保留以备灌输CD3AK细胞悬液或化疗。
1.6 CD3AK细胞输注 A组术后第1d开始，从门静脉 输入CD3AK细胞/IL-2(细胞数 2×108/次，IL-2：10万u)，1次/d,连续10d,休息5d为1周期，2周期为1疗程，CD3AK 治疗期间不作其它治疗(如放疗、介入治疗等)。B组插管留至日后化疗。
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1.7 免疫指标测定 手术治疗前1周、手术后1周，2周，3周，4 周分别测定患者外周血T淋 巴细胞亚群(APAAP法)，T淋巴细胞转化率，NK细胞活性试验(参照LDH释放改良法)，IL-2R( 采用间接免疫荧光法)。
1.8 疗效判断 肿瘤变化均以手术治疗后4周，根据WHO“实体瘤 近期疗效的分级标准”判断疗效。统 计学处理：各项数据均用(
±s)表示，根据需要采用t检验或F检 验。
2 结果
2.1 杀伤活性测定 对Hela-3细胞的杀伤活性，CD3A细胞(54.12±12. 34)与LAK细胞(31.76±9.63)相比较有显著性差异(P<0.05)，对K562细胞的杀伤活性，CD3AK细胞(77.45±7 .38)与LAK细胞(48.28±6.85)相比较有显著性差异(P<0.05)。
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2.2 临床疗效 根据WHO“实体瘤近期疗效的分级标准”。A组15 例转移性肝癌，完全缓解(CR)2例，部分缓解(PR)10例(其中5例肿瘤缩小后行Ⅱ期手术切除)，稳定3例。1例术后出现一过 性黄疸、腹水，经治疗后消失(CR+PR 12/15)。 B组：完全缓解(CR)0例，部分缓解(PR)6例(其中2例肿瘤缩小后行Ⅱ期手术切除)，稳定4例(CR+PR 6/10)，3例术后出现一过性黄疸、腹水，经治疗后 消失。两组病例均无术中及术后因手术并发症死亡。生存时间：A组15例中1例生存9个月，死于肿瘤晚期 恶液质，2例生存1年8个月，死于肝、肺功能衰竭，12例生存1年以上(其中4例16个月以上、4例2年以上) 。 B组10例中有2例生存11个月，死于恶性肿瘤晚期恶液质，1例生存14个月，死于肿瘤期转移，2 例生存16个月，死于肝功能衰竭合并肺部感染，5例生存1年以上(其中1例16个月以上、2例2 年以上)。
2.3 如表1所示，术前1周时，A、B组外周血单个核细胞的分布没有明显差异(P>0. 05)。术后1周时， B组细胞免疫功能明显低下，外周血CD3、CD4、CD4/CD8、NKC、IL-2R、T淋转明 显降低，与术前相比较有显著性差异(P<0.05)。术后第2周开始细胞免疫功能逐渐恢复但较缓慢，至第4周还 处于低水平。 A组在术后1周时细胞免疫功能明显提高，外周血CD3、 CD4、 CD4/CD8、 NKC、IL-2R、T淋 转明显增加，与术前相比有显著性差异(P<0.05)，术后第2周、第3周、第4周呈上升趋势且保持在高水平状 态。A、B两组同期各检测指标相比较有显著性差异。C组外周血单个核细胞的分布在术前、术后相比较无 明显差异(P>0.05)，但细胞免疫功能均比A、B组高。
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3 讨论
研究证实，肝肿瘤90%的血供来源于肝动脉，余为门静脉供血。肝动脉、门静脉双重栓 塞，不但造成肿瘤的大片坏死，最大限度地解除患者的瘤负荷，减少外周静脉用药所引起的毒副作用，还 可使肿瘤周围、子瘤以及门静脉癌栓完全坏死，以达到根治的目的，同时，非栓塞区肝实质代偿性增大，增 加了肝储备功能，扩大了肝切除的指征[1，2]。中晚期肝癌患者的体质、免疫力、抵抗力以及 对化疗的耐受能力均较差，不能耐受常规大剂量的外周化疗，从而大大影响治疗效果。采取门静脉插管化疗时，肿瘤局部 的化疗药物浓度比外周静脉用药时高，实践证明前者的治疗效果明显优于后者。韩有志等[3]应用肝动 脉化疗栓塞+门静脉插管化疗治疗直肠癌肝转移15例，1年生存率80%，3年生存率达33.3%。本研究全组23例患者 中，总有效率达72%(18/25)，其中2例肿瘤消失，7例经治疗后行Ⅱ期手术切除肿瘤，取得良好的临床疗效 。B组1年生存率80%，与文献报道相同，而A组1年生存率14/15(93%)，高于B组。
