血管内皮生长因子在原发性肝细胞癌的表达及临床意义
作者：周天保 盛茂鑫
单位：江西医学院第二附属医院普外科,南昌 330006
关键词：内皮；血管；内皮生长因子；癌；肝细胞；免疫组织化学
福建医科大学学报000316
摘要: 目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)的表达与原发性肝细胞癌(HCC)侵袭和转移的关系。 方法 免疫组织化学LSAB法对手术切除的30例原发性肝细胞癌和20例癌旁组织石蜡切片中VEGF表达进行检测。在400倍视野下选择5个最密集区,计算VEGF阳性细胞数,取均数。 结果 (1)VEGF表达在HCC组织比癌旁组织明显增高;(2)在HCC中,有转移者及包膜不完整者VEGF表达明显高于无转移者及包膜完整者;(3)大肿瘤(直径>5 cm)与小肿瘤(直径≤5 cm)者比较,统计学无显著意义。 结论 HCC组织的VEGF表达与肿瘤的侵袭和转移行为密切相关,有可能作为判定HCC转移及预后的指标。
, 百拇医药
中图分类号: R392.11; R735.7; R392.31; R730.261 文献标识码: A
文章编号:1000-2235(2000)03-0256-03
Expression of Vascular Endothelial Growth Factor and
Its Clinical Significance in Primary Hepatocellular Carcinoma
ZHOU Tian-bao SHENG Mao-xin
(Department of General Surgery, The Affiliated Second Hospital, Jiangxi Medical College, Nanchang, 330006 China)
, 百拇医药
ABSTRACT: Objective To study the relationship between the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF) and invasion,metastasis of primary hepatocellular carcinoma(HCC). Methods Paraffin-embedded specimens from 30 patients with primary hepatocellular carcinoma who had undergone radical hepatectomy were studied. Angiogenesis was assessed by the expression of vascular endothelial growth factor using LSAB immunohistochemical staining. VEGF positively stained cancer cells were counted in five areas of the highest density region under 400 times magnification microscopy. Results (1)The level of VEGF in HCC was higher than that in the non-tumorous liver tissue. (2) The level of VEGF expression in tumor with metastasis or in non-encapsulated tumors was higher than that in tumor without metastasis or in well-encapsulated tumors. (3)There was no significant differance in the expression of VEGF between large tumors of HCC(diameter >5 cm) and small ones(diameter ≤5 cm). Conclusion The expression of VEGF are highly correlated with invasion and metastasis in primary HCC,which may serve as a parameter for determining tumor metastasis and prognosis.
, 百拇医药
KEY WORDS: endothelial,vascular; endothelial growth factor; carcinoma,hepatocyte; immunohistochemistry