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要提高肿瘤患者术后的生存率，笔者认为关键之一是如何在最大限度减少患者瘤负荷的基 础上，尽快纠正、恢复肿瘤患者机体混乱、低下的免疫功能状态，尤其是细胞免疫功能。因此，积极进行 免疫调节治疗，尤其是采用具有强抗瘤效应的细胞继承疗法甚为重要。本研究在双重化疗、栓塞的同时积极 配合免疫治疗，取得了良好的疗效。基础和临床研究表明：CD3AK细胞体外杀瘤活性明显高于LAK细胞， 本研究得出同样的结论。其杀瘤机制：①由直接接触杀伤肿瘤细胞；②分泌细胞因子：释放IL-2，TNF，IPN -r等，诱导B细胞转化为高效分泌抗体的浆细胞，提高机体的体液免疫力，间接杀伤肿瘤细胞[4] 。虞喜豪[5]等应用CD3AK细胞治疗中晚期癌肿显示临床有效率达63%，且输入CD3AK细胞的量与疗效成正比。研究认 为，提高肿瘤局部免疫活性细胞浓度，能够通过直接接触杀伤肿瘤细胞，且免疫活性细胞进入体循环后，同 样发挥间接抗肿瘤作用。本研究A组有效率达80%(12/15)，且增加了Ⅱ期手术切除的机会(A组7/15， B 组2/10)。刘剑仑等[6]分析了肿瘤患者手术前后细胞免疫功能状态时发现，手术 本身对患者细胞免疫功能有明显影响，术后1周时细胞免疫功能明显降低，直至2周后才开始逐渐恢复。而术后2周内是及时杀灭残留肿瘤 细胞以及抑制其生长、分化、浸润、转移的关键。本研究中B组得出同样的结论。而A组在机 体的免疫力恢复方面，手术后1周机体免疫力即得到明显恢复、提高，与术前相比有显著性 差异(P<0.05)，第2周、第3周、第4周机体免疫力逐渐上升且维持在高水平状态，无B组 在术 后免疫功能先降低后回升的现象，克服了由手术打击所引起的机体免疫力明显减退的缺陷， 从而更好地发挥术后早期机体的抗肿瘤作用，对消灭残存的肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞的生长 、分化、浸润转移等具有特别重要的意义。NK细胞、T淋转、以及CD4/CD8明显增加，特别是 IL-2R由术前28.93±4.12上升至术后第4周的45.93±7.89(P<0.001)，更显示T淋巴 细胞处 于明显的激活增殖状态，这可能与CD3AK细胞杀灭或抑制肿瘤细胞，分泌细胞因子，解除 机体荷瘤状态下患者免疫功能受到明显的抑制现象，提高机体体内免疫功能，促进免疫调节 、免疫监视、及免疫细胞直接或间接发挥抗肿瘤作用有关。
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表1 A、B、C组治疗前后患者免疫功能的变化( ±s) 组 别
CD3
CD4
CD8
CD4/CD8
NKC
IL-2R
T淋转
A组(n=15)
术前1周
27.63±4.14##
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35.41±7.96#
30.41±4.92#
1.23±0.41 #
27.63±4.34#
28.93±4.02##
38.41±9.14#
术后1周
33.13±4.83**
40.67±3.33**
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24.01±4.54**
1.85 ±0.31*
31.32±4.49**
37.07±3.57**
45.26±7.32**
术后2周
35.27±6.42**
46.27±5.47**
21.24±5.36**
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2.18 ±0.45**
35.27±6.42*
39.63±4.45**
48.33±8.06**
术后3周
38.33±3.20**
47.67±4.47**
20.45±6.22*
2.42±0.6 7*
, 百拇医药
38.33±3.20**
44.67±7.96**
55.78±8.87**
术后4周
41.07±2.84*
49.27±8.56*
19.50±4.65**
2.51± 0.85*
41.07±2.84*
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45.93±7.89**
56.02±10.21*
B组(n=10)
术前1周
28.49±3.81#
37.47±9.98#
29.68±4.66#
1.24±0.41#
28.4 9±3.81#
30.13±3.48##
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39.45±9.13#
术后1周
22.87±5.42
32.73±6.79
36.01±5.48
0.97±0.26
22.87±5.42
21. 07±4.66
31.57±10.56
术后2周
24.27±6.54
, 百拇医药
33.67±7.63
32.14±6.32
1.14±0.22
24.47±6.85
24. 53±4.19
34.85±7.31
术后3周
27.13±6.04
34.47±78.57
29.67±5.21
1.36±0.34
, http://www.100md.com 27.13±6.24
28 .27±5.22
38.85±6.43
术后4周
35.08±7.98
41.67±6.86
27.06±4.84
1.87±0.27
35.07±7.98
35. 07±6.58
45.69±9.76
C组(n=10)
, 百拇医药
术前1周
60.18±8.06
51.67±8.41
26.39±5.35
2.34±0.25
40.88±6 .63
48.12±7.56
56.18±10.12
术后1周
55.48±6.65
48.72±7.94
21.63±4.83
, 百拇医药
2.56±0.42
36.75±5.87
41. 66±6.56
45.62±8.94
术后2周
62.76±9.34
54.13±9.86
22.46±5.08
2.45±0.23
44.51±6.78
52. 36±8.13
, 百拇医药 51.43±9.23
术后3周
63.26±6.43
50.38±8.21
18.93±4.41
2.52±0.38
42.49±7.74
47. 45±8.42
50.82±11.31
术后4周
67.22±7.72
55.81±9.62
, 百拇医药
25.15±3.86
2.15±0.32
45.51±7.07
50. 18±9.23
53.11±11.23
*:P<0.05; **:P<0.001(A组与B组同期同类指标相比较)；
#:P<0.05; ##:P<0.001(A组或B组术前与术后1周同类指标相比较)；
本课题为广东省医学科研立项课题 课题编号B1997137
侯冰宗(1965-),男,1988年7月毕业于广西医科大学获学士学位,1995年7月毕业于广西医科大学获肿瘤外科硕士学位;现任暨南大学医学院第三附属医院肿瘤外科主治医生.
, 百拇医药
参考文献
1，Lee K C,Knoshita H,Hirohasik,et al.Extension of surgical indication s for hepatocellular carcinoma by portal vein embolization.World J Surg,1993,17: 109
2，Nakao N,Miura K,Takahashi H,et al.Hepatocellular carcinoma,combined hepatic arterial,and portal venous embolization.Radiology,1986,161:303
3，韩有志，张玲，韩风，等.直肠癌肝转移的治疗.中国肿瘤临床，1996，23(6) ：412
4，Anderson-PM，Blazar-BR，Bach-FH，et al.Anti-CD3+IL-2-stimulat ed murin e killer cells.In vitro generation and in vivo antitumor activity J-Immunol,198 9,Feb15，142(4):1383～1394
5，虞喜豪，程永德，金健行，等.CD3单克隆抗体激活细胞用于中晚期癌肿治疗 的初步观察.上海免疫学杂志，1995，15(5)：289
6，刘剑仑，秦伟新，韦长元，等.大肠癌病人手术后细胞免疫功能的动态研究. 中华实验外科杂志，1995，12(2)：710
(收稿 2000-03-23), http://www.100md.com
单位：李佩英(桂林医学院)；侯冰宗 李绵 钟能锭 解立桦 何天昌(暨南大学医学院第三附属医院肿瘤外科 珠海市 519000)
关键词：化疗栓塞；门静脉灌输；CD3AK细胞；转移性肝癌；免疫
华夏医学000307 摘要 目的：观察肝动脉化疗栓塞+门静脉插管化疗、灌输CD3AK细胞治疗转 移性肝癌的临床疗效及对机体免疫功能的影响。方法：将25例大肠癌肝转移患者随机分为A ，B两组，A组行肝动脉化疗栓塞+门静脉插管化疗、灌输CD3AK细胞治疗，B组行肝动脉化 疗栓塞+门静脉插管化疗治疗。结果：A组患者的细胞免疫指标在术后迅速恢复且维持在高水 平状态，避免了机体由于手术打击而导致术后免疫力普遍降低的现象。而B组术后细胞免疫 功能较术前明显降低(P<0.05)，且恢复缓慢。A、B两组术后同期各指标相比较有显著性 差异(P<0.05)。C组外周血单个核细胞的分布及体液免疫功能指标在术前、术后相比较 无明显差异(P>0.05)，但均比A、B组高。A组临床有效率为80%，B组为60%。结论：肝动 脉化疗栓塞+门静脉插管化疗、灌输CD3AK细胞治疗转移性肝癌能提高临床疗效，提高肿瘤 的Ⅱ期切除率及迅速恢复、提高机体的细胞免疫功能。
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中图分类号 R735.7；R730.5
Study of Combine Effect of Hepatic Arterial Chemoembolization and Portal Venous Infusion with CD3AK cells on Patient with Metastatic Hepatic Carcinoma
Hou Bin g zong,Li Peiying,Li Mian,et al.