早在1972年,Gimbrone等学者在研究中就注意到恶性肿瘤组织中血管异常增多,并进一步认为肿瘤血管新生是恶性肿瘤生长和转移的前提,推测肿瘤通过新生血管从宿主获得丰富的营养,并依赖它向宿主输出大量恶性细胞,致肿瘤不断生长和转移[1]。有资料证实,对实体瘤而言,当其生长至1 mm×1 mm×1 mm以上时,若无新生血管生成,则肿瘤静止于休眠状态[2]。肿瘤的血管生成与多种生长因子的刺激有关,其中血管内皮生长因子(VEGF)在肿瘤的血管生成中起极其重要的作用,是促进血管生成的唯一特异的生长因子。笔者从促血管生成的角度研究原发性肝细胞癌(HCC),以期对HCC的发生、发展、转移及预后作一些探讨。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 标本来源 收集江西医学院第二附属医院1994年1月～1998年5月间行手术切除经病理证实为HCC的标本30例。患者中位年龄45.6岁(35～60岁),其中男性19例,女性11例。肿瘤直径>5 cm和≤5 cm各15例;包膜完整12例,不完整18例;有肝外脏器转移和/或有门静脉癌栓或肝门淋巴结转移16例,无转移14例。对照组取20例肿瘤边缘以外经HE染色病理切片证实无癌变的组织。所有标本用福尔马林液固定(不超过24 h),常规石蜡包埋,切片厚度为4 μm,切片在4张以上。
1.2 方法 CMIAS真彩色医学图像分析系统(北京航空航天大学),兔抗人VEGF多克隆抗体(丹麦Dako公司),LSAB试剂盒(丹麦Dako公司)。LSAB免疫组织化学染色按说明书操作。
1.3 VEGF阳性结果判定 VEGF阳性细胞为棕黄色或棕褐色颗粒,分布于胞浆,在100倍视野下随机选择5个阳性细胞最密集区,在400倍视野下,转换到图像分析仪并在幕上计数阳性肿瘤细胞。阳性肿瘤细胞大于或等于整个肿瘤细胞的5%定为阳性,其他情况为阴性[3]。用已知会呈现阳性反应的胃癌组织作阳性对照。用PBS代替一抗,作阴性对照。
, http://www.100md.com
1.4 统计方法 VEGF表达与各临床因素之间分析用卡方精确检验法。为了强调观察指标的客观性,实行单盲法,即观察者事先不知道病人的临床情况。
2 结 果
30例原发性肝细胞癌VEGF表达与临床各因素之间关系(附表)
在HCC组织中总VEGF表达率为53.3%(16/30),而癌旁组织中的表达率为15%(3/20),两者相比有高度统计意义(P<0.01)。癌旁组织阳性表达者着色较弱、淡(附图)。附表 VEGF表达与临床各因素之间关系
n
阴性
阳性(%)
淋巴结转移
, http://www.100md.com
阴性
14
9
5(35.7)
阳性
16
5
11(68.8)
包膜完整性
完整
12
8
4(33.3)
, 百拇医药
不完整
18
6
12(66.7)
肿瘤大小(mm)
<5
15
8
7(46.7)
> 5
15
7
8(53.3)
, http://www.100md.com
组间比较,:P<0.05.3 讨 论
恶性肿瘤的生长、侵袭及转移过程受多种因素的影响,其中肿瘤诱导的血管生成反应与其生物学行为关系密切。一般可以把许多实体瘤的生长过程分为:(1)无血管过程,此时肿瘤生长十分缓慢,不浸润也不转移。(2)肿瘤诱导宿主长出毛细血管,伸向并渗透到肿瘤组织,使肿瘤进入有血管过程,此时肿瘤生长迅速,并开始浸润转移[4]。VEGF表达与肿瘤生长、侵袭、转移的关系已引起许多学者的高度重视,近些年已有一些文献陆续报道。笔者对HCC的研究结果显示,VEGF在HCC及癌旁组织中的表达率分别为53.3%和15%,表明VEGF在癌灶组织的阳性表达远高于癌旁组织,说明VEGF表达与肿瘤关系极为密切。本组资料同时显示,VEGF表达水平在有转移组明显高于无转移组(P<0.05),包膜不完整组高于包膜完整组(P<0.05),提示VEGF表达将可作为监测转移的一项指标。
VEGF在肿瘤转移中的重要作用可以解释为肿瘤组织中血管生成和增加使肿瘤细胞进入血液循环的机会增多,尤其是VEGF降解血管内皮细胞的基质,削弱其屏障作用,使新生血管基底膜更加不完整,有利于肿瘤细胞更易进入血管,从而为转移提供条件。Okuda等总结26例有包膜的HCC资料,发现此类HCC生长缓慢,发生转移迟[5]。Suzuki等也证实包膜完整性与VEGF表达相关[6]。笔者认为,在包膜不完整的HCC呈现出快速侵袭性生长时,肿瘤细胞必然增加对供血的需求,由于溶质与氧的扩散限于几毫米内,导致局部缺氧,这样就刺激肿瘤细胞大量分泌VEGF,使得大量新生血管生成,以改善局部血供,因此增加了VEGF的表达。在笔者的实验中,肿瘤的大小比较VEGF表达无显著差异,表明虽然VEGF在HCC发生发展中发挥着重要作用,但只有当HCC向外侵袭、转移方向转变时,VEGF表达才上升到一个更高的水平。
, 百拇医药
鉴于VEGF在肿瘤生长和转移中的重要作用,目前已探索用VEGF抗体阻断肿瘤新生血管形成,从而达到抑制肿瘤生长的目的。Melnyk等对活体自发性转移模型的研究表明,单独抑制VEGF的表达就足以抑制肿瘤细胞在活体内的生长和转移[7]。
恶性肿瘤发生、发展和转移是一个较为复杂的过程,转移是恶胜肿瘤的一种重要生物学特性和导致机体死亡的主要原因。笔者的实验证实了VEGF是一个衡量肿瘤生长、发展的极其重要的指标,可望通过对抗VEGF生成的方法探索抑制肿瘤的生长和转移。
附图 原发性肝细胞癌VEGF表达阳性(LSAB×400)
作者简介:周天保(1968～),男,住院医师,医学硕士.