The third affiliated hospital of Jinan Universit y，Zhuhai 519000
Abstract Objective:To observe the clinical therapeutic value and ef fect on hostal immunol functional change for patient with secondary hepatic veno us infusion with CD3AK cells treatment.Methods:25 cases of patient with metast atic hepatic carcinoma of primary colon origin are divided randomly into group A a nd group B.group A,employed the combined hepatic arterial chemoembolization and portal venous infusion with CD3AK cells procedure,while group B used the combi ned hepatic arterial chemoembolization only.Results:In group A,avoiding the gene ral low immunity leave as a result of the cellular immunol index restore swifty and maintain at relatively high level post-operatively,while in group B,the cel l ular immunol function is obviously low and the restoration is slow.Both group A and group B index show apparent difference in same period of time(P<0.05).Ef fectiveness for group A is 80% while 60% for group B.Conclusion:Combined hepatic arterial chemombolization and portal venous infusion carcinoma with CD3AK cel ls procedure has marked clinical therapeutic value and swift restoration.It is a lso effective to enhance hostal immune function.
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Key words chemoembolization; portal venous infusion;CD3AK cells;m etastatic hepatic carcinoma;immune
随着对肝癌血供研究的不断深入，近年来出现了一种较新的治疗肝癌的方法，即肝动脉 、门静脉同时栓塞化疗以求达到彻底阻断肿瘤供血，提高治疗效果。然而该治疗方法在起治疗作用的同时 亦对机体免疫功能造成损害。本研究采用肝动脉化疗栓塞+门静脉插管化疗，术后从门静脉灌输CD3AK细胞/I L-2(CD3monoclonal antibody Activated Killer cell,CD3AK细胞：白细胞介素-II，IL-2)治疗15例结肠癌 、直肠癌肝转移的患者，探索该综合疗法的临床疗效及对机体免疫功能的影响。
1 对象与方法
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1.1 对象 25例不能行Ⅰ期切除的转移性肝癌(原发灶已切除 ，病理证实)，年龄(49±10 .4)岁，直肠癌肝转移11例，结肠癌转移14例。一般情况良好，无黄疸、腹水，B超、CT等检 查未发现其他 器官转移灶。单病灶6例，两个或以上病灶19例。随机分为A、B两组，A组15例，行肝动脉化疗栓塞+门静脉 灌输化疗及CD3AK细胞治疗， B组10例，行肝动脉化疗栓塞+门静脉灌输化疗。另设C组肝良性肿瘤患者(单 纯肿物切除)作为对照组。
1.2 材料 IL-2：上海生物制品二厂产品； CD3单克隆抗体： 军事医学科学院产品。
1.3 CD3AK细胞的制作及活性测定 (由肿瘤生物治疗中心提供 )。取正常献血员外周血 经密度梯度离心所得富含淋巴细胞成分液，置于RPMl1640细胞培养液，细胞浓度为1×106 /ml(细胞培养液含CD3单克隆抗体30ng/ml及IL-2 100u/ml,PHA 10μg/ml,5%AB 型人血清)，置于5%的CO2孵箱37℃温育8～12d，收集不同时间的CD3AK细胞制成细胞悬液200ml/瓶即用(内含CD3AK细胞2×108/200ml)。同 时取样留检。
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1.4 CD3AK细胞抗瘤活性测定 靶细胞为Hela-3、K562 细胞株，采用MTT法，效靶比例为50∶1。另按常规方法诱导LAK细胞(培养体系IL-2 100u/m1，PHA 10ug/ml，5%AS型人血清)作为对照。
1.5 肝动脉化疗栓塞及门静脉插管化疗 常规剖腹行肝动脉插管 ，经十二指肠动脉或肝总动脉导管直达靶肝叶的肝动脉分支内，固定导管。门静脉插管：经胃网膜右静脉或回结肠系膜静脉或结肠中 静脉分支插入导管，插管完成后，经导管注入美蓝进一步证实插管部位。肝动脉插管注入由表阿霉素30mg，丝 裂霉素10mg，碘化油10～15ml制成的混悬液。门静脉插管注入表阿霉素30～50mg，丝裂霉 素8～10mg。术中肝动脉插管拔后行肝动脉结扎，门静脉插管则保留以备灌输CD3AK细胞悬液或化疗。
1.6 CD3AK细胞输注 A组术后第1d开始，从门静脉 输入CD3AK细胞/IL-2(细胞数 2×108/次，IL-2：10万u)，1次/d,连续10d,休息5d为1周期，2周期为1疗程，CD3AK 治疗期间不作其它治疗(如放疗、介入治疗等)。B组插管留至日后化疗。
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1.7 免疫指标测定 手术治疗前1周、手术后1周，2周，3周，4 周分别测定患者外周血T淋 巴细胞亚群(APAAP法)，T淋巴细胞转化率，NK细胞活性试验(参照LDH释放改良法)，IL-2R( 采用间接免疫荧光法)。
1.8 疗效判断 肿瘤变化均以手术治疗后4周，根据WHO“实体瘤 近期疗效的分级标准”判断疗效。统 计学处理：各项数据均用(
±s)表示，根据需要采用t检验或F检 验。2 结果
2.1 杀伤活性测定 对Hela-3细胞的杀伤活性，CD3A细胞(54.12±12. 34)与LAK细胞(31.76±9.63)相比较有显著性差异(P<0.05)，对K562细胞的杀伤活性，CD3AK细胞(77.45±7 .38)与LAK细胞(48.28±6.85)相比较有显著性差异(P<0.05)。
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2.2 临床疗效 根据WHO“实体瘤近期疗效的分级标准”。A组15 例转移性肝癌，完全缓解(CR)2例，部分缓解(PR)10例(其中5例肿瘤缩小后行Ⅱ期手术切除)，稳定3例。1例术后出现一过 性黄疸、腹水，经治疗后消失(CR+PR 12/15)。 B组：完全缓解(CR)0例，部分缓解(PR)6例(其中2例肿瘤缩小后行Ⅱ期手术切除)，稳定4例(CR+PR 6/10)，3例术后出现一过性黄疸、腹水，经治疗后 消失。两组病例均无术中及术后因手术并发症死亡。生存时间：A组15例中1例生存9个月，死于肿瘤晚期 恶液质，2例生存1年8个月，死于肝、肺功能衰竭，12例生存1年以上(其中4例16个月以上、4例2年以上) 。 B组10例中有2例生存11个月，死于恶性肿瘤晚期恶液质，1例生存14个月，死于肿瘤期转移，2 例生存16个月，死于肝功能衰竭合并肺部感染，5例生存1年以上(其中1例16个月以上、2例2 年以上)。
2.3 如表1所示，术前1周时，A、B组外周血单个核细胞的分布没有明显差异(P>0. 05)。术后1周时， B组细胞免疫功能明显低下，外周血CD3、CD4、CD4/CD8、NKC、IL-2R、T淋转明 显降低，与术前相比较有显著性差异(P<0.05)。术后第2周开始细胞免疫功能逐渐恢复但较缓慢，至第4周还 处于低水平。 A组在术后1周时细胞免疫功能明显提高，外周血CD3、 CD4、 CD4/CD8、 NKC、IL-2R、T淋 转明显增加，与术前相比有显著性差异(P<0.05)，术后第2周、第3周、第4周呈上升趋势且保持在高水平状 态。A、B两组同期各检测指标相比较有显著性差异。C组外周血单个核细胞的分布在术前、术后相比较无 明显差异(P>0.05)，但细胞免疫功能均比A、B组高。
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3 讨论