参考文献:
, http://www.100md.com
[1] Gimbrone MA,Jr Leapman SB,Cotran RS,et al. Tumor dormancy in vivo by prevention of neovascularization[J]. J Exp Med, 1972,136:261.
[2]Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis-dependent[J]?J Natl Cancer Inst, 1991,82:4.
[3] Salven P,Heikkil A,Joensuu H,et al. Enhanced expression of vascular endothelial growth factor in metastatic melanoma[J]. Br J Cancer, 1997,76:930.
[4] 张天泽,徐光炜. 肿瘤学[M]. 天津:天津科学技术出版社, 1997.281.
, http://www.100md.com
[5] Okuda K,Musha H,Nakajima Y,et al. Clinic pathologic features of encapsulated hepatocellular carcinoma a syudy of 26 cases[J]. Cancer, 1977,40:1240.
[6] Suzuki K,Hayashi N,Miyamoto Y,et al. Expression of vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor in human hepatocellular carcinoma[J]. Cancer Res, 1996,56:3004.
[7] Melnyk O,Shuman MA,Kim KJ,et al. Vascular endothelial growth factor promotes tumor dissemination by a mechanism distinct from its effect on primary tumor growth[J]. Cancer Res, 1996,56:921.
收稿日期:1999-10-05, 百拇医药
单位：江西医学院第二附属医院普外科,南昌 330006
关键词：内皮；血管；内皮生长因子；癌；肝细胞；免疫组织化学
福建医科大学学报000316
摘要: 目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)的表达与原发性肝细胞癌(HCC)侵袭和转移的关系。 方法 免疫组织化学LSAB法对手术切除的30例原发性肝细胞癌和20例癌旁组织石蜡切片中VEGF表达进行检测。在400倍视野下选择5个最密集区,计算VEGF阳性细胞数,取均数。 结果 (1)VEGF表达在HCC组织比癌旁组织明显增高;(2)在HCC中,有转移者及包膜不完整者VEGF表达明显高于无转移者及包膜完整者;(3)大肿瘤(直径>5 cm)与小肿瘤(直径≤5 cm)者比较,统计学无显著意义。 结论 HCC组织的VEGF表达与肿瘤的侵袭和转移行为密切相关,有可能作为判定HCC转移及预后的指标。
, 百拇医药
中图分类号: R392.11; R735.7; R392.31; R730.261 文献标识码: A
文章编号:1000-2235(2000)03-0256-03
Expression of Vascular Endothelial Growth Factor and
Its Clinical Significance in Primary Hepatocellular Carcinoma
ZHOU Tian-bao SHENG Mao-xin
(Department of General Surgery, The Affiliated Second Hospital, Jiangxi Medical College, Nanchang, 330006 China)
, 百拇医药
ABSTRACT: Objective To study the relationship between the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF) and invasion,metastasis of primary hepatocellular carcinoma(HCC). Methods Paraffin-embedded specimens from 30 patients with primary hepatocellular carcinoma who had undergone radical hepatectomy were studied. Angiogenesis was assessed by the expression of vascular endothelial growth factor using LSAB immunohistochemical staining. VEGF positively stained cancer cells were counted in five areas of the highest density region under 400 times magnification microscopy. Results (1)The level of VEGF in HCC was higher than that in the non-tumorous liver tissue. (2) The level of VEGF expression in tumor with metastasis or in non-encapsulated tumors was higher than that in tumor without metastasis or in well-encapsulated tumors. (3)There was no significant differance in the expression of VEGF between large tumors of HCC(diameter >5 cm) and small ones(diameter ≤5 cm). Conclusion The expression of VEGF are highly correlated with invasion and metastasis in primary HCC,which may serve as a parameter for determining tumor metastasis and prognosis.