研究证实，肝肿瘤90%的血供来源于肝动脉，余为门静脉供血。肝动脉、门静脉双重栓 塞，不但造成肿瘤的大片坏死，最大限度地解除患者的瘤负荷，减少外周静脉用药所引起的毒副作用，还 可使肿瘤周围、子瘤以及门静脉癌栓完全坏死，以达到根治的目的，同时，非栓塞区肝实质代偿性增大，增 加了肝储备功能，扩大了肝切除的指征[1，2]。中晚期肝癌患者的体质、免疫力、抵抗力以及 对化疗的耐受能力均较差，不能耐受常规大剂量的外周化疗，从而大大影响治疗效果。采取门静脉插管化疗时，肿瘤局部 的化疗药物浓度比外周静脉用药时高，实践证明前者的治疗效果明显优于后者。韩有志等[3]应用肝动 脉化疗栓塞+门静脉插管化疗治疗直肠癌肝转移15例，1年生存率80%，3年生存率达33.3%。本研究全组23例患者 中，总有效率达72%(18/25)，其中2例肿瘤消失，7例经治疗后行Ⅱ期手术切除肿瘤，取得良好的临床疗效 。B组1年生存率80%，与文献报道相同，而A组1年生存率14/15(93%)，高于B组。
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要提高肿瘤患者术后的生存率，笔者认为关键之一是如何在最大限度减少患者瘤负荷的基 础上，尽快纠正、恢复肿瘤患者机体混乱、低下的免疫功能状态，尤其是细胞免疫功能。因此，积极进行 免疫调节治疗，尤其是采用具有强抗瘤效应的细胞继承疗法甚为重要。本研究在双重化疗、栓塞的同时积极 配合免疫治疗，取得了良好的疗效。基础和临床研究表明：CD3AK细胞体外杀瘤活性明显高于LAK细胞， 本研究得出同样的结论。其杀瘤机制：①由直接接触杀伤肿瘤细胞；②分泌细胞因子：释放IL-2，TNF，IPN -r等，诱导B细胞转化为高效分泌抗体的浆细胞，提高机体的体液免疫力，间接杀伤肿瘤细胞[4] 。虞喜豪[5]等应用CD3AK细胞治疗中晚期癌肿显示临床有效率达63%，且输入CD3AK细胞的量与疗效成正比。研究认 为，提高肿瘤局部免疫活性细胞浓度，能够通过直接接触杀伤肿瘤细胞，且免疫活性细胞进入体循环后，同 样发挥间接抗肿瘤作用。本研究A组有效率达80%(12/15)，且增加了Ⅱ期手术切除的机会(A组7/15， B 组2/10)。刘剑仑等[6]分析了肿瘤患者手术前后细胞免疫功能状态时发现，手术 本身对患者细胞免疫功能有明显影响，术后1周时细胞免疫功能明显降低，直至2周后才开始逐渐恢复。而术后2周内是及时杀灭残留肿瘤 细胞以及抑制其生长、分化、浸润、转移的关键。本研究中B组得出同样的结论。而A组在机 体的免疫力恢复方面，手术后1周机体免疫力即得到明显恢复、提高，与术前相比有显著性 差异(P<0.05)，第2周、第3周、第4周机体免疫力逐渐上升且维持在高水平状态，无B组 在术 后免疫功能先降低后回升的现象，克服了由手术打击所引起的机体免疫力明显减退的缺陷， 从而更好地发挥术后早期机体的抗肿瘤作用，对消灭残存的肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞的生长 、分化、浸润转移等具有特别重要的意义。NK细胞、T淋转、以及CD4/CD8明显增加，特别是 IL-2R由术前28.93±4.12上升至术后第4周的45.93±7.89(P<0.001)，更显示T淋巴 细胞处 于明显的激活增殖状态，这可能与CD3AK细胞杀灭或抑制肿瘤细胞，分泌细胞因子，解除 机体荷瘤状态下患者免疫功能受到明显的抑制现象，提高机体体内免疫功能，促进免疫调节 、免疫监视、及免疫细胞直接或间接发挥抗肿瘤作用有关。
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表1 A、B、C组治疗前后患者免疫功能的变化(
±s) 组 别CD3
CD4
CD8
CD4/CD8
NKC
IL-2R
T淋转
A组(n=15)
术前1周
27.63±4.14##
, 百拇医药
35.41±7.96#
30.41±4.92#
1.23±0.41 #
27.63±4.34#
28.93±4.02##
38.41±9.14#
术后1周
33.13±4.83**
40.67±3.33**
, 百拇医药
24.01±4.54**
1.85 ±0.31*
31.32±4.49**
37.07±3.57**
45.26±7.32**
术后2周
35.27±6.42**
46.27±5.47**
21.24±5.36**
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2.18 ±0.45**
35.27±6.42*
39.63±4.45**
48.33±8.06**
术后3周
38.33±3.20**
47.67±4.47**
20.45±6.22*
2.42±0.6 7*
, 百拇医药
38.33±3.20**
44.67±7.96**
55.78±8.87**
术后4周
41.07±2.84*
49.27±8.56*
19.50±4.65**
2.51± 0.85*
41.07±2.84*
, 百拇医药
45.93±7.89**
56.02±10.21*
B组(n=10)
术前1周
28.49±3.81#
37.47±9.98#
29.68±4.66#
1.24±0.41#
28.4 9±3.81#
30.13±3.48##
, 百拇医药
39.45±9.13#
术后1周
22.87±5.42
32.73±6.79
36.01±5.48
0.97±0.26
22.87±5.42
21. 07±4.66
31.57±10.56
术后2周
24.27±6.54
, 百拇医药
33.67±7.63
32.14±6.32
1.14±0.22
24.47±6.85
24. 53±4.19
34.85±7.31
术后3周
27.13±6.04
34.47±78.57
29.67±5.21
1.36±0.34
, http://www.100md.com 27.13±6.24
28 .27±5.22
38.85±6.43
术后4周
35.08±7.98
41.67±6.86
27.06±4.84
1.87±0.27
35.07±7.98
35. 07±6.58
45.69±9.76
C组(n=10)
, 百拇医药
术前1周
60.18±8.06
51.67±8.41
26.39±5.35
2.34±0.25
40.88±6 .63
48.12±7.56
56.18±10.12
术后1周
55.48±6.65
48.72±7.94
21.63±4.83
, 百拇医药
2.56±0.42
36.75±5.87
41. 66±6.56
45.62±8.94
术后2周
62.76±9.34
54.13±9.86
22.46±5.08
2.45±0.23
44.51±6.78
52. 36±8.13
, 百拇医药 51.43±9.23
术后3周
63.26±6.43
50.38±8.21
18.93±4.41
2.52±0.38
42.49±7.74
47. 45±8.42
50.82±11.31
术后4周
67.22±7.72
55.81±9.62
, 百拇医药
25.15±3.86
2.15±0.32
45.51±7.07
50. 18±9.23
53.11±11.23
*:P<0.05; **:P<0.001(A组与B组同期同类指标相比较)；
#:P<0.05; ##:P<0.001(A组或B组术前与术后1周同类指标相比较)；
本课题为广东省医学科研立项课题 课题编号B1997137
侯冰宗(1965-),男,1988年7月毕业于广西医科大学获学士学位,1995年7月毕业于广西医科大学获肿瘤外科硕士学位;现任暨南大学医学院第三附属医院肿瘤外科主治医生.
, 百拇医药
参考文献
1，Lee K C,Knoshita H,Hirohasik,et al.Extension of surgical indication s for hepatocellular carcinoma by portal vein embolization.World J Surg,1993,17: 109
2，Nakao N,Miura K,Takahashi H,et al.Hepatocellular carcinoma,combined hepatic arterial,and portal venous embolization.Radiology,1986,161:303
3，韩有志，张玲，韩风，等.直肠癌肝转移的治疗.中国肿瘤临床，1996，23(6) ：412
4，Anderson-PM，Blazar-BR，Bach-FH，et al.Anti-CD3+IL-2-stimulat ed murin e killer cells.In vitro generation and in vivo antitumor activity J-Immunol,198 9,Feb15，142(4):1383～1394
5，虞喜豪，程永德，金健行，等.CD3单克隆抗体激活细胞用于中晚期癌肿治疗 的初步观察.上海免疫学杂志，1995，15(5)：289
6，刘剑仑，秦伟新，韦长元，等.大肠癌病人手术后细胞免疫功能的动态研究. 中华实验外科杂志，1995，12(2)：710
(收稿 2000-03-23), http://www.100md.com