, 百拇医药
KEY WORDS: endothelial,vascular; endothelial growth factor; carcinoma,hepatocyte; immunohistochemistry
早在1972年,Gimbrone等学者在研究中就注意到恶性肿瘤组织中血管异常增多,并进一步认为肿瘤血管新生是恶性肿瘤生长和转移的前提,推测肿瘤通过新生血管从宿主获得丰富的营养,并依赖它向宿主输出大量恶性细胞,致肿瘤不断生长和转移[1]。有资料证实,对实体瘤而言,当其生长至1 mm×1 mm×1 mm以上时,若无新生血管生成,则肿瘤静止于休眠状态[2]。肿瘤的血管生成与多种生长因子的刺激有关,其中血管内皮生长因子(VEGF)在肿瘤的血管生成中起极其重要的作用,是促进血管生成的唯一特异的生长因子。笔者从促血管生成的角度研究原发性肝细胞癌(HCC),以期对HCC的发生、发展、转移及预后作一些探讨。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 标本来源 收集江西医学院第二附属医院1994年1月～1998年5月间行手术切除经病理证实为HCC的标本30例。患者中位年龄45.6岁(35～60岁),其中男性19例,女性11例。肿瘤直径>5 cm和≤5 cm各15例;包膜完整12例,不完整18例;有肝外脏器转移和/或有门静脉癌栓或肝门淋巴结转移16例,无转移14例。对照组取20例肿瘤边缘以外经HE染色病理切片证实无癌变的组织。所有标本用福尔马林液固定(不超过24 h),常规石蜡包埋,切片厚度为4 μm,切片在4张以上。
1.2 方法 CMIAS真彩色医学图像分析系统(北京航空航天大学),兔抗人VEGF多克隆抗体(丹麦Dako公司),LSAB试剂盒(丹麦Dako公司)。LSAB免疫组织化学染色按说明书操作。
1.3 VEGF阳性结果判定 VEGF阳性细胞为棕黄色或棕褐色颗粒,分布于胞浆,在100倍视野下随机选择5个阳性细胞最密集区,在400倍视野下,转换到图像分析仪并在幕上计数阳性肿瘤细胞。阳性肿瘤细胞大于或等于整个肿瘤细胞的5%定为阳性,其他情况为阴性[3]。用已知会呈现阳性反应的胃癌组织作阳性对照。用PBS代替一抗,作阴性对照。
, http://www.100md.com
1.4 统计方法 VEGF表达与各临床因素之间分析用卡方精确检验法。为了强调观察指标的客观性,实行单盲法,即观察者事先不知道病人的临床情况。
2 结 果
30例原发性肝细胞癌VEGF表达与临床各因素之间关系(附表)
在HCC组织中总VEGF表达率为53.3%(16/30),而癌旁组织中的表达率为15%(3/20),两者相比有高度统计意义(P<0.01)。癌旁组织阳性表达者着色较弱、淡(附图)。附表 VEGF表达与临床各因素之间关系
n
阴性
阳性(%)
淋巴结转移
, http://www.100md.com
阴性
14
9
5(35.7)
阳性
16
5
11(68.8)
包膜完整性
完整
12
8
4(33.3)
, 百拇医药
不完整
18
6
12(66.7)
肿瘤大小(mm)
<5
15
8
7(46.7)
> 5
15
7
8(53.3)
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组间比较,:P<0.05.3 讨 论
恶性肿瘤的生长、侵袭及转移过程受多种因素的影响,其中肿瘤诱导的血管生成反应与其生物学行为关系密切。一般可以把许多实体瘤的生长过程分为:(1)无血管过程,此时肿瘤生长十分缓慢,不浸润也不转移。(2)肿瘤诱导宿主长出毛细血管,伸向并渗透到肿瘤组织,使肿瘤进入有血管过程,此时肿瘤生长迅速,并开始浸润转移[4]。VEGF表达与肿瘤生长、侵袭、转移的关系已引起许多学者的高度重视,近些年已有一些文献陆续报道。笔者对HCC的研究结果显示,VEGF在HCC及癌旁组织中的表达率分别为53.3%和15%,表明VEGF在癌灶组织的阳性表达远高于癌旁组织,说明VEGF表达与肿瘤关系极为密切。本组资料同时显示,VEGF表达水平在有转移组明显高于无转移组(P<0.05),包膜不完整组高于包膜完整组(P<0.05),提示VEGF表达将可作为监测转移的一项指标。
VEGF在肿瘤转移中的重要作用可以解释为肿瘤组织中血管生成和增加使肿瘤细胞进入血液循环的机会增多,尤其是VEGF降解血管内皮细胞的基质,削弱其屏障作用,使新生血管基底膜更加不完整,有利于肿瘤细胞更易进入血管,从而为转移提供条件。Okuda等总结26例有包膜的HCC资料,发现此类HCC生长缓慢,发生转移迟[5]。Suzuki等也证实包膜完整性与VEGF表达相关[6]。笔者认为,在包膜不完整的HCC呈现出快速侵袭性生长时,肿瘤细胞必然增加对供血的需求,由于溶质与氧的扩散限于几毫米内,导致局部缺氧,这样就刺激肿瘤细胞大量分泌VEGF,使得大量新生血管生成,以改善局部血供,因此增加了VEGF的表达。在笔者的实验中,肿瘤的大小比较VEGF表达无显著差异,表明虽然VEGF在HCC发生发展中发挥着重要作用,但只有当HCC向外侵袭、转移方向转变时,VEGF表达才上升到一个更高的水平。
, 百拇医药
鉴于VEGF在肿瘤生长和转移中的重要作用,目前已探索用VEGF抗体阻断肿瘤新生血管形成,从而达到抑制肿瘤生长的目的。Melnyk等对活体自发性转移模型的研究表明,单独抑制VEGF的表达就足以抑制肿瘤细胞在活体内的生长和转移[7]。
恶性肿瘤发生、发展和转移是一个较为复杂的过程,转移是恶胜肿瘤的一种重要生物学特性和导致机体死亡的主要原因。笔者的实验证实了VEGF是一个衡量肿瘤生长、发展的极其重要的指标,可望通过对抗VEGF生成的方法探索抑制肿瘤的生长和转移。
附图 原发性肝细胞癌VEGF表达阳性(LSAB×400)
作者简介:周天保(1968～),男,住院医师,医学硕士.
参考文献:
, http://www.100md.com
[1] Gimbrone MA,Jr Leapman SB,Cotran RS,et al. Tumor dormancy in vivo by prevention of neovascularization[J]. J Exp Med, 1972,136:261.
[2]Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis-dependent[J]?J Natl Cancer Inst, 1991,82:4.
[3] Salven P,Heikkil A,Joensuu H,et al. Enhanced expression of vascular endothelial growth factor in metastatic melanoma[J]. Br J Cancer, 1997,76:930.
[4] 张天泽,徐光炜. 肿瘤学[M]. 天津:天津科学技术出版社, 1997.281.
, http://www.100md.com
[5] Okuda K,Musha H,Nakajima Y,et al. Clinic pathologic features of encapsulated hepatocellular carcinoma a syudy of 26 cases[J]. Cancer, 1977,40:1240.
[6] Suzuki K,Hayashi N,Miyamoto Y,et al. Expression of vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor in human hepatocellular carcinoma[J]. Cancer Res, 1996,56:3004.
[7] Melnyk O,Shuman MA,Kim KJ,et al. Vascular endothelial growth factor promotes tumor dissemination by a mechanism distinct from its effect on primary tumor growth[J]. Cancer Res, 1996,56:921.
收稿日期:1999-10-05, 百拇医